PEMERIKSAAN BAKTERI DENGAN PEWARNAAN

ADI HARTONO

10/6/2008

Pewarnaan
Suatu teknik untuk mempelajari morfologi bakteri dengan cara pemberian zat warna kepada sel bakteri. Bagian-bagian sel dapat diamati, karena dapat menyerap zat warna yang berbeda oleh masing-masing bagian sel.

10/6/2008

Kenapa perlu diwarna ?

Bakteri ukurannya sangat kecil 05-1 u x 10 u Dibawah mikroskop tidak jelass bagianbagian nya. Untuk melihat dengan jelas perlu diberi zat warna.

10/6/2008

Umumnya ada 2 macam zat warna

Zat warna bersifat asam
Komponen warnanya adalah anion Dalam bentuk garam natrium

Zat warna bersifat basa

Komponen warna kation. Dalam bentuk klorida

10/6/2008

Macam-Macam Zat Warna Bakteri

No Nama Zat Pewarnaan Warna Bakteri

1 2 3 4 5

Sapranin Gentian violet Methylen blue Malachit green Karbol fuchsin

Merah Ungu Biru Hijau Merah

10/6/2008

Struktur Sel
Sel terdiri dari : Dinding sel , terdiri dari : - lapisan peptidoglikan - asam teikoat Membran plasma, terdiri dari : - membran protein - lapisan fosfolipid
10/6/2008 6

Macam-Macam Pewarnaan
1. Pewarnaan Sederhana - Menggunakan 1 macam zat warna. - Warna bakteri hanya 1 - Tidak dapat membedakan sifatnya. - Untuk melihat ukuran dan bentuknya.

10/6/2008

2. Pewarnaan Differensial - Menggunakan lebih dari 1 zat warna

- Membedakan sifat bakteri. - Melihat bagian-bagian bakteri. - Dapat digunakan untuk identifikasi bakteri tahap awal.

10/6/2008

Macam-Macam Pewarnaan Differensial

1. Pewarnaan Gram 2. Pewarnaan BTA 3. Pewarnaan Spora 4. Pewarnaan Granul

10/6/2008

Fiksasi
Proses melengketkan sediaan pada kaca obyek. Bakteri mati, tetpai tidak lisis. Secara Kimia : metanol Secara Fisika : pemanasan diatas nyala api.

10/6/2008

10

Pewarnaan Gram
Ditemukan Christian Gram (1884). Pewarnaan dasar dan rutin dalam identifikasi bakteri lebih lanjut. Kuman dibagi dua : - Gram positif berwarna ungu - Gram negatif berwarna merah.

10/6/2008

11

Tahap pewarnaan Gram

Perlakuan Waktu
Warna Bakteri

Gram +

Gram -

Pembuatan preparat Fiksasi Gentian violet 30 detik ungu Cuci dengan air Larutan 30 detik iodium Cuci dengan air dan keringkan Dekolorisasi dengan alkohol 20 detik Cuci dengan air dan keringkan Sapranin 30 detik ungu
10/6/2008

ungu -

merah
12

Pewarnaan BTA
Untuk mengidentifikasi kuman M. tbc dan M. leprae Kuman M.tbc dan M. leprae mempunyai dinding sel yang banyak mengandung lipid. Sukar ditembusi zat warna biasa. Perlu pemanasan. Bakteri M tbc dan M leprae berwarna merah.

10/6/2008

13

Tahap Pewarnaan BTA

Buat preparat. Fiksasi Zat Warna Karbol Fuchsin sambil dipanaskan (tidak mendidih) 3 menit. Cuci dengan air Pelunturan dengan asam alkohol hingga bersih. Methylen blue 1 menit.

10/6/2008

14

Zat Warna Pewarnaan BTA

Karbol fuchsin = merah. Methylen blue = biru. Asam alkohol sebagai peluntur. Kuman BTA positif : batang berwarna merah. Kuman BTA negatif : batang berwarna biru. Sensitifitas : 5000 BTA / ml sputum.

10/6/2008

15

Metoda Pewarnaan BTA

1. Ziehl Nellson 2. Kinyoun Gabbet 3. Tan Tiam Hook.

10/6/2008

16

10/6/2008

17