Spektrofotometri

Spektrofotometri merupakan salah satu jenis teknik dari spektroskopi yangmempelajari

tentang absorpsi dan emisi radiasi dari suatu senyawa. Radiasi tersebut didasarkan atas
gelombang elektromagnetik dengan kecepatan m/detik (Sudarmadji,199! "olme #
$eck, 199%&. 'elombang elektromagnetik tersebut dapat diketahui panjanggelombangnya
dari spektrum sinar yang dibiaskan. Spektrum(spektrum tersebut dibagimenjadi dua yakni
cahaya tampak dan cahaya tak tampak. )engan adanya spektrum inilah,maka dapat
digunakan untuk menganalisa suatu senyawa atau mikrobia dalam dalamsejumlah
penelitian. *lat yang betindak untuk spektrofotometri disebut spektrofotometer (
+hristian, 199,&
Spektrofotometri -ltra.iolet
Spektrofotometri sinar tampak adalah pengukuran absorbansi energi
cahaya oleh suatu sistem kimia pada suatu panjang gelombang tertentu ()ay,
/00/&. Spektrum -1(1is mempunyai bentuk yang lebar dan hanya sedikit
informasi tentang struktur yang bisa didapatkan dari spektrum ini. 2etapi
spektrum ini sangat berguna untuk pengukuran secara kuantitatif. 3onsentrasi dari
analit di dalam larutan bisa ditentukan dengan mengukur absorban pada panjang
gelombang tertentu dengan menggunakan hukum 4ambert(5eer ()archriyanus,
/00,! Rohman, /006&.
Radiasi ultra.iolet dan sinar tampak diabsorpsi oleh molekul organik
aromatik, molekul yang mengandung elektron(7 terkonjugasi dan atau atom
dengan elektron(n yang menyebabkan transisi elektron di orbital terluarnya dari
tingkat energi elektron dasar ke tingkat energi elektron tereksitasi lebih tinggi.
5esarnya serapan radiasi tersebut sebanding dengan banyaknya molekul analit
yang mengabsorpsi sehingga dapat digunakan untuk analisis kuantitatif
(Satiadarma, /00,&.
'ugus fungsi yang menyerap radiasi di daerah ultra.iolet dekat dan daerah
tampak disebut gugus kromofor dan hampir semua gugus ini mempunyai ikatan
tak jenuh. 3romofor ini merupakan tipe transisi dari sistem yang mengandung
elektron 7 pada orbital molekulnya. -ntuk senyawa yang mempunyai sistem
konyugasi, perbedaan energi antara keadaan dasar dan keadaan tereksitasi menjadi lebih
kecil sehingga penyerapan terjadi pada panjang gelombang yang
lebih besar ()achriyanus, /00,&.
Spektrofotometri 8R
)ari namanya sudah bisa dimengerti bahwa spektrofotometer ini berdasar pada
penyerapan panjang gelombang infra merah. +ahaya infra merah terbagi menjadi infra
merahdekat, pertengahan, dan jauh. 8nfra merah pada spektrofotometri adalah infra merah
jauh dan pertengahan yang mempunyai panjang gelombang /.9(
1000 :m. $ada spektro 8R meskipun
bisa digunakan untuk analisa kuantitatif, namun biasanya lebih kepada analisa
kualitatif.-mumnya spektro 8R digunakan untuk mengidentifikasi gugus fungsi pada
suatu senyawa,terutama senyawa organik. Setiap serapan pada panjang gelombang
tertentu menggambarkanadanya suatu gugus fungsi spesifik."asil analisa biasanya berupa
signal kromatogram hubungan intensitas 8R terhadap panjang gelombang. -ntuk
identifikasi, signal sample akan dibandingkan dengan signalstandard. $erlu juga diketahui
bahwa sample untuk metode ini harus dalam bentuk murni.3arena bila tidak, gangguan
dari gugus fungsi kontaminan akan mengganggu signal kur.ayang diperoleh. 2erdapat
juga satu jenis spektrofotometri 8R lainnya yang berdasar pada penyerapan sinar 8R
pendek. Spektrofotometri ini di sebut ;ear 8nfrared Spectropgotometry(;8R&. *plikasi
;8R banyak digunakan pada industri pakan dan pangan guna analisa bahan baku yang
bersifat rutin dan cepat
3R<=*2<'R*>8
3romatografi adalah teknik pemisahan campuran didasarkan atas perbedaan
distribusi dari komponen(komponen campuran tersebut diantara dua fase, yaitu fase
diam (padat atau cair& dan fase gerak (cair atau gas&.
5ila fase diam berupa ?at padat yang aktif, maka dikenal istilah kromatografi
penyerapan (adsorption chromatography&. 5ila fase diam berupa ?at cair, maka teknik ini
disebut kromatografi pembagian (partition chromatography& 5erdasarkan fase gerak yang
digunakan, kromatografi dibedakan menjadi dua
golongan besar yaitu gas chromatography dan li@uid chromatography. =asing(masing
golongan dapat dibagi lagi seperti yang telah disebutkan pada definisi di atas.