PROSEDUR VALIDASI ANALITIK DENGAN METODE

KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI UNTUK ANALISIS

FARMASI
Abstrak
Analisis HPLC adalah faktor penting dalam proses pengembangan obat, dan penting untuk
memastikan keandalan dari prosedur analitis untuk mendapatkan data yang berarti. Konferensi
Internasional tentang Harmonisasi (ICH) telah mengakui pentingnya validasi tentang analitis
prosedur, dan mengeluarkan pedoman tentang Validasi Prosedur Analitis (Q2) sebagai kerangka
kerja untuk studi validasi. Laporan ini melengkapi ICH pedoman Q2, dan menyediakan sarana
praktis untuk studi validasi berfokus pada analisis dengan HPLC
Pengantar
Validasi prosedur analitis adalah proses untuk membuktikan bahwa prosedur analitis cocok
untuk tujuan yang telah ditetapkan. Hasil diperoleh dari studi validasi metode dapat digunakan
untuk menilai kualitas, keandalan dan konsistensi hasil analisis. Beberapa artikel telah
dipublikasikan pada persyaratan validasi untuk metode analisis [1,2]. Hijau memberikan panduan
praktis untuk validasi metode analisis dengan satu set persyaratan untuk metode [3]. Untuk
industri farmasi, pedoman dari FDA [4-6] dan farmakope AS (USP) [7] menyediakan kerangka
kerja untuk melakukan studi validasi. Sayangnya, beberapa definisi bervariasi antara organisasi
yang berbeda. Untuk mencapai harmonisasi untuk aplikasi farmasi , Konferensi Internasional
tentang Harmonisasi ( ICH ) diselenggarakan , dan perwakilan dari industri farmasi dan badan
pengatur dari Amerika Serikat , Eropa dan Jepang mendefinisikan karakteristik validasi ,
persyaratan dan metodologi untuk validasi metode analisis. Untuk farmasi analisis , pedoman
ICH ( Q2 ( R1 ) : Teks pada Validasi prosedur analitis dan Metodologi [ 8 ] ) diterbitkan
untuk melakukan studi validasi . Dalam pedoman ini , analitis Prosedur diklasifikasikan ke
dalam empat kategori . Keempat jenis prosedur analitis adalah : 1 ) tes identifikasi , 2 )
kuantitatif tes untuk kotoran , 3 ) uji batas untuk mengontrol kotoran , 4 ) tes kuantitatif dari
bagian aktif dalam farmasi aktif massal bahan , produk diformulasikan , atau komponen lain
yang dipilih dalam dirumuskan produk . Penilaian karakteristik validasi harus didasarkan pada
tujuan penggunaan metode , dan tingkat keketatan sebanding dengan kekritisan dari prosedur
analitis dalam pengukuran . The ICH juga mengakui bahwa tidak selalu diperlukan untuk
mengevaluasi setiap karakteristik validasi . Untuk identifikasi tes, hanya karakteristik validasi
"kekhususan" seharusnya dibentuk. Tabel 1 menunjukkan dua jenis analitis Metode untuk
analisis kromatografi, seperti metode uji untuk pengukuran bagian dan pengotor metode aktif
untuk penentuan senyawa target pada tingkat jejak, dan karakteristik validasi untuk diselidiki.
Untuk metode pengujian, evaluasi deteksi limit (DL) dan limit kuantitasi (QL) tidak penting,
karena senyawa target yang akan diukur ada pada tingkat tinggi. Untuk kuantitatif
analisis, penentuan DL tidak diperlukan. Ada tidak ada pedoman resmi pada urutan percobaan
validasi. dan urutan yang optimal tergantung pada prosedur analitis .Berdasarkan pengalaman
penulis , untuk melakukan validasi metode kromatografi cair , urutan berikut akan berguna :
spesifisitas , batas deteksi dan / atau batas kuantisasi , linearitas , akurasi , presisi .
Dalam pedoman ICH Q2 , karakteristik validasi untuk diselidiki semua terdaftar, tetapi batas
penerimaan untuk setiap item yang tidak digambarkan sebagai contoh . Selain itu, prosedur yang
sebenarnya menjadi dilakukan tidak disebutkan secara rinci . Ketidakjelasan dalam pedoman
ICH Q2 memerlukan desain protokol yang efektif . Sebuah percobaan yang dirancang dengan
baik dan statistik pendekatan yang relevan akan memudahkan validasi belajar pada prosedur
analitis sesuai dengan ICH pedoman . Laporan ini menggambarkan pendekatan untuk melakukan
validasi studi tentang prosedur analitis dengan HPLC . Kriteria yang dapat diterima untuk
masing-masing karakteristik validasi juga disarankan dalam laporan ini . Pendekatan yang
dijelaskan dalam laporan ini akan berlaku untuk lainnya teknik analisis untuk sampel biologis
dan lingkungan analisis .

Persyaratan pra-validasi
Bahan kimia, seperti reagen dan standar, harus tersedia dalam jumlah yang cukup, akurat
diidentifikasi, cukup stabil dan diperiksa untuk kemurnian. Bahan dan bahan habis pakai lainnya,
misalnya, kromatografi kolom, harus memenuhi syarat untuk memenuhi kolom kriteria kinerja.
Percobaan validasi juga harus dilakukan oleh seorang analis yang berpengalaman untuk
menghindari kesalahan karena kurangnya pengalaman. Validasi pada prosedur analitis harus
dilakukan dengan sampel homogen, dan validasi data harus diperoleh oleh berulang kali
menganalisis aliquot dari sampel homogen, masing-masing yang telah secara independen
disiapkan sesuai dengan analisis.
Prosedur metode.
1. Peralatan Analytical kualifikasi
Hasil yang memuaskan dari studi validasi dapat diperoleh hanya dengan peralatan yang
beroperasi dengan baik. Sebagai contoh, jika batas deteksi faktor penting untuk metode tertentu ,
spesifikasi instrumen untuk suara awal dan respon terhadap senyawa tertentu harus diverifikasi.
Sebelum melakukan studi validasi , perlu untuk memverifikasi bahwa sistem analitis dirancang
secara memadai , dipelihara ,berkualitas. ICH telah menerbitkan pedoman Q 7 [ 9 ] di mana
kualifikasi instrumen dijelaskan untuk memastikan kesesuaian instrumen analitis . Selama tahap
kualifikasi analitis instrumen yang dibeli dari vendor , kualifikasi instalasi ( IQ ) , kualifikasi
operasional ( OQ ) dan kinerja kualifikasi ( PQ ) harus dilakukan . IQ menetapkan bahwa
instrumen diterima serta dirancang dan ditetapkan , dan itu terpasang dengan benar . The OQ
memastikan bahwa modul dari sistem HPLC beroperasi secara akurat dan tepat sesuai dengan
yang ditetapkan spesifikasi mengenai beberapa parameter , seperti aliran rate untuk pompa ,
volume injeksi untuk auto - sampler , suhu kontrol untuk kolom oven , panjang gelombang untuk
UV - detektor , dll PQ memverifikasi kinerja sistem . Langkah-langkah ini biasanya digunakan
untuk memverifikasi bahwa sistem tersebut cukup untuk analisis yang akan dilakukan.
2. Stabilitas analit (s) dalam solusi
Beberapa analit dalam larutan mungkin membusuk sebelum kromatografi investigasi, misalnya,
selama persiapan solusi sampel, ekstraksi, pembersihan atau penyimpanan di botol (dalam lemari
pendingin atau dalam sampler otomatis). Untuk menghasilkan direproduksi dan hasil yang dapat
diandalkan, stabilitas analit (s) dalam solusi, dan bahwa fase gerak harus ditentukan sebelum
memulai studi validasi. Dalam banyak kasus, sampel dianalisis semalam menggunakan sistem
HPLC dilengkapi dengan auto-sampler. Untuk metode uji untuk bulk bahan farmasi aktif atau
metode pengotor untuk jejak senyawa (kotoran dan kontaminan), analit (s) dalam solusi sampel
dan larutan standar harus stabil selama 48 jam di bawah kondisi penyimpanan yang ditetapkan.
Ponsel fase harus stabil selama minimal 48 jam. Kriteria stabilitas yang dapat diterima untuk
Metode uji tidak berubah lebih dari 2,0% di daerah puncak yang diperoleh dari solusi disimpan,
relatif terhadap orang-orang dari solusi baru disiapkan. Adapun metode kenajisan, stabilitas
diterima Kriteria tidak berubah lebih dari 10% ditentukan dengan cara yang sama dengan metode
uji. Jika analit (s) dalam solusi yang tidak stabil pada suhu kamar, kemudian mengurangi suhu
penyimpanan untuk 2 - 8 C dapat meningkatkan stabilitas solusi. Tahap mobile dianggap stabil
jika fase gerak tersimpan menghasilkan kromatogram setara dengan yang diperoleh dengan fase
gerak baru disiapkan. Penilaian harus dilakukan berdasarkan kapasitas faktor, resolusi dan faktor
tailing.
Protokol validasi analitis
Protokol pada studi validasi harus mencakup sebagai berikut poin dalam studi validasi : 1 )
tujuan dan ruang lingkup metode analisis , 2 ) jenis metode analisis dan validasi karakteristik , 3
) kriteria penerimaan untuk masing-masing karakteristik validasi .Pertimbangan pada poin-poin
berikut akan berguna untuk mempersiapkan protokol .
Apa jenis sampel akan diukur oleh analisis Metode ? Apakah sampel menjadi utuh darah ,
serum , plasma , dimurnikan protein , bahan kimia ? Apakah ada campur zat yang terkandung
dalam sampel , jika demikian , mereka harus dideteksi atau diukur ? Apa rentang konsentrasi
yang diharapkan ? Apa tingkat spesifisitas , batas deteksi atau batas kuantisasi ,linearitas ,
akurasi dan presisi diperlukan ? Tujuan menjawab pertanyaan-pertanyaan yang dijelaskan di atas
adalah untuk menentukan cara terbaik untuk memenuhi tujuan dari validasi untuk analisis
prosedur . Jika metode ini dimaksudkan untuk quantitate aktif bahan farmasi dalam obat-obatan ,
atau kotoran di tingkat melacak , metode ini dikategorikan ke dalam uji kuantitatif metode ,
seperti yang ditunjukkan pada Tabel 1 . Jika metode ini dimaksudkan untuk melayani sebagai
pengujian batas , metode adalah metode kualitatif .
Prosedur validasi
Pada bagian ini, kami akan menjelaskan arti dari karakteristik validasi, dan pendekatan yang
sebenarnya untuk melakukan studi validasi. Contoh dari kriteria diterima juga dijelaskan.

1. Kekhususan
Kekhususan prosedur analitis kromatografi adalah Kemampuan untuk mengukur respon analit di
hadapan semua potensi komponen sampel seperti bahan awal, intermediet dalam sintesis, dan
bahan-bahan aktif dalam merumuskan produk, dan produk degradasi. Kekhususan dalam
kromatografi cair dicapai dengan memilih kolom yang optimal dan pengaturan kondisi
kromatografi, seperti komposisi fase gerak, suhu kolom dan detektor panjang gelombang. Selain
kromatografi pemisahan , prosedur persiapan sampel juga harus dioptimalkan untuk pemisahan
terbaik . Spesifisitas dapat ditunjukkan dengan menganalisis sampel yang mengandung kotoran
atau bahan lain melonjak ke analit ( s ) dari bunga. Hal ini tidak perlu untuk spike zat
mengganggu potensi yang tidak cukup ada dalam sampel pengujian . Degradasi produk bisa
dihasilkan dengan menyimpan analit di bawah stres kondisi yang cukup untuk menurunkan ke
kemurnian sekitar 90 % .Kondisi stres khas untuk generasi produk degradasi untuk bahan
farmasi aktif massal panas ( 50 C , 60 C ) , cahaya ( 6500 lx sinar ultraviolet ) , kondisi asam
( dalam 0,1 mol / L klorida larutan asam ) , kondisi alkali ( dalam 0,1 mol / L natrium hidroksida
solusi ) , dan oksidan ( dalam 3 % larutan hidrogen peroksida ) . Untuk produk dirumuskan ,
panas, cahaya dan kelembaban adalah faktor dari kondisi parah . Campuran yang dihasilkan
harus dianalisis , dan puncak analit dievaluasi untuk kemurnian puncak dan resolusi dari
puncak eluting terdekat . Untuk studi analisis biologis spesifisitas juga harus diperluas untuk
menilai gangguan yang mungkin disebabkan oleh komponen dalam urin , darah , dan lain-lain
persiapan sampel Dioptimalkan dapat menghilangkan sebagian besar komponen matriks . Dalam
analisis kromatografi , sulit untuk memastikan apakah puncak dalam kromatogram murni , atau
terdiri dari lebih dari satu majemuk. Di masa lalu, parameter kromatografi seperti ponsel
komposisi fase dimodifikasi untuk menyelidiki puncak kemurnian . Baru-baru ini ultraviolet /
terlihat detektor diode -array yang sedang digunakan . Tingkat kotoran yang dapat dideteksi
dengan ini instrumen tergantung pada perbedaan spektral , pada kinerja detektor dan pada
algoritma perangkat lunak . Dalam kondisi ideal, kotoran puncak pada tingkat 0,5 % dapat
dideteksi . Contoh kekhususan kriteria untuk metode untuk menentukan pengotor jumlah jejak
senyawa adalah bahwa faktor resolusi setidaknya 1,2 di antara semua kotoran potensial yang
dihasilkan atas tingkat 0,1 % dalam kondisi stres . Untuk metode uji , faktor resolusi antara
senyawa target dan kotoran adalah di sedikitnya 1,5 . Pemisahan diinginkan ditunjukkan pada
Gambar 1 . Setelah resolusi diterima dicapai untuk analit dan potensi kotoran , parameter
kromatografi , seperti ponsel - komposisi fase , aliran -rate , dan modus deteksi , jenis kolom ,
harus dipertimbangkan untuk diatur .

2 . Batas Deteksi dan batas kuantisasi
Batas deteksi ( DL ) dari prosedur analitis adalah yang terendah Konsentrasi analitis di mana
suatu analit ( s ) dapat dideteksi kualitatif . Biasanya ketinggian puncak dua atau tiga kali
tingkat kebisingan . Batas kuantitasi ( QL ) juga konsentrasi terendah pada tingkat analit dapat
quantitated dengan presisi yang dapat diterima , membutuhkan ketinggian puncak 10 sampai 20
kali lebih tinggi dari baseline noise . Ini rasio signal-to -noise adalah Aturan praktis yang baik .
The ICH telah mengakui rasio signal-to-noise yang paling konvensional, tetapi juga
mencantumkan dua operasi lain untuk menentukan DL dan QL: metode non instrumental visual
dan sarana perhitungan. Metode non-instrumen Visual mungkin berlaku untuk teknik pemisahan
seperti kromatografi lapis tipis. Sebuah cara perhitungan adalah didasarkan pada latar belakang
statistik. Setiap metode akan memberikan yang berbeda hasil. Currie mengusulkan agar DL
harus diputuskan secara eksklusif didasarkan pada kesalahan jenis pertama () yang
didefinisikan oleh distribusi noise kosong [10]. Dia memperkenalkan konsep tingkat kritis (LC)
bawah sinyal yang dinilai tidak diamati. Secara matematis, tingkat kritis diberikan sebagai.
1.And the detection limit is expressed as below,
2. Mana K adalah nilai tentang distribusi normal standar mendefinisikan probabilitas, dan
merupakan standar deviasi dari puncak kosong. Standar deviasi dari puncak sampel pada tingkat
DL diasumsikan sama dengan puncak kosong. Itu dua jenis kesalahan harus dipertimbangkan:
memutuskan bahwa substansi hadir jika tidak (, kesalahan jenis pertama), dan sebaliknya, gagal
untuk memutuskan bahwa itu hadir ketika ada (; error dari jenis kedua). Secara umum, nilai
yang dapat diterima untuk dan adalah 0,05 di industri farmasi [11]. Dalam hal ini, K 1.65,
dan DL adalah sama dengan 3,3 . Hubungan antara LC, DL dan distribusi probabilitas
digambarkan pada Gambar 2. Secara umum, kuantitas fisik yang menarik (massa, konsentrasi)
tidak secara langsung diukur, tetapi dihitung dengan sinyal yang diamati (Daerah puncak)
melalui kurva kalibrasi. DL dinyatakan dalam persamaan berikut:
3.Di mana "slope" berarti bahwa dari kurva kalibrasi. Persamaan ini bisa diubah menjadi
persamaan berikut.
4.Persamaan ini berarti standar deviasi relatif (RSD) di tingkat batas deteksi adalah 30%. Dalam
cara yang sama, QL juga diungkapkan dalam persamaan berikut, dan RSD adalah 10% pada
kuantisasi yang membatasi tingkat.
5.6.Pengukuran besarnya respon latar belakang analisisdilakukan dengan menganalisis jumlah
yang sesuai dari kosong sampel dan menghitung standar deviasi dari respon tersebut .
Standar deviasi residual atau standar deviasi dari y intersep garis regresi dapat digunakan
sebagai standar deviasi . Hubungan antara tingkat kritis ( LC ) , batas deteksi ( DL ) dan
kesalahan pertama dan kedua jenis Gambar 2 . .Gambar 3 . Khas kromatogram menunjukkan
batas deteksi dan batas kuantisasi . Tingkat kebisingan bervariasi , dan yang diamati dalam pola
distribusi normal .Contoh dari kriteria batas deteksi adalah bahwa , di mana RSD daerah puncak
puncak pengotor akan ? 30 % ketika analit dianalisis dalam interval pendek . Demikian pula ,
kriteria untuk kuantisasi batas adalah bahwa RSD daerah puncak pada tingkat yang ? 10 % .
Setiap hasil perkiraan batas deteksi dan batas kuantisasi harus diverifikasi dengan sampel yang
mengandung analit yang sesuai di DL atau QL tingkat , seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3
.Kedua DL dan QL dapat dipengaruhi oleh instrumen HPLC . Puncak tajam menghasilkan tinggi
rasio signal-to -noise , sehingga lebih rendah DL dan QL . Sebaiknya memverifikasi DL dan QL
ketika Sistem HPLC untuk analisis rutin berubah , terutama dari sistem HPLC lama ke tipe baru .
3 . Linearitas
Linearitas dari prosedur analitis adalah kemampuan untuk menunjukkan respon analit sebanding
dengan konsentrasi analitdalam kisaran tertentu . Dalam prakteknya , studi linearitas harus
dirancang
harus sesuai untuk analisis dimaksudkan . Pada penyelesaian studi linearitas , rentang konsentrasi
yang tepat akan ditetapkan untuk semua penelitian selanjutnya . Untuk metode pengujian , studi
linearitas umumnya dilakukan dengan menyiapkan larutan standar pada lima konsentrasi tingkat
80-120 % dari konsentrasi analit target . Untuk metode kenajisan, linearitas ditentukan dengan
menyiapkan solusi standar di lima tingkat konsentrasi selama rentang dari pelaporan ambang
batas 120% dari tingkat spesifikasi . Pelaporan ambang batasnya di atas yang merupakan
pengotor dalam massal aktif bahan farmasi atau produk dirumuskan harus dilaporkan kepada
otoritas regulasi , dan tingkat spesifikasi batasnya atas yang pengotor seharusnya tidak terjadi
dalam farmasi aktif massal produk bahan atau dirumuskan [ 12,13 ] . The ICH Q2 pedoman
menentukan minimal lima tingkat konsentrasi sepanjang dengan rentang minimum tertentu yang
ditentukan , namun tidak memerlukan bukti presisi , karena hubungan linear tidak dapat
dihasilkan tanpa presisi yang cukup .
Linearitas biasanya ditunjukkan melalui regresi least-square . Penerimaan data linearitas sering
dinilai dengan memeriksa koefisien korelasi dan y - intercept , dan sisa jumlah kotak . Untuk
metode pengujian , koefisien korelasi lebih dari 0.999 umumnya dianggap sebagai bukti fit
diterima dari data ke garis regresi . Untuk metode kenajisan, koefisien korelasi lebih dari 0.99
umumnya diterima . Sebuah regresi linear persamaan diterapkan pada hasil harus memiliki
intercept tidak signifikan berbeda dari 0 . Hasil ini harus didorong dari penilaian statistik kurva
kalibrasi . Hal ini juga menerima bahwa y - intercept harus kurang dari beberapa persen dari
respon diperoleh untuk analit pada konsentrasi sasaran . Sebagai contoh, y - intercept untuk
metode pengujian harus kurang dari 2,0 % dari respon analit pada konsentrasi sasaran . Y
intercept untuk metode pengotor harus kurang dari 10 % dari respon dari analit pada tingkat
spesifikasi . Linearitas juga harus dievaluasi grafis , selain evaluasi matematika yang dijelaskan
di atas . Evaluasi dibuat dengan pemeriksaan visual sebidang luas puncak sebagai fungsi analit
konsentrasi , seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4 . Selain pendekatan ini , plot dari nilai
yang diperoleh oleh pengurangan dari nilai-nilai yang diamati dari nilai prediksi ( dari persamaan
linear ) terhadap Konsentrasi dapat membantu untuk menilai linearitas . Untuk rentang linear di
kurva kalibrasi , penyimpangan harus didistribusikan secara merata antara nilai-nilai positif dan
negatif , seperti yang ditunjukkan pada Gambar 5 .
4 . Akurasi dan presisi
Hasil analisis yang diperoleh melalui prosedur analitis dari sampel . Dalam hal ini , hasil analisis
melibatkan dua jenis kesalahan . Salah satunya adalah kesalahan sistematis dan yang lainnya
adalah random error . Kesalahan sistematik sering disebabkan dari instrumen analitis,
interferensi oleh bahan hidup bersama . Kesalahan acak terjadi setiap kali analisis yang
dilakukan . Kedua jenis kesalahan dalam prosedur analitis harus diselidiki sebagai karakteristik
validasi akurasi dan presisi .Akurasi adalah kedekatan hasil analisis diperoleh analisis dengan
nilai-nilai yang benar , dan biasanya disajikan sebagai persen dari nominal. Akurasi dalam
ketiadaan presisi memiliki sedikit makna .Akurasi biasanya ditentukan dalam salah satu dari
empat berikut cara.
Pertama , akurasi dapat dinilai dengan menganalisis sampel konsentrasi dikenal (bahan referensi)
dan membandingkan diukur nilai nilai sebenarnya . Jika Institut Nasional Standar dan Teknologi
(NIST) standar dapat tersedia , standar tersebut harus dimanfaatkan. Namun, standar tersebut
baik ditandai tidak dapat ditawarkan untuk analit terkait obat baru .
Kedua pendekatan adalah untuk membandingkan hasil analisis dari analisis baru prosedur
dengan hasil dari yang sudah ada baik ditandai prosedur yang dikenal akurat . Sekali lagi ,
selama pengembangan obat tahap dalam industri farmasi , alternatif seperti prosedur analitis
biasanya tidak tersedia .
Pendekatan ketiga adalah dilakukan oleh spiking analit dalam matriks kosong . Jumlah
ditambahkan sesuai dengan nilai sebenarnya . Jika kotoran potensial telah diisolasi , mereka akan
ditambahkan ke matriks untuk meniru sampel yang tidak murni .Tingkat analit dalam sampel
berduri harus ditentukan dengan menggunakan Prosedur persamaan yang sama seperti yang akan
digunakan dalam analisis didefinisikan prosedur .
The ICH pedoman Q2 merekomendasikan akurasi yang akan dinilai menggunakan minimal
sembilan penentuan selama minimal tiga tingkat konsentrasi yang mencakup kisaran tertentu.
Untuk metode pengujian, sampel berduri disiapkan dalam rangkap tiga pada tiga tingkatan atas
kisaran 80-120% dari konsentrasi sasaran. Untuk metode kenajisan, sampel berduri disiapkan
dalam rangkap tiga pada rentang yang mencakup kandungan pengotor yang diharapkan dari
sampel, seperti laporan ambang batas 120% dari tingkat spesifikasi. Setelah perhitungan
pemulihan persen, akurasi harus dilaporkan sebagai recovery persen dengan penentuan jumlah
tambah dikenal analit dalam sampel atau sebagai perbedaan antara mean dan diterima nilai
sebenarnya, bersama-sama dengan interval kepercayaan. Confidence interval dihitung terutama
dari rata-rata (x), standar deviasi (? V). Rata-rata dari dataset dihitung menggunakan berikut
persamaan:
7.Dimana n berarti jumlah sampel yang diukur dalam penelitian ini. Itu
Standar deviasi adalah ukuran penyebaran nilai-nilai dalam dataset, dan dapat dihitung dengan
perbedaan antara rata-rata dan nilai-nilai individu sebagai berikut.
8. Interval rahasia yang digunakan untuk menunjukkan keandalan perkiraan. Ketika jumlah
bahan aktif farmasi dalam produk diformulasikan ditentukan, nilai rata-rata hasil adalah
perkiraan jumlah aktual hadir dalam yang dirumuskan. Sebuah interval keyakinan memberikan
batas sekitar nilai rata-rata yang diperoleh melalui prosedur uji. Dalam interval keyakinan, nilai
sebenarnya (rata-rata populasi) terletak pada nilai tertentu probabilitas, biasanya 95%. Interval
kepercayaan dari rata-rata populasi () dinyatakan menggunakan t-distribusi:
9.
y _t id UTF-8
Merjemahkan teks atau laman web
where K is the value concerni
defining the probabilities, and
of the blank peaks. The standar
the DL level is assumed to be eq

di mana berarti derajat kebebasan , dan adalah kesalahan jenis pertama .Jika 0 % adalah dari
interval kepercayaan akurasi ( perbedaan Gambar 5 . Deviasi di sekitar garis kalibrasi
ditunjukkan pada Gambar 5 . KROMATOGRAFI , Vol.33 No.2 ( 2012) Masato Kazusaki ,
Shinji Ueda , Naoto Takeuchi , Yasutaka Ohgami dari nilai sebenarnya dan nilai yang diamati )
, hasil analisis yang merugikan dipengaruhi oleh kesalahan sistematik . Sebuah contoh dari
akurasi kriteria untuk metode pengotor adalah bahwa pemulihan individu akan
di kisaran 80 % sampai 120 % pada setiap tingkat konsentrasi . Untuk uji Metode yang
diterapkan pada produk dirumuskan , individu pemulihan akan dari 95 % sampai 105 % pada
setiap tingkat konsentrasi .Untuk akurasi metode uji untuk farmasi aktif massal bahan , akurasi
diperkirakan dari hasil penelitian dari spesifisitas , linearitas dan presisi .Bagian paling penting
dari setiap studi validasi untuk analisis Prosedur adalah presisi . Ketepatan suatu metode analisis
adalah jumlah variasi dalam hasil yang diperoleh dari beberapa analisis dari sampel homogen .
Pedoman ICH istirahat presisi dalam tiga bagian : pengulangan , presisi menengah, dan
reproduktifitas .

Repeatability presisi dinyatakan sebagai standar deviasi hasil analisis ketika analisis dilakukan di
laboratorium oleh operator menggunakan peralatan selama waktu yang relatif singkat rentang.
Repeatability juga disebut intra - assay presisi . The ICH pedoman metodologi menyatakan dua
cara untuk pengumpulan data . Satu cara mengumpulkan data dari minimal sembilan penentuan (
untuk Misalnya , tiga konsentrasi , tiga ulangan masing-masing) selama minimum dari tiga
konsentrasi yang mencakup kisaran target . Lain cara mengumpulkan data dari setidaknya 6
ulangan untuk diukur pada 100 persen dari target uji konsentrasi . Data presisi akan
tersedia dari analisis rangkap tiga sampel berduri dilakukan dalam studi akurasi . Dokumentasi
dalam mendukung presisi ( pengulangan ) studi harus mencakup standar deviasi dan selang
kepercayaan . Presisi ( pengulangan ) kriteria assay metode untuk bahan farmasi aktif massal
adalah bahwa pengulangan harus tidak lebih dari 1,0 % , dan bahwa untuk dirumuskan
produk tidak lebih dari 2,0 % . Untuk metode pengotor untuk menentukan jumlah kecil senyawa
, presisi ini harus tidak lebih dari 10 % . Interval kepercayaan presisi juga dihitung dengan
menggunakan chi -square distribusi ,
11.dimana S adalah jumlah deviasi kuadrat, dan diperoleh dari berikut perhitungan.
12.Presisi Menengah adalah istilah yang telah didefinisikan oleh ICH sebagai variabilitas jangka
panjang dari proses pengukuran . Menengah presisi adalah hasil dari dalam - lab variasi karena
random acara-acara seperti hari yang berbeda , analis yang berbeda , berbeda analitis kolom ,
peralatan yang berbeda , dll Tujuan menengah validasi presisi adalah untuk memverifikasi
bahwa di laboratorium yang sama metode akan memberikan hasil yang sama . Dalam
menentukan antara presisi , desain eksperimen harus digunakan sehingga efek ( jika ada) dari
variabel individu dapat dipantau . Penyelidikan terdiri dari minimal dua analis pada enam
berbeda hari dengan dua ulangan . Reproducibility , yang ditentukan dengan menganalisis
homogen sampel di beberapa laboratorium , sering merupakan bagian dari antar laboratorium
studi crossover. Tujuannya adalah untuk memastikan bahwa metode ini akan memberikan hasil
yang sama di laboratorium yang berbeda .
5 . Rentang
Kisaran suatu metode analisis adalah interval antara bagian atas dan tingkat yang lebih rendah (
termasuk tingkat ini ) yang telah dibuktikan dengan presisi , akurasi dan linearitas menggunakan
analisis Metode . Jadi , rentang yang dapat diterima akan didefinisikan sebagai konsentrasi
Interval di mana linearitas , akurasi dan presisi yang dapat diterima .
Robustness 6 .
Ketangguhan dari prosedur analitis adalah kemampuannya untuk tetap tidak terpengaruh oleh
variasi kecil dalam parameter analitis . Ketahanan dievaluasi dengan memvariasikan parameter
analisis seperti ph penyangga , laju alir , suhu kolom , Volume injeksi , deteksi panjang
gelombang atau komposisi fase gerak dalam realistis jangkauan. Pengaruh kuantitatif variabel
harus ditentukan .
kesimpulan
Jika analis di industri farmasi memperoleh diragukan menguji hasil melalui prosedur analitis
tidak valid , mereka akan menyadari bahwa jumlah banyak waktu yang harus diperlukan untuk
memecahkan masalah . Kesulitan semacam ini akan dihindari , asalkan bahwa studi validasi
dilakukan dengan benar . A didefinisikan dengan baik proses validasi memberikan bukti bahwa
sistem dan metode yang cocok untuk digunakan sesuai dengan tujuannya . Melakukan seluruh
validasi studi tentang prosedur analitis dapat menjadi proses yang membosankan .
Namun, setelah studi validasi selesai, analis dapat percaya diri dalam kemampuan prosedur
analitis untuk menyediakan kuantisasi yang baik . Kami berharap bahwa kami bisa memberikan
panduan untuk membantu memahami bagaimana melakukan studi validasi pada prosedur analitis
yang menghasilkan data baik berguna dan makna . Laporan ini berfokus pada melakukan
studi validasi untuk obat-obatan oleh sistem HPLC . Pendekatan validasi ini akan diterapkan
pada metode analisis menggunakan GC , HPLC , GC - MS , LC - MS untuk sampel biologis atau
zat pencemaran lingkungan . Banyak dari prinsip-prinsip , teknik pemisahan , dan persyaratan
yang umum untuk semua jenis metodologi analisis kromatografi .