Presentacin participantes
NOMBRE Empresa Experiencia en CG o UV-Vis Algun problema en esas tcnicas que quisiera resolver?
MESSEN, C.A.
JULIO, 2007
HORARIOS
8:00
10:00
12:00 13:00
15:00
17:00
MENSAJE INICIAL
MESSEN, C.A.
JULIO, 2007
Objetivo general
Adquirir los fundamentos bsicos que permitan la ejecucin de la calibracin en los espectrofotmetros UV-VIS y los Cromatgrafos.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Reconocer los sistemas de medicin .
EN UV-VISIBLE Y CROMATOGRAFIA
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EJERCICIO INICIAL
2 3 4 5
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HERRAMIENTAS
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CALIBRACIN
Segn VIM
Conjuntos de operaciones que establecen, bajo condiciones especificadas, la relacin entre los valores de magnitudes indicados por un instrumento o sistema de medicin, o
patrones
Verificacin
Segn Fund. y Vocb. SGC
Confirmacin mediante la
Ajuste
Segn VIM
Operacin destinada a
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CALIBRACIN
Segn VIM
Conjuntos de operaciones que establecen, bajo condiciones especificadas, la relacin entre los valores de magnitudes indicados por un instrumento o sistema de medicin, o
patrones
importante tener alguna indicacin de la calidad de los resultados y saber cuanta confianza podemos tener en ellos para el proposito del analisis
PRINCIPIO DE CROMATOGRAFIA
LOS COMPONENTES DE LA MUESTRA SON TRANSPORTADOS POR LA FASE MOVIL A TRAVES DE LA FASE ESTACIONARIA Y SE DETECTAN A LA SALIDA DE LA COLUMNA
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PUNTO EBULLICION, C
64,5 78 56 82 42 97 80 108 77 88 110 139 166 156
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ALCOHOLES
TIEMPO RETENCION 2,15 2,68 4,44 7,9 13,81 16,13 18,21 20,11 ALCOHOL METANOL ETANOL 1-PROPYL 1-BUTANOL 1-HEXANOL 1-HEPTANOL 1-OCTANOL 1-NONANOL PUNTO EBULLICION 64,5 78 97 118 156 176 194 214
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25 TIEMPO RETENCION 20 15 10 5 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
NUMERO DE CARBONOS
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Principio de espectrofotometria
Algunos compuestos absorben
radiacin de una fuente y esta seal se puede medir La seal puede relacionarse con la concentracin del compuesto
Fuente de Energia
Informacin Analitica
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Pregunta de espectrofotometra
Existe una relacin de Absorbancia y
Pregunta de espectrofotometria
CONCENTRACION ABSORBANCIA 0 0 0,25 0,27 0,57 0,51 0,68 0,84
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3 MINUTOS
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Algunos elementos
1 2 3 4 5 6 7 8 Concentracin Respuesta instrumental Cm: Limite de deteccin LOQ: Limite de Cuantificacion Rango dinamico LOL: Limite de linealidad Curva de calibracion
2 4 3
5
1
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ERRORES
AL AZAR
Variaciones no predecibles
SISTEMATICOS
Variaciones predecibles
GROSEROS ( Espurios)
Fallas humanas o del instrumento,
estudiante A B C D 10,08 9,88 10,19 10,04 10,11 10,14 9,79 9,98 10,09 10,02 9,69 10,02 10,10 9,80 10,05 9,97 10,12 10,21 9,78 10,04 Preciso, Sesgado Impreciso, insesgado Impreciso, sesgado Preciso, insesgado
Contaminacin
Interferencias Errores de calibracin
Errores de muestreo
Perdidas o degradacin
Fuente: Quality assurance in Analytical chemistry
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Tcnicas
Llevar al dia a dia , con las limitaciones Procedimientos especificos
Actitud y disposicin
Familiarizarse Interpretar estadisticamente los resultados
evaluador?
DE ACUERDO A ICH
El objetivo de la validacin de un procedimiento analtico es demostrar que el mismo es adecuado para el propsito previsto
NO
REALIZAR EXPERIMENTO
DEFINICION DE VALIDACION
SI
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EXTRACCION Y LIMPIEZA
DETERMINACIO N
CALIBRACION
RESULTADOS
FUENTE: The Estimation of Uncertainty by the Utilization of Validation and Quality Control Data MESSEN, C.A. JULIO, 2007
CARACTERISTICAS A VALIDAR
ESPECIFICIDAD
____________________
EXACTITUD
PRECISION
______________________
___________________
ROBUSTEZ
______________________
___________________
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ESPECIFICIDAD
CAPACIDAD DE EVALUAR SIN EQUIVOCACION EL
PRUEBA DE PUREZA
CONTENIDO
50
EXACTITUD
CERCANIA ENTRE EL
PRECISION
CERCANIA ENTRE LOS VALORES OBTENIDOS DE
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REPETIBILIDAD Precisin, misma condiciones, corto plazo Tres determinaciones ,tres niveles Intra-ensayo PRECISION INTERMEDIA Diferentes dias, analistas, equipos Intra-laboratorio REPRODUCIBILIDAD Entre-laboratorios
LIMITE DE DETECCION
Cantidad mas pequea de analito , en una muestra,
3 LD P
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LIMITE DE CUANTIFICACION
Cantidad ms pequea de analito en una muestra que
55
Limite de cuantificacin
Segn Eurachem
Definir precisin esperada en LC Preparar muestras, diluir. 6 concentraciones decrecientes Inyectar 6 veces cada muestra Calcular %DSR Graficar precisin vs concentracin Concentracin a la precisin definida = limite de deteccin
Fuente: Huber, Validation and Analytical Methods review, www.labcompliance.com LIC. KELIM VANO H. MESSEN, C.A. JULIO, 2007 56
LINEALIDAD
Capacidad para obtener resultados que sean
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Ejemplo
Ferguson, QUANTITATIVE HPLC ANALYSIS ANALGESIC CAFFEINE FORMULATION LIC. KELIM VANO H. MESSEN, C.A. JULIO, 2007 58
The regression equation is espesor = - 8,261 + 1,282 presion S = 0,154413 R-Sq = 97,5% 97,3% R-Sq(adj) =
Analysis of Variance
Source DF SS MS F P Regression 1 16,4352 16,4352 689,30 0,000 Error 18 0,4292 0,0238 Total 19 16,8644
Datos simulados a partir de KUME, LIC. KELIM VANO H. MESSEN, C.A. JULIO, 2007 59
RANGO
Intervalo en el cual se ha demostrado que el
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ROBUSTEZ
Capacidad para no ser afectado por variaciones pequeas,
deliberadas en los parmetros del mtodo Por ejemplo Estabilidad soluciones Filtracin Tiempo extraccin Temperatura flujo
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EJEMPLO 1 ROBUSTEZ
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DIA 1 2 3 4
Fuente: CHUNG CHOW CHAN (et al), Analytical Method validation and instrument performance verification LIC. KELIM VANO H. MESSEN, C.A. JULIO, 2007 62
METODO
NO
VALIDADO?
NO
COMPILAR INFORMACION
MEDICION CRITICA
SI SI NO
NO
REEVALUAR INFORMACION
SI
INFORMACION SATISFACTORIA
SI
REVALIDAR
LIC. KELIM VANO H.
NO
MESSEN, C.A. Fuente: Quality assurance in Analytical chemistry JULIO, 2007
ESPECTROFOTOMETRA UV-VIS
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ESQUEMA
1.2.3.4.5.TEORA BSICA.
INSTRUMENTACIN.
ESTIMACIN DE LA INCERTIDUMBRE.
BUENAS PRCTICAS.
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Trmica
E Luminosa h
ATOMOS MOLECULAS
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Tipos de espectroscopia
ESPECTROSCOPIA ATOMICA
MOLECULAR
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ESPECTROSCOPIA ATOMICA
TECNICA EMISION ASBORCION FLUORESCENCIA RAYOS X EXCITACIN CALOR UV-VIS UV-VIS RAYOS X RELAJACION UV-VIS CALOR UV-VIS RAYOS X
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ESPECTROSCOPIA MOLECULAR
TECNICA RMN MICROONDAS INFRARROJO UV-VIS RADIACION ELECTROMAGNETICA RADIOFRECUENCIA MICROONDAS INFRARROJO UV-VIS
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SE RESTRINGE A UN NMERO LIMITADO DE GRUPOS FUNCIONALES, LLAMADOS CROMFOROS, QUE CONTIENEN ELECTRONES DE VALENCIA CON ENERGAS DE EXCITACIN RELATIVAMENTE BAJOS.
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LOS TIPOS DE TRANSICIONES ELECTRNICAS QUE PERMITEN EXPLICAR PORQU ALGUNAS ESPECIES PUEDEN ABSORBER ENERGA RADIANTE:
cromforos, que contienen electrones de valencia con energas de excitacin relativamente bajos.
Los iones y complejos de los 18 elementos de las dos primeras series de Transicin
complejos inorgnicos,
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Fundamento terico
La ley fundamental en la que se basan los mtodos espectrofotomtricos es la de Lambert y Beer. La relacin entre la intensidad de la luz transmitida o energa radiante I y la energa radiante incidente I0 es una funcin del espesor de la celda b a travs del medio absorbente, de acuerdo a donde: A= bC Donde: A = absorbancia = absortividad 78 b = espesor de la celda C = concentracin MESSEN, C.A. LIC. KELIM VANO H. JULIO, 2007
ACTUALMENTE ES UNA DE LAS TCNICAS ANALTICAS MS USADAS EN LA INDUSTRIA, LABORATORIOS CLNICOS Y DE INVESTIGACIN.
TIENE UNA GRAN APLICABILIDAD EN LA IDENTIFICACIN Y DETERMINACIN DE UNA ENORME CANTIDAD DE COMPUESTOS ORGNICOS E INORGNICOS.
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EJEMPLOS
Ver internet
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2.- INSTRUMENTACIN EN
ESPECTROFOTOMETRA UV-VIS
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Espectro uv-visible
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EVALUACION DE ESPECTROFOTOMETROS
Calibracin trazable
CAPACIDAD para analisis de rutina
Trazabilidad
Uso de materiales de referencia
certificados
Mtodos especficos acordados por las
partes
Requerimientos de calibracin
Calibracin de Longitud de Onda
Calibracin de Absorbancia Absorcin de las celdas Radiacin dispersa
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Calibracin de Absorbancia
Visible Filtros neutros Soluciones de CuSO4
Ultravioleta Solucion de K2Cr2O7 Filtros metalizados
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Radiacin Dispersa
Filtros de corte
Soluciones NaI, KCl, NaNO2, Acetona
Incertidumbres asociadas a varios mtodos Metodo Dicromato acido de potasio Filtros NIST 930D Filtros NIST 2031 metal cuarzo Incertidumbre (Abs) 1 0.004 (min) 2 0.0022 3 0.004
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Balanza analtica, con una resolucin de 0,1 mg (slo si los materiales de referencia del analito deben ser pesados).
Solucin de Material de Referencia Certificado (MRC) conteniendo una concentracin conocida del analito en un medio apropiado. Distintas soluciones (siempre un nmero superior a 3 y ms conveniente 5) de una concentracin conocida del analito a determinar. Dicha concentracin abarcarn lo ms extensamente posible el rango lineal de determinacin del analito.
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