CARACTERIZACIN DE LA FLORA MICROBIANA ANAEROBIA DEL CIEGO EN LA POBLACIN AVICOLA ADULTA Y SANA DEL MUNICIPIO DE LOS PATIOS CON

MIRAS A LA PRODUCCIN DE PROBIOTICOS CON CEPAS AUTOCTONAS DE LA REGIN

ADIEL ALBERTO VASQUEZ QUIJANO JHOLLMAN CHACON RANGEL MARGARITA CABALLERO ALUMNOS MICROBIOLOGA APLICADA II SEMESTRE DE 2002 IPA

PROBIOTICOS
Del griego en favor de la vida 1988 Dr. Fuller y Cole Suplemento microbiano vivo de alimentos que afecta positivamente al animal hospedante, mejorando su equilibrio microbiano intestinal Probiticos son aquellos microorganismos vivos que, al ser agregados como suplemento en la dieta, afectan de forma benfica el desarrollo de la flora microbiana no patgena en el intestino y estimulando las funciones protectoras del sistema digestivo. Bacterias y levaduras que se cultivan en condiciones de laboratorio y que se utilizan posteriormente para corregir el balance de la microflora digestiva, que ha quedado desequilibrada por diferentes causas.

RESUMEN
En este trabajo se presentan resultados con respecto a la caracterizacin de la flora intestinal anaerobia predominante en aves adultas sanas del municipio de Los Patios. Se identificaron, con gnero y especie, 24 bacterias, 9 de las cuales no se han reportado en la literatura internacional. Se prepar un probitico con estos microorganismos y se evalu frente a descargas de Salmonella resultando un Factor de Proteccin (FP) >17.83. Se prepararon probiticos con las 24 bacterias identificadas y la flora aerobia obtenida de cada una de las granjas en estudio, se evalu el FP y se obtuvieron resultados que mostraron un aumento promedio del FP de 54.95%. Los resultados indican que la eficiencia de un probitico est dada por el tipo de flora aerobia y anaerobia que pueda contener.

INTRODUCCION
El conocimiento de los efectos benficos de algunas de las bacterias de la flora intestinal se inicia a principios de siglo con los trabajos de Metchnikoff.

Una vez comprobado que algunas bacterias intestinales, adicionadas al pienso o al agua de bebida, determinaban una respuesta favorable en produccin animal, se intent enmarcarlas en un grupo especfico. No se ha resuelto una denominacin tcnica especfica que permita su diferenciacin de otros aditivos o sustancias no biolgicas, considerados con efectos estimulantes de la produccin animal. La palabra probitico fue utilizada por 1 vez por Lilley y Stillwell en 1965 para referirse a una sustancia secretada por un microorganismo que estimulaba el crecimiento de otro.

 En 1971, Sperti defini probitico como extractos de tejido que estimulaban el crecimiento microbiano Parker, en 1974, como organismos y substancias que contribuyen para el balance microbiano intestinal 1989, Fuller modific el concepto: suplemento alimenticio microbiano vivo que afecta benficamente el hospedero animal, mejorando su balance microbiano intestinal.

 En produccin animal intensiva, para obtener un buen rendimiento, es indispensable el uso de antibiticos, lo cual proporciona al animal una proteccin frente a ciertas enfermedades, al mismo tiempo, actan como precursores de crecimiento al eliminar microorganismos no deseados que se encuentran en el tubo digestivo. El problema central de usar antibiticos en dietas para animales, radica en que queda un residuo en los productos animales que al ser consumido por el hombre, produce una resistencia de microorganismos patgenos a la accin de antibiticos y por consiguiente el hombre se encuentra en condiciones ms precarias de defensa ante cualquier enfermedad, especialmente bacteriana.

 Si con la administracin de probiticos conseguimos mantener una flora intestinal en equilibrio evitaremos problemas tan frecuentes en las aves de jaula como son las diarreas y otros problemas producidos por bacterias como la Salmonella.

Cual es el probitico ideal?

Que no resulte daino ni productor de sustancias txicas. Los microorganismos que los componen deben adherirse fcilmente a la pared intestinal y crecer rpidamente. Contener bacterias que como los lactobacilos puedan transformar la lactosa en cido lctico, consiguindose as tal acidez en el tubo digestivo evitando que ciertas bacterias dainas puedan sobrevivir. Incluir microorganismos que elaboren vitaminas, beneficiosas y necesarias para el ave y enzimas que ayuden a la digestin. Que por su simple presencia fsica evite que microorganismos patgenos colonicen el intestino.

 En este trabajo se presentan resultados con respecto a la flora intestinal anaerobia predominante en aves adultas sanas del municipio de Los Patios, donde se calcula una poblacin aproximada de 600.000 animales. A travs de informacin obtenida del ICA se localizaron las granjas dedicadas a la avicultura en el rea de estudio. Se eligieron 16 granjas con una poblacin avcola de aproximadamente 536.600 aves, de las cuales 425.200 (79.24%) son ponedoras y 111.400 (20.76%) pollos de engorde.

 Se revisaron todos los datos obtenidos en cada una de las granjas, con el fin de seleccionar las que reunan las condiciones para el estudio, teniendo en cuenta:
Granjas sin historial de patologas recientes. Granjas cuyas aves cumplan con las caractersticas ptimas de crecimiento esperadas para la edad.

 De las granjas escogidas para el estudio solamente se trabaj con 9 de ellas (89.44% de la poblacin avcola de Los Patios) ya que las otras siete presentaban, al momento del estudio, problemas epidemiolgicos con New Castle y Gumboro, quedando una poblacin de 452.200 animales que representan un 75.37% del total de la poblacin.

 Una vez realizado el censo de la poblacin avcola, se eligieron los animales que cumplan las condiciones para el estudio teniendo en cuenta el criterio de ser aves adultas y sanas

Se sacrificaron cada vez dos aves por granja y se tom el contenido de los ciegos en un caldo de tioglicolato para el anlisis de la flora microbiana anaerobia.

Diagnstico presuntivo de anaerobios Siempre se hace indispensable un diagnstico rpido. El aislamiento y la identificacin de los anaerobios toman algunos das y an semanas, por lo que es necesario hacer un anlisis presuntivo en la muestra, basado en dos parmetros esenciales:
1. Examen macroscpico de la muestra. 2. Examen microscpico de la muestra.

1. Examen macroscpico de la muestra.

a. Color con tendencia al pardo o negro ms que de color crema, que generalmente es de origen anaerobio. b. Olor caracterstico. c. Algunos microorganismos anaerobios presentan fluorescencia, como el Bacillus melaningognicus (fluorescencia rojo brillante).

2. Examen microscpico de la muestra.

a. Frente a la coloracin de Gram se observan mezclas de cocos y bacilos Gram Positivos y Gram negativos. b. Algunas veces los bacilos Gram negativos presentan caractersticas fusiformes o una morfologa muy pleomorfica. c. En ocasiones los bacilos Gram negativos pueden ser enmascarados por los cocos Gram positivos y esto presenta dificultades en la interpretacin de los cultivos. d. La morfologa del Actinomyces caracterstica, semejando ms cadenas de cocos que elementos bacilares. e. Clostridium perfringens es generalmente ms obvio en su morfologa, bacilos Gram positivos muy gruesos bruscos con bordes recortados que recuerdan ladrillos.

MATERIALES Y METODOS:
Sistema anaerbico GasPak Sobres generadores de anaerobiosis para el sistema GasPak Sobres indicadores de anaerobiosis

MEDIOS DE CULTIVO PARA ANAEROBIOS Caldo Tioglicolato (enriquecido) Medio fluido Tioglicolato segn Brewer Agar sangre para anaerobios segn CEC Sistema de identificacin CRYSTAL Sistema de identificacin IDS Rapid ANA II System

RESULTADOS DE LOS CULTIVOS ANAEROBIOS

Actinomycetaceae Bacillus cereus Mobiluncus curtius Actinomyces bovis Bacteroides thetriomicon Propionibacterium propionicus Actinomyces viscosus Tissierella praeacuta Bilophila ivadsworthia Capnocytophaga sp. Propionibacterium guenilosum

Bacillus subtilis
Bacteroides capillosus Bacteroides vulgatus Bifidobacterium bifidum

Lactobacillus acidophilus (acid)

Lactobacillus bifidu Lactobacillus casei Lactobacillus delbruekii

Lactobacillus fermentum
Lactobacillus lactis Saccharomyces cerevisiae Streptococcus intermedius

Streptococcus mutans

EVALUACION DE LA EFECTIVIDAD DEL PROBIOTICO PRODUCIDO

La evaluacin de la eficiencia del tratamiento con el PROBIOTICO, se calcula con base en ndices de infeccin y de proteccin
Dosis Salmon ella (Bacterias / g) 107 106 105 104 103 102 101
Cantidad de pollitos positivos para Salmonella al cabo de cuatro das tras la inoculacin. * Las muestras en que no se detectaron Salmonellas, recibieron un valor de cero (0).

Grupo Control (N de pollitos positivos)

Grupo Tratado (N de pollitos positivos)

4 5 3 3 2 1 0 0

0 1 0 0 0 0 0 10

No se asla (0)*

 Valores bajos del Factor de Infeccin (FI) indican baja proporcin de aves infectadas con Salmonella, y bajo nivel de animales portadores; lo contrario ocurre con valores altos de FI. En cuanto al Factor de Proteccin (FP), mientras mayor sea el valor, ms eficaz es la proteccin. Tericamente, el mximo valor que se obtiene es > 80, en el supuesto de que todas las aves control tuviesen108 Salmonella / g en los ciegos, y que todas las aves tratadas fuesen negativas. Es improbable alcanzar este resultado en la prctica: Los valores que se obtienen son mucho menores. Pivnick y col. Citaron valores desde 4.8 hasta 17.5. Aunque es imposible relacionar estos datos directamente con la aplicacin comercial del tratamiento, se ha sugerido que un factor de proteccin <4 tendra poca o ninguna posibilidad de reducir las infecciones con Salmonella en las aves domsticas.

Clculos:
FI (Controles) =

4 7 5 6 3 5 3 4 2 3 1 2 78 7.8
10 10

FI (Tratados)

6 1 10

0.6

FP

FI (Controles) 7.8 15.5 FI (Tratados) 0.6

Dosis Salmonella (Bacterias / g) 107 106

Grupo Control (N de pollitos positivos) 5 3

Grupo Tratado (N de pollitos positivos) 0 0

105
104 103 102 101

3
2 0 1 0

0
0 0 0 0

No se aisla (0)*

10

Cantidad de pollitos positivos para Salmonella al cabo de cuatro das tras la inoculacin. * Las muestras en que no se detectaron Salmonellas, recibieron un valor de cero (0).

G-1

G-2

G-3

G-4

G-5

Probitico Aerobio
Probitico mixto (aerobio+ anaerobio)

FP

54

45

45

50

49

FP

79

74

67

78

78

Datos del FP para cada grupo de pollos tratados con los dos probiticos obtenidos.