Replicao do DNA

Prof. Dr. Francisco Prosdocimi

Mitose / Meiose

Como acontece a sntese do DNA?

Meselson-Stahl experiment
1957 Cresceram E. coli em meio com N-15 e depois voltaram pra N-14 Purificao do DNA das bactrias Trs tipos de DNA
N-15 + N-15 N-15 + N-14 N-14 + N-14

Ao aquecer o N-15 + N-14 e separar as fitas ficava claro que uma fita continha N-15 e outra N-14

Replicao semi-conservativa

Origens de replicao
Locais com um contexto de sequncia especfico Ligam protenas especficas Quando acionadas, essas protenas permitem o incio da replicao

Origens de replicao

Replicao
DNA Polimerase III Sentido 5 3 Nucleotdeos 3P so adicionados
Liberao de Pirofosfato

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Primase
Ribonucleoprotena Liga-se helicase em procariotos formando o chamado primossomo Sintetiza um primer de RNA contendo aproximadamente 11 bases; fornece 3 OH DNA polimerase lenta e sujeita a erros Evita a progresso da forquilha uma vez que a fita lder anda mais rpido

Micrografia, bolha de replicao

Forquilhas de replicao

Forquilha de replicao

Replicao das fitas

Fita lder
Primase age uma vez

Fita retardada
Primase age vrias vezes 1967, Fragmentos de Okasaki
Okazaki R, Okazaki T, Sakabe K, Sugimoto K. Mechanism of DNA replication possible discontinuity of DNA chain growth. Jpn J Med Sci Biol. 1967 Jun;20(3):255-60

Primase na fita retardada

Deslocamento da forquilha de replicao Primase faz primer

Direes de replicao na Forquilha

Desenovelamento do DNA
Retirada das histonas Protenas de ligao a fita simples (SSBPs) DNA helicase
Quebra pontes de H

DNA topoisomerases
Tiram a tenso

Forquilha de replicao

Polaridade da sntese define fitas lder e retardada (descontnua)

DNA polimerase
Enzimas que catalisa a reao de sntese do DNA Adiciona nucleotdeos trifosfato extremidades 3OH livre Alongamento da cadeia de DNA sempre feito na direo 5>3 (endonuclease 5>3) Incapaz de fazer DNA do zero (precisa ter extremidade 3OH livre) Possui mecanismo de correo de erros (exonuclease 3>5)

Tipos de DNA polimerase

DNA polimerase I
Descoberta em 1956 (Kornberg pai) Funo precisa descoberta apenas em 1969: remove o primer de RNA da fita descontnua

DNA polimerase III

Descoberta em 1970 (Kornberg filho) Principal enzima que realiza a replicao em procariotos

DNA polimerase II
Lenta, envolvida em reparo do DNA

DNA Replication
DNA Pol precisa de um molde inicial Primase: gera um molde de RNA complementar A DNA Pol III agora capaz de adicionar bases extremidade 3OH

Eliminao dos fragmentos de Okasaki

DNA Pol I

Mecanismo da enzima Ligase

Viso geral
Repare na posio do primer de RNA

Reparo pela Polimerase

Mecanismo de verificao (Proof-reading) DNA-polimerase possui
Uma atividade de polimerizao 5 3 Uma atividade de exonuclease 3 5

Reparo pela Polimerase

Mecanismo de verificao (Proof-reading) DNA-polimerase possui
Uma atividade de polimerizao 5 3 Uma atividade de exonuclease 3 5

DNA Repair
Checagem de pareamento incorreto (eucariotos) Protenas especiais para reparo do erro

E as extremidades dos cromossomos?

Doenas causadas por problemas no mecanismos de replicao

Ataxia de Friedreich's
dano progressivo no sistema nervoso (problemas musculares, na fala e doenas no corao) forma mais comum das ataxias herdadas A seqncia GAATTC se repete, quando existem mais de 40 repeties, o indivduo apresenta a doena.

Xeroderma pigmentosum
envelhecimento precoce aumento na incidncia de cncer Falha no mecanismo de reparao do DNA causado pela luz UV

Ciclo celular
A replicao do DNA regulada temporalmente Fase S do ciclo celular Checkpoints do ciclo celular Ciclinas

Concluses
Replicao semi-conservativa Bolha de replicao avana em duas direes Fita lder e fita retardada Helicases e topoisomerases desenrolam o DNA Primase faz o primer DNA polimerase III, DNA polimerase I DNA ligase Telomerase