REACCIONES BIOQUIMICAS DE LAS ENTEROBACTERIAS

CONCEPTO DE REACCIN BIOQUMICA

La

reaccin bioqumica es el mtodo mas seguro para el diagnstico bacteriolgico, sobre la base de los cambios metablicos que producen las bacterias en los medios de cultivos, los cuales se ponen de manifiesto por las variaciones de color y aspecto de los mismos.

REACCIONES BIOQUIMICAS DE LAS ENTEROBACTERIAS

MATERIALES

1.- 21 TUBOS DE ENSAYOS

2. - Un tubo de Durham para la glucosa. 3. - Un Caldo de Peptona con su respectiva tirilla de Acetato de plomo en el tapn. 4. - Un agar Citrato de Simmons. 5. - Un agar Urea de Christiansen. 6. - Un caldo para reduccin de Nitratos. 7. - Un caldo VP-RM para el ROJO DE METILLO. 8. - Un caldo de VP-RM para la prueba de VOGES-PROSKAUER. 9. - Un AGAR MOTILIDAD. 10. - Un asa de inoculacin para siembras en superficie. 11. - Una aguja de inoculacin para siembras de profundidad. 12. - Un mechero de alcohol. 13. - Una tubera o gradilla, donde van colocados los medios de cultivo, siempre en el mismo orden

TCNICA
Sembramos

en 21 tubos de reacciones bioqumicas haciendo pases o siembras de cualquier espcimen que requiera una identificacin de genero, especie o subespecie.
Tubo

de Durham en el 1er tubo

Estilo

de la inoculacin.- Para sembrar en los tubos con medios lquidos hay que inclinar el tubo y sembrar en el ngulo que queda entre la pared y el nivel lquido.

TCNICA
Sembramos

en superficie Sembramos en picadura Incubamos a 24 horas y a 37c Observamos los tubos al siguiente da

Tubo 1 14 : AZUCARES

Los primeros 14 se los debe interpretar de la siguiente manera: Es negativo (-) si se mantiene el color del medio de cultivo y es positivo si hay reaccin, es decir un cambio de color despus del periodo de incubacin. El Tubo de Durham indica si hay (AG) de fermentacin en el tubo 1.

TUBO DE DURHAM

Tubo 15 : CALDO DE PEPTONA

Indol (+) Rojizo con o sin anillo Indol (-) Tirilla de acetato de plomo indica si hay o no SH2 o gas sulfidrico.

 INDOL.(FUNDAMENTO)

La produccin de Indol a causa de la degradacin del triptofano por parte de la bacteria se investiga agregando al momento de la lectura una gota de reactivo de Erlich o de Kovac al Caldo de Peptona. Si se produce un anillo rosado en la superficie significa que el microorganismo es Indol Positivo. Si no se produce, la bacteria ser Indol Negativa.

Tubo 16: A. CITRATO DE SIMMONS

Sembramos en superficie e incubamos (-) si mantiene le coloracin (+) Si cambian a color azul

 CITRATO.-(FUNDAMENTO)
Cuando

una bacteria metabliza el citrato como fuente de carbono, el indicador de ph presente en el agar, hace que el medio vire hacia un color azul turquesa, es decir, es Citrato Positivo. Si el medio permanece de color verde original, se dice que la bacteria es Citrato Negativo.

Tubo 17: A. UREA

(-) Si se mantiene la coloracin (+) Si se hace de color fucsia

 UREA.-(FUNDAMENTO) Cuando un microorganismo es productor de ureasa, hidroliza la Urea, con produccin de Amonio y CO2. Esto se detecta por el indicador de ph Rojo de Fenol presente en el agar, que hace que el medio vire hacia un color rojo fucsia. Si por el contrario, el medio permanece de su color original amarillo, quiere decir que la bacteria es Ureasa Negativa, o sea incapaz de descomponer la Urea.

Tubos 18, 19, 20: C.NITRATO, ROJO METILO,

V. PROSKAUER

(-) Si mantienen la coloracin

(+) Si presenta anillo y est rojizo

PRUEBA DE LOS NITRATOS FUNDAMENTO.

Se basa en la capacidad de un microorganismo de reducir los nitratos a nitritos,utilizando el nitrato en una va alternativa como fuente de energa, reducindolo a nitrito o a nitrgeno libre; esta propiedad es una caracterstica importante en la diferenciacin de muchos grupos bacterianos. La presencia de nitrito en el medio de cultivo, se demuestra aadiendo alfa-naftilamina y cido sulfanilico con la formacin de un compuesto rojo que es el parasulfobenceno-azo-alfa-naftilamina

PRUEBA DE VOGES-PROSKAUER FUNDAMENTO: Se basa en la capacidad que poseen determinados microorganismos de producir acetil-metil-carbinol (acetoina) a partir de la degradacin de la glucosa. Como producto final del metabolismo de la misma. En presencia de oxigeno y de una solucin de OHK al 40%, el acetil-metil-carbinol se convierte en diacetilo el cual en contacto con alfa-naftol produce un color rojo en el caldo de cultivo.

PRUEBA DEL ROJO METILO FUNDAMENTO: El principio de la prueba, es la capacidad que poseen algunos microorganismos de actuar sobre la glucosa y a travs del cido piruvico producir una fermentacin cida mixta capaz de bajar el ph una cifra igual o inferior a un ph de 4,4. La bacteria tendr que producir mucho cido a partir del sustrato del hidrato de carbono para ser detectado.

Tubo 21: A. MOTILIDAD

Sembramos en picadura (-)Si la sitio de picadura est fino y el medio limpio. (+) Si el sitio de picadura est ensanchado y el medio turbio.

 AGAR

MOTILIDAD.(FUNDAMENTO)
una bacteria es mvil, el medio de Agar Motilidad se vuelve turbio y hay un ensanchamiento notable de la lnea de picadura. Si la lnea de picadura permanece sin mayor alteracin significa que la bacteria es motilidad negativa.

Cuando