Staphylococcus.

Generalidades. Cocos Gram(+). La mayor parte de los estafilococos tiene un dimetro de 0.5-1 m. Prueba de la catalasa (+): como Staphylococcus, Micrococcus, Kocuria, Kytococcus y Alloiococcus). Las bacterias que viven en ambientes aerobios necesitan un equipo enzimtico capaz de neutralizar formas txicas de oxigeno. La catalasa, que convierte el perxido de hidrgeno en agua y oxgeno molecular.

Anaerobios facultativos. Crecen en condiciones concentracin de NaCl (10%) y temperatura 18-40 C.

con

elevada

Staphylococcus.
Generalidades. Del griego staphyl, racimo de uvas. Presentes en piel y mucosas en el humano. Staphylococcus aureus (narinas anteriores), Staphylococcus capitis (glndulas sebceas) y Staphylococcus haemolyticus y Staphylococcus homnis (zonas dotadas de glndulas apocrinas). Patgenos en el ser humano. Amplio espectro de enfermedades sistmicas, infecciones de la piel, las partes blandas, los huesos y el aparato genitourinario e infecciones oportunistas. Especies asociadas con mayor frecuencia a enfermedad en el ser humano son S. aureus (el miembro ms virulento y mejor conocido del gnero), Staphylococcus epidermidis, S. haemolyticus, Staphylococcus lugdunensis y Staphylococcus saprophyticus.

Staphylococcus.

Estructura de la pared celular.

Estructura de la pared celular.

Cpsula y capa de polisacrido extracelular. La capa ms externa de la pared celular estafiloccica se puede recubrir de una cpsula de polisacrido. La cpsula protege a las bacterias al inhibir la fagocitosis de estos microorganismos por los leucocitos polimorfonucleares (PMN). La mayor parte de los estafilococos producen una biopelcula hidrosoluble laxa (capa de polisacrido extracelular) formada por monosacridos, protenas y pequeos pptidos. Esta sustancia extracelular une las bacterias a tejidos y cuerpos extraos, como catteres, injertos, prtesis valvulares y articulares y derivaciones, Esta propiedad es particularmente importante para la supervivencia de los estafilococos coagulasanegativos, los cuales son relativamente avirulentos.

Estructura de la pared celular.

Pptidoglicano. Representa la mitad de la pared celular en peso, caracterstica que comparten todas las bacterias grampositivas. El peptidoglucano posee una actividad de tipo endotoxina, ya que estimula la produccin de pirgenos endgenos, la activacin del complemento, la formacin de interleucina-1 por parte de los monocitos y la agregacin de los leucocitos PMN (un proceso que origina la formacin de abscesos).

Estructura de la pared celular.

cidos Teicoicos. Polmeros fosfatados especficos de especie. Se unen de manera covalente a residuos de cido N-acetilmurmico de la capa de peptidoglucano o a travs de una unin lipoflica a la membrana citoplsmica (cidos lipoteicoicos). El cido teicoico de ribitol con residuos de N-acetilglucosamina (polisacrido A) se encuentra presente en S. aureus, mientras que el cido teicoico de glicerol con residuos glucosilo (polisacrido B) aparece en S. epidermidis. Los A.T. median en la unin de los estafilococos a las superficies mucosas a travs de su unin especfica a la fibronectina. Son poco inmunognicos, sin embargo estimulan una respuesta humoral especfica cuando se encuentran unidos al peptidoglicano.

Estructura de la pared celular.

Protena A. La superficie de la mayora de las cepas de S. aureus (pero no la de los estafilococos coagulasa-negativos) est recubierta de la protena A. Esta protena, unida a la capa de peptidoglicano o a la membrana citoplsmica. Tiene afinidad al receptor Fc de las inmunoglobulinas IgGr; IgG2 e IgG4, previniendode forma eficaz la eliminacin inmunitaria del microorganismo mediada por anticuerpos. La protena A extracelular se puede unir tambin a los anticuerpos, formando inmunocomplejos con el consiguiente consumo de complemento. La protena A se ha usado en ciertas pruebas serolgicas en las que se ha utilizado S. aureus recubierto de protena A como portador inespecfico de anticuerpos frente a otros antgenos. .

Estructura de la pared celular.

Coagulasas y otras adhesinas de superficie.

La superficie externa de la mayora de las cepas de S. aureus contiene un factor de agregacin (tambin llamado coagulasa ligada). Esta protena constituye un destacado factor de virulencia en S. aureus. Se une al fibringeno y lo convierte en fibrina insoluble, lo que hace que los estafilococos se agreguen o formen grupos. La deteccin de esta protena constituye la prueba principal de identificacin de S. aureus. Hay otras protenas de superficie importantes tambin para la adherencia a las protenas de la matriz del anfitrin, que a su vez se une a los tejidos del anfitrin (p. ej., fibronectina, fibringeno, elastina, colgeno). .

Estructura de la pared celular.

Membrana citoplasmtica. Se compone de un complejo de protenas, lpidos y una pequea cantidad de hidratos de carbono. Acta de barrera osmtica para la clula y proporciona una sujecin para la biosntesis celular y las enzimas respiratorias. .

Staphylococcus.
Patogenia e inmunidad.

La patologa de las infecciones estafiloccicas depende de la produccin de protenas de superficie que intervienen en la adhesin de las bacterias a los tejidos del organismo anfitrin y la fabricacin de protenas extracelulares, como toxinas especficas y enzimas hidrolticas. .

Toxinas.
Toxina : La toxina altera el msculo liso de los vasos sanguneos y es txica para muchas clulas, como hemates, leucocitos, hepatocitos y plaquetas. Forma poros de 1 a 2 nm alterando flujos de K+ y de entrada de Na+, Ca2+ y otras molculas pequeas conduce a aumento de volumen por osmosis y a lisis. Toxina : Esta enzima presenta especificidad para la esfingomielina y la lisofosfatidilcolina, y es txica para diversas clulas, entre las que se encuentran los hemates, los fibroblastos, los leucocitos y los macrfagos. Cataliza la hidrlisis de los fosfolpidos de la membrana en las clulas susceptibles, y la lisis es proporcional a la concentracin de esfingomielina expuesta en la superficie celular. Toxina : La toxina acta como un surfactante que altera las membranas celulares mediante una accin de tipo detergente, por lo que no es especfica.

Toxinas.
Toxina y leucocidina de Panton-Valentine: Se han identificado tres protenas protenas S (HlgA [hemolisina g A], HlgC, LukS-PV) y dos protenas F (HlgB, LukF-PV). Estas seis toxinas pueden lisar los neutrfilos y los macrfagos, y la actividad hemoltica ms intensa se asocia a HlgA/HlgB, HlgC/HlgB y HlgA/LukF-PV. La toxina leucocidina P-V (LukS-PV/LukF-PV) es leucotxica. La lisis celular provocada por estas toxinas est mediada por la formacin de poros con aumento de la permeabilidad a los cationes y la inestabilidad osmtica.

Toxinas exfoliativas: El sndrome de la piel escaldada estafiloccica (SPEE), est mediado por toxinas exfoliativas. Se han identificado dos formas distintas de toxina exfoliativa (ETA y ETB). Son serina proteasas, actan sobre los puentes intracelulares (desmosomas) en el estrato granuloso de la epidermis.

Toxinas.
Enterotoxinas: Se han identificado ocho tipos de enterotoxinas estafiloccicas (A a E; G a I) y tres subtipos de la enterotoxina C. Las enterotoxinas son estables a 100 C durante 30 minutos y resistentes a la hidrlisis de las enzimas gstricas y yeyunales.

Son superantgenos capaces de inducir la activacin inespecfica de los linfocitos T y la liberacin de citocinas. Los cambios histolgicos caractersticos observados en el estmago y el yeyuno consisten en la infiltracin de neutrfilos en el epitelio y la lmina propia subyacente, con prdida de las clulas en borde de cepillo del yeyuno. Se cree que la estimulacin de la liberacin de los mediadores inflamatorios por parte de los mastocitos origina la emesis caracterstica de la intoxicacin alimentaria estafiloccica.

Enzimas estafiloccicas.
Enterotoxinas: Se han identificado ocho tipos de enterotoxinas estafiloccicas (A a E; G a I) y tres subtipos de la enterotoxina C. Las enterotoxinas son estables a 100 C durante 30 minutos y resistentes a la hidrlisis de las enzimas gstricas y yeyunales.

Son superantgenos capaces de inducir la activacin inespecfica de los linfocitos T y la liberacin de citocinas. Los cambios histolgicos caractersticos observados en el estmago y el yeyuno consisten en la infiltracin de neutrfilos en el epitelio y la lmina propia subyacente, con prdida de las clulas en borde de cepillo del yeyuno. Se cree que la estimulacin de la liberacin de los mediadores inflamatorios por parte de los mastocitos origina la emesis caracterstica de la intoxicacin alimentaria estafiloccica.

Enzimas estafiloccicas.
Coagulasa: El papel de la coagulasa en la patogenia de la enfermedad es especulativo, pero la coagulasa puede provocar la formacin de una capa de fibrina alrededor del absceso estafiloccico, de forma que la infeccin quede localizada y los microorganismos estn protegidos de la fagocitosis. Catalasa: El perxido de hidrgeno se puede acumular durante el metabolismo bacteriano o con posterioridad a la fagocitosis. Todos los estafilococos producen catalasa, la cual cataliza la conversin del perxido de hidrgeno en agua y oxgeno. Hialuronidasa: Hidroliza los cidos hialurnicos, los mucopolisacridos cidos que se encuentran en la matriz acelular del tejido conectivo. Favorece la diseminacin de S. aureus en los tejidos. Ms del 90% de las cepas de S. aureus es capaz de producir esta enzima. Fibrinolisina: Prcticamente todas las cepas de S. aureus fabrican fibrinolisina. Puede disolver los cogulos de fibrina. La estafilocinasa es diferente de las enzimas fibrinolticas producidas por los estreptococos.

Enzimas estafiloccicas.
Lipasas: Todas las cepas de S. aureus y ms del 30% de las cepas de Staphylococcus coagulasa-negativos producen diferentes lipasas. Estas enzimas hidrolizan los lpidos, una funcin esencial para garantizar la supervivencia de los estafilococos en las zonas sebceas del organismo. Nucleasa: Es otro marcador de S. aureus, si bien otras especies tambin producen esta enzima. Se desconoce la funcin de esta enzima en la patogenia de la infeccin. Penicilinasa: Ms del 90% de los estafilococos aislados eran sensibles a la penicilina en 1941, el ao en que el antibitico se us en clnica por primera vez. Los microorganismos desarrollaron con rapidez resistencia a la penicilina por su producin de penicilinasa ((3-lactamasa). La amplia distribucin de esta enzima se asegur por la presencia en plsmidos transmisibles.

Enfermedades asociadas a S. aureus

Sndrome de la piel escaldada. Intoxicacin alimentaria. Sndrome Shock txico. Infecciones cutneas. Bacteremia y endocarditis. Neumona y empiema. Osteomielitis y artritis sptica.

Diagnstico de Laboratorio
La muestra se puede obtener a partir de abscesos, con un hisopo.
El aspirado con pus contiene fundamentalmente material necrtico con un nmero relativamente bajo de microorganismos, por lo que la muestra carece de utilidad. Por lo general, hay pocos microorganismos presentes en la sangre de los pacientes bacterimicos (una media de menos de 1 microorganismo por mililitro de sangre), por lo que las muestras de sangre se deben cultivar pero no se deben teir. Se observa la presencia de estafilococos en la nasofaringe de los pacientes con SPEE y la vagina de las pacientes con Sndrome del Shock Txico, pero estas clulas no se pueden distinguir de los microorganismos que normalmente colonizan estas localizaciones. El diagnstico de estas enfermedades se basa en las manifestaciones clnicas del paciente y se confirma con el aislamiento de S. aureus en el cultivo.

Diagnstico de Laboratorio
Microscopa: Cocos gram(+).
Serologa: Los anticuerpos frente a los cidos teicoicos de la pared celular estn presentes en muchos pacientes con infecciones prolongadas por S. aureus. Se detectan en la mayor parte de los pacientes aquejados de endocarditis estafiloccica esta prueba es menos fiable en los pacientes con osteomielitis o portadores de heridas infectadas, ya que el foco de infeccin se encuentra secuestrado en estas localizaciones y los microorganismos no suelen estimular la respuesta inmunitaria humoral. Identificacin: Pruebas bioqumicas (p. ej., reacciones positivas para la coagulasa, protena A, nucleasa termoestable y fermentacin de manitol) para diferenciar S. aureus y otros estafilococos. Se pueden utilizar los patrones de sensibilidad antmicrobiana (antibiogramas), los patrones bioqumicos (biotipaje o caracterizacin bioqumica), la sensibilidad a los bacterifagos (fagotipaje) y el anlisis de cidos nucleicos con el propsito de caracterizar a las especies aisladas con fines epidemiolgicos.

Agar Sangre
DESCRIPCIN
Medio de cultivo enriquecido con la adiccin de sangre. Las hemolisinas son enzimas que lisan los hemates. Las bacterias que producen estas enzimas presentan un halo transparente alrededor de las colonias a consecuencia de la lisis de los hemates. Se siembra por aislamiento en estra en placas de agar sangre y se incuba a 37C.

RESULTADO Hemolisis(+):

Hemolisis(-):

Diagnstico de Laboratorio

Agar Sal y Manitol

DESCRIPCIN
Medio diferencial utilizado para aislamiento e identificacin de Staphylococcus aureus. La alta concentracin de NaCl (7,5 %) le proporciona su carcter selectivo (microorganismos osmotolerantes y osmfilos se pueden multiplicar). Adems, el manitol es el nico azcar presente el cual es fermentado por cepas patgenas de este gnero, diferencindolas de las que no lo son.

RESULTADO

ESPECIES
Staphylococcus aureus (+): Colonias grandes rodeadas de un halo amarillo.

P(+):

La fermentacin produce cidos provocando un viraje del indicador de pH (rojo fenol) a amarillo.

N(-):

Staphylococcus hepidermidis (-): Colonias pequeas rodeadas de un halo prpura (a veces permite el desarrollo de Enterococcus faecalis, pero con un crecimiento muy pobre).

Coagulasa
DESCRIPCIN
La coagulasa es un enzima capaz de desnaturalizar la fibrina del plasma. Bacterias patgenas como Staphylococcus aureus dan una reaccin postiva y los no patgenos negativa. Se aade una suspensin densa de bacterias a un tubo pequea con plasma y se incuba a 37 oC. Se observa la coagulacin a las 4 y 24 h sin sacarlos de la estufa.

RESULTADO P(+):

N(-):

Catalasa
DESCRIPCIN
Catalasa: enzima que protege a las clulas frente al perxido de hidrgeno producido en el metabolismo del oxgeno. Cataliza la formacin de agua y oxgeno a partir del perxido de hidrgeno. Es til para distinguir Streptococcus (negativa) de Staphylococcus (positiva) y Clostridium (negativa) de Bacillus (positiva). La actividad catalasa se detecta aadiendo unas gotas de perxido de hidrgeno sobre las colonias en placa que no sea de agar sangre (dara falsos positivos). La produccin de burbujas indica la presencia del enzima.

RESULTADO P(+):

N(-):

Staphylococcus.
Tratamiento. Los antibiticos de eleccin son oxacilina (u otras penicilinas resistentes a la penicilinasa) o vancomicina para las cepas resistentes a oxacilina. Generalmente es necesario retirar el cuerpo extrao para que el tratamiento tenga xito. El tratamiento precoz de la endocarditis o de las infecciones de derivacin es necesario para evitar posterior dao tisular o la formacin de inmunocomplejos. EI mantenimiento de catteres intravasculares estriles ayuda a prevenir las infecciones