Reduced expression of Jak-1 and Tyk-2 proteins leads to interferon resistance in Hepatitis C virus replicon

Alpha interferon yang berkombinasi dengan ribavirin adalah terapi baku untuk hepatitis C infeksi virus. Sayangnya, sejumlah besar pasien tidak berhasil untuk membasmi infeksi mereka dengan rejimen ini. Mekanisme IFN-resistensi tidak jelas. Tujuan penelitian ini adalah untuk menentukan kontribusi faktor sel inang dengan mekanisme resistensi interferon menggunakan replikan sel baris. Replikan HCV dengan aktivasi tinggi dan rendah dari promotor-IFN yang berbudaya untuk waktu lama di hadapan interferon alfa (IFN-alpha2b). Garis stabil sel replikan dengan fenotipe resisten diisolasi dan dikarakterisasi oleh kemampuan mereka untuk terus bereplikasi di hadapan IFN alpha. Interferon koloni sel resisten berkembang hanya dalam replikan memiliki aktivasi bawah promotor IFN dan tidak tahan koloni muncul dari replikan yang menunjukkan aktivasi tinggi promotor IFN. Masing-masing klon sel diisolasi dan sembilan IFN baris sel tahan didirikan. HCV RNA dan protein tingkat dalam sel tidak diubah oleh IFN alpha2b. Mengurangi sinyal dan fenotip tahan IFN ditemukan pada semua Hah-7 baris sel bahkan setelah menghilangkan HCV, menunjukkan faktor selular yang terlibat. Tahan fenotipe dalam replikan bukan karena kurangnya ekspresi interferon reseptor. Semua baris sel menunjukkan cacat dalam-JAK STAT signaling dan fosforilasi STAT 1 dan 2 protein STAT sangat terhambat karena berkurangnya ekspresi Tyk2 dan Jak-1 protein. Kesimpulannya dalam studi in vitro memberikan bukti bahwa ekspresi berubah dari Jak-Stat sinyal protein dapat menyebabkan resistensi IFN menggunakan klon replikan sel HCV. Virus hepatitis C (HCV) adalah patogen manusia melalui darah. Ada 170 juta orang di seluruh dunia terinfeksi dengan HCV, dan merupakan masalah kesehatan masyarakat yang besar. Hanya sebagian kecil dari individu mengembangkan imunitas dan infeksi virus yang jelas alami. Mayoritas orang terkena HCV perlahan-lahan berkembang menjadi infeksi kronis. Peradangan kronis terjadi di hati karena infeksi

virus menyebabkan sirosis hati dan carcinoma [1-7]. Infeksi HCV adalah penyebab utama transplantasi hati di Amerika Serikat [8]. Standar terapi untuk infeksi HCV kronis adalah kombinasi dari IFN- dan ribavirin, namun sebagian besar hepatitis kronis pasien C tidak dapat menghapus infeksi mereka dengan rejimen ini. Pasien terinfeksi dengan genotipe 1 HCV di Amerika sering resisten terhadap IFN- dan ribavirin. Alasan mengapa beberapa hepatitis C kronis pasien tidak merespon terapi interferon tidak diketahui. HCV milik keluarga Flaviviridae. Ada enam genotipe yang berbeda dari HCV didistribusikan di seluruh dunia dengan lebih dari 50 subtipe [14,15]. Ada 30% variasi di antara setiap genotipe, 15% di antara sub-jenis dan 1-5% di antara quasisspecies. Organisasi HCV genom RNA antara semua genotipe mirip. Ini dimulai dengan wilayah 5'untranslated (UTR), membaca panjang terbuka frame dan daerah UTR 3 '[16]. Genom HCV encode sebuah polyprotein besar 3000 asam amino, yang diproses menjadi protein struktural dan non-struktural di sel yang terinfeksi oleh virus protease dan seluler. Beberapa laporan menunjukkan bahwa genotipe tertentu HCV merespon lebih baik untuk terapi interferon dibandingkan ang lain. Misalnya, 80% pasien terinfeksi hepatitis C kronis dengan genotip 2 dan 3 dapat membersihkan infeksi virus, sementara hanya 50% pada pasien terinfeksi dengan genotipe 1 [17,18] menunjukkan dirawat dengan seksama tanggapan virologi. Ini saran klinis keterlibatan faktor virus dalam menanggapi terapi interferon. Sejumlah penelitian molekuler telah dilakukan dengan hasil yang menunjukkan bahwa beberapa HCV struktural dan / atau non-struktural protein virus blok interferon diinduksi jalur antivirus [19-26]. Dasar molekul resistensi HCV interferon telah difokuskan pada NS5A dan tindakan protein E2 di interferon induksi protein kinase R [27-31]. Studi terbaru juga menjelaskan bahwa protease HCV (NS3/NS4A) dapat menghambat produksi dari endogen IFN-beta [32]. Sebagian besar studi tentang perlawanan IFN telah berfokus pada virus terkait beberapa faktor, dan sedikit perhatian telah dibayarkan kepada faktor tuan rumah. Mekanisme yang mendasari perlawanan terhadap interferon kronis hepatitis C belum jelas. HCV RNA ditiru sistem sekarang terbukti menjadi model yang cocok untuk mempelajari interaksi

host-virus. Memahami bagaimana virus dan host faktor yang mempengaruhi sensitivitas interferon yang mengakibatkan pengembangan strategi-strategi alternatif untuk meningkatkan tingkat keberhasilan interferon berdasarkan antivirus terapi. Interferon adalah keluarga sitokin yang memainkan sangat peranan penting dalam kekebalan bawaan dan melindungi manusia dari infeksi dengan jumlah virus dan intraselular organisme [33]. Sistem interferon diaktifkan selama infeksi virus dalam sel inang, replika virus sehingga menghambat selama host respon imun bawaan. Ada dua jenis interferon. Type I interferon meliputi IFN- dan interferon beta (IFN-) dan Jenis interferon II termasuk gamma interferon (IFN-). Sejak endogen interferon diproduksi oleh sel yang terinfeksi tidak cukup untuk menghilangkan infeksi, eksogen rekombinan manusia IFN- telah oleh karena itu digunakan untuk mengobati hepatitis C kronis. Kloning dan sekuensing dari cDNA fungsional untuk masingmasing interferon telah memungkinkan untuk menggunakan sitokin ini sebagai antivirus potensial untuk mengobati jumlah infeksi virus [34]. Tindakan antivirus interferon dimulai ketika IFN- mengikat reseptor. Interferon mengikat pada permukaan sel reseptor mengaktifkan jalur sinyal intraselular, yang melibatkan Janus kinase (JAK1), kinase tirosin 2 (TYK2) dan sinyal transduser dan penggerak transkripsi (STAT1 dan STAT2) protein. Fosforilasi protein Jak STAT menunjukkan bahwa baik Homo-atau heterodimerize mentranslokasi ke inti sehingga mendorong ungkapan dari gen IFN dirangsang (ISG). Fosfor STAT1 dan STAT2 menggabungkan dengan IRF-9 (interferon faktor regulasi 9) untuk membentuk suatu ISGF trimerik-3 kompleks. Kompleks ini memasuki inti dan mengikat ke sebuah konsensus urutan DNA [GAAAN (N) GAAA] disebut interferon yang merangsang respon elemen (ISRE) [35,36]. Peraturan urutan pabrik ini adalah hadir hulu dari sebagian besar IFN- dan IFN- responsif gen. Air terjun ini molekul sinyal sangat penting untuk stimulasi interferon gen dimediasi transkripsi. Penelitian sebelumnya di laboratorium kami menunjukkan bahwa aktivasi interferon dirangsang elemen responsif (IFN-promotor) sangat penting dalam respon antivirus terhadap hepatitis C. Aktivasi interferon diinduksi gen aktivasi melalui jalur JAK-STAT bervariasi di

antara yang berbeda-7 klon Huh [37]. Penelitian ini dimulai untuk menentukan signifikansi IFN-promotor aktivasi dalam baris sel replicon berbeda dengan sehubungan dengan tindakan antivirus IFN-2b. Kami menemukan bahwa replikan sel baris dengan induksi rendah tingkat interferon promotor sering mengembangkan resistansi terhadap IFN-. Dalam hal ini, kami telah mengembangkan beberapa baris sel replikan stabil di mana replikasi HCV benar-benar resisten terhadap IFN-. Peran faktor virus dan seluler pada mekanisme IFN perlawanan telah dilakukan. Kami menunjukkan di sini bahwa ekspresi protein diubah di Jak-Stat sinyal jalur sel replikan blok IFN-induced activa gen dan resistensi menyebabkan interferon.

Sumber : http://www.virologyj.com/content/4/1/89 Diambil pada tanggal 19 November 2010 Paramita Stella (G0010149)