Kematian mendadak seorang dewasa muda terkait dengan Keracunan Makanan Bacillus

careus

Sebuah kasus keracunan mematikan, yang terjadi di Brussels, Belgia. Yang menjelaskan bahwa
seorang pria berusia 20 tahun tewas setelah menelan pasta terkontaminasi dengan Bacillus
careus. Strain Emetik B.careus diisolasi, dan tingkat tinggi cereulide (14,8 mg / g) yang
ditemukan dalam makanan spaghetti.

LAPORAN KASUS
Pada 1 Oktober 2008, seorang pria berusia 20 tahun menjadi sakit setelah makan
makanan sisa dari spaghetti dengan saus tomat, yang telah disiapkan 5 hari sebelumnya dan
disimpan di dapur pada suhu kamar. Setelah sekolah, ia menghangatkan spaghetti dalam oven
microwave. Segera setelah makan, ia meninggalkan rumah untuk kegiatan olahraga, tapi dia
kembali 30 menit kemudian karena sakit kepala, sakit perut, dan mual. Pada kedatangannya,
dia muntah deras selama beberapa jam dan pada tengah malam mengalami dua episode diare
berair. Dia tidak meminum obat apapun dan hanya minum air. Setelah tengah malam. Dia
tertidur. Keesokan paginya pukul 11:00, orangtuanya khawatir karena dia tidak bangun. Ketika
mereka pergi ke kamarnya, mereka menemukan dia mati.
Pemeriksaan Hukum menentukan waktu kematian, mungkin jam 4:00, sekitar 10 jam
setelah konsumsi makanan yang dicurigai. Autopsi tidak dapat dilakukan sampai 5 hari
kemudian makroskopik, kecoklatan dan agak melunak pada hati dan ascites (550ml dari citrine
cair) ditemukan. Pada jantung didapatkan makroskopis normal. Sebanyak lisis pankreas juga
ditemukan, tetapi tidak dapat dikecualikan bahwa temuan ini adalah karena keterlambatan
otopsi.
Lima usap tinja dan dua sampel tinja diambil visum, dan sampel diuji untuk kehadiran
Bacillus careus oleh pertumbuhan pada agar manitol kuning telur polimiksin (MYP). B.careus
ditemukan hanya dua dari lima usap tinja, dan strain diisolasi diberi nama ISP321 dan ISP322.
Tidak ada B.careus dikultur dari sampel tinja.

Pasta dan sampel saus tomat, sisa-sisa makan malam, juga dikirim untuk analisis ke
Laboratorium Acuan Nasional untuk Wabah yang ditularkan melalui makanan (NRLFBO).
Untuk penghitungan B.cereus dalam sampel makanan, metode ISO 7932 (16) digunakan.
Signifikan B.cereus jumlah (9.5x107 CFU / g) yang ditemukan dalam pasta, sementara B.cereus
tidak hadir dalam saus tomat. Strain yang diisolasi dari makan pasta bernama ISP303.

PCR yang mendeteksi keberadaan gen toksin yang diterapkan untuk DNA dari pasta
isolat (ISP303) dan dua isolat manusia (ISP321 dan ISP322), dan hasilnya disajikan pada Tabel 1.
Kehadiran gen penyandi enterotoksin nonhemolitik (NHE) (nheA), Phospholipase C (PLCA),
cytotoxin K (cytK), hemolisin II (hlyII), dan hemolisin BL (hblA) diselidiki (12, 13, 15). Semua tiga
strain diuji positif untuk kehadiran gen nheA dan PLCA. Strain semuanya negatif untuk gen
enterotoksin lainnya (cytK, hlyII, dan hblA).

Tes PCR cereulide terkait tertentu (7) juga digunakan untuk menargetkan penentu genetik
ces, yang diperlukan untuk sintesis cereulide. PCR tes untuk mendeteksi ces memberikan hasil
positif untuk ketiga isolat. Sebenarnya produksi cereulide juga dikonfirmasi oleh uji sperma babi
(4; data tidak ditampilkan). Hasil ini menunjukkan bahwa ketiga isolat B.cereus, ISP303,
ISP321, dan ISP322, adalah strain muntah. Konsentrasi racun cereulide di spaghetti ditentukan
dengan kromatografi cair-spektrometri massa tandem (L.CMS2) (5; L. Delbrassinne, M.
Andjelkovic, A. Rajkovic, P. Dubois, E. N'Guessan, J. Mahillon, dan J. Van Loco, hasil yang
tidak dipublikasikan) menjadi 14,8 mg / g pasta. Jumlah cereulide ditentukan dalam spaghetti
dengan penelitian ini adalah hampir 10 kali lebih tinggi dari konsentrasi cereulide dari 1,6 ug / g
yang sebelumnya ditemukan di hidangan pasta yang terkontaminasi (18) dan tampaknya
akibatnya berada dalam kisaran atas jumlah yang dilaporkan dalam cereulide makanan terlibat
dalam wabah.

Karakterisasi lebih lanjut dari tiga isolat dilakukan dengan menggunakan berulang PCR
berbasis urutan (rep-PCR) dan pulsedfield gel elektroforesis (PFGE) (10, 11, 25) DNA genom.
Semua tiga strain ditampilkan rep-PCR yang sama dan profil PFGE (data tidak ditampilkan).

B. cereus adalah organisme yang sudah terkenal dalam keracunan makanan. Organisme
itu dapat menyebabkan dua tipe gejala keracunan makanan yang digambarkan sebagai sindrom
emetik dan sindrom diare. Tipe emetik disebabkan oleh toksin tahan panas cereulide yang
mulai mengalami pembentukan dalam makanan yang mulai basi. Gejala biasanya ringan tetapi
bisa parah dalam beberapa kasus . Empat kasus yang fatal disebabkan cereulide telah
dilaporkan ( 6 , 22 ,24, 26 ) . Hasil ini memberikan bukti terhadap kasus keracunan makanan
pada pria muda dan sehat yang disebabkan B. cereus. Data klinis dan onset gejala cepat ,
bersama dengan mikrobiologi dan studi molekuler, menyatakan bahwa B. cereus sebagai
penyebab yang paling mungkin untuk hasil yang fatal.

Strain Emetik B. cereus diketahui menyebabkan kerusakan pada mitokondria. Karena
metode yang digunakan dalam otopsi macroscopical tidak bisa mengungkapkan gejala jantung
yang spesifik , kami melakukan pemeriksaan lebih lanjut, yaitu pewarnaan mikroskopis spesifik.
immunostaining untuk diaktifkan caspase 3 , penanda untuk apoptosis ( 1 , 27 ) , adalah negatif,
yang menunjukkan tidak adanya kerusakan mitokondria. Struktur miosit jantung juga utuh ,
yang menunjukkan bahwa serangan jantung mendadak disebabkan secara tidak langsung ,
misalnya, karena asidosis.

Kegagalan hati fulminan adalah salah satu komplikasi yang paling ditakuti yang
disebabkan oleh strain B. cereus emetik. Dalam hal ini, kerusakan hati masih tergolong ringan
dan bukan satu-satunya penjelasan tentang kematian mendadak pria muda dan sehat. Oleh
karena itu , dan karena kehadiran diare , bersama dengan usus nekrosis yang parah, tes PCR
yang mendeteksi keberadaan enterotoksin gen diterapkan pada sampel.

Sebagaimana ditunjukkan di atas , produk PCR telah menemukan gen nheA dan plcA
tetapi tidak untuk cytK, hlyII , dan hblA . Pengamatan ini agak sulit untuk ditafsirkan, karena
implikasi yang sebenarnya dari enterotoksin pada diare masih dalam perdebatan. Tidak adanya
enterotoksin HBL di B. cereus strain yang menghasilkan cereulide merupakan hal umum ,
sedangkan strain emetik biasanya menghasilkan NHE ( 8 ). Pola produksi toksin untuk strain
terisolasi dalam kasus ini diduga klasik untuk strain yang terlibat dalam keracunan emetik .
Namun demikian , beberapa strain emetik yang memproduksi NHE ditemukan menjadi sangat
sitotoksik untuk Caco - 2 sel , seperti dilaporkan sebelumnya ( 14 ). Selain itu, kehadiran
simultan faktor penentu genetik untuk cereulide dan gen penyandi enterotoksin potensial baru-
baru ini telah di demonstrasikan untuk B. cereus ( 19 , 20 ), yang tampaknya virulen . Bisakah
fakta ini memiliki memainkan peran dalam nekrosis usus besar meskipun cytK pada PCR
menunjukkan hasil negatif , sejak kita mengetahui bahwa racun ini adalah salah satu yang telah
terlibat dalam enteritis nekrotik ( 21 ) ? Itu adalah pertanyaan penting yang saat ini belum bisa
ditemukan jawabannya.

Meskipun kita tidak bisa memberatkan B. cereus sebagai penyebab langsung dan unik
kematian, kasus ini menggambarkan tingkat keparahan muntah dan sindrom diare dan
pentingnya pendinginan yang memadai makanan siap. Karena toksin emetik preformed dalam
makanan dan tidak aktif oleh perlakuan panas (2, 23), adalah penting untuk mencegah
pertumbuhan B. cereus dan produksi cereulide selama penyimpanan. Produksi ini racun
berhubungan erat dengan suhu (9) dan tidak ketat berkorelasi dengan jumlah bakteri baru-baru
ini ditunjukkan oleh Delbrassinne et al., (5, hasil yang tidak dipublikasikan). Cereulide jumlah
yang dihasilkan oleh B. cereus regangan muntah diinokulasi pada 106 CFU / g dalam nasi lebih
tinggi pada 23 C dibandingkan pada 30 C sedangkan situasi yang berlawanan diamati untuk
jumlah cereulide-produser. Hasil ini menunjukkan bahwa cereulide mungkin lebih aktif
diproduksi pada suhu ambien. Dalam hal ini, spaghettis telah disimpan pada suhu kamar selama
beberapa hari: ini memungkinkan B. cereus untuk tumbuh disebutkan sebelumnya konsentrasi
yang sangat tinggi dan menghasilkan konsentrasi racun tinggi (14,8 mg / g) ditemukan dalam
pasta dan kemungkinan bertanggung jawab untuk hasil fatal. Menurut laporan yang diterbitkan
sebelumnya, konsentrasi racun yang menyebabkan emesis pada manusia, sebagaimana
ditentukan dengan uji sitotoksisitas pada HEp-2 sel atas dasar beberapa makanan yang
terkontaminasi, diperpanjang 0,01-1,28 mg cereulide / g makanan (3), dan dari ,005-32 ug
cereulide / g makanan (16), ditentukan oleh LC-MS. Meskipun konsentrasi mereka tidak
melibatkan kasus mematikan, kita tidak tahu apa yang jumlah sebenarnya tertelan. Dalam
kasus fatal yang dijelaskan oleh Mahler et al., (22), strain diisolasi dari residu pan diproduksi
enterotoksin NHE (terdeteksi oleh tes SM-VIA) dan toksin emetik bila ditanam pada nasi. Ini
menyoroti virulensi strain mampu produksi ini secara simultan, seperti yang dilaporkan dalam
penelitian ini.

Kesimpulannya, meskipun hasil otopsi tidak meyakinkan, mungkin karena
keterlambatan analisis, nummer besar B. cereus sel dan konsentrasi cereulide signifikan
ditemukan di sisa makanan adalah penyebab paling mungkin dari kematian pria muda yang
sehat. Penelitian lebih lanjut dari isolat dan hal ini dapat memberikan wawasan ke dalam
mekanisme virulensi muntah isolat B. cereus.