Estructura y funcin del ADN

Historia del descubrimiento de la molcula

Experimentos clsicos en torno a mitosis

l Acetabularias de Hmmerling y Brachet (1930 1940)

1869 Friedrich Miescher descubre lo que hoy conocemos como ADN

Fleming Beneden y Strasburger describen en 1890 la destribucin cromosmica durante la divisin celular.

Walther Flemming

1910 Thomas Hunt Morgan demuestra que los genes residen en los cromosomas

1933 Jean Brachet demuestra que el ADN se encuentra en los cromosomas y que el ARN est presente en el citoplasma de todas las clulas 1941 Edward Lawrie Tatum y George Wells Beadle muestran que los genes codifican las protenas

El material gentico es ADN o una protena? Experimento de Griffith (1920)

Trat de obtener una vacuna para proteger a la gente contra la bacteria Streptococcus pneumoniae, que produce la neumona. No tuvo xito, pero descubri el fenmeno de la transformacin. Griffith descubri dos variedades de Streptococcus, una con cpsula y otra desnuda. Propuso la hiptesis que la cpsula afecta la capacidad de las bacterias para causar la enfermedad y experiment con ratones de la siguiente manera:

1.

Inyect bacterias encapsuladas vivas. Resultado: Los ratones contrajeron neumona y murieron. La sangre contena bacterias encapsuladas.

2.

Inyect bacterias desnudas vivas. Resultado: Permanecieron saludables. No se encontraron Streptococcus en la sangre. Inyect bacterias encapsuladas muertas. Resultado: Los ratones no tuvieron neumona y carecan de bacterias vivas.
Inyect una mezcla de bacterias encapsuladas muertas y bacterias desnudas vivas. Resultado: Tuvieron neumona y estaban infestados de bacterias encapsuladas vivas que crecieron

3.

4.

Qu significaban los experimentos?

l Una hiptesis era que las bacterias vivas haban adquirido molculas de informacin gentica provenientes de las bacterias muertas.
q

Las molculas codificaban las instrucciones para formar cpsulas; por lo tanto, transformaban a las bacterias desnudas en bacterias encapsuladas.

La molcula de la transformacin era el ADN?

l Avery, MacLeod y McCarty de la Universidad Rockefeller en 1944 aislaron ADN de bacterias encapsuladas, las mezclaron con bacterias desnudas vivas y produjeron bacterias encapsuladas vivas. l Para demostrar que la transformacin la ocasionaba el ADN, y no pequeas cantidades de protenas que contaminan al ADN, trataron diferentes muestras con enzimas que destruyen protenas. l Dichas enzimas no afectaron la capacidad de transformacin de las muestras de ADN; por otro lado, al tratar muestras con enzimas que destruyen el ADN, se impidi la transformacin.

1944 Oswald Theodore Avery, Colin McLeod y Maclyn McCarty aslan ADN como material gentico

Colin MacLeod, Maclyn McCarty, Detlev Wulf Bronk, Theodosius Dobzhansky, and Wendell M. Stanley at the Avery Memorial Gateway dedication ceremony

1944 Oswald Theodore Avery, Colin McLeod y Maclyn McCarty aslan ADN como material gentico

Oswald T. Avery (1940s)

Historia de la gentica

1950 Erwin Chargaff muestra que los cuatro nucletidos no estn presentes en los cidos nucleicos en proporciones estables, pero que parecen existir algunas leyes generales. La cantidad de adenina, A, por ejemplo, tiende a ser igual a la de timina,

ATGCTTATTC TACGAATAAG

A=T C=G

1905 - 2002)

El ADN es la molcula que contiene la informacin gentica

Hershey & Chase

Lab rats ... James Watson, above left, and Francis Crick weren't going to let Rosalind Franklin get in the way of scientific glory. Photo-illustration: Harry Afentoglou

Rosalind Franklin
Durante 50 aos, la historia de la ciencia ha sostenido que los descubridores de la doble hlice del ADN fueron Crick y Watson. En los ltimos aos, las investigaciones han sacado a la luz la labor de Rosalind Franklin, sin cuyas radiografas sus colegas no hubieran llegado tan rpido a la meta. Hoy se puede decir que si stos son los padres del hallazgo de la estructura helicoidal de la molcula, Franklin merece ser considerada la madre.

l El ADN de los cromosomas se compone de dos cadenas enrolladas una a la otra en una doble hlice. l Los azcares y fosfatos que unen un nucletido al siguiente forman el esqueleto en cada lado de la doble hlice. l En tanto que las bases de cada cadena se aparean en el centro de la hlice.

Solo pares especficos de bases, llamados pares de bases complementarias, se pueden unir en la hlice mediante enlaces de hidrgeno: adenina con timina y guanina con citosina.

COMPOSICIN DEL ADN

l La molcula de ADN est compuesta de subunidades, llamadas nucletidos, unidos en cadenas largas. l Cada nucletido consta de un grupo fosfato, un azcar de cinco carbonos, la desoxirribosa y, una base nitrogenada.

Bases Nitrogenadas
l En el ADN se presentan cuatro bases diferentes:
q q q q

Adenina Guanina Timina Citosina

MOLCULA DE ADN

DIMENSIONES DEL ADN

REPLICACIN DEL ADN

La clave de la constancia

PROCESO

La replicacin del ADN

l Es el proceso mediante el cual la molcula de ADN hace copias de s misma (y, por tanto del cromosoma). l En el ncleo hay muchos nucletidos libres que son los bloques de construccin del nuevo ADN .

l l

La doble hlice se desdobla de modo que las dos cadenas de nucletidos quedan paralelas y se rompen los enlaces entre las bases. Las dos cadenas de nucletidos se separan, empezando en un extremo y abrindose hasta el otro. Cada mitad de la molcula sirve como un molde para la formacin de una nueva mitad del ADN. Las bases de los nucletidos libres se unen con las bases correspondientes en las dos cadenas de nucletidos expuestas. La unin especfica de A con T y de C con G, asegura que las copias nuevas de ADN sean copias exactas del original.

Pasos de la replicacin del ADN

Pasos de la replicacin del ADN

l Se forman enlaces entre los fosfatos y los azcares de los nucletidos que se han apareado con las cadenas de ADN. El resultado es que se forman dos copias idnticas de la molcula original de ADN. l Las dos nuevas molculas de ADN se enroscan y de nuevo toman la forma de una doble hlice.

1958 El experimento Meselson-Stahl demuestra que el ADN se replica de modo semiconservador.

Historia de la gentica
1956 Joe Hin Tjio y Albert Levan establecen en 46 el nmero de cromosomas en humanos

Joe Hin Tjio. Albert Levan

Estructura de un cromosoma

Qu es un gen?
l Es una secuencia de nucletidos en la molcula de ADN, equivalente a una unidad de transcripcin. l Contiene la informacin, a partir de la cual se sintetiza un polipptido, una enzima, un cido ribonucleico: mensajero, de transferencia o ribosomal. l En el genoma humano la mayora de los genes son nicos y se expresan en forma independiente. Los genes segregan cuando ocurre la meiosis.

DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGA MOLECULAR DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGA MOLECULAR

Hebra molde Hebra molde Transcripcin Transcripcin

Traduccin Traduccin

Naturaleza del material hereditario. Naturaleza del material hereditario. Los cidos nucleicos y sus componentes Los cidos nucleicos y sus componentes
ADENINA (A) ADENINA (A) GUANINA (G) GUANINA (G)

Los cidos nucleicos son macromolculas con estructura Los cidos nucleicos son macromolculas con estructura de polmero lineal, donde los monmeros son de polmero lineal, donde los monmeros son nucletidos. Cada nucletido est formado por un azcar nucletidos. Cada nucletido est formado por un azcar pentosa, un fosfato y una base nitrogenada. Las bases pentosa, un fosfato y una base nitrogenada. Las bases pueden ser purinas (de doble anillo), como la Adenina y la pueden ser purinas (de doble anillo), como la Adenina y la Guanina... Guanina...

4 5 6

TIMINA (T) TIMINA (T)

URACILO (U) ) URACILO (U

CITOSINA (C) CITOSINA (C)

Tambin pueden ser pirimidinas, de anillo Tambin pueden ser pirimidinas, de anillo sencillo, como la timina y la citosina, en el sencillo, como la timina y la citosina, en el ADN; y la citosina y el uracilo en el ARN ADN; y la citosina y el uracilo en el ARN

ATENCIN: Un ATENCIN: Un hidrgeno en la hidrgeno en la posicin 2 posicin 2

Pentosa del ADN: Desoxirribosa Pentosa del ADN: Desoxirribosa

Desoxirribunucletido Desoxirribunucletido

La molcula de ADN es una doble hlice antiparalela La molcula de ADN es una doble hlice antiparalela (Watson y Crick 1953) (Watson y Crick 1953)

Fosfatos van Fosfatos van unidos al azcar unidos al azcar en el C-5 yyel C-3 en el C-5 el C-3

Hebras Hebras antiparalelas antiparalelas

Punta 3 libre Punta 3 libre

Punta 5 libre Punta 5 libre

ACIDOS NUCLEICOS ACIDOS NUCLEICOS

La funcin codificante del ADN est La funcin codificante del ADN est determinada por la secuencia de sus determinada por la secuencia de sus nucletidos (bases) nucletidos (bases)

EL ADN es la molcula que permite perpetuar la vida: EL ADN es la molcula que permite perpetuar la vida: REPLICACIN DEL ADN REPLICACIN DEL ADN
Hebra molde Hebra molde

Hebra lder Hebra lder

Hebra retardada Hebra retardada

Replicacin
l Las ADN polimerasas requieren como sustrato la punta 3 hidroxilo libre de una base apareada para catalizar la unin de otro nucletido. l El OH libre se une al 5-fosfrico del deoxinuclesido 5 trifosfato, liberndose un pirofosfato inorgnico

ADN polimerasas, ligasas.

l ADN polimerasas de alta fidelidad dirigidas por ADN: dos de ellas replican los cromosomas, () especfica para la hebra retardada porque tiene una subunidad primasa, () lder y elongacin de la hebra retardada, otras dos reparan el ADN ( y ), y una de ellas replica y repara el ADN mitocondrial (). l ,, : tienen actividad 3 - 5 exonucleasa l y : tienen actividad de reparacin del ADN de tipo excisin de nucletidos y de bases.

ADN-polimerasas..
l ADN polimerasas propensas a errores dirigidas por ADN: un grupo grande que replica con muy baja fidelidad. La tasa de error de la polimerasa (iota) es 20.000 veces mayor que la de . Se expresan en cantidades altas en el sistema inmune, implicadas en la hipermutabilidad en linfocitos B y T. l ADN polimerasas dirigidas por ARN: usan como molde una hebra de ARN: transcriptasas reversas. l Ej: Actividad polimerasa en la enzima telomerasa (Tert) que replica la parte final de los extremos lineales de los cromosomas. Transcriptasa reversa endgena, que ocasionalmente puede convertir ARN en ADNc e integrarlo al genoma.

Proteinas principales replicacin

l Topoisomerasas: rompen una hebra y la tensin del enrrollamiento de la hlice se relaja l Helicasas: completan el desenrrollamiento l ADN polimerasas: complejos agregados de diferentes protenas. l Primasas: sintetizan los iniciadores de ARN que se necesitan para iniciar la replicacin l Ligasas: sellan las lagunas dejadas por las ribonucleasas cuando remueven los primers, catalizan la unin fosfodiester entre nucletidos adyacentes. l Proteinas de unin a la hebra sencilla del ADN: estabilizan la horquilla de replicacin.

Estructura tridimensional de una helicasa: un hexmero con seis sitios de enlace al ATP. La hidrlisis secuencial de estos ATPs permite el desenrrollamiento de la doble hlice.

La ADN polimerasa

Sntesis del primer de ARN por una primasa

En eucariontes los fragmentos de Okasaki tienen 200 nucletidos, los primers unos 10. Los iniciadores de ARN se eliminan mediante una ARNasa especfica que reconoce dobles hlices hbridas ARN-ADN La laguna es llenada por una polimerasa y la unin finalmente es realizada por una ligasa

La ligasa acopla la hidrlisis de un ATP para hacer ms favorable la reaccin de unin entre el fosfato y el hidroxilo libre, liberando al final un AMP.

Efecto de las protenas de enlace con la hebra sencilla del ADN

Estructura de las proteinas de enlace a la hebra sencilla Modelo de la protena humana

Horquilla de replicacin en los mamferos: Dos polimerasas diferentes en la hebra retardada, primero empieza la pol sintetizando el primer de ARN algo del ADN porque tiene una subunidad primasa, luego sigue trabajando la pol en la elongacin del fragmento

Reparacin del ADN

Tipos de dao al ADN

Mecanismos endgenos: 1. Prdida de bases tipo purinas por ruptura espontnea del enlace con el azcar 5000/da/clula humana 2. Deaminacin espontnea de citosinas y adeninas produce uracilo e hipoxantina 3. Molculas con oxgenos reactivos atacan los anillos de las bases nitrogenadas 4. La ADN polimerasa puede incorporar bases equivocadas en la replicacin 5. Errores en la replicacin o recombinacin provocan fracturas en el ADN

Agentes extracelulares
1. Radiaciones ionizantes: rayos gamma y rayos X causan rupturas en la doble hlice 2. Luz UV causa la formacin de los dmeros de timina 3. Qumicos ambientales como agentes alquilantes y otras sust qumicas forman aductos con las bases del ADN: hidrocarburos, productos naturales como las aflatoxinas.

11_21.jpg

11_21_2.jpg

Mecanismos de deteccin y reparacin de daos al ADN

Sistemas enzimticos para reconocer, eliminar y reparar daos inducidos al ADN se han descrito y estudiado bien en bacterias El estudio de los sndromes hereditarios de predisposicin al cncer ha permitido ampliar el conocimiento en el ser humano

Capitulo 14: del ADN a las protenas

Transmisin de la informacin
l La transmisin se lleva a cabo principalmente gracias a la existencia de los cidos ribonucleicos o ARNs l ARN mensajero (lineal de hebra simple) l ARN de transferencia l ARN ribosomal l Y a las ARNs polimerasas

ATENCION: ATENCION: Grupo hidroxilo Grupo hidroxilo en la posicin 2 en la posicin 2

Ribonucletido Ribonucletido

URACILO sustituye aala TIMINA URACILO sustituye la TIMINA

La secuencia correspondiente a una unidad de La secuencia correspondiente a una unidad de transcripcin en el ADN se transcribe en una hebra transcripcin en el ADN se transcribe en una hebra complementaria de ARN, llamada transcrito complementaria de ARN, llamada transcrito primario, a partir del cual, por modificaciones postprimario, a partir del cual, por modificaciones posttranscripcionales ,,se origina el ARN mensajero transcripcionales se origina el ARN mensajero

TRANSCRIPCIN TRANSCRIPCIN

La ARN polimerasa se activa cuando forma un complejo con los factores de transcripcin o elementos trans. La interaccin de estos entre s, y con las secuencias reguladoras del ADN (los factores cis) es la que determina donde, cuando y con qu rapidez ocurre la transcripcin

Modelo simplificado de un gen humano

PROMOTOR Secuencia que no se traduce
Intrn 1 Intrn 2 Intrn 3

Secuencia que no se traduce

5`
Regin reguladora EXON 1 EXON 2 EXON 3 EXON 4 EXON n Regin reguladora

3`

Unidad de transcripcin

Despus del procesamiento postranscripcional del ARN Despus del procesamiento postranscripcional del ARN transcrito primario, la secuencia de ARNm corresponde a las transcrito primario, la secuencia de ARNm corresponde a las secuencias de los exones y las no codificantes (UTRs). secuencias de los exones y las no codificantes (UTRs).
Dra. Patricia Cuenca Berger INISA

Procesamiento postranscripcional del ARN

l Corte en 5 y unin de un cap(5-metilguanosina), para proteger del ataque de las exonucleasas, facilitar el transporte ncleo-citoplasma, y el anclaje del ARNm al ribosoma l Corte en 3 y unin de una cola de poli-A (200 AMP), confiere estabilidad y ayuda en la traduccin l Eliminacin de los intrones, por formacin de un complejo snARNs-proteinas: spliceosoma, el cual es especfico. La especificidad de la reaccin est dada por la complementaridad de las bases entre los pequeos ARNs nucleares y el ARN transcrito primario

ARN de transferencia activado: ARN de transferencia activado: cargado con el aminocido cargado con el aminocido correspondiente correspondiente

CODIGO CODIGO GENETICO GENETICO ARNm ARNm

DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGA MOLECULAR DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGA MOLECULAR

Hebra molde Hebra molde Transcripcin Transcripcin

Traduccin Traduccin

TRADUCCIN TRADUCCIN ARN --- Protena ARN --- Protena

Cuatro monmeros de aminocidos

Reaccin de condensacin

Polipptido

Enlace peptdico catalizado por el complejo enzimtico localizado en el ribosoma

01_03.jpg

Estructura general de un aminocido

POLARES Cargados

Sus molculas estn parcialmente cargadas

01_03_2.jpg
Polares neutros

En sus residuos tienen grupos aminos, hidroxilos o sulfidrilos

01_03_3.jpg

No polares o hidrofbicos

Estructura primaria
(Secuencia lineal)

Residuos de los distintos aminocidos

Estructura secundaria
(forma adoptada espontneamente)

Estructura terciaria
(Forma tridimensional: globular, tubular, como una rueda, etc.)

Las protenas sufren transformaciones post-traduccionales

Estructura cuaternaria: combinacin de monmeros

Anemia falciforme: Hemoglobina HbA se transforma en HbS La mutacin es un cambio del segundo nucletido en el codn 6 en la subunidad beta Adenina por timina cido glutmico por valina HbS Seleccin Natural Ventaja heterocigoto Malaria

Variaciones en la secuencia de bases del ADN que no causan Variaciones en la secuencia de bases del ADN que no causan alteraciones funcionales patolgicas, son alelos o alteraciones funcionales patolgicas, son alelos o polimorfismos del gen existentes en la poblacin (>1%) polimorfismos del gen existentes en la poblacin (>1%)

Alteraciones en la secuencia de bases del ADN que Alteraciones en la secuencia de bases del ADN que alteran la funcin normal (produciendo patologa) alteran la funcin normal (produciendo patologa) del producto gnico son mutaciones del producto gnico son mutaciones

Mutaciones
l Germinales o constitucionales: l El individuo las adquiere por herencia de sus padres, puede ocurrir de novo en una clula germinal de alguno de los padres. l Todas las clulas del cuerpo llevan la misma mutacin l Ejemplo: enfermedades hereditarias l Somticas: l Se adquiere en el transcurso de la vida l Es portada nicamente por la clula afectada y sus clulas hijas. El individuo es un mosaico. l Ejemplo: cncer

Clases de mutaciones: Sustitucin de bases: 1- Sustituciones sinnimas (otro codn : mismo aa) 2- Mutaciones sin sentido (cambio a codn STOP) 3- Mutaciones de sentido equivocado: sustitucin del aa en la proteina 4- Mutaciones en el sitio de corte y empalme del ARN.

Otros tipos de mutaciones: a- Mutaciones de cambio en el marco de lectura - deleciones - duplicaciones o insersiones b- Mutaciones dinmicas La patologa molecular intenta explicar porque un cambio gentico dado podra resultar en un fenotipo clnico particular.

Prdida de funcin del gen PAX3: Sndrome de Waardenburg tipo I, sordera y anormalidades pigmentarias

16_01.jpg

Diferentes tipos de mutaciones afectan al gen, todas causan prdida de funcin y el mismo resultado clnico

Cambio fenotpico por dos mecanismos: 1- prdida o reduccin de la funcin normal. 2- el producto podra adquirir una nueva funcin. Por qu las mutaciones tienen diferentes tipos de herencia, dominantes, recesivas, etc?
Las leyes de Mendel se cumplen en la herencia de algunos rasgos y enfermedades humanas, las que son codificadas por un solo gen.
Leyes de Mendel: redescubiertas 1900 Modelo de la doble hlice del ADN: 1953

Mutaciones hereditarias: Dominante o recesiva?

l Mutaciones recesivas llevan a un producto gnico con funcin reducida o con prdida de funcin. - Para la mayora de los genes, es suficiente el producto de uno de los alelos (la mitad) para que se lleve a cabo la funcin normal. Por eso es que la mayora de los errores innatos del metabolismo son recesivos. l Mutaciones dominantes llevan a un producto gnico con ganancia de funcin. - La ganancia de funcin causa fenotipos dominantes porque la presencia del producto normal no previene que el producto mutado se comporte anormalmente.
La adquisicin de una nueva funcin es un evento raro en enfermedades hereditarias, pero muy comn en cncer

Clases de mutaciones: Sustitucin de bases: 1- Sustituciones sinnimas (otro codn : mismo aa) 2- Mutaciones sin sentido (cambio a codn STOP) 3- Mutaciones de sentido equivocado: sustitucin del aa en la proteina 4- Mutaciones en el sitio de corte y empalme del ARN.

Otros tipos de mutaciones: a- Mutaciones de cambio en el marco de lectura - deleciones - duplicaciones o insersiones b- Mutaciones dinmicas La patologa molecular intenta explicar porque un cambio gentico dado podra resultar en un fenotipo clnico particular.

Prdida de funcin del gen PAX3: Sndrome de Waardenburg tipo I, sordera y anormalidades pigmentarias

16_01.jpg

Diferentes tipos de mutaciones afectan al gen, todas causan prdida de funcin y el mismo resultado clnico

Cambio fenotpico por dos mecanismos: 1- prdida o reduccin de la funcin normal. 2- el producto podra adquirir una nueva funcin. Por qu las mutaciones tienen diferentes tipos de herencia, dominantes, recesivas, etc?
Las leyes de Mendel se cumplen en la herencia de algunos rasgos y enfermedades humanas, las que son codificadas por un solo gen.
Leyes de Mendel: redescubiertas 1900 Modelo de la doble hlice del ADN: 1953

Mutaciones hereditarias: Dominante o recesiva?

l Mutaciones recesivas llevan a un producto gnico con funcin reducida o con prdida de funcin. - Para la mayora de los genes, es suficiente el producto de uno de los alelos (la mitad) para que se lleve a cabo la funcin normal. Por eso es que la mayora de los errores innatos del metabolismo son recesivos. l Mutaciones dominantes llevan a un producto gnico con ganancia de funcin. - La ganancia de funcin causa fenotipos dominantes porque la presencia del producto normal no previene que el producto mutado se comporte anormalmente.
La adquisicin de una nueva funcin es un evento raro en enfermedades hereditarias, pero muy comn en cncer

Variabilidad de los genes

Gen Tamao N exones ARNt 100 pb 2 -globina 1.600 pb 3 colgenoVII 31.000 pb 118 Distrofina 2.400.000 pb 79 Genes dentro de genes: Ej: el intrn 27 del gen NF1 contiene 3 genes Genes que se sobreponen: Ej: algunos genes mitocondriales

Proteoma
l Es el set de genes que codifican para protenas Distribucin por su funcin en el GH: l Procesos ADN (replic, trans, trad.) 22% l Metabolismo 17% l Divisin celular 12% l Defensa 12% l Regulacin y seales 12% l Estructura 8% l Funcin desconocida 17%