Studi molekuler spesies tanaman apomictic sering mendeteksi variasi lebih genotip dari yang

diperkirakan dari mode reproduksi diasumsikan mereka. Dua mekanisme yang paling sering
dipanggil untuk menjelaskan tingkat tinggi variasi adalah rekombinasi, melalui fakultatif seksualitas,
dan mutasi. Potensi reproduksi seksual di fakultatif apomict Hieracium pilosella (Asteraceae) adalah
menghalangi-ditambang di tiga lokasi lapangan dengan artifisial penyerbukan dengan berhubungan
erat, tetapi berbeda secara morfologis, H. aurantiacum. Tingkat variasi genotipe di tiga lokasi
direkam menggunakan pengulangan urutan antar-sederhana (ISSRs). Analisis Kompatibilitas dapat
menentukan, menggunakan terjadinya'' karakter tidak kompatibel,''.
Bertentangan dengan harapan, populasi spesies tumbuhan apomictic seringkali memiliki tingkat
variasi genotype. Dua penjelasan sering dikutip untuk fenomena ini adalah rendahnya tingkat
reproduksi seksual dan mutasi (lihat Vrijen-hoek, 1990, untuk review). Sampai saat ini, penjelasan
seperti sebagian besar tetap spekulatif, karena belum ada metode yang dapat diandalkan yang
digunakan untuk membedakan antara mereka. Baru-baru ini, analisis cladistic telah digunakan dalam
penelitian ini fakultatif apomicts untuk partisi variasi genotip diamati dalam populasi ini. ''Komponen
kompatibilitas analisis'' digunakan untuk mencegah-tambang apakah perbedaan antara genotipe
paling baik dijelaskan oleh akumulasi mutasi atau apakah karakter pola-pola diamati lebih
parsimoniously dicatat dengan pertukaran genetic. Analisis kompatibilitas diterapkan untuk metode
molekuler yang menghasilkan penanda dominan dengan memperlakukan setiap band sebagai
karakter individu. Penelitian ini unik karena kita memiliki ukuran empiris dari potensi reproduksi
seksual pada fakultatif apomict bawah kondisi lapangan di tiga populasi. Kombinasi dari tipe data
telah memungkinkan kita untuk menguji apakah ada hubungan antara potensi reproduksi seksual
dan tingkat variasi genetik populasi. Kami berhipotesis bahwa sebagai tingkat reproduksi seksual
meningkat. mengingat bahwa populasi memiliki sejarah yang sebanding dan dengan asumsi belum
ada seleksi yang kuat pada perekrutan baik keturunan seksual atau aseksual. Herbaceous gulma
sebagai model spesies. Dengan menggabungkan langkah-langkah empiris dari tingkat reproduksi
seksual, kami berharap dapat mengidentifikasi kontribusi relatif seks dan mutasi dengan variasi
genotipe yang diamati dalam populasi ini.
Tempat lapangan dan menentukan potensi seks, Kami memeriksa tiga populasi dari Hieracium
pilosellain tengah Pulau Selatan, Selandia Baru (Chilton Valley, Gua Stream, Little River). Tingkat
reproduksi seksual dalam populasi ditentukan dengan penyerbukan dengan berhubungan erat, tapi
morfologis berbeda Hieracium aurantiacum L. karakteristik morfologi menengah keturunan hibrida
adalah penanda ideal untuk silang. Penggunaan teknik ini dimungkinkan karena H. pilosellais diri
kompatibel. Bunga diinduksi dalam kondisi rumah kaca bertepatan dengan berbunga H. pilosellain
lapangan. Sebelum mekar, tunas dari Hieracium pilosellain ia lokasi lahan ditutupi dengan tas nilon
jaring serangga-bukti untuk mencegah penyerbukan. Setelah capitulum yang telah sepenuhnya
dibuka, tas itu dihapus dan capitulum lembut digosok dengan aH. Semua pollinations dilakukan
hanya ketika seluruh perbungaan sepenuhnya terbuka. Satu capitulum H. pilosellawas diserbuki
dengan dua H. aurantiacumto mengurangi kemungkinan pembatasan serbuk sari. Setelah diserbuki,
H.pilosellacapitulum itu kembali ditutupi dengan tas nilon, yang tersisa di tempat sampai
menghasilkan biji dan benih yang dipanen. Benih adalah permukaan disterilkan dalam larutan 1%
sodium hipoklorit selama 50 menit dan ditaburkan pada media agar yang mengandung garam dan
vitamin MS dengan 3% sukrosa. Setelah berkecambah keturunan F1 yang disebarkan di unit
propagasi kabut untuk sekitar 8 minggu dan bibit kemudian ditransfer ke rumah kaca untuk
karakterisasi. Potensi reproduksi seksual diuji di masing-masing tiga musim. untuk Lembah Chilton
dan situs Little River dan selama dua musim untuk Gua situs Streaming karena kegagalan benih
ditetapkan selama 1999/2000 karena kondisi kekeringan. Sedangkan metode ini memberikan
perkiraan potensi seksual reproduksi, karena beberapa alasan ini mungkin kurang atau melebih-
lebihkan frekuensi sebenarnya seks.
Keterbatasan metode ini Isolasi DNA dan polymerase chain reaction (PCR)-individu mawar itu sampel
di masing-masing lokasi lahan tiga dan DNA diekstraksi mengikuti metode CTAB. Pada setiap lokasi
mawar terpilih setidaknya 500 mm terpisah dan dalam batas-batas lokasi lahan. Sampel di Little
River dan Chilton Lembah semua dikumpulkan dari daerah 535 m. Karena distribusi tambal sulam
tanaman di Gua Stream, tanaman dikumpulkan dari daerah-10310 m.
Ulangi urutan antar-sederhana (ISSR) PCR dilakukan dalam 25 mL reaksi. Primer dipilih dari
University of British Columbia Biotech-nology Laboratorium mikrosatelit primer ditetapkan 9 (Tabel
1) atas dasar suatu withh survei sebelumnya. pilosella. Reaksi diperkuat dalam PTC-200 Cycler
Thermal menggunakan protokol: 4 menit pada 938C, diikuti oleh 41 siklus 938C selama 20 s, 488C
selama 60 detik, dan 728C selama 20 s. PCR selesai menggunakan ekstensi akhir 728C selama 4
menit dan dihentikan oleh 48C konstan. Produk PCR dipisahkan pada 2% Tris asetat gel, diwarnai
dengan etidium bromida, dan difoto di bawah cahaya UV. Hanya band yang jelas dan berulang
dimasukkan dalam analisis.
Analisis data dari ISSR Band profil-Analisis dilakukan dengan menggunakan MVSP versi 3.1a. Indeks
keragaman tambahan dihitung dengan menggunakan fungsi statistik deskriptif TFPGA versi 1.3
(Miller, 1997). Jaccards kesamaan digunakan dalam semua kasus karena metode ini hanya
memperhitungkan pertandingan positif antara band, sebagai band hilang dalam profil ISSR dapat
terjadi karena beberapa alasan-alasan yang berbeda (Weising et al., 1994). Sebuah dendrogram
UPGMA dibangun menggunakan Jaccards matriks kemiripan. UPGMA ini terpilih karena memberikan
bobot yang sama untuk setiap titik di setiap cluster. Ini mengasumsikan bahwa cluster dalam data
ukuran kira-kira sama, dan tidak ada sampel hirarkis telah terjadi, dengan tidak ada satu cluster
menjadi sampel lebih atau kurang daripada yang lain. Ini memperlakukan kasus sebagai independen,
sampel acak, sebagaimana layaknya untuk metode pengambilan sampel yang digunakan (Kovach
Computing Services). Keragaman genotip diplot terhadap jumlah penanda termasuk untuk
menentukan jumlah resolusi kita harus mendeteksi klon dalam kumpulan data.
Perbandingan data-Persentase rata-rata keturunan yang dihasilkan seksual per lintas dihitung untuk
masing-masing tiga lokasi selama tiga musim lapangan direkam. Ini kemunduran terhadap
heterosigositas penanda di lokasi ditentukan dari profil ISSR, sebagai ukuran variasi populasi, untuk
menentukan apakah ada hubungan antara keduanya. Jumlah ketidakcocokan dihitung sebagai
jumlah dari semua karakter yang tidak kompatibel dalam kumpulan data, di mana ketidakcocokan
didefinisikan sebagai kehadiran semua empat kombinasi berpasangan karakter negara dalam
perbandingan biner dari dua karakter. Kemungkinan tidak saling kecocokannnya dihitung mengikuti
metode Le Quesne (1969). Penanda yang mengidentifikasi ketidakcocokan kurang dari yang
diharapkan dari frekuensi mereka secara acak juga menunjukkan jumlah rekombinasi yang terjadi,
semakin tinggi frekuensi tanda tersebut dilestarikan, kurang Kontribusinya dari rekombinasi struktur
penduduk. Selain itu, jika dapat ditunjukkan bahwa karakter konservatif dalam suatu populasi
bertanggung jawab untuk tidak kompatibel pada populasi lain, ini adalah bukti lebih lanjut untuk
rekombinan bangsa (Mes et al., 2002). Fungsi digunakan untuk menghitung ketidakcocokan hadir
dalam data set karena semua genotipe dan jumlah total untuk kumpulan data. Analisis ini kemudian
diulang dengan berikutnya genotipe yang paling bertentangan dihapus sampai semua kompatibilitas
itu kembali dipecahkan.
Frekuensi seksual reproduksi-reproduksi Frekuensi seks UAL berbeda antara tiga tempat, tapi semua
situs menghasilkan beberapa keturunan hibrida. Potensi seksual reproduksi berkisar 0,2-2,7% dari
benih yang diproduksi selama 3 thn survei ini dilakukan (Tabel 2). Data Gua Streaming diperoleh
hanya dua musim karena hilangnya semua produksi benih selama 1999/2000 musim panas sebagai
akibat dari kekeringan. Meskipun metode ini mungkin tidak memberikan ukuran kesesuaian
sepenuhnya dari frekuensi yang sebenarnya dari seks, itu sudah cukup untuk memungkinkan
perbandingan antara populasi yang akan dibuat. Karakter yang paling berguna untuk
mengidentifikasi hibrida adalah panjang, warna, dan penataan rambut bract involucral, yang
umumnya lebih besar, lebih gelap, dan lebih banyak daripada di salah satu orangtua. . Warna
Kapitulum adalah karakter berguna sebagai keturunan sering mewarisi warna oranye dari induk
paternal (Hieracium aurantiacum), tetapi tidak semua hibrida yang diidentifikasi dengan warna
bunga mereka, namun, karena mereka tidak berbeda kuat dari ibu (H. pilosella) Jenis. Warna
Kapitulum sering bervariasi pada tanaman hibrida yang sama, dengan oranye dan cerah capitula
kuning pada individu yang sama. Jumlah capitula per tangkai sangat bervariasi antara hibrida F1.
Beberapa menyerupai H. aurantiacum, sampai dengan enam capitula per pedun-cle, sedangkan yang
lain memiliki capitulum tunggal, karakteristik H. pilosella. Kemampuan jumlah penanda kita
digunakan untuk mendeteksi perbedaan genotip antara klon diuji dengan memplot keragaman
genotipe terhadap jumlah penanda yang digunakan. Kami menemukan bahwa grafik mencapai
dataran tinggi sebelum semua penanda dimasukkan, menunjukkan bahwa kita memiliki resolusi
yang cukup untuk mendeteksi clonality dalam kumpulan data. Penurunan terus matriks
ketidakcocokan sebagai genotipe berturut-turut kembali pindah menunjukkan bahwa ada kelompok
genotipe yang lebih atau kurang kompatibel satu sama lain daripada kelompok atau individu lainnya.