Kelompok 2:

Maharani Sutejo (M0412049)

Y. Rendy Cahyono (M0412081)
SENTRIFUGASI ANALISIS
Prinsip sentrifugasi didasarkan pada pemisahan molekular dari sel atau
organel subselular. Pemisahan tersebut berdasarkan konsep bahwa partikel yang
tersuspensi di sebuah wadah akan mengendap (bersedimentasi) ke dasar wadah
karena adanya gaya gravitasi. Sehingga laju pengendapan suatu partikel yang
tersuspensi

tersebut

dapat

diatur

dengan

meningkatkan

atau

menurunkan

pengaruh gravitasional terhadap partikel. Pengaturan laju pengendapan tersebut

dapat dilakukan dengan cara menempatkan wadah yang berisi suspensi partikel
kemesin sentrifugasi tepatnya pada bagian rotor yang kemudian akan berputar
dengan kecepatan tertentu. Hal tersebut tergantung pada ukuran dan bobot jenis
dari suspensi. Teknik ini dapat digunakan untuk mengisolasi dan mengkarakterisasi
molekul biologi dan komponen selular. Hasil sentrifugasi terbagi menjadi dua, yaitu
supernatan dan pelet. Supernatan adalah substansi hasil sentrifugasi yang memiliki
bobot jenis yang lebih rendah. Posisi dari substansi ini berada pada lapisan atas dan
warnanya lebih jernih. Sementara pelet adalah substansi hasil sentrifugasi yang
memiliki bobot jenis yang lebih tinggi.

Analytical Centrifuge
- Menggunakan ukuran sampel kecil (kurang dari 1 ml)
Dibangun pada sistem optik untuk menganalisis kemajuan dari molekul selama
sentrifugasi
Menggunakan sampel yang relatif murni
Digunakan untuk tepat menentukan koefisien sedimentasi dan molekul MW
Beckman Model E adalah contoh sentrifugal yang digunakan untuk tujuan ini

Dalam ultrasentrifus analitis, sampel yang berputar dapat dimonitor secara real
time melalui sistem deteksi optik, menggunakan penyerapan sinar ultraviolet dan /
atau sistem sensitif gangguan indeks bias optik. Hal ini memungkinkan operator
untuk mengamati evolusi konsentrasi sampel terhadap sumbu rotasi profil sebagai
akibat dari lapangan sentrifugal yang diterapkan. Dengan instrumentasi modern,
pengamatan ini secara elektronik digital dan disimpan untuk analisis matematis

lebih lanjut. Dua jenis percobaan

biasanya dilakukan pada instrumen ini:

sedimentasi eksperimen kecepatan dan percobaan sedimentasi keseimbangan.

Percobaan kecepatan sedimentasi bertujuan untuk menafsirkan seluruh waktukursus sedimentasi, dan melaporkan pada bentuk dan massa molar makromolekul
terlarut, serta ukuran-distribusi mereka. Resolusi Ukuran metode ini skala kira-kira
dengan kuadrat jari-jari partikel, dan dengan menyesuaikan kecepatan rotor dari
percobaan ukuran-berkisar dari 100 Da sampai 10 GDA dapat ditutup. Percobaan
kecepatan sedimentasi juga dapat digunakan untuk mempelajari kesetimbangan
kimia reversibel antara spesies makromolekul, baik oleh memantau jumlah dan
massa molar kompleks makromolekul, dengan memperoleh informasi tentang
komposisi yang kompleks dari analisis multi-sinyal mengeksploitasi perbedaan di
setiap

sinyal

komponen

spektroskopi,

atau

dengan

berikut

ketergantungan

komposisi tingkat sedimentasi dari sistem makromolekul, seperti yang dijelaskan

dalam

teori

Gilbert-Jenkins.

Jenis-jenis informasi yang dapat diperoleh dari ultrasentrifus analitis meliputi bentuk
gross makromolekul, perubahan konformasi dalam makromolekul, dan distribusi
ukuran sampel makromolekul. Untuk makromolekul, seperti protein, yang ada
dalam kesetimbangan kimia dengan kompleks non-kovalen yang berbeda, jumlah
dan subunit stoikiometri kompleks dan konstanta konstanta kesetimbangan dapat
dipelajari.
Ultrasentrifugasi analitis baru-baru ini melihat peningkatan penggunaan karena
peningkatan kemudahan analisis dengan komputer modern dan pengembangan
perangkat lunak, termasuk mendukung paket perangkat lunak NIH, SedFit.
Cara kerja :
1. Tempatkan tabung reaksi di dudukan centrifuge / rotor.
2. Seimbangkan dengan tabung reaksi lain dengan larutan yang berbeda yang
sudah di taruh pada ruang test tube yang berlawanan.
3. Tutup kaca centrifuge dan putar tombol serta atur waktu serta kecepatan
centrifuge . Sentrifugasi membutuhkan waktu satu menit atau lebih. Perhatikan

bahwa Anda harus mematikan centrifuge dengan saklar dan menunggu untuk itu
untuk berhenti berputar, untuk secara efektif memisahkan endapan dan solusi.