Pengembangan Metode

Validasi Metode HPLC

pada Azitromisin
Kelompok 1 :
Fara Azzahra
Iwan Mahmud
Sri Iriani Batorowati
Muhammad Ansar

1407062005
1407062007
1407062016
1407062026

PENDAHULUAN

KOMPONEN

HPLC (High Pressure Liquid

(Kromatografi Cair Kinerja Tinggi) :

PENGEMBANGAN
PRODUK

Chromatography/KCKT

Metode analisis untuk identifikasi, kuantitas dan pemurnian

senyawa.
HPLC digunakan untuk memisahkan molekul berdasarkan
perbedaan afinitasnya terhadap zat padat tertentu. Cairan
yang akan dipisahkan merupakan fase cair dan zat padatnya
merupakan fase diam

PENDAHULUAN

KOMPONEN

PENGEMBANGAN
PRODUK

PENDAHULUAN

KOMPONEN

PENGEMBANGAN
PRODUK

AZITROMISIN
Adalah Antibiotik golongan makrolida kelas azalide.
Azitromisin menghambat sintesis protein bakteri
dengan mengikat subunit 50S ribosom dari bakteri 70S
ribosom.
Azitromisin menghambat aktivitas peptidyltransferase
aktivitas dan mengganggu translokasi asam amino
selama proses penerjemahan.

BAHAN DAN METODE

A. Instrumen:
Seri HPLC terdiri sistem Spectra 2004, spektrofotometri sistem P4000
pompa, Autosampler AS3000, sistem spektrofotometri UV2000 detektor,
Thermostat kolom kompartemen terhubung dengan software Win
Chrome2004.
B. Metodologi:
Metode HPLC dilakukan dengan menggunakan ketentuan sebagai
berikut :
Kondisi kromatografi:
Kolom
: C-8, 250mm X 4.6mm, 5,
kecepatan alir
: 1.2 ml / menit
Detektor
: UV pada Panjang gelombang 210 Nm
Suhu kolom
: 45 C
Volume injeksi
: 20 L
Waktu dijalankan
: 15 menit
Pencuci jarum : Air : Metanol perbandingan 90:10 (v/v)

Pembuatan fase gerak dibuat dengan disaring dan

didegassing dari campuran buffer fosfat (4.5590 gram
Potassium dihydrogen ortofosfat dalam 1,0 liter air dan
pH diatur menjadi 7,5) dan metanol dengan
perbandingan 20:80 v/v

PERSIAPAN
F.GERAK

PERS. LART STOK

AZITROMISIN

PEMBUATAN
LARUTAN SAMPEL

PROSEDUR

Timbang seksama sejumlah 50mg serbuk

Azitromisin, masukkan kedalam labu ukur 50ml.
Kemudian tambahkan pelarut sebanyak 30 mL,
lakukan sonikasi dan dilanjutkan dengan saring
larutan melalui kertas saring 0,45 dan dibuat
pengenceran

PERSIAPAN
F.GERAK

PERS. LART STOK

AZITROMISIN

PEMBUATAN
LARUTAN SAMPEL

PROSEDUR

Ambil 10 tablet azitromisin 500mg. Tablet

dihancur menjadi serbuk halus dan jumlah serbuk
setara dengan 100mg azitromisin. Timbang dan
masukkan ke labu ukur 100ml. Kemudian
tambahkan dengan 20 ml pelarut dan gojog kuat.
Setelah itu tambahkan kembali pelarut ad tanda
dan diinject-an
PERSIAPAN
F.GERAK

PERS. LART STOK

AZITROMISIN

PEMBUATAN
LARUTAN SAMPEL

PROSEDUR

Inject sebanyak 20l larutan blanko, larutan

pembanding, enam kali larutan standar (abaikan
peak karena kosong dan pembanding.
Persyaratan sistem kesesuaian dari larutan
SST:
- Faktor tailing
: NMT 2.0
- Plat teoritis
: NLT 2000
PERSIAPAN
F.GERAK

PERS. LART STOK

AZITROMISIN

PEMBUATAN
LARUTAN SAMPEL

PROSEDUR

Presisi
(Pengulangan)

Akurasi

Linearitas

Penetapan Kadar

Presisi (Pengulangan):
Persiapan larutan presisi:
Encerkan 10 ml larutan stok standar, kemudian ad kan 100 mL
pelarut. Prosedur yang sama diulang untu keenam preparasi

Akurasi:
Keakuratan metode pengujian ditunjukkan dengan menyiapkan
sampel recovery (yaitu, pengujiansampel dengan kuantitas pada level
115%, 125% dan 150% dari konsentrasi target)

Ruggedness

Robusness

LOD

LOQ

Presisi
(Pengulangan)

Akurasi

Linearitas

Penetapan Kadar

Linearitas:
Respon linearitas detektor ditunjukkan oleh pelarut yg
telah disiapkan pada rentang 100 sampai 800% dari level
target
Penetapan Kadar:
Larutan stok standar diambil 10 ml dan dilakukan
pengenceran ad 100ml dengan pelarutnya
Ruggedness

Robusness

LOD

LOQ

Presisi
(Pengulangan)

Akurasi

Linearitas

Penetapan Kadar

Ruggedness (Kekasaran):
Metode uji ini ditunjukkan dengan melakukan studi presisi dalam
enam sampel yang telah disiapkan pada batch sampel tunggal
dengan analisis yang berbeda
Robusness (Ketahanan):
Metode uji ini ditunjukkan dengan melakukan variasi fase gerak
2,0%, yaitu (22: 78-18: 82), aliran variasi 10%, yaitu (1.1ml
untuk 1.3ml / min) dan variasi suhu kolom 5.0C, yaitu 40 C
-50C)

Ruggedness

Robusness

LOD

LOQ

Presisi
(Pengulangan)

LOD
LOD
LOQ
LOQ

Ruggedness

Akurasi

Linearitas

Penetapan Kadar

= 3 x SD/Slope
= 53,246 g/ml
= 10 x SD/Slope
= 158,321 g/ml

Robusness

LOD

LOQ

SPESIFIKASI STUDI

Spesifikasi Studi:
Sampel dianalisis dalam kondisi khusus, yaitu
perbandingan
studi.
Kromatogram
dari
pembanding tidak menunjukkan gangguan pada
saat retensi Azitromisin, artinya metode ini khusus
untuk penentuan Azitromisin

HASIL

Profil Kromatogram Azitromisin

HASIL

Precision

Kriteria Penerimaan:
% RSD area dari 6
preparasi tingkat presisi
tidak boleh lebih dari
2,0 %

HASIL

Akurasi

HASIL

Kesesuaian sistem dg metode yang digunakan

HASIL

Linearitas

HASIL

Penetapan Kadar Azitromisin

HASIL
Roggudness
(Kekasaran)

Robustness (Ketahanan)

HASIL

Metode analisis:
Panjang gelombang azitromisin tetap 210nm
Spesifikasi Studi :
Kromatogram
dari
pembanding
tidak
menunjukkan interferensi pada saat retensi Azitromisin
metode ini khusus untuk penentuan Azitromisin

KESIMPULAN

Metode RP-HPLC merupakan metode yang

sederhana, akurat dan tepat untuk penentuan
Azitromisin baik secara teknis maupun formulasi dari
yang telah dikembangkan
Metode ini dapat direkomendasikan untuk analisis
rutin dan kontrol kualitas penelitian obat dalam
formulasi
Sehingga dapat disimpulkan, bahwa metode analisis
ini valid dan dapat digunakan untuk analisis rutin

TERIMA KASIH ^^