KULTUR MURNI

Beberapa langkah utama yang diperlukan utk

fermentasi :
Seleksi mikroba/enzim sesuai tujuan
Seleksi media
Sterilisasi utk menghindari kontaminasi
Peralatan (autoclave, mikropipet, Laminarflow
dll)
Evaluasi Hasil maupun proses secara
menyeluruh
KULTUR MIKROBA
Bioteknologi Mikrobial
Bioteknologi Mikrobial :
Teknologi mikrobial tradisional = tekn.yang
menggunakan metode lama (seleksi alami &
memodifikasi proses hasil maksimal)
Teknologi mikrobial dgn rekayasa Organisme
= menggunakan gen lain yang disisipkan pada
gen mikroba _____ Rekayasa Genetik.

Karakteristik Mikroba
Mikroba dialam banyak sekali jenisnya/
tercampur sgt kompleks. OKI perlu
Diisolasi
Seleksi
Identifikasi

Isolasi Mikroba
Isolasi galur murni dpt dilakukan scr
bertingkat :
Tingkat Pertama : Manual= pengenceran
bertingkat 10
-1
-10
-7
kmd ditanam dimedia
padat
Tingkat kedua :Media selektif
Tingkat ketiga(1&2) dimurnikan lagi dgn
diisolasi lagi
Tingkat keempat:isolasi modern dgn alat
mikromanipulator
Karakteristik Mikroba
Karakteristik kultural : Nutrien bersifat spesifik (kapang kondisi asam pH
3, bakteri tdk thn asam)
Karakteristik Morfologis: ukuran sel m=0,001 mm, susunan koloni
(diplo, tetra, strepto, sarcina), bentuk (bacil,coccus), struktur yang
diamati (sitolasma, inti,glikogen,kromosom, dinding sel, mitokondria dll).
Karakteristik metabolik :cara mikroba melk prs biokimia dlm hdpnya
(E.coli & salmonella typhi bentuk& ukuran sama tapi E.coli dlm usus.
Karakteristik kimiawi : melihat unsur & susunan kimia sel
Karakteristik Antigenik : Hewan disuntik dgn mikroba tdk diketahui,
diambil serumnya utk dilakukan reaksi antigen-antibodi sgt spesifik.
Karakteristik Genetik :susunan basa DNA yang konstan pd mikroba
% (G+C) = G + C x 100% G = Guanine C = Cytosine
A + T +G + C A = Adenine T = Thymine
Species % (G + C)
Bacillus subtilis 42 43
B.cereus 32 37
B.megaterium 36 38
Lactobacillus 46,9
L.leichmanii 50,0 + 0,5
Micrococcus luteus 70,7 - 75,5
M.roseus 66 - 74
M.varians 66 - 72
Basa DNA Bakteri
Uji Gram :
Uji Katalase :
Uji Glukasa :
Uji karbohidrat :
Uji NaCl :
Uji pH :
Uji Proteolitik
Uji Amilolitik
Uji Lipolitik
Uji aerobik/anaerobik
Identifikasi dengan UJI

Satu ose mikroba


Gelas objek bebas lemak


Ditetesi gram A 2-3 tetes 5 menit

Dicuci air & dikeringkan


Ditetesi gram B 2-3 tetes 5 menit

Dicuci air & dikeringkan

Ditetesi gram C 2-3 tetes 5 menit


Dicuci air & dikeringkan


Ditetesi gram D 2-3 tetes 5 menit

PEWARNAAN GRAM

Satu ose mikroba

Uji Katalase

Gelas objek bebas lemak

Ditetesi H2O2 A 2-3 tetes 5 menit

Ada Buih (+) & Tidak Ada (-)


Satu ose mikroba

Uji Gas

Inokulasi media cair/broth dlm tabung + tabung dirham

Inkubasi suhu 30-37oC


Ada Gas (+)


Tidak ada Gas (-)


Homofermentatif


Heterofermentatif

No. Uji Biokimia
Isolat Isolat
Bacillus
megate-rium
B.pumi-
lus B.subti-lis
Nitro-
coccus
Peudo-
monas
.putida
P.stut-zeri B.mycoide
s
Micro-
coccus
Lacto-
bacillus
planta-
rum
Plano-
cocus
citreus
Staphy-lo-
coccus
Vibrio sp
1. Spora + + + _ _ _ + _ - _ - _
2. Oksidase _ _ _ _ + + - - - - - +
3. Motilitas + + + + + + + - + - + +
4. Nitrat _ _ _ + + + - + - - - +
5. Lysin - - - _ _ + _ + _ - _ +
6. Ornithin - - - _ _ _ _ + _ - _ +
7. H
2
S - - - _ _ _ _ + _ - _ -
8. Glukosa + + + _ + _ - _ + + + +
9. Manitol + + + _ _ _ _ _ Td _ Td +
10. Xylosa _ _ _ _ + _ - + - - - +
11. ONPG - - - + _ _ _ _ _ _ _ _
12. Indole _ _ _ _ _ _ _ _ _ + _ +
13. Urease - - - _ _ _ _ _ _ + _ -
14. V-P _ + _ _ _ _ _ + _ - _ -
15. Sitrat _ + _ _ + _ + _ - _ - _
16. TDA - - - _ _ _ _ _ _ _ _ _
17. Gelatin + + + _ _ _ _ _ _ _ _ _
18. Malonat _ _ _ _ + _ - _ - _ - _
19. Inositol _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
20. Rhamnosa _ _ _ _ _ _ _ _ + _ + _
21. Sukrosa + _ + _ _ _ _ _ + _ + _
22. Lactosa _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ +
23. Arabinosa _ _ _ _ _ _ _ _ Td _ Td _
24. Adonitol _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
25. Raffinosa _ _ _ _ _ _ _ _ + _ + _
26. Salicin _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
27. Arginin _ _ _ + + + - - - - - -
28. Katalase + + + _ _ _ + + + + + -
Morfologi
Koloni
29. Gram Positif Positif Positif Negatif Negatif Negatif Positif Positif Positif Positif Negatif Negatif
30 Bentuk Koloni Bulat Bulat
Oval
Bulat
Oval
Bulat
Oval
Bulat
Bulat
Bulat
Bulat
Bulat
31. Warna Krem Bulat
Krem
Kuning
Pucat
Krem
Kuning
Kuning
Putih
krem Kuning
Kuning
emas Hijau
32. Bentuk Sel Batang Batang Batang Bulat Batang Batang Batang Bulat Batang Bulat Bulat Batang
33. Diameter (mm) 3 2,2
2,5
1,2
1
1,2
3
0,2
0,5
0,6
0,6
1
34. Elevasi Cembung Datar
Datar
Datar
Cembang
Cembung
Cembang
Cembung
Cembang
Cembung
Cembang
Cembung
Tabel 1. Bakteri yang diisolasi di Peraiaran berbagai Mangrove

N0 KODE ISOLAT
KARAKTERISTIK MORFOLOGI KOLONI
Bentuk Tepi Elevasi Warna Gram Diameter (m)
1. S 1 Escherichia coli Bulat Tidak rata cembung merah BGN 0,6
2. S 2 Salmonella Arizona Bulat Tidak rata datar pucat BGN 1,2
3. S 3 Klebsiella oxitoka Bulat Rata cembung pink BGN 0,8
4. S 4
Enterobacter
gergoviae
Bulat Rata cembung pink BGN 0,9
5. S 5 Pseudomonas putida Bulat Rata cembung pucat BGN 1,0
6. S 6
Pseudomonas
pseudomallei
Oval Tidak rata datar pucat BGN 0,6
7. S 7 Bacillus cereus Bulat Tidak rata datar crem BGP-spora 1,3