PENGARUH FLAVONOID PADA METABOLISME ASETAMINOFEN SITOKROM P450 DEPENDEN PADA TIKUS DAN MIKROSOM HATI MANUSIA.

Kelompok 1: Muchson, Herllya, Monica, Hazibi, Dian, Fuad, Luthfia, Fajar, Siwi, Rini

PENDAHULUAN

Kaya Flavonoid

Mengubah aktivitas sitokrom P450

Memiliki OH bebas Efek inhibisi

Tanpa OH bebas Efek Stimulasi Pengaruh Flavonoid pada oksidasi Acetaminophen???

TUJUAN
Tujuan dari penelitian ini adalah menyelidiki lebih lanjut efek dari flavonoid pada P450-dependen aktivitas dan oksidasi Acetaminophen (APAP) pada tikus dan mikrosom hati manusia.

ALAT dan BAHAN

9 Flavonoid (Myrecetin, Flavon,Fisetin, Narigenin, Quercetin, Hesperidin, Tangeretin, Nobiletin, Naringin) GSH, NDMA, Ethoxyresorufin, virus vaccinia tissue regaen kultur, sel G2 Hep, reagen.

ALAT dan BAHAN

Myrecetin, flavon, fisetin, GSH, dan NDMA dibeli dari Aldrich kimia Co (Milwaukee,WI). Narigenin, quercetin, hesperidin, tangeretin, nobiletin, dan naringin adalah pemberian dari florida fruitcitric departmen (Lake Alfred, FL). Ethoxyresorufin diperoleh dari Sigma Chemical Co (St Louis MO). Tissue reagen kultur dibeli dari Gibco BRL (Gaithersburg, MD). Wild type virus vaccinia dan vektor ekspresi diperoleh dari Dr B Moss (National Institute of Health, Bethesda, MD). Sel Hep G2diperoleh dari ATCC (Rockville, MD). Semua reagen lainnya adalah dari grade sesuai yang tersedia secara komersial.

ALAT dan BAHAN

PROSEDUR PERCOBAAN
Persiapan Mikrosom Hati Sistem ekspresi P450 Manusia

Uji Enzim

Metabolisme APAP

HASIL PENELITIAN
Mikrosom liver tikus jantan (control) 2. Human liver microsomes 3. P450 yang diekspresikan pada sel Hep G2 4. Penambahan substrat pada mikrosome yang berbeda 5. Pengaruh flavonoid pada aktivitas EROD 6. Pengaruh flavonoid pada NDMA demetilasi 7. Pengaruh flavonoid pada Erythromycin demethylase
1.

Pengaruh flavonoid terhadap oksidasi APAP pada Mikrosom liver tikus jantan (control)
Inhibisi laju pembentukan NAPQI-GSH utamanya diakibatkan oleh inhibisi pada P450 2E1 Flavone meningkatkan laju oksidasi APAP 2 - 5x Tangeretin (12.5 M) meningkatkan oksidasi APAP, namun peningkatan konsentasi berikutnya tidak meningkatkan aktivitas. Quercetin, Myricetin, Naringenin menurunkan oksidasi APAP.

Pengaruh Flavonoid pada Oksidasi APAP pada mikrosom liver tikus jantan
4 3 2 1 0

Control +MeOH 12.5mcM 25mcM 50mcM 100mcM

Flavone

Tangeretin

Myricetin

Quercetin

Naringenin

Pengaruh flavonoid terhadap oksidasi APAP pada Human Liver Microsomes

Flavone, Tangeretin, Nobiletin meningkatkan NAPQI-GSH pada HL-110 Quercetin, Myricetin menghambat pembentukan NAPQI-GSH pada HL-110 HL-110 = P450 3A4

Pengaruh Flavonoid pada Oksidasi APAP pada mikrosom liver manusia

compounds
Vehicle Flavone Nobiletin Tangeretin Naringin Hesperidin Naringenin Fisetin Myricetin Quercetin 448 650 523 509 415 452 356 361 358 399

HL-1
pmol/mg/min (% activity) 18 (100) 113 (150) 70 (120) 48 (110) 41 (93) 13 (101) 5 (79) 29 (81) 38 (80) 7 (89)

HL-110
pmol/mg/min (% activity) 697 66 (100) 2298 20 (330) 1545 12 (220) 1130 82 (160) 587 53 (84) 572 7 (82) 540 46 (77) 468 52 (67) 390 7 (56) 279 10 (40)

Konsentrasi APAP, Flavonoid, dan Metanol = 500 M, 50 M, dan 0,03%

Pengaruh Flavone dan Quercetin pada Oksidasi APAP oleh Sitokrom P450 pada Sel Hep G2
Senyawa Pembawa Flavone Quercetin P450 2E1 40 2.1 43 0.7 32 2.1 P450 1A2 44 1.4 0 0 P450 3A4 20 0 83 4.2 8 1.4

Konsentrasi APAP, flavonoid, dan methanol yang digunakan : 500 M, 50 M, dan 0,03%

Pengaruh flavonoid terhadap Substrat yang berpengaruh pada oksidasi APAP pada mikrosom yang berbeda
Male Rat liver microsome Flavone Vmax 3,2 x Km Quercetin Km 3 x Vm DEX-female rat Flavone Vmax 2,4 x Km 1,6x Quercetin Km 5,2 x Vmax (93%) Hep G2 3A4 Flavone Vmax 1,8 x Quercetin Km Vmax (48%)

Pengaruh Flavonoid pada Substrate Dependence dari Oksidasi APAP pada Mikrosom yang berbeda-beda
Flavone

Tanpa Flavonoid Quercetin

Control Rat Liver Microsome

Pengaruh Flavonoid pada Substrate Dependence dari Oksidasi APAP pada Mikrosom yang berbeda-beda
Flavone

Tanpa Flavonoid

Quercetin

DEX-induced female rat liver microsomes

Pengaruh Flavonoid pada Substrate Dependence dari Oksidasi APAP pada Mikrosom yang berbeda-beda
Flavone

Tanpa Flavonoid Quercetin

Sel Hep G2-h3A4

Parameter Kinetik Flavone dan Quercetin pada Oksidasi APAP pada P450 3A4 Sel Hep G2

Pengaruh Flavonoid pada aktivitas EROD

Kontrol Flavone, Tangeretin, Quercetin, Myricetin P450 1A2

Hep G2-h1A2 Flavone, Tangeretin, P450 3A4

Pengaruh Flavonoid pada aktivitas NDMA dan Aktivitas Erithromisin demetilasi pada tikus control dan mikrosom liver manusia
Kontrol
Myricetin = inhibisi lemah

Mikorosom Liver Manusia Myricetin = inhibisi Flavone, Tangerenin, Quercetin = sedikit pengaruh

KESIMPULAN
Flavone > Nobiletin > Tangeretin menstimulasi oksidasi APAP Quercetin > Myricetin > Naringetin > Fisetin > Hisperidin > Naringinin menginhibisi oksidasi APAP.

KESIMPULAN

Flavone P450 3A4 P450 1A2 dan EROD tidak berpengaruh signifikan 2E1, NDMA, erythromycin demethylase Quercetin P450 3A4, 1A2, 2E1, dan EROD kM dan VMAX

Lanjutan..
Acetaminophen (APAP) adalah analgesik -antipiretik yang sangat umum digunakan. Meskipun APAP adalah obat yang aman dan efektif bila digunakan pada dosis yang dianjurkan, tetapi dapat menyebabkan hepatotoksik/kerusakan hati dan ginjal atau bahkan kematian pada kasus overdosis , terutama pada kecanduan alkohol atau bila digunakan bersama dengan beberapa obat lain

Hepatotoksik Asetaminofen