DNA recombinante

Es una molcula que proviene de la unin artificial de 2 fragmentos de DNA

Este trmino se reserva a las molculas de DNA producidas por la unin de segmentos que provienen de diferentes fuentes biolgicas de manera artificial. La primera molcula de DNA Recombinante fue creada en 1972 por el bilogo molecular Paul Berg.

Tecnologa del DNA recombinante

Es el conjunto de tcnicas que permiten aislar un gen de un organismo, para su posterior manipulacin e insercin en otro diferente, logrando que ste organismo incorpore dicho material a su genoma y lo exprese como si fuera suyo.

Podemos hacer que un organismo (animal, vegetal, bacteria, hongo) o un virus produzca una protena que le sea totalmente extraa.

Tecnologa del DNA recombinante

Esta tecnologa se desarroll a partir del descubrimiento de las endonucleasas de restriccin y su accin sobre los cidos nucleicos.
Endonucleasas de restriccin: Son enzimas sumamente especficas, capaces de cortar ambas hebras del DNA en lugares especficos, creando de esta manera una serie de fragmentos.

Trabajan nicamente sobre secuencias especficas de bases nitrogenadas. La funcin de las enzimas de restriccin es la de proteger al organismo de DNA extrao.

Algunas enzimas de restriccin comunes, con sus sitios de reconocimiento y de corte, el patrn de corte y la fuente de origen.

Vectores: El vector es el vehculo que transporta el gen o genes de inters al organismo hospedador. Permiten la unin de los fragmentos de DNA extrao a su propio DNA por medio de sitios de restriccin compatibles Una vez dentro la clula, el vector se multiplica produciendo varias copias idnticas del gen que transporta. Debe ser fcil de recuperar. Principales vectores: -Plsmidos -Fagos -Cosmidos -Cromosomas Artificiales (YACS).

Plsmidos:
Son molculas de DNA circular bicatenario de carcter extracromosmico que se encuentran en el citoplasma de las bacterias y tienen la capacidad de replicarse autnomamente. Contienen un nmero limitado de sitios de restriccin. Poseen genes de resistencia para varios antibiticos. El vector PBR322 fue uno de los primeros plsmidos usados para la construccin de DNA recombinante.

Fagos o Bacterifagos: Los virus ms empleados como vectores para DNA recombinante son los bacterifagos lambda por su facilidad de incorporar genes de otros individuos a su genoma La transduccin especializada que presentan los fagos lambda hacen que sean usados como vectores.

Los csmidos
Los csmidos son vectores hbridos construidos utilizando partes del cromosoma del fago lambda y de DNA plasmdico. El DNA de los csmidos que contiene insertos de DNA se empaqueta en la cpside proteica de lambda para formar partculas fgicas infectivas. Una vez el csmido entra en la clula husped, se replica como un plsmido. Puesto que la mayora del genoma de lambda se ha delecionado, los csmidos pueden transportar insertos de DNA mucho ms grandes que los que lambda puede llevar. Los csmidos pueden transportar casi 50kb de DNA insertado, mientras que los vectores fgicos pueden acomodar insertos de DNA de unas 15kb y los plsmidos generalmente estn limitados a insertos de 5-10kb.

Cromosomas artificiales
Transportan grandes cantidades de material gentico.Son muy tiles en la secuenciacin del genoma. Cromosoma artificial de levadura: YACS Es uno de los mas utilizados. Los segmentos de ADN contienen todos los elementos necesarios para propagar un cromosoma en levaduras.

Los procedimientos bsicos incluyen una serie de pasos:

Los fragmentos de DNA se generan utilizando las endonucleasas de restriccin, que reconocen y cortan las molculas de DNA por secuencias nucleotdicas especficas. Los fragmentos producidos mediante la digestin con enzimas de restriccin se unen a los vectores. Los vectores pueden replicarse autnomamente en una clula husped y facilitan la manipulacin de la molcula de DNA recombinante recin creada.

La molcula de DNA recombinante, formada por un vector que lleva un segmento de DNA insertado, se transfiere a una clula husped.
Dentro de esta clula, la molcula de DNA recombinante se replica, produciendo docenas de copias idnticas conocidas como clones.

Al replicarse las clulas husped, las clulas descendientes heredan el DNA recombinante, crendose una poblacin de clulas idnticas, que llevan todas la secuencia clonada.
Los segmentos de DNA clonados pueden recuperarse de las clulas husped, purificarse y analizarse. Potencialmente, el DNA clonado puede transcribirse, su mRNA puede traducirse, y el producto gnico puede aislarse y examinarse.

Fuentes:
http://library.thinkquest.org/04apr/01305/cloningEnglish/history/index.htm http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/DNA-recombinante/Tecnica%20DNA%20recombinante.pdf http://repositorio.sistemauno.com.co/secundaria/ciencias_b_/Ampliaciones/Ampliacion/Historia%20de% 20la%20clonacin.pdf http://www.slideshare.net/daniel0512/clase-15-tecnologa-del-dna-recombinante http://www.personales.ulpgc.es/ecastro.dbbf/Descargas/Transparencias/DNA%20recombinante.pdf http://www.korion.com.ar/archivos/adn_recombinante.pdf