ENZIMAS

Eng. Qumica Gisanara Dors

Estgio de Docncia
2
ENZIMAS - HISTRICO
Catlise biolgica incio sc. XIX
digesto da carne: estmago;
digesto do amido: saliva.
Dcada de 50
Louis Pasteur - concluiu que a fermentao do
acar em lcool pela levedura era catalisada por
fermentos = enzimas.
Eduard Buchner (1897)
extratos de levedo podiam fermentar o acar
at lcool;
enzimas funcionavam mesmo quando removidas
da clula viva.



3
ENZIMAS - HISTRICO
James Sumner (1926)
Isolou e cristalizou a urease;
Cristais eram de protenas;
Postulou que todas as enzimas so protenas.

John Northrop (dcada 30)
Cristalizou a pepsina e a tripsina bovinas;

Dcada de 50 sc. XX
75 enzimas isoladas e cristalizadas;
Ficou evidenciado carter protico.

Atualmente + 2000 enzimas so conhecidas.
4
ENZIMAS
Definio:
Catalisadores biolgicos;
Longas cadeias de pequenas molculas
chamadas aminocidos.
Funo:
Viabilizar a atividade das clulas, quebrando
molculas ou juntando-as para formar novos
compostos.
Com exceo de um pequeno grupo de molculas
de RNA com propriedades catalticas, chamadas de
RIBOZIMAS, todas as enzimas so PROTENAS.


Aminocidos:
H

R C* COOH

NH2
5
ENZIMAS PROTENA
Classificao protenas

Protenas globulares Protenas fibrosas
Estrutura das protenas

Primaria Secundaria Terciria Quaternria

ENZIMAS

Protenas globulares

Estrutura terciria

Protenas com alto peso
molecular, maioria entre 15 a
1000 Kilo Daltons Unit (KD)
OBS: 1 Dalton = 1 unidade de
peso molecular (AMU)



6
ENZIMAS ESTRUTURA



RNA
Estrutura
Enzimtica
Ribozimas
Se covalente
Apoenzima ou
Apoprotena
Grupo Prosttico
Holoenzima
Cofator
Coenzima
Protena
Pode ser:
on inorgnico
molcula orgnica
7
ENZIMAS CARACTERSTICAS GERAIS
Apresentam alto grau de especificidade;
So produtos naturais biolgicos;
Reaes baratas e seguras;
So altamente eficientes, acelerando a
velocidade das reaes (10
8
a 10
11
+ rpida);
So econmicas, reduzindo a energia de
ativao;
No so txicas;
Condies favorveis de pH, temperatura,
polaridade do solvente e fora inica.



8
ENZIMAS
Comparao das enzimas com catalisadores qumicos.


Caracterstica Enzimas Catalisadores Qumicos
Especificidade ao substrato alta baixa
Natureza da estrutura complexa simples
Sensibilidade T e pH alta baixa
Condies de reao (T, P e pH) suaves drstica (geralmente)
Custo de obteno (isolamento e purificao) alto moderado
Natureza do processo batelada contnuo
Consumo de energia baixo alto
Formao de subprodutos baixa alta
Separao catalisador/ produtos difcil/cara simples
Atividade Cataltica (temperatura ambiente) alta baixa
Presena de cofatores sim no
Estabilidade do preparado baixa alta
Energia de Ativao baixa alta
Velocidade de reao alta baixa
9
ENZIMAS NOMENCLATURA
Sculo XIX - poucas enzimas identificadas

- Adio do sufixo ASE ao nome do substrato:

* gorduras (lipo - grego) LIPASE
* amido (amylon - grego) AMILASE

- Nomes arbitrrios:
* Tripsina e pepsina proteases



10
ENZIMAS NOMENCLATURA

1955 - Comisso de Enzimas (EC) da Unio
Internacional de Bioqumica (IUB) nomear e
classificar.

Cada enzima cdigo com 4 dgitos que
caracteriza o tipo de reao catalisada:
1 dgito - classe
2 dgito - subclasse
3 dgito - sub-subclasse
4 dgito - indica o substrato


11
ENZIMAS CLASSIFICAO
1. Oxido-redutases (reaes de oxidao-reduo ou transferncia de eltrons)
1.1.atuando em CH-OH
1.2.atuando em C=O
1.3.atuando em C=O-
1.4.atuando em CH-NH
2
1.5.atuando em CH-NH-
1.6.atuando em NADH, NADPH
2.Transferases (transferem grupos funcionais entre molculas)
2.1.grupos com um carbono
2.2.grupos aldedo ou cetona
2.3.grupos acil
2.4.grupos glicosil
2.7.grupos fosfatos
2.8.grupos contendo enxofre
3.Hidrolases (reaes de hidrlise)
3.1.steres
3.2.ligaes glicosdicas
3.4.ligaes peptdicas
3.5.outras ligaes C-N
3.6.anidridos cidos
Classificao das enzimas segundo a Comisso de
Enzimas.
12
ENZIMAS CLASSIFICAO
4.Liases (catalisam a quebra de ligaes covalentes e a remoo de molculas de gua,
amnia e gs carbnico)
4.1. =C=C=
4.2. =C=O
4.3. =C=N-
5.Isomerases (transferncia de grupos dentro da mesma molcula para formar ismeros)

5.1.racemases
6.Ligases (catalisam reaes de formao de novas molculas a partir da ligao entre
duas pr-existentes, sempre s custas de energia)
6.1. C-O
6.2. C-S
6.3. C-N
6.4. C-C
Classificao das enzimas segundo a Comisso de
Enzimas.
13
ENZIMAS CLASSIFICAO
Subclasses
Exemplos de
Subclasses
Tipo de reao catalisada Classe
Hidratases Adicionam H
2
O ligas duplas Liases
Quinases Transferem fosforilas do ATP Transferase
Mutases Movem fosforilas dentro da
mesma molcula
Isomerase
Sintases Sntese independente de ATP Transferases
Sintetases Sntese dependente de ATP Ligases
14
ENZIMAS NOMENCLATURA



ADP + D-Glicose-6-fosfato ATP + D-Glicose
IUB - ATP:glicose fosfotransferase
E.C. 2.7.1.1
2 - classe - Transferase
7 - subclasse - Fosfotransferases
1 - sub-subclasse - Fosfotransferase que utiliza grupo
hidroxila como receptor
1 - indica ser a D-glicose o receptor do grupo fosfato
Nome trivial: Hexoquinase
15
ENZIMAS CATALISADORES
Aceleram reaes qumicas


Ex: Decomposio do H
2
O
2

Condies da Reao Energia livre de Ativao
KJ/mol Kcal/mol
Velocidade
Relativa
Sem catalisador

Platina

Enzima Catalase
75,2 18,0

48,9 11,7

23,0 5,5
1

2,77 x 10
4


6,51 x 10
8

H
2
O
2
H
2
O

O
2
+
Catalase
16
ENZIMAS CATALISADORES




No so consumidos na reao
H
2
O
2
H
2
O

O
2
+
Catalase
E + S E + P
17
ENZIMAS CATALISADORES




Atuam em pequenas concentraes
1 molcula de Catalase
decompe
5 000 000 de molculas
de H
2
O
2
pH = 6,8 em 1 min
Nmero de renovao = n de molculas de
substrato convertidas em produto por uma nica
molcula de enzima em uma dada unidade de tempo.
18
ENZIMAS CATALISADORES




No alteram o estado de equilbrio
Abaixam a energia de ativao;
Keq no afetado pela enzima.
No apresenta efeito termodinmico global
AG no afetada pela enzima.

Diferena entre
a energia livre
de S e P
Caminho da Reao
Energia de ativao com
enzima
Energia de ativao sem enzima
S
P
19
ENZIMAS
COMPONENTES DA REAO



E + S E S P + E
Substrato se liga ao
STIO ATIVO
da enzima
20
ENZIMAS STIO ATIVO



Regio da molcula enzimtica que participa
da reao com o substrato.
Pode possuir componentes no proticos:cofatores.
Possui aminocidos auxiliares e de contato.


HOLOENZIMA
Poro protica
APOENZIMA
Grupamento
prosttico
Ativador:ons inorgnicos
que condicionam a ao
cataltica das enzimas. Fe
+
Cofator
Coenzima: molcula
orgnica complexa.NAD+
HOLOENZIMA
Poro protica
APOENZIMA
Grupamento
prosttico
Ativador:ons inorgnicos
que condicionam a ao
cataltica das enzimas. Fe
+
Cofator
21
ENZIMAS COFATOR



Algumas enzimas que contm ou necessitam
de elementos inorgnicos como cofatores
ENZIMA COFATOR
PEROXIDASE Fe
+2
ou Fe
+3


CATALASE
CITOCROMO OXIDASE Cu
+2

LCOOL DESIDROGENASE Zn
+2

HEXOQUINASE Mg
+2

UREASE Ni
+2
22
ENZIMAS COENZIMAS



Coenzima Abreviatura Reao
catalisada
Origem
Nicotinamida adenina
dinucleotdio
NAD
+
Oxi-reduo
Niacina ou
Vitamina B
3
Nicotinamida adenina
dinucleotdio fosfato
NADP
+
Oxi-reduo
Niacina ou
Vitamina B
3
Flavina adenina
dinucleotdio
FAD Oxi-reduo
Riboflavina ou
Vitamina B
2
Maioria deriva de vitaminas hidrossolveis
Classificam-se em:
- transportadoras de hidrognio
- transportadoras de grupos qumicos
Transportadoras de hidrognio
23
ENZIMAS COENZIMAS
Coenzima Abrev. Reao catalisada Origem
Coenzima A CoA-SH
Transferncia de
grupo acil
Pantotenato ou
Vitamina B
5

Biotina
Transferncia de
CO
2
Biotina ou
Vitamina H
Piridoxal fosfato PyF
Transferncia de
grupo amino
Piridoxina ou
Vitamina B
6

Metilcobalamina
Transferncia de
unidades de carbono
Cobalamina ou
Vitamina B
12
Tetrahidrofolato THF
Transferncia de
unidades de carbono
cido flico
Tiamina
pirofosfato
TPP
Transferncia de
grupo aldedo
Tiamina ou
Vitamina B
1


Transportadoras de grupos qumicos
24
ENZIMAS
LIGAO ENZIMA - SUBSTRATO



Emil Fischer (1894): alto grau de especificidade das
enzimas originou Chave-Fechadura , que
considera que a enzima possui sitio ativo complementar
ao substrato.

25
ENZIMAS
LIGAO ENZIMA - SUBSTRATO



Koshland (1958): Encaixe Induzido , enzima e o
o substrato sofrem conformao para o encaixe. O
substrato distorcido para conformao exata do
estado de transio.

26
ENZIMAS
ATIVIDADE ENZIMTICA



Enzyme Commission: uma unidade (U) de
atividade a quantidade de enzima que catalisa a
transformao de 1 micro mol de substrato ou a
formao de 1 micro mol de produto por minuto.

Expressa: U = micro moles produto/minuto
Atividade especfica = U/mg de protena

Enzima pura, condies que permita a velocidade da
reao seja mxima o substrato [S]| de modo a
permitir que toda a enzima [E] [ES].

V = K[E] = K[ES]
27
ENZIMAS
ATIVIDADE ENZIMTICA



Fatores que alteram a velocidade de reaes
enzimticas:
- pH;
- temperatura;
- concentrao das enzimas;
- concentrao dos substratos;
- presena de inibidores.
28
ENZIMAS
INFLUNCIA DO PH



O efeito do pH sobre a enzima deve-se s variaes
no estado de ionizao dos componentes do sistema
medida que o pH varia.
Enzimas grupos ionizveis, existem em estados
de ionizao.
29
ENZIMAS
INFLUNCIA DO PH



A estabilidade de uma enzima ao pH depende:
- temperatura;
- fora inica;
- natureza qumica do tampo;
- concentrao de ons metlicos contaminantes;
- concentrao de substratos ou cofatores da enzima;
- concentrao da enzima.
ENZIMA pH TIMO
Pepsina 1,5
Tripsina 7,7
Catalasa 7,6
Arginasa 9,7
Fumarasa 7,8
30
ENZIMAS
INFLUNCIA DA TEMPERATURA



| temperatura dois efeitos ocorrem:
(a) a taxa de reao aumenta, como se observa na
maioria das reaes qumicas;
(b) a estabilidade da protena decresce devido a
desativao trmica.
Enzima temperatura
tima para que atinja sua
atividade mxima, a
temperatura mxima na
qual a enzima possui uma
atividade cte. por um
perodo de tempo.
31
ENZIMAS
INFLUNCIA DA TEMPERATURA



O efeito da temperatura depende:
- pH e a fora inica do meio;
- a presena ou ausncia de ligantes.

Acima desta temperatura, o | velocidade de reao
devido a temperatura compensado pela perda de
atividade cataltica devido a desnaturao trmica.
ENZIMA TEMPERATURA TIMA (C)
Pepsina 31,6
Tripsina 25,5
Urease 20,8
32
ENZIMAS
INFLUNCIA DA TEMPERATURA



Ea Lei de Arrehenius
A
T RT
Ea
k
Ae k
RT Ea
log
1
3 , 2
log
/
+ =
=

Ea pode ser determinada
medindo-se a cte de
velocidade da reao em
temperaturas.
Curva A: grfico usual.
Curva B: o grfico mostra
uma variao definida na
inclinao, se em
determinada temperatura,
uma etapa se torna
limitante da velocidade.
Curva C: uma queda
brusca na curva indica
inativao enzimtica.
33
ENZIMAS
INFLUNCIA DA [E]



Velocidade de transformao do S em P ~ qtidade
de E.
Desvios da linearidade ocorrem:
- Presena de inibidores na soluo de enzima;
- Presena de substncias txicas;
- Presena de um ativador que dissocia a
enzima;
- Limitaes impostas pelo mtodo de anlise.
Recomenda-se:
- Enzimas com alto grau de pureza;
- Substratos puros;
- Mtodos de anlise confivel.
34
ENZIMAS
INFLUNCIA DA [S]
[S] varia durante o curso da reao medida que S
convertido em P.
Medir Vo = velocidade inicial da reao.



vo

[S]
Vmax
[E] = cte.
[S] pequenas Vo| linearmente.
[S] maiores Vo| por incrementos
cada vez menores.
Vmax [S]| Vo| insignificantes.
Vmax atingida E estiverem na
forma ES e a [E] livre insignificante,
ento, E saturada com o S e V no |
com | de [S].
35
ENZIMAS
CINTICA ENZIMTICA



Victor Henri (1903): E + S ES


1913
Leonor Michaelis -Enzimologista
Maud Menten - Pediatra
E + S
K1
K-1
ES
Kp
E + P
Etapa rpida Etapa lenta
36
ENZIMAS
CINTICA ENZIMTICA



Cintica Enzimtica

Determinar as constantes de afinidade do S e
dos inibidores;
Conhecer as condies timas da catlise;
Ajuda a elucidar os mecanismos de reao;
Determinar a funo de uma determinada
enzima em uma rota metablica.
37
ENZIMAS
CINTICA ENZIMTICA


v =
Vmax [S]
Km + [S]
[S]
v
Vmax
2
v = Vmax
v = Vmax [S]
Km
Km
1
2
3
1- [S]+ Km>>[S]
2- [S]| [S]>>Km
3- v = Vmax
2
38
ENZIMAS
CINTICA ENZIMTICA
Afinidade da enzima ao substrato.
Km depende:
aspectos especficos do mecanismo de reao;
n de passos da reao;
velocidades relativas dos passos individuais.
ENZIMA SUBSTRATO Km (mM)
Catalase H2O2 25
Hexoquinase ATP 0,4
D-Glicose 0,05
D-Frutose 1,5
Quimotripsina Gliciltirosinilglicina 108
N-benzoiltirosinamida 2,5
39
ENZIMAS
CINTICA ENZIMTICA
Vmax:
E + S
K
1
K
-1
ES
K
p
E + P
Vmax = K
p
[E
t
]
E + P
E + S
K
1
K
-1
ES
K
2
EP
K
3
K
-2
Vmax = K
3
[E
t
]
Vmax [E]
Vmax [2E]
V
[S]
40
Enzimas
ordem da reao



Quando a formao de
P for proporcional [S]
a velocidade da reao
de 1
a
ORDEM
Quando a velocidade
da reao independe
da [S] a reao de
ORDEM ZERO
V
[S]
[S]+ [S] <<Km
v = Vmax
v = Vmax [S]
Km
v = K[S]
[S]| [S]>>Km
41
ENZIMAS
MTODOS GRFICOS
max
V
1
[S]
max
V
m
K
v
1
+ =
Grfico dos Recprocos de Lineweaver-Burk
1
[S]
1
v
-1
Km
1
Vmax
Km
Vmax
Inclinao =
42
ENZIMAS
MTODOS GRFICOS
Grfico de Eadie-Hofstee
[S]
v
m
K
max
V v =
Vmax
Km
v
-Km
Inclinao =
v
[S]
Vmax
43
ENZIMAS
MTODOS GRFICOS
Grfico de Hanes-Woolf
[S]
[S]
v
-Km
Km
Vmax
1
Vmax
Inclinao =
[S]
max
V
1
max
V
m
K
v
[S]
+ =
44
ENZIMAS
MTODOS GRFICOS
Grfico da equao integrada de Michaelis-Menten
Vmax
Km
-1/Km Inclinao =
([S]o-[S])
t
Vmax
2,3log[S]o
t [S]
t
[S]) ([S]
K
1
K
V
[S]
[S]
log
t
2,3
o
m m
max o

=
45
ENZIMAS
INIBIO ENZIMTICA
Qualquer substncia que reduz a velocidade de uma
reao enzimtica.
INIBIDORES


REVERSVEIS IRREVERSVEIS


COMPETITIVOS NO COMPETITIVOS INCOMPETITIVOS
46
ENZIMAS
INIBIO COMPETITIVA
Inibidor competitivo concorre com o S pelo sitio ativo da E
livre.
I anlogo no metabolizvel, derivado de um S
verdadeiro, S substituto da E ou um P da reao.
[substrato] necessria para
obter a mesma [ES]
afinidade da enzima pelo
substrato
I compostos com estrutura
molecular lembra S
Km aparente
da enzima
47
ENZIMAS
INIBIO COMPETITIVA
E + S
ES E + P
EI
I

+


K
1
K
I
K
2
] [
1
)
] [
1 (
1 1
] [ )
] [
1 (
] [
] [
] ][ [
max max
max
S K
I
V
K
V v
S
K
I
K
S V
v
EI
I E
K
I
m
I
m
I
+ + =
+ +
=
=
Michaelis-Menten
Lineweaver-Burk
48
ENZIMAS
INIBIO COMPETITIVA
1- sem inibidor
2- com inibidor na concentrao [I1]
3- com inibidor na concentrao [I2] > [I1]
49
ENZIMAS
INIBIO NO-COMPETITIVA
Inibidor no-competitivo se liga reversivelmente,
aleatria e independentemente em um stio que lhe
prprio.

I no tem semelhana
estrutural com o S

[substrato] no diminui a
inibio

Km da enzima NO se altera

Vmax na presena do
inibidor
50
ENZIMAS
INIBIO NO-COMPETITIVA
E + S
ES E + P
EI + S
EIS
+
I
+
I
K
S
K
I
K
2
K
I
K
S
(
)
] [
1 (
1
] [
1
)
] [
1 (
1
)
] [
1 ]( [ )
] [
1
] [
] [
] ][ [
] [
] ][ [
max max
max
I I
m
I I
m
I
K
I
V S K
I
V
K
v
K
I
S
K
I
K
S V
v
EIS
I ES
EI
I E
K
+ + + =
+ + +
=
= =
Lineweaver-Burk
Michaelis-Menten
51
ENZIMAS
INIBIO NO-COMPETITIVA
1- sem inibidor
2- com inibidor na concentrao [I1]
3- com inibidor na concentrao [I2] > [I1]
52
ENZIMAS
INIBIO INCOMPETITIVA
Inibidor incompetitivo se liga reversivelmente, em
um stio prprio, ao complexo ES.

I no tem semelhana
estrutural com o S

I favorece a formao do ES

Km e Vmax da enzima

53
ENZIMAS
INIBIO INCOMPETITIVA
E + S
ES E + P
EIS
+
I
K
S
K
2
K
I
)
] [
1 (
1
] [
1 1
] [
] [
1
] [
] [
1
] [
] ][ [
max max
max
I
m
I
m
i
I
K
I
V S V
K
v
S
K
I
K
S
K
I
V
v
EIS
I ES
K
+ + =
+
+
+
=
=
Lineweaver-Burk
Michaelis-Menten
54
ENZIMAS
INIBIO INCOMPETITIVA
1- sem inibidor.
2- com inibidor na concentrao [I1]
3- com inibidor na concentrao [I2] > [I1]
55
ENZIMAS
INIBIO IRREVERSVEL
I se combina com um grupo funcional, na molcula
da E, que essencial para sua atividade.
Podem promover a destruio do grupo funcional
Forma-se uma ligao COVALENTE entre o I e a E.
Vmax + parte da E completamente removida do
sistema e Km permanece a mesma.
K
2
E + P
E + S
ES
K
1
EI
+
I
56
ENZIMAS
INIBIO IRREVERSVEL
Graficando Vmax vs a quantidade total de E adicionada
ao meio de reao em presena de I.
57
ENZIMAS
ENZIMAS REGULATRIAS
No obedecem a cintica de Michaelis-Menten.
Controlam a etapa limitante em uma cadeia de
reaes enzimticas.
Tem sua atividade cataltica aumentada ou diminuda
em resposta a determinados sinais, molculas
sinalizadoras (pequenos metablicos ou cofatores).
Classes de enzimas reguladoras:
Enzimas alostricas;
Enzimas reguladas pela modificao covalente
reversvel.
58
ENZIMAS
ENZIMAS REGULATRIAS
Enzimas alostricas
Funcionam atravs da ligao no-covalente e reversvel
de um metablito regulador chamado modulador;
Moduladores podem ser inibidores ou ativadores;
So maiores e mais complexas, possuem duas ou mais
cadeias polipeptdicas.

Enzimas reguladas pela modificao covalente
reversvel
Grupos qumicos so ligados covalentemente e
removidos da enzima reguladora por enzimas , podem
ser: fosfato, adenosina monofosfato, grupos metil, etc.

59
ENZIMAS
ENZIMAS REGULATRIAS
1- Comportamento tipo Michaelis-Menten.
2- Comportamento Alostrico.
60

Imobilizadas
Reutilizao
Maior estabilidade
(faixas mais amplas de
pH e temperatura)
Menor interferncia de
inibidores e/ou
ativadores

Livres
Instabilidade
Rpida perda da
atividade cataltica
No podem ser
recuperadas
Enzimas Livres versus Enzimas Imobilizadas
ENZIMAS - IMOBILIZADAS
61
ENZIMAS - IMOBILIZADAS
A enzima livre imobilizada em um suporte inerte
como vidro poroso, bentonite, etc.

O principal interesse em imobilizar uma enzima
obter um biocatalisador com atividade e
estabilidade que no sejam afetadas durante o
processo, em comparao sua forma livre.
62
ENZIMAS - IMOBILIZADAS
63
ENZIMAS - IMOBILIZADAS
Vantagens da utilizao de enzimas imobilizadas
- As enzimas podem ser reutilizadas
- Os processos qumicos podem ser continuamente operados e
prontamente controlados
- Os produtos podem ser facilmente separados
- Os problemas com elfuentes e manipulaes de materiais so
minimizados
- A reprodutibilidade do procedimento analtico pode ser
aumentada
- Em alguns casos, as propriedades enzimticas (atividade e
estabilidade operacionais) podem ser alteradas
64
ENZIMAS - IMOBILIZADAS
Propriedades de Enzimas Imobilizadas
Efeitos sobre a atividade enzimtica:

Modificao da estrutura tridimensional;

Modificao do microambiente;

Fenmenos de difuso no interior do complexo.

65
ENZIMAS - IMOBILIZADAS
Medida da atividade:
Atividade da enzima imobilizada mais fraca
que a das enzima nativa, mas a estabilidade
maior.

Influencia das condies operacionais:
pH e temperatura desnaturao parcial ou
total da protena;
imobilizada resistem melhor a variaes de pH
e tratamentos trmicos;
Obs: origem da enzima, suporte utilizado e mtodo de fixao
66
ENZIMAS - IMOBILIZADAS
Aplicaes de Enzimas Imobilizadas
Aplicaes analticas:
Facilita automatizao das cadeias de dosagem e
simplifica as manipulaes.
Biossensores:
Imobilizao de colinesterase e anticorpos
sobre cristal piezeltrico utilizadas na
deteco de pesticidas organofosforados;
Reatores para anlise cromatogrfica;
Kits para titulaes e imunoensaios.
67
ENZIMAS - IMOBILIZADAS
Indstria de alimentos:
Glicose isomerase fixada para a produo de
xaropes com alto teor de frutose;
Celulase Converso de celulose em acares
solveis;
Imobilizao de fermento de po (Sacharomices
cerevisae) lcoois enantiomericamente puros.

Uso Industrial:
Fonte para produo de penicilinas sintticas.
68
ENZIMAS - IMOBILIZADAS
Lipases imobilizadas:
Imobilizadas em organo-gel utilizadas na esterificao
do cido olico com n-pentanol;
Imobilizadas em carvo de coco, bauxita e gel de gar
utilizadas na transformao de leo de soja em
biodisel.

Aplicaes na medicina:
Hidrogel contendo enzimas imobilizadas Substrato
presente - converso enzimtica - produto muda a
conformao do hidrogel liberao da droga.

69
ENZIMAS - IMOBILIZADAS
Em desenvolvimento:
Estudos de filtros que utilizam enzimas
imobilizadas na superfcie do meio filtrante para o
tratamento do ar dos ambientes.
Recentes avanos na imobilizao de enzimas por
argilas, utilizadas em bioremediao.
Estudos em desenvolvimento: imobilizao,
estabilizao e aplicao da enzima esterase, de
rim de porco, na sntese de produtos de interesse
farmacutico.

70
ENZIMAS APLICAES
ENZIMA FONTE APLICAO
Papana mamo Ajuda na digesto, Mdica,
bebidas, carnes
Bromelina abacaxi Ajuda na digesto, Mdica,
bebidas, carnes
Diastase malte Panificao, xarope
Pepsina mucosa gstrica
suno
Amaciamento de carne
Lipase Candida rugosa Tratamento de efluentes
Permitem s indstrias usarem processos mais
econmicos, diminuindo o consumo de energia e
recursos; mais confiveis e que poluem menos.
So eficientes;
Muito especficas;
Permite produo segura e ambientalmente amigvel.
Origem vegetal
Origem animal
Origem microbiana

71
ENZIMAS APLICAES
Proteases

Leite: na preparao do leite de soja.
Carnes e Peixes: recuperao de protenas do osso
ou espinha.
Vinhos: clarificao.
Queijo: coagulao da casena.
72
ENZIMAS APLICAES
Lactase
Sorvete: preveno da cristalizao da lactose.
Leite: estabilizao das protenas do leite em
leites congelados por remoo da lactose.
Hidrlise da lactose, permitindo o uso por
adultos deficientes na lactase intestinal e em
crianas com deficincia em lactase congnita.
Rao: converso da galactose em lactose e
glicose.

73
ENZIMAS APLICAES
o-amilase
Fermentados: converso do amido a maltose
por fermentao. Remoo da turbidez do
amido
Cereais: converso do amido a dextrinas e
maltose.
Chocolate/cacau: liquefao do amido

74
ENZIMAS APLICAES
Peroxidase
Deteriorao - Frutas: contribui na reao de
escurecimento.
Polifenoloxidase

Ch/Caf: desenvolvimento do escurecimento
durante o amadurecimento e fermentao.
Deteriorao - Frutas e Vegetais: reao de
escurecimento e perda de vitaminas.
75
ENZIMAS APLICAES
Enzimas utilizadas em raes para aves.

Melhora a utilizao de gorduras animais e vegetais Lipdios e
cidos graxos
Lipases
Remoo de Galactosdios Galactosdios Galactosidases
Melhora a utilizao do fsforo dos vegetais.
Remoo do cido ftico.
cido ftico Fitase
Suplementao das enzimas endgenas. Degradao
mais eficiente do amido.
Amido Amilases
Suplementao das enzimas endgenas. Degradao
mais eficiente de protenas.
Protenas Proteases
Degradao da celulose e liberao de nutrientes Celulose Celulases
Reduo da viscosidade da digesta. Pectinas Pectinases
Reduo da viscosidade da digesta. Menor umidade
na cama.
|-glucanos Glucanases
Reduo da viscosidade da digesta. Arabinoxilanas Xilanase
Efeitos Substrato Enzima
76
ENZIMAS APLICAES
Tratamento de efluentes
Preocupao ambiental desencadeou uma procura
por outras alternativas, as chamadas "tecnologias
limpas.
Enzimas substituir muitos componentes
qumicos utilizados nos processos industriais atuais.
77
ENZIMAS APLICAES
Enzimas utilizadas em tratamento de efluentes.

Enzima e fonte Poluentes e efluentes
Azorredutase (Pseudomonas luteola) Indstria de tinta
Catalase (Baccilus sp.) Remoo de H2O2 presente em efluentes de
branqueamento de tecidos
|-glicosidase e Mangans peroxidase Remoo de corantes azo na industria de alimentos e
da industria txtil
Polifosfatase e Fosfotransferase Remoo de fosfato biolgico de efluentes
Protease pronase (Pseudomonas aeruginosa) Inativao de vrus bacterifago Cox A9 de efluentes,
para reutilizao da gua
Naftaleno-dioxigenase Remoo de naftaleno
Lipase (Penicillium P4) Remoo do teor de DQO de efluentes de leo de oliva
(Candida rugosa) Reduo do teor de lipdeos e DQO efluentes avcolas
(pncreas de porco) Reduo do teor de lipdeos e SS de efluentes da
indstria de derivados lcteos
78
ENZIMAS APLICAES
Industria de lcool;
Industria de detergentes;
Industria txtil;
Industria de papel e celulose;
Curtumes;
Produo de cido ctrico, cido glutmico, insulina,
vacinas, esterodes, vitaminas e antibiticos;
Bioremediao: de polmeros, de hidrocarbonetos e
clorados.

79
ENZIMAS APLICAES
Aplicao da Lipase no tratamento de guas
residurias com elevados teores de lipdeos
JUSTIFICATIVA
Efluentes com | teores de gorduras e leos e que
utilizam o processo anaerbio, a 1 etapa m.o. para
degradar as gorduras a produo de enzimas
capazes de hidrolisar os triglicerdeos.
Etapa lenta e nem sempre h m.o. especficos
para a produo de lipase no consegue atingir
bons resultados.
Gorduras se solidificam a baixas temperaturas:
formao de uma camada gordurosa sobre as lagoas,
caminhos preferenciais e arraste da biomassa.
80
ENZIMAS APLICAES
OBJETIVO
Viabilizar tecnicamente a aplicao de um pr-
tratamento enzimtico para remoo de gorduras,
utilizando preparaes de lipases pancreticas fornecidas
pelas empresas Kin Master (LKM) e Nuclear (LNU).
Caracterizar o efluente
Caracterizar as propriedades catalticas das enzimas
Testar tempos de hidrolise na formao de cidos
graxos (2h, 4h, 8h, 12h e 24h)
Avaliar o impacto do tratamento enzimtico por
meio de testes de biodegradabilidade expressa pela
formao de metano, DQO e atividade metanognica.


81
ENZIMAS APLICAES

MATERIAIS E MTODOS
Determinao da Atividade Hidroltica
Substrato:Controle = azeite de oliva
Efluente = efluente de indstria de
produtos avcolas
Tampo e soluo enzimtica (5mg/mL). Branco
Incubados em banho-maria sob agitao
Soluo de etanol:acetona parar a reao
cidos graxos liberados titulados com KOH (0,02M)
e indicador fenolftalena
t.m
).M.10 V (V
U
6
b
a

=
(moles/mg.min)
82
ENZIMAS APLICAES
RESULTADOS



Influncia do pH na atividade hidroltica das lipases
LNU e LKM
350
850
1350
1850
2350
2850
3350
3850
4350
5,5 6 6,5 7 7,5 8 8,5
pH
A
t
i
v
i
d
a
d
e

(
U
)
100
120
140
160
180
200
220
240
LNU - Controle
LNU - Ef luente
83
ENZIMAS APLICAES
Influncia do pH na atividade hidroltica das lipases
LNU e LKM
50
550
1050
1550
2050
2550
3050
5,5 6 6,5 7 7,5 8 8,5
pH
A
t
i
v
i
d
a
d
e

(
U
)
50
150
250
350
450
550 LKM - Controle
LKM - Ef luente
RESULTADOS



84
ENZIMAS APLICAES
RESULTADOS



Influncia do pH na atividade hidroltica das lipases
LNU e LKM
0
100
200
300
400
500
600
700
5,5 6 6,5 7 7,5 8 8,5 pH
A
t
i
v
i
d
a
d
e

(
U
)
130
145
160
175
190
205
220
235
LKM - Ef luente
LNU - Ef luente
85
ENZIMAS APLICAES
RESULTADOS



750
1250
1750
2250
2750
3250
3750
25 31 37 43 49 55 61
Temperatura (C)
A
t
i
v
i
d
a
d
e

(
U
)
210
260
310
360
410
460
510
560
610
LNU - Controle
LNU - Ef luente
Influncia da Temperatura na atividade hidroltica das
lipases LNU e LKM
86
ENZIMAS APLICAES
Influncia da Temperatura na atividade hidroltica das
lipases LNU e LKM
1000
1500
2000
2500
3000
25 30 35 40 45 50 55 60 65
Temperatura (C)
A
t
i
v
i
d
a
d
e

(
U
)
250
300
350
400
450
500
550
600
LKM - Controle
LKM - Ef luente
RESULTADOS



87
ENZIMAS APLICAES
Influncia da Temperatura na atividade hidroltica das
lipases LNU e LKM
200
250
300
350
400
450
500
550
600
650
25 30 35 40 45 50 55 60 65
Temperatura (C)
A
t
i
v
i
d
a
d
e

(
U
)
250
300
350
400
450
500
550
600
LNU - Ef luente
LKM - Ef luente
RESULTADOS



88
ENZIMAS APLICAES
RESULTADOS



10 20 30 40 50 60
300
400
500
600
700
800
900
Lipase Pancreatina (LKM)
Lipase Pancreatina (LNU)


A
t
i
v
i
d
a
d
e

(
U
)
concentrao (%)
Influncia da concentrao de substrato na atividade
hidroltica das lipase LKM e LNU