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CAPTURA HIBRIDA II

CAMILA LIMA DIOGO Clique para editar o estilo do subttulo mestre ANANERE

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Prevalncia de HPV de baixo e alto risco pela tcnica de biologia molecular (Captura Hibrida II) em Santa Catarina

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MATERIAL E MTODO

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Tcnica molecular de Captura Hibrida II (Digene R)

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Foi feito um levantamento resultados positivos.

dos

De acordo com as idades, agruparam-se casos, nos seguintes grupos

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RESULTADOS E DISCUSSO

FIGURA

1. Distribuio percentual do nmero de exames positivos e negativos para

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RESULTADO E DISCUSSO
No

presente estudo foi encontrada alta porcentagem de HPV de alto risco, o que indica a importncia da realizao de um exame especifico para detectar o vrus do HPV, podendo assim diminuir a morbidade do cncer de colo de tero.

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Incidncia de HPV positivos de alto e baixo risco por faixa etria no perodo de 2001-2005. Conforme exposto no grfico 1
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Esses dados demonstram que indivduos com menos de 25 anos, tiveram maior prevalncia para HPV positivo, e essa prevalncia foi 4/9/12

Os

resultados obtidos nesta pesquisa apresentam-se coerentes com os dados encontrados na literatura em relao a distribuio dos resultados positivos para HPV de baixo e/ou alto risco nas diferentes faixas etrias. vitimas preferenciais desse vrus so as que esto entre 15 e 25 anos. infeco por HPV e mais comum em pessoas sexualmente ativas entre 20 e 24 anos, independente do tipo viral.
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As

Verificando

que abaixo dos 35 anos houve uma maior prevalncia do HPV de baixo risco. fato pode ser explicado, em partes, pelo aumento da freqncia sexual nesta idade. que acarreta em uma maior periodicidade na pratica de exames de preveno, diminudo a incidncia de cncer de colo uterino. na faixa etria acima de 35 anos, ha uma 4/9/12 maior incidncia de HPV de alto risco,

Este

O grfico 2 ilustra a prevalncia de HPV de baixo e alto risco por faixa etria

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No entanto, quando comparada a prevalncia do HPV de baixo e alto risco em relao a faixa etria, o HPV de baixo risco teve uma maior incidncia na populao.

o HPV de alto risco foi mais prevalente.


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Verificou-se com o desenvolvimento deste trabalho, a grande incidncia do HPV na populao estudada.

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Com

isso, destaca-se a importncia da deteco do HPV atravs de metodologias mais sensveis, como testes de biologia molecular (Captura Hibrida IIR), para garantir o diagnostico precoce deste que vem sendo considerado o maior agente causador de cncer de colo de uterino.

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Concluso

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Papilomavirus humano associado a leses de crvice uterina


Tcnica de editar o Clique paradot blot estilo do subttulo mestre

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O mtodo mais simples de deteco do HPV a observao das verrugas genitais a olho nu. Entretanto, estima-se que apenas 1% dos pacientes com infeces pelo HPV apresentam condilomas tpicos (verrugas visveis) e que a grande maioria dos casos so subclnicos, portanto, assintomtico, o que muitas vezes dificulta um diagnstico . O diagnstico das infeces subclnicas baseia-se principalmente no exame de Papanicolau ou citopatolgico e na Genistoscopia, que se utilizam de reagentes e lentes de aumento. Outros mtodos, como bipsia dirigida e biologia molecular, so utilizados na identificao da infeco, sendo que o PCR ou a captura hbrida utilizados principalmente nos casos de infeces recorrentes e persistentes para identificao do DNA HPV, proporcionando um melhor direcionamento na conduta a ser adotada com este paciente, tratamento ou apenas controle.

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Objetivo

Determinar a prevalncia e identificar os tipos de HPV mais frequentes em mulheres com leses de crvice uterina, agrupadas segundo diagnstico histopatolgico, em Belm, Par.

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Materiais e mtodos
228 amostras de crvice uterina

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PCR Baseou-se na descrio de Manos et al Como controle de qualidade utilizaram-se primers capazes de amplificar um fragmento do gene de globina humana. Controles positivos (clulas He-La ou clulas Caski) Controle negativo 4/9/12 (gua).

Primers genricos MY09 e MY11, que detectam ampla faixa dos diferentes tipos de HPV em uma rea bem delimitada de seus genomas

1l de cada amostra do DNA a ser testado 49l de uma mistura (MIX)

33 ciclos de amplificao em aparelho ciclador de temperatura

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Aps eletroforese em gel de agarose a 2%, os produtos da PCR foram corados em soluo de brometo de etdio e visualizados luz ultravioleta.

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Tcnica de hibridizao por DOT BLOT


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A tipagem dos HPV foi realizada nas amostras que amplificaram ou no 450 pares de bases da regio L1 dos HPV.

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Resultados

Todas as amostras foram testadas por PCR, enquanto que pela hibridizao por dot-blot analisaram-se 147 (de um total de 150) no grupo A, 49 (das 54) no grupo B e 17 (das 19) no grupo C.

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Tabela 1 - Presena de papilomavirus humano em leses de crvice uterina, pelas tcnicas de PCR e hibridizao por dot- blot, segundo os grupos estudados*, Belm, Par (1992-1996).

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60,4 0%

Tipos prevalentes de HPV em 106 amostras de crvice uterina, de pacientes do grupo A (Ambulatrio do IOL), pela tcnica de hibridizao por d o t - b l o t, Belm, Par (1992-1996).

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Prevalncia de papilomavirus humano em leses de crvice uterina pelas tcnicas de PCR e hibridizao por dot-blot, segundo os grupos estudados*, Belm, Par (1992-1996).

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Tipos prevalentes de HPV em 33 amostras de crvice uterina, de pacientes do grupo B (Ambulatrio do IOL), pela tcnica de hibridizao por d o t - b l o t, Belm, Par, (1992-1996).

54,5 5%

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QUADRO III CARACTERSTICAS DOS TESTES DE DNA PARA DETECO DA INFECO POR HPV FACILIDADE ESPECIFICIDAD SENSIBILIDADE E PARAO TESTE Alta Moderada Moderada Alta Alta Alta Fraca Boa Boa

TESTE

COMENTRIOS Excelente para pesquisa e controle de qualidade, porm muito demorado e de difcil uso na clnica diria Rpido e relativamente barato Localiza DNA do HPV em tecidos Simples execuo, porm pouco preciso Altssima sensibilidade, porm alto risco de falso-positivo exceto nos quando for realizado PCR "REAL TIME" com proteo bioqumica UDL (Uracil DNA glicosilase) pois zera a contaminaodo TIPO "CARRY-OVER" Rpido e pode ser usado na 4/9/12

Southern Blot Dot Blot Hibridiza oin situ Hibridiza o in situcom filtro

Fraca

Fraca

Boa

PCR

Muito alta

Alta

Boa

Captura

Alta

Alta

Boa

Concluso

Os resultados aqui discutidos reforam a correlao entre certos tipos de HPV, especialmente o 16, no desenvolvimento de leso maligna de crvice uterina.

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Referncias

http://rsbweb.nih.gov/ij/docs/examples/dot-blot/dot-blot.jpg http://www.virushpv.com.br/novo/diagnostico.php www.dspace.espol.edu.ec/.../9029/.../D-39716.p... www.dms.ufsc.br/.../9560_AULA_BIO_MOL_Agosto_2009.ppt

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