LAMPIRAN 1.

Standar zona hambat antibiotik menurut CLSI

Jenis antibiotik

Konsentrasi
cakram antibiotik

Kloramfenikol

30 g

Diameter zona hambat (mm)

Sensitif intermediate Resisten
18
13 s/d 17
12

Sumber: Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, formerly NCCLS)

Providing NCCLS standards and guidelines ISO/TC 212 standards, and
ISO/TC 76 standards.
LAMPIRAN 2. Analisis keragaman pengaruh pelarut, konsentrasi, dan isolat
terhadap zona hambat pada mikroba uji E. coli Post Hoc Test
pelarut untuk mikroba uji E. coli
Tests of Between-Subjects Effects
Dependent Variable:ZonaHambat
Source

Type III Sum

of Squares

df

Mean Square

Sig.

Corrected Model

265.154a

44

Intercept

302.791

4.650

2.325

7.764

.001

Konsentrasi

24.387

6.097

20.358

.000

Isolat

47.375

23.688

79.097

.000

3.515

.439

1.467

.180

129.423

32.356 108.042

.000

Konsentrasi * Isolat

16.318

2.040

6.811

.000

Pelarut * Konsentrasi *
Isolat

39.486

16

2.468

8.241

.000

Error

26.953

90

.299

Total

594.897

135

Corrected Total

292.106

134

Pelarut

Pelarut * Konsentrasi
Pelarut * Isolat

6.026

20.123

.000

302.791 1.011E3

.000

a. R Squared = .908 (Adjusted R Squared = .863)

Universitas Sumatera Utara

LAMPIRAN 3. Post Hoc Test pelarut untuk mikroba uji E. coli

Duncan
Pelarut

n-heksana
metanol
Etil asetat
Sig.

45
45
45

Zona Hambat
Subset
1
2
1.2358
1.6129
1.6442
1.000
.787

LAMPIRAN 4. Post Hoc Test konsentrasi untuk mikroba uji E. coli

Duncan
Konsentrasi

Zona Hambat
Subset
2

N
1

0
40
80
60
100
Sig.

27
27
27
27
27

.7100
1.4796
1.6293
1.6967
1.000

1.6967
1.9726
.067

.173

LAMPIRAN 5. Post Hoc Test isolat untuk mikroba uji E. coli

Duncan
Isolat

Zona Hambat
Subset
2

N
1

S2T16-1
S3T32-3
S3T33-3
Sig.

45
45
45

.7100
1.6442
1.000

1.000

2.1387
1.000

Universitas Sumatera Utara

LAMPIRAN 6. Analisis keragaman pengaruh pelarut, konsentrasi, dan isolat

terhadap zona hambat pada mikroba uji S. aureus
Tests of Between-Subjects Effects
Dependent Variable:ZonaHambat
Type III Sum
of Squares

Source

df

Mean Square

Sig.

Corrected Model

90.656a

44

2.060 1.740E3

.000

Intercept

125.802

125.802 1.062E5

.000

17.603

8.801 7.431E3

.000

2.249

.562 474.795

.000

17.603

8.801 7.431E3

.000

4.499

.562 474.795

.000

35.205

8.801 7.431E3

.000

Konsentrasi * Isolat

4.499

.562 474.795

.000

Pelarut * Konsentrasi *
Isolat

8.998

16

.562 474.795

.000

Error

.107

90

.001

Total

216.565

135

90.763

134

Pelarut
Konsentrasi
Isolat
Pelarut * Konsentrasi
Pelarut * Isolat

Corrected Total

a. R Squared = .999 (Adjusted R Squared = .998)

LAMPIRAN 7. Post Hoc Test Pelarut untuk mikroba uji S. aureus

Duncan
Pelarut
n-heksana
Etil asetat
Metanol
Sig.

N
45
45
45

Zona hambat
Subset
1
2
.7100
.7100
1.4760
1.000
1.000

Universitas Sumatera Utara

LAMPIRAN 8. Post Hoc Test Konsentrasi untuk mikroba uji S. aureus

Duncan
Konsentrasi

0
60
40
80
100
Sig.

27
27
27
27
27

Zona hambat
Subset
1
2
.7100
1.0148
1.0156
1.0204
1.000

.581

1.0659
1.000

LAMPIRAN 9. Post Hoc Test Isolat untuk mikroba uji S. aureus

Duncan
Isolat
S2T16-1
S3T32-3
S3T33-3

N
45
45
45

Zona Hambat
Subset
1
2
.7100
.7100
1.4760

Universitas Sumatera Utara

LAMPIRAN 10. Analisis keragaman pengaruh pelarut, konsentrasi, dan isolat

terhadap zona hambat pada mikroba uji C. albicans
Tests of Between-Subjects Effects
Dependent Variable:ZonaHambat
Source

Type III Sum

of Squares

Df

Mean Square

Corrected Model

254.597a

44

Intercept

305.733

Pelarut

Sig.

60.624

.000

305.733 3.203E3

.000

170.599

85.300 893.702

.000

21.849

5.462

57.229

.000

4.590

2.295

24.046

.000

43.698

5.462

57.229

.000

Pelarut * Isolat

9.180

2.295

24.046

.000

Konsentrasi * Isolat

1.560

.195

2.043

.050

Pelarut * Konsentrasi *
Isolat

3.120

16

.195

2.043

.018

Error

8.590

90

.095

Total

568.920

135

Corrected Total

263.187

134

Konsentrasi
Isolat
Pelarut * Konsentrasi

5.786

a. R Squared = .967 (Adjusted R Squared = .951)

LAMPIRAN 11. Post Hoc Test Pelarut untuk mikroba uji C. albicans
Duncan
Zona hambat
Pelarut
N
Subset
1
2
n-heksana
45
.7100
Etil asetat
45
.7100
Metanol
45
3.0947
Sig.
1.000
1.000

Universitas Sumatera Utara

LAMPIRAN 12. Post Hoc Test Konsentrasi untuk mikroba uji C. albicans
Duncan
Zona Hambat
Konsentrasi
N
Subset
1
2
0
27
.7100
40
27
1.6044
80
27
1.6804
1.6804
60
27
1.7370
1.7370
100
27
1.7926
Sig.
1.000
.140
.213

LAMPIRAN 13. Post Hoc Isolat untuk mikroba uji C. albicans

Duncan
Zona Hambat
Konsentrasi
N
Subset
1
2
S2T16-1
45
1.2504
S3T32-3
45
1.5827
S3T33-3
45
1.6816
Sig.
1.000
.132

Universitas Sumatera Utara

LAMPIRAN 14. Analisis keragaman pengaruh pelarut, konsentrasi, dan isolat

terhadap zona hambat pada mikroba uji F. oxysporum

Tests of Between-Subjects Effects

Dependent Variable:ZonaHambat
Source

Type III Sum

of Squares

Df

Mean Square

Sig.

Corrected Model

10.622a

44

Intercept

111.339

Pelarut

3.668

1.834

46.562

.000

Konsentrasi

2.249

.562

14.275

.000

.757

.379

9.614

.000

Pelarut * Konsentrasi

1.087

.136

3.449

.002

Pelarut * Isolat

1.063

.266

6.749

.000

.571

.071

1.812

.085

Pelarut * Konsentrasi *
Isolat

1.226

16

.077

1.945

.026

Error

3.545

90

.039

Total

125.506

135

14.167

134

Isolat

Konsentrasi * Isolat

Corrected Total

.241

6.129

.000

111.339 2.827E3

.000

a. R Squared = .750 (Adjusted R Squared = .627)

LAMPIRAN 15. Post Hoc Test Pelarut untuk mikroba uji F. oxysporum
Duncan
Konsentrasi
Etil asetat
n-heksana
Metanol
Sig.

N
45
45
45

Zona Hambat
Subset
1
2
.7596
.8269
1.1380
.111
1.000

Universitas Sumatera Utara

LAMPIRAN 16. Post Hoc Test Konsentrasi untuk mikroba uji F. oxysporum
Duncan
Konsentrasi

0
60
40
80
100
Sig.

27
27
27
27
27

Zona hambat
Subset
1
2
.7100

3
.8730
.8981
.9489

1.000

.189

1.1107
1.000

LAMPIRAN 17. Post Hoc Test isolat untuk mikroba uji F. oxysporum
Duncan
Konsentrasi
S2T16-1
S3T32-3
S3T33-3
Sig.

N
45
45
45

Zona Hambat
Subset
1
2
.8373
.8753
1.0118
.366
1.000

Universitas Sumatera Utara

LAMPIRAN 18. Analisis keragaman pengaruh pelarut, konsentrasi, dan isolat

terhadap zona hambat pada mikroba uji G. boninense
Tests of Between-Subjects Effects
Dependent Variable:ZonaHambat
Source

Type III Sum

of Squares

df

Mean Square

Sig.

Corrected Model

110.856a

44

Intercept

570.992

8.190

4.095

10.371

.000

Konsentrasi

64.555

16.139

40.875

.000

Isolat

12.064

6.032

15.277

.000

2.813

.352

.891

.528

12.265

3.066

7.766

.000

Konsentrasi * Isolat

3.603

.450

1.141

.344

Pelarut * Konsentrasi *
Isolat

7.367

16

.460

1.166

.310

Error

35.535

90

.395

Total

717.384

135

Corrected Total

146.391

134

Pelarut

Pelarut * Konsentrasi
Pelarut * Isolat

2.519

6.381

.000

570.992 1.446E3

.000

a. R Squared = .757 (Adjusted R Squared = .639)

LAMPIRAN 19. Post Hoc Test Pelarut untuk mikroba uji G. boninense
Duncan
Konsentrasi
Etil asetat
n-heksana
Metanol
Sig.

N
45
45
45

Zona Hambat
Subset
1
2
1.7733
2.0227
2.3738
.063
1.000

Universitas Sumatera Utara

LAMPIRAN 20. Post Hoc Test Konsentrasi untuk mikroba uji G. boninense
Duncan
Konsentrasi
0
60
40
80
100
Sig.

N
27
27
27
27
27

Zona hambat
Subset
1
2
.7100
2.2419
2.2433
2.4144
1.000

.347

2.4144
2.6733
.134

LAMPIRAN 21. Post Hoc Test isolat untuk mikroba uji G. boninense
Duncan
Zona Hambat
Konsentrasi
N
Subset
1
2
S2T16-1
45
1.6593
S3T32-3
45
2.1300
S3T33-3
45
2.3804
Sig.
1.000
.062

Universitas Sumatera Utara

LAMPIRAN 22. Hasil uji antagonis ekstrak isolat terhadap mikroba uji dalam
bentuk zona hambat pertumbuhan (mm)

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

100
0
40
60
80
100
0
40
60
80
100

10,00
0
0,83
0,69
0,79
1,53
0
6,90
7,73
7,90
9,40

19,20
0
1,08
1,58
1,42
2,22
0
7,23
6,47
9,40
10,97

17,13
0
1,23
0,04
0,99
1,55
0
5,18
9,05
7,68
7,18

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

S3T33-3

0
13,03
15,46
17,26
19,73
0
11,46
11,43
11,80
14,83
0
13,20
14,53
16,58

S3T32-3

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
16,63
19,20
18,90

S2T16-1

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
6,33
8,93
6,07

S3T32-3

0
40
60
80
100
0
40
60
80
100
0
40
60
80

Etil Asetat
S3T33-3

G. boninense

S2T16-1

F. oxysporum

S3T33-3

C. albicans

S3T32-3

S. aureus

S2T16-1

E. coli

Konsentrasi
ekstrak (%)

Mikroba uji

Ekstrak
n-heksana

Metanol

0
0
0 6,70
0 13,50
0 9,70
0 18,83
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
15,30
15,56
18,63
21,93
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
2,24
2,38
4,84
6,77

0
0
0,33
0,67
0,75
2,08
0
7,41
8,01
8,61
8,71

0
0
0
0
0
0
0
5,60
4,00
3,46
6,07

0
0
0
0
0
0
0
7,16
6,96
6,79
6,26

0
0
0
0
0,50
1,00
0
6,32
4,87
5,75
7,85

Universitas Sumatera Utara

LAMPIRAN 23. Alur Kerja Isolasi Bakteri Penghasil Antimikroba dari Sampel
Tanah

Sampel Tanah
-

Ditimbang sebanyak 1 g
Ditambah aquadest steril hingga 10 ml
Dihomogenkan.

Suspensi Tanah
-

Diambil sebanyak 1 ml
Disebarkan pada permukaan media NA
Diinkubasi dapa suhu 302C selama 24-48 jam

Kultur campuran
bakteri
- Diamati koloni yang menunjukkan daerah
bening di sekitarnya
- Disubkultur pada media NA

Kultur murni bakteri

potensial antimikroba

Universitas Sumatera Utara

LAMPIRAN 24. Alur Kerja Ekstraksi Isolat Bakteri Potensial Antimikroba

Menggunakan Pelarut Metanol, n-heksana dan Etil Asetat
Isolat Bakteri Potensial Antimikroba

- Dibuat suspense dengan kekeruhan sesuai

Standar McFarland (1x108 CFU/ml)
- Disebarkan dengan cotton swab pada
permukaan media NA
- Dibuat beberapa petri
- Diinkubasi selama 5-6 hari pada suhu ruang
(ditutupi dengan aluminium foil)

Kultur Bakteri
-

Dipotong kecil-kecil
Dimasukkan dalam tabung Erlenmeyer 500 ml
Ditambahkan 150 ml pelarut metanol
Dimaserasi selama 3 hari
Disaring dan disimpan dalam tabung
Erlenmeyer lain
- Dimaserasi kembali dengan volume yang
sama

Maserat
- Disentrifuse pada kecepatan 3000 rpm
selama 15 menit

Supernatan
- Dipekatkan dengan menggunakan rotary
Evaporator pada suhu tidak lebih dari 502C
- Hal yang sama dilakukan terhadap jenis pelarut
n-heksana dan etil asetat

Ekstrak Bakteri

Universitas Sumatera Utara

LAMPIRAN 23. Alur Kerja Isolasi Bakteri Penghasil Antimikroba dari Sampel
Tanah

Sampel Tanah
-

Ditimbang sebanyak 1 g
Ditambah aquadest steril hingga 10 ml
Dihomogenkan.

Suspensi Tanah
-

Diambil sebanyak 1 ml
Disebarkan pada permukaan media NA
Diinkubasi dapa suhu 302C selama 24-48 jam

Kultur campuran
bakteri
- Diamati koloni yang menunjukkan daerah
bening di sekitarnya
- Disubkultur pada media NA

Kultur murni bakteri

potensial antimikroba

Universitas Sumatera Utara

LAMPIRAN 24. Alur Kerja Ekstraksi Isolat Bakteri Potensial Antimikroba

Menggunakan Pelarut Metanol, n-heksana dan Etil Asetat
Isolat Bakteri Potensial Antimikroba

- Dibuat suspense dengan kekeruhan sesuai

Standar McFarland (1x108 CFU/ml)
- Disebarkan dengan cotton swab pada
permukaan media NA
- Dibuat beberapa petri
- Diinkubasi selama 5-6 hari pada suhu ruang
(ditutupi dengan aluminium foil)

Kultur Bakteri
-

Dipotong kecil-kecil
Dimasukkan dalam tabung Erlenmeyer 500 ml
Ditambahkan 150 ml pelarut metanol
Dimaserasi selama 3 hari
Disaring dan disimpan dalam tabung
Erlenmeyer lain
- Dimaserasi kembali dengan volume yang
sama

Maserat
- Disentrifuse pada kecepatan 3000 rpm
selama 15 menit

Supernatan
- Dipekatkan dengan menggunakan rotary
Evaporator pada suhu tidak lebih dari 502C
- Hal yang sama dilakukan terhadap jenis pelarut
n-heksana dan etil asetat

Ekstrak Bakteri

Universitas Sumatera Utara

LAMPIRAN 25 . Alur Kerja Pembuatan Larutan Standar McFarland 108 CFU/ml (http://www.quelab.com)

0,048 M
BaCl2

0,18 M
H2SO4
-

Diambil sebanyak 0,5 ml

Diambil sebanyak 99,5 ml

Dihomogenkan kedua larutan

Hasil
- Diukur densitas suspensi dengan menggunakan spektrofotometer (
nilai O.D. 625nm 0,13)

Larutan standar
0,5 McFarland 1x 108 CFU/ml

Universitas Sumatera Utara

LAMPIRAN 26. Alur Kerja Uji Daya Hambat Isolat Potensial Terhadap Mikroba Patogen
Isolat bakteri
penghasil antimikroba

Bakteri Patogen

- Masing-masing disubkultur selama 24 jam pada media NA

- Diambil dengan jarum ose
- Masing-masing dilarutkan dalam larutan fisiologis (NaCl 0,9%)
- Dihomogenkan dan disesuaikan kekeruhannya dengan standar 0.5 McFarland
(1x108 CFU/ml)

Suspensi bakteri patogen

Suspensi bakteri penghasil

antimikroba

Disebarkan dengan cotton swab pada permukaan

media MHA
Diletakkan cakram kertas yang sudah berisi
suspensi bakteri antimikroba

- Ditetesi sebanyak 10l pada cakram

kertas steril

Hasil
- Diinkubasi pada T: 302C selama 24-48 jam
- Diukur zona hambat yang terbentuk dengan jangka sorong

Diameter zona hambat

Universitas Sumatera Utara

LAMPIRAN 27. Alur Kerja Uji Daya Hambat Ekstrak Isolat Potensial Terhadap Bakteri Patogen
Ekstrak Metabolit
Sekunder

Bakteri Patogen
-

Disubkultur selama 24 jam pada media NA

Diambil dengan jarum ose
Dilarutkan dalam larutan fisiologis (NaCl 0.9%)
Dihomogenkan dan disesuaikan kekeruhannya
dengan standar 0,5 McFarland (1x108 CFU/ml)

Suspensi Bakteri Patogen

- Diencerkan dengan DMSO sesuai

konsentrasi yaitu 40,60,80, dan 100%
- Ditetesi sebanyak 10l pada cakram
kertas steril
- Kontrol (-) digunakan cakram kertas
yang berisi 10l DMSO
- Kontrol (+) digunakan cakram kertas
yang berisi kloramfenikol 30 g

- Disebarkan dengan cotton swab pada permukaan

media MHA
- Diletakkan cakram kertas yang sudah berisi
ekstrak meatbolit sekunder isolat potensial

Hasil
- Diinkubasi pada T: 302C selama 24-48 jam
- Diukur zona hambat yang terbentuk dengan jangka sorong

Diameter zona hambat

Universitas Sumatera Utara

LAMPIRAN 28. Alur Kerja Uji Daya Hambat Ekstrak Isolat Potensial Terhadap Jamur Patogen
Ekstrak Metabolit
Sekunder

Jamur Patogen
- Disubkultur selama 72-96 jam pada media PDA
khusus untuk C. albicans 24 jam

Jamur patogen usia

3-4 hari

- Diencerkan dengan DMSO sesuai

konsetrasi yaitu 40,60,80, dan 100%
- Ditetesi sebanyak 10l pada cakram
kertas kosong steril
- Kontrol (-) digunakan cakram kertas
yang berisi 10l DMSO
- Kontrol (+) digunakan cakram kertas
yang berisi ketokonazol 20g

- Diletakkan cakram kertas yang sudah berisi

ekstrakmetabolit sekunder isolat potensial di ke
empat sisinya sesuai konsentrasi

Hasil
- Diinkubasi pada T: 27-29 C selama 24-48 jam
- Diukur zona hambat yang terbentuk dengan jangka sorong

Diameter zona hambat

Universitas Sumatera Utara