Integrantes
Costa Quispe, Melissa Chacolla Huaringa, Rafael Julin Dvila Cayhualla, Elisa Palomino Poma, Edda Libertad
Genes reguladores :
tat: rev: vif: vpr: vpu (VIH-1) : Vpx (VIH-2) : nef : regulador de expresin vira regulador expresin mRNA incrementa la infectividad viral replicacin viral liberacin viral infectividad viral regulador inmunolgico
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Mtodos Indirectos
Pruebas de tamizaje
Objetivo
Objetivo de la prueba Seleccin de la tcnica depende Sensibilidad y Especificidad Prevalencia de la infeccin VIH en poblacin estudiada.
ELISA
Pruebas Dot-blot
Pruebas de Aglutinacin
Pruebas Inmunocromatograficas
Prueba de ELISA
ELISA Indirecto
Solid Phase
Antigen
Enzyme Conjugate
Sandwich Complex
ELISA COMPETITIVO
Solid Phase
Antigen
Enzyme-labeled Antigen
Reaction Product
EIA/ELFA 4 generacin
EIA/ELFA 3 generacin
Anti-HIV 1+2
EIA 2 generacin
Anti- HIV
EIA 1 generacin
Prueba rpida
Prueba de aglutinacin
PRUEBA RPIDA
Inmunocromatografa
Muestra: Suero (Anticuerpos a IgG)
Conjugado: Oro Coloidal conjugado a antgeno de VIH Lnea de control: Anti-IgG/Oro coloidal
Control
PRUEBA RPIDA
Procedimiento Core-VIH
PASOS A SEGUIR:
1. Codificacin del test 2. Aadir 2 gotas de suero, plasma o sangre total en el pocillo marcado como A 3. Aadir 5 gotas de buffer en el pocillo B Positivo a VIH-1 4. Lectura e interpretacin a los 15 minutos
INTERPRETACION CORE - VIH
C T A B REACTIVO
Control reactivo
NO REACTIVO
Pruebas confirmatorias
Western Blot
Inmunofluorescencia
LIA
Identificacin y localizacin de los antgenos y controles recubiertos en la tira.
Controles internos
CP (Lnea moderada = 1+ )
CP ( Lnea dbil = +/ - )
Antgenos
CONTROL POSITIVO
WESTERN BLOT
Prueba especfica y determina que protenas del patgeno son reconocida por el sistema inmune.
PRINCIPALES BANDAS DEL WESTERN BLOT Denominacin gp160 gp120 Protena Precursora de la envoltura Glucoprotena externa Gen env
gp41
p55 p40 p24 p17 p66 p51 p31
Glucoprotena transmembrana
Precursora del core Protena principal Protena de la matriz Transcriptasa inversa Endonucleasa pol gag
CRITERIOS MNIMOS DE POSITIVIDAD DEL WESTERN BLOT FDA Existencia por lo menos de tres bandas: p24, p31 y gp41 u otra glucoprotena Existencia de al menos 3 bandas una por cada uno de los 3 genes estructurales Al menos dos bandas: p24, gp41 y gp160/120 Al menos una banda del core (gag/pol) y otra de envoltura (env) Al menos dos bandas de envoltura
ARC
CDC CRSS
OMS
Mtodos Directos
protena p24, es un marcador directo de la presencia del virus en el organismo. La cuantificacin del antgeno p24 en el suero es la prueba ms barata y sencilla para obtener una informacin de la cantidad de virus circulante. La antigenemia se ha utilizado para predecir la evolucin clnica de individuos asintomticos. Monitorizacin de la respuesta a antirretrovirales. Diagnstico precoz de la infeccin aguda por VIH-1. Diagnstico de la infeccin por va vertical. Reconocimiento de la replicacin viral en cultivos celulares.
Cultivo viral
IL-2
LT CD4
IL-2
Ag 24
Cel.Mononucleares
Cultivo Viral
Las aplicaciones en la prctica clnica del cultivo
viral, que realmente es la tcnica ms especfica de diagnstico, son: Infeccin peditrica. Infeccin silente. Estudios de variabilidad gentica y epidemiologa molecular. Sensibilidad a antirretrovirales. Adems el cultivo viral es la herramienta imprescindible para la caracterizacin biolgica de las diferentes cepas del VIH-1.
Provirus
La PCR es un mtodo altamente sensible que nos permite amplificar por lo menos 1 copia de ADN proviral. El cultivo viral y la PCR son las tcnicas ms utilizadas, permitiendo detectar entre el 30-50% de los neonatos al nacer, y entre el 80-100% dentro del primer mes de vida.
Diagnosticar primo infeccin por el HIV-1 (perodo ventana) Resolucin de la infeccin en casos indeterminados Vigilar terapia antiretroviral Diagnosticar infeccin por HIV en nios Diferenciar infeccin por HIV-1 y HIV-2 diferenciacin de subtipos.
Ventajas: Es un mtodo no invasivo, no necesita refrigeracin. Ayuda geritricos y RN con exmenes Cte.. aplicados en zonas geogrficas inaccesibles (estudio).
OraQuickAdvance HIV-1/2
La S.R. permite el flujo de la muestra al dispositivo y al tira de prueba con para rehidratar el reactivo calorimtrico Ac contra Ag inmovilizados de la membrana de nitrocelulosa
15C 37C.
Resultados:
Uni-Gold Recombigen
Para muestras de pulpejo de dedo suero o plasma. La prueba sale en 10 minutos. Para VIH-1
Reveal G2
Prueba de moderada
complejidad con suero y plasma, requiere refrigeracin para DX de HIV-1; T 5
MultispotHIV-1/HIV-2
Algoritmo - VIH
Muestra: Suero / Plasma
ELISA
Reactivo Indeterminado
No reactivo
2 ELISA
Reactivo
Indeterminado
No reactivo
Pbas. Confirmatorias
Positivo
IFI / WB
Negativo
Indeterminado
Control en 3 meses / PCR
Cul es el problema?
En un sujeto infectado se producen en promedio aproximadamente diez billones de viriones por da y, en promedio, aparece una mutacin por cada 9200 bases copiadas del ADN viral.
Diversidad gentica
Comportamiento viral
Virulencia
Las mutaciones
Capacidad de replicacin
Citotoxicidad
Competencia
Lo peor es?
Diversidad Gentica
El Problema
2
Tanto las protenas estructurales como aquellas con actividad funcional poseen una notable plasticidad funcional
3
El virus presenta una alta tasa de replicacin, que permite generar del orden de 1010 nuevos viriones cada da
El
desarrollo de una vacuna se ha visto enormemente dificultado. Si estudiamos la historia natural de la infeccin por el VIH comprobamos que tras su penetracin en el individuo, el sistema inmune responde de forma aparentemente adecuada, elaborando una respuesta inmune humoral y celular, que no es capaz sin embargo de parar la evolucin de la infeccin.
1. 2. 3. 4. 5. 6.
La siguiente lista resume los principales enfoques de la vacuna: Vacunas Vacunas Vacunas Vacunas Vacunas Vacunas recombinantes de subunidades recombinantes de vectores de ADN de combinacin vivas atenuadas enteras inactivas
Consideraciones finales
de prevencin del sida en el Centro para Control y Prevencin de Enfermedades (CDC), dijo al New York Times que esta nueva forma del virus es nica por el rpido avance de la enfermedad y su resistencia a los tratamientos farmacuticos actuales. A pesar de ser un caso aislado, el CDC ya envi una alerta nacional a los departamentos de salud de todos los estados de la Unin Americana.
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Lo que puedes hacer, o has soado que podras hacer, debes comenzarlo. La osada lleva en s, genio, poder y magia.
Thanks