Isolasi dan Karakterisasi parsial bioaktif

Fucoxanthin dari Himanthalia elongata Brown Seaweed:

Pendekatan TLC Berbasis
Gaurav Rajauria dan Nissreen Abu-Ghannam
Sekolah Ilmu Pangan dan Kesehatan Lingkungan, Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan dan, Dublin
Institute of Technology,
Cathal Brugha Street, Dublin 1, Irlandia
Rumput laut merupakan sumber penting dari karotenoid, dan banyak penelitian telah efek
menguntungkan dari pigmen ini pada kesehatan manusia. Dalam penelitian ini, Himanthalia
elongata rumput laut coklat diekstraksi dengan campuran pelarut polaritas rendah, dan ekstrak
kasar dipisahkan dengan kromatografi lapis tipis analitis (TLC). Senyawa yang dipisahkan diuji
kapasitas mereka potensi antioksidan dan aktivitas antimikroba terhadap Listeria monocytogenes
bakteri menggunakan TLC bioautografi Pendekatan. Untuk bio-autography, band berwarna pada
TLC kromatogram divisualisasikan setelah penyemprotan dengan DPPH dan triphenyl- reagen
tetrazolium klorida yang layar antioksidan dan antimikroba senyawa, masing-masing, dan hanya
satu senyawa aktif ditayangkan di piring TLC. Identifikasi awal senyawa aktif ini dilakukan
dengan membandingkan warna dan (Retensi factor) nilai dengan standar fucoxanthin otentik.
Selanjutnya, senyawa aktif dimurnikan menggunakan TLC preparatif. Senyawa murni ini
menunjukkan antioksidan kuat (EC 50 : 14,8 1,27 g / mL) dan antimikroba (penghambatan
zona: 10.27 mm, 25 g senyawa / disc) kegiatan yang diperiksa oleh DPPH scavenging dan agar
cakram difusi bioassay, masing-masing. Itu bioaktivitas yang ditunjukkan oleh senyawa
dimurnikan hampir mirip dengan standar fucoxanthin. Karakteristik UV-terlihat dan
-IR spektrum senyawa aktif dimurnikan sepenuhnya cocok dengan standar. Oleh karena itu,
senyawa aktif utama dalam H. elongata diidentifikasi sebagai fucoxanthin.
1. Pendahuluan
Dibandingkan dengan tanaman terestrial, rumput laut merupakan belum dimanfaatkan sumber
daya yang menawarkan potensi besar untuk isolasi bahan-bahan alami asli bunga untuk
makanan dan kesehatan tujuan. Kelas beragam rumput laut, coklat dimakan rumput laut
dianggap yang paling bergizi dan memiliki berbagai senyawa dengan sifat biologis [1]. Itu
fraksi lipofilik rumput laut ini adalah campuran com- ponents termasuk pigmen karotenoid
terutama fucoxan- tipis, zeaxanthin, violaxanthin, dan senyawa kecil lainnya seperti -carotene
dan anthocyanin derivatif [1]. Beberapa laporan telah menunjukkan peran karotenoid yang
berbeda dalam pencegahan penyakit degeneratif, dan ini telah dikaitkan dengan sifat
antioksidan mereka [2, 3]. Namun, beberapa pigmen tersebut terlibat dalam komunikasi sel
dan telah dieksplorasi untuk antimikroba potensi mereka Perilaku juga [1, 4]. Oleh karena itu,
pigmen ini memainkan peran penting dalam pemeliharaan kesehatan dan secara tradisional
menarik perhatian farmasi dan makanan indus- mencoba [5].
Di antara pigmen dilaporkan, fucoxanthin adalah salah satu kebanyakan karotenoid berlimpah,
terutama di rumput laut coklat, dan memberikan kontribusi> 10% dari total perkiraan produksi
karotenoid di alam [6]. Pigmen ini milik kelompok dari xantofil, dan laporan terakhir
menunjukkan bahwa fucoxanthin memiliki beberapa sifat biologis seperti antioksidan,

antimicrobial, kegiatan antiobesity, dan antikanker [7]. Sebelumnya, pigmen ini telah diisolasi
dan diidentifikasi dari dimakan rumput laut coklat seperti Sargassum siliquastrum, Hizikia
fusiformis, dan Undariapinnatifida [8-10] . Padahal, pigmen ini
dapat dengan mudah berasimilasi, mereka tidak dapat disintesis oleh jaringan hewan; Oleh karena itu,
ini compoundsmust diperoleh
dari makanan [5]. Dengan demikian, ada kebutuhan yang meningkat untuk mencari yang baru
sumber dan prosedur analitis untuk menyaring dan mengidentifikasi ini
molekul dengan cepat dan tepat.Dalam karya ini, oleh karena itu, cepat dan dapat diandalkan TLC

berbasis
Pendekatan ini diterapkan untuk mengisolasi dan memurnikan fucoxan- yang
pigmen tipis untuk pertama kalinya dari Himanthalia elongata
coklat rumput laut Irlandia. Pendekatan ini meliputi ekstraksi
rumput laut dengan pelarut polaritas rendah dioptimalkan sebelumnya
campuran, isolasi ekstrak kasar dengan menggunakan analisis tipis
kromatografi lapis (TLC), skrining biologis
ekstrak untuk antioksidan dan antimikroba kegiatan dengan menggunakan
TLC bioautografi, dan pemurnian senyawa aktif
preparatif TLC. Selain itu, senyawa dimurnikan adalah
diuji untuk kegiatan biologis (uji in vitro) dan chemturun tajam ditandai dengan UV-terlihat dan FT-IR spektroskopi
teknik dan dibandingkan dengan standar otentik. Untuk
terbaik dari pengetahuan kita, ini adalah pertama kalinya senyawa ini
telah biologis disaring, terisolasi, dan dimurnikan dari H.
elongata rumput laut.
2. Bahan dan Metode
2.1. Bahan kimia. Untuk analisis kromatografi lapis tipis,
HPLC Jauh UV gradien kelas n-heksana, kloroform, dietil
eter, asetonitril, asam asetat, dan metanol yang digunakan
(Merck Chemicals, Darmstadt, Jerman). Triphenylklorida tetrazolium (TTC), 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil
(DPPH), kalium bromida (KBr), dan fucoxanthin yang
dibeli dari Sigma-Aldrich Chemical Co (Steinheim,
Jerman).
2.2. Contoh rumput laut dan Prosedur Ekstraksi. Brown lautgulma yang digunakan dalam penelitian ini adalah Himanthalia elongata
yang dibeli dari Quality Sea sayuran., Co Donegal,
Irlandia. Sampel rumput laut yang dicuci untuk menghilangkan
epifit, pasir, dan puing-puing dan disimpan pada -18

Analisis Cuntil.
Mereka kemudian dihancurkan dengan nitrogen cair dan diekstraksi
menurut metode yang ada di laboratorium kami [11] dengan
Campuran sama-volume pelarut polaritas (n-heksana rendah,
dietil eter, dan kloroform). Semua ekstrak kering yang
dilarutkan dalam metanol dan disentrifugasi pada 9168 g (Sigma 216PK, SartoriusAG, Gttingen, Jerman) for10 min, andthe

supernatan dikumpulkan dan digunakan untuk analisis lebih lanjut.

2.3. Isolasi dan Pemurnian Senyawa Aktif
2.3.1.AnalyticalTLC. AnalyticalTLCwascarriedoutonTLC
piring (20 20 cm dengan ketebalan 0,2 mm, gel silika GF
254
.
Merck, Darmstadt, Jerman) dipotong dari komersial
tersedia lembar. Sebuah alikuot ekstrak kasar terlihat ke
piring silika gel dan dibiarkan kering selama beberapa menit.
Setelah itu, piring dikembangkan dengan kloroform / dietil
eter / n-heksana / asam asetat (10: 3: 1: 1, v / v / v / v) sebagai ponsel
fase dalam ruang kaca yang sebelumnya jenuh dengan eluting
pelarut selama 30 menit pada suhu kamar. Piring dikembangkan
dikeringkan di bawah udara normal dan tempat divisualisasikan
di bawah cahaya tampak. Itu
(Faktor retensi) nilai terisolasi
senyawa dan standar dihitung dan dibandingkan.
2.3.2. TLC bioautografi untuk bioaktivitas Screening. BioauEvaluasi tographic dilakukan untuk memeriksa
aktivitas antioksidan dan antimikroba com- terpisah
pound di piring TLC. Sebuah jumlah yang tetap dan konsentrasi
ekstrak (10 Lof10 mg / mL) wasappliedeachtimeontheplate
untuk studi bioautografi TLC. Untuk pemutaran antioksidan
Kapasitas dant, udara kering piring dikembangkan disemprot dengan
solusi metanol 2,54 mM DPPH reagen antioksidan
dan plat-dikeringkan setelah penyemprotan. Band dengan
kapasitas antioksidan yang diamati sebagai band kuning ungu
background [2, 12].
Untuk pemutaran aktivitas antimikroba, bio-otomatis
Evaluasi grafis senyawa dipisahkan dilakukan
menggunakan makanan patogen Listeria monocytogenes (ATCC 19115)
Bakteri sebagai organisme uji. Inokulum penuh tumbuh dengan
hitungan bakteri dari 1 10
6
CFU / mL disiapkan dan
disentrifugasi pada 3000 g selama 10 menit. Media supernatan
dibuang dan pelet itu dilarutkan kembali dalam 10 mL segar
Mueller-Hinton broth (Scharlau Chemie, Barcelona, Spanyol).
Budaya ini disemprotkan ke piring TLC dikembangkan dan
diinkubasi semalam pada 37

C dalam 100% kelembaban relatif. Setelah

inkubasi, piring disemprot dengan 2% (b / v) larutan
dari trifenil-tetrazolium klorida (TTC) dan diinkubasi selama
lanjut 6 jam. Zona hambatan diamati sebagai daerah yang jelas terhadap
latar belakang berwarna merah di piring TLC [13, 14].

2.3.3. KLT preparatif untuk Pemurnian. Sebuah beruntun minyak mentah

Ekstrak diterapkan secara manual pada TLC piring kaca preparatif
(20 cm x 20 cm, ketebalan 1.500 m) dengan fluores- anorganik
sen pengikat indikator (Analtech, Sigma-Aldrich, Steinheim,
Jerman). Setelah pengeringan udara, piring dikembangkan, menggunakan
fase gerak yang sama seperti yang digunakan di TLC analitis, dalam
presaturated ruang kaca. Dalam setiap percobaan, dua piring
digunakan secara paralel. Salah satu piring dari setiap set
experimentwassprayedwithDPPHradical (forantioxidants)
dan solusi TTC (untuk antimikroba), seperti dijelaskan di atas,
dan band yang menunjukkan antioksidan dan antimikroba
Kegiatan yang dikerok dengan hati-hati dari piring kedua
setiap rangkaian percobaan. Sampel tergores dibubarkan
dalam HPLC kelas metanol dan disentrifugasi pada 12000 rpm selama
15 menit untuk menghapus silika. Supernatan adalah col
lected, disaring dari 0,22 m filter, dan dikeringkan di bawah dikurangi
tekanan. Selanjutnya, semua sampel kering yang lewat di bawah
gas nitrogen selama 5 menit dan kemudian dilarutkan dalam metanol untuk
karakterisasi lebih lanjut dan analisis bioaktivitas. Seluruh The
Proses pemurnian dilakukan di bawah sinar gelap atau redup
kondisi.
2.4. Antioksidan dan antimikroba Kegiatan Penentuan
(In Vitro Assay). Antioksidan dan kegiatan antimikroba
ekstrak kasar, senyawa dimurnikan, dan standar yang
ditentukan oleh DPPH kapasitas radikal uji dan
discdiffusionbioassay, masing-masing, accordingtothemethods
dilaporkan sebelumnya [11].
Halaman 3
International Journal of Kimia Analitik
3
2.5. Karakterisasi Senyawa dimurnikan
2.5.1. UV-Visible Spektroskopi. Spektrum yang dimurnikan
Senyawa tercatat 190-600 nm pada UV-terlihat
spektrofotometer ditambah dengan detektor DAD (Agilent
Teknologi, Cork, Irlandia). Peaks tugas dibuat
dengan membandingkan spektrum analit dengan fucoxanthin
standar.
2.5.2. FT-IR Spektroskopi. Fourier transform infrared (FTIR) spektrum senyawa yang dimurnikan dan standar fucoxanthin
dicatat dalam KBr pelet menggunakan Nicolet FT-IR alamiah lainnya
trophotometer (AVATAR 360, Nicolet, Madison, WI, USA).
Biasanya, 32 scan adalah sinyal-rata untuk spektrum tunggal
diperoleh di kawasan ini 4000-500 cm
-1
. Kering

sampel atau standar dicampur dengan KBr kering, dan campuran

ditekan menjadi disc tembus baik. Sampel adalah
dianalisis sebagai KBr pelet dan dibandingkan dengan fucoxanthin yang
standar.
3. Hasil dan Pembahasan
3.1. Skrining dan Pemurnian Ekstrak Kasar. Masa kini
pekerjaan menggambarkan metodologi yang komprehensif untuk skrining tersebut
ing, pemurnian, dan karakterisasi karotenoid bioaktif
pigmen dari H. elongata rumput laut. Ekstraksi lautgulma dilakukan oleh dioptimalkan sebelumnya, sama volume
campuran n-heksana, dietil eter, dan pelarut kloroform.
Pelarut ekstraksi diuji dan campurannya yang terkandung
berbagai polaritas dan ekstrak kasar yang terbaik adalah
dipilih berdasarkan aktivitas dan jumlah fungsional
konten fenolik (data tidak dipublikasikan). Dalam studi ini, pertama,
senyawa hadir dalam ekstrak kasar yang dipilih adalah
dipisahkan menggunakan TLC analitis. Profil kromatografi
dari ekstrak kasar, divisualisasikan di bawah cahaya tampak, ditunjukkan
kehadiran 6 band warna-warni di piring TLC. Itu
pigmen berwarna-warni utama H. elongata telah dijelaskan
sebagai fucoxanthin, zeaxanthin, -carotene, violaxanthin, echinenone, karotenoid, dan klorofil [1, 4]. Dengan demikian, jeruk,
band kuning, dan hijau di TLC mungkin akan sesuai
beberapa pigmen ini (Gambar 1 (a)). Analitis-TLC
menunjukkan sebuah band kuning yang kuat di
= 0,97 (pita 1) dan
band cahaya kuning (4 dan 5) di
= 0,60 dan 0,43,
masing-masing. Selain itu, TLC juga dipamerkan kehijauan-hitam
(Band 2,
= 0.93), kehijauan-abu-abu (band 3,
= 0.87), dan
band warna oranye intens (6) di
= 0,36 (Gambar 1 (a)).
Selain itu, senyawa dipisahkan diuji untuk mereka
sifat biologis potensial dengan menggunakan TLC bioautografi. Untuk
kapasitas antioksidan, piring dikembangkan disemprotkan
dengan DPPH

reagen, dan karena dapat dilihat dari hasil

(Gambar 1 (b)) itu, senyawa terpisah, satunya band 1
dan 6 dipamerkan kapasitas antioksidan karena mereka berubah kuning
pada latar belakang ungu. Intensitas warna kuning
tergantung pada jumlah dan sifat pemulung radikal dalam
sampel. Kekuatan warna band 6 lebih
intens dibandingkan dengan band 1 menunjukkan bahwa mantan

Band memiliki potensi yang lebih antioksidan. Hal ini melaporkan bahwa dengan
pengecualian fucoxanthin, karotenoid lain seperti karoten, -cryptoxanthin, zeaxanthin, dan lutein tidak
menunjukkan efek pemulungan terhadap DPPH radikal [15], yang dalam
perjanjian dengan temuan ini pigmen dimana lainnya
tidak menunjukkan pemulungan terhadap DPPH radikal kecuali
dua senyawa. DPPH

adalah substrat yang umum digunakan dan

telah banyak digunakan untuk menyaring senyawa antioksidan dari
rumput laut dan tanaman lainnya menggunakan TLC bioautografi [2, 12, 16].
Mengenai aktivitas antimikroba, yang dikembangkan TLC
piring, preinoculated dengan L. monocytogenes budaya, adalah
disemprot dengan agen TTC, dan zona bening diamati (hanya
di sekitar pita 6) pada pelat TLC terhadap latar belakang merah
(Gambar 1 (c)). Selain dari band 6, tidak ada com- terisolasi
pound di piring TLC menunjukkan aktivitas antimikroba terhadap
L. monocytogenes. Skrining TLC bioautografi-dipandu
Kegiatan antioksidan dan antimikroba senyawa dalam
ekstrak kasar adalah pendekatan cepat dan telah digunakan
oleh banyak peneliti. Misalnya, senyawa antioksidan
dalam ekstrak kasar Spirulina platensis alga dan Perilla
Buah frutescens yang ditandai dengan TLC bio-autography
[2, 12]. Demikian pula, antioksidan dan antimikroba kegiatan
ekstrak kasar Chlorococcum humicola alga yang menghalangiminedusing thesameapproach [16]. Dalam karya ini, antara
senyawa terisolasi di piring TLC, satunya band 6 menunjukkan
antioksidan dan sifat antimikroba dan dianggap
senyawa yang paling aktif di H. ekstrak kasar elongata dan,
Oleh karena itu, dianalisis lebih lanjut.
Karena fucoxanthin adalah karotenoid hadir utama dalam
rumput laut coklat, itu digunakan sebagai standar. Dalam hal ini, murni
fucoxanthin bersama dengan ekstrak kasar itu secara bersamaan
dimuat pada analisis pelat TLC tunggal dan karakteristiknya yang
profil kromatografi berdistribusi dipelajari. Hasil dari
Gambar 1 (d) menunjukkan bahwa warna oranye intens dan R
nilai standar fucoxanthin mirip dengan salah satu senyawa
(Band 6,
Nilai: 0,36) diisolasi dari ekstrak kasar.
Dengan demikian, identifikasi kromatografi menduga bahwa
senyawa aktif terisolasi bisa fucoxanthin. Oleh karena itu, dalam
memesan untuk memeriksa keaslian, senyawa aktif adalah
dimurnikan menggunakan KLT preparatif dan beruntun gelap yang jelas
senyawa warna oranye dipisahkan dari minyak mentah
ekstrak dan menggaruk dari piring (Gambar 1 (e)). Lebih jauh
lebih, senyawa murni ini diuji untuk potensi

Kegiatan antioksidan dan antimikroba menggunakan uji in vitro.

The spektrofotometri DPPH konvensional radikal
assay pemulungan digunakan untuk menyaring kapasitas antioksidan
dari ekstrak kasar dan preparatif TLC dimurnikan compon H. elongata rumput laut. Ekstrak kasar dipamerkan
Kapasitas pemulungan lebih rendah dari senyawa yang dimurnikan dan
standar. The DPPH radikal secara signifikan memulung oleh
standar fucoxanthin dan senyawa dimurnikan dalam dosis-a
cara yang tergantung, dengan EC
50
nilai 12,5 0,98 g / mL
dan 14,8 1,27 g / mL, masing-masing (Tabel 1). Oleh karena itu,
menunjukkan bahwa senyawa diisolasi dan dimurnikan dari H.
elongata rumput laut menunjukkan kapasitas antioksidan hampir sama
untuk thestandardof fucoxanthin.Despitethestrong antioksidan
sifat fucoxanthin, kimia balik reaksi
antara fucoxanthin dan DPPH radikal tidak jelas. Namun,
beberapa peneliti mengantisipasi bahwa fucoxanthin bereaksi dengan
mol setara DPPH dan menyumbangkan elektron atau
Page 4
4
International Journal of Kimia Analitik
1
2
3
4
5
6
1
0,5
0
Fucoxanthin
standar
KLT preparatif
beruntun dimurnikan
(E)
(A)
(B)
(C)
(D)
= 0.36
= 0,97
Gambar 1: deteksi berbasis TLC senyawa H. elongata rumput laut, divisualisasikan di bawah
cahaya tampak (a), bio-autographic pemutaran aktif
Senyawa antioksidan diwarnai dengan 2.54 mM DPPH


solusi dalam metanol (b), bio-autographic skrining senyawa antimikroba aktif
diwarnai dengan 2% larutan TTC (c), identifikasi senyawa aktif terhadap fucoxanthin standar
(d), dan pemurnian
senyawa aktif menggunakan preparatif-KLT (e).
Tabel 1: Aktivitas antioksidan dan antimikroba standar
*
, Ekstrak kasar, dan senyawa dimurnikan dari H. elongata rumput laut.
Kapasitas antioksidan
Aktivitas antimikroba
EC
50
(G / mL)
Zona hambat (mm)
Ekstrak kasar
91,3 1,98
sebuah
9.95
sebuah
Senyawa dimurnikan
14,8 1,27
b
10.72
b
Fucoxanthin
*
12,5 0,98
c
10,89
b
Nilai dinyatakan sebagai rata-rata tiga ulangan.
Nilai dengan huruf yang berbeda (a-c) di masing-masing kolom yang berbeda nyata (<0,05).
Kapasitas antioksidan ditentukan dengan menggunakan DPPH

pemulungan uji.
Aktivitas antimikroba ditentukan terhadap L. monocytogenes menggunakan disc difusi bioassay.
Diameter lingkaran cahaya hambatan pertumbuhan yang disebabkan oleh minyak mentah
dan sampel dimurnikan dan standar
*
diukur dengan jangka sorong digital dan dinyatakan dalam milimeter.
O
O
O
O
CH
3

H
3
C CH
3
CH
3
CH
3
CH
3
CH
3
CH
3
CH
3
CH
3
H
3
C
HO
HO
Gambar 2: Struktur kimia fucoxanthin (rumus molekul:
C
42
H
58
O
6
).
hidrogen radikal dalam kondisi anoxic untuk bertindak sebagai radikal
pemadam. Di sisi lain, dalam kondisi aerobik,
fucoxanthin sebagian teroksidasi oleh molekul oksigen dan
hanya bagian dari itu bereaksi dengan DPPH rendering itu relatif
kurang aktif terhadap radikal DPPH [15]. Antioksidan
Kapasitas karotenoid berkaitan erat dengan kehadiran
atom oksigen intramolekul dan tampaknya menjadi lebih
kompleks dalam kasus fucoxanthin, memiliki enam atom oksigen dalam
molekul (Gambar 2), karena antioksidan tidak hanya bereaksi
dengan DPPH tetapi juga dengan oksigen [17].
2
3
4
5
6

1
L. monocytogenes
Gambar 3: Aktivitas antimikroba standar (fucoxanthin), minyak mentah
ekstrak, dan senyawa dimurnikan terhadap L. Bakteri monocytogenes
(Control (1, 2, dan 3); standar (4); senyawa dimurnikan (5); mentah
ekstrak (6)).
Halaman 5
International Journal of Kimia Analitik
5
A
b
s
o
RBA
n
ce (A
U)
Panjang gelombang (nm)
Senyawa dimurnikan
Standar fucoxanthin
1.2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
300
350
400
450
500
550
468 nm
446 nm
331 nm
(A)
1000
3000
3441
(OH)
(CH)
2849
2918
2961

3031
Senyawa dimurnikan
Standar fucoxanthin
T
r
sebuah
n
smi
t
t
sebuah
nce (%)
2000
1929
1603
1576
1529
1471
1454
1381
1362
1031
1048
1071
1197
1259
1246
1335
1732
(Conjugate CO)
1649
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80

81
82
83
(Allene)
1172-1154
918
(CH
2
)
(C-O asetat)
(C = O asetat)
(Geminal CH
3
)
958
(Trans -distributed
C = C)
Bilangan gelombang (cm
-1
)
(B)
Gambar 4: Karakteristik UV-tampak (a) dan FT-IR (b) spektrum standar (fucoxanthin) dan
preparatif TLC dimurnikan senyawa dari H.
elongata rumput laut.
Selain itu, senyawa murni yang sama diuji
sebagai antimikroba terhadap L. Bakteri monocytogenes menggunakan
konvensional bioassay disc difusi. Dua puluh lima microlitres
ekstrak kasar, senyawa dimurnikan, dan standar (fucoxanthin) yang diresapi pada kertas cakram (Gambar 3). Itu
pengukuran aktivitas antimikroba didasarkan pada
ada atau tidak adanya pertumbuhan bakteri di kontak
zona antara media kultur dan sampel dan
penampilan akhirnya zona penghambatan yang
dihitung seperti yang dijelaskan dalam publikasi sebelumnya kami [11].
Nilai-nilai zona hambatan dicatat menggunakan digital
jangka sorong (Draper Toolbox, Worcestershire, Inggris) dengan
rata-rata (mm) dari dua pengukuran diameter per disc
diambil dalam arah tegak lurus. Zona inhibisi
seaweedextractandpurifiedcompoundwasmeasuredtaking
referensi inhibisi yang dipamerkan oleh standar dan
hasilnya disajikan pada Tabel 1. Ekstrak kasar menunjukkan
aktivitas antimikroba ampuh pada konsentrasi 10 mg / mL
(250 g ekstrak per disc) untuk L. monocytogenes. Namun,
aktivitas ditunjukkan oleh ekstrak kasar jauh lebih rendah daripada
senyawa yang dimurnikan dan standar. Antimikroba yang
Kegiatan yang ditunjukkan oleh kedua senyawa dimurnikan dan standar,

pada konsentrasi 1 mg / mL (25 g / disc), sangat baik

dan statistik serupa (<0,05) terhadap bakteri yang diuji
(Tabel 1). Oleh karena itu, terbukti dari hasil sebelumnya
bahwa senyawa dimurnikan menunjukkan antioksidan kuat dan
sifat antimikroba yang hampir mirip dengan
senyawa standar.
3.2. Karakterisasi Senyawa dimurnikan. Awal
Identifikasi dilakukan dengan KLT diantisipasi bahwa com- dimurnikan
pon bisa fucoxanthin. Selain itu, spektroskopi
Identifikasi dilakukan dan dibandingkan dengan melakukan otentikasi yang
standar fucoxanthin tic untuk mengkonfirmasi identitas puri- yang
Senyawa fied. Dalam hal ini, spektrum UV-dari
Senyawa murni direkam dan maxi penyerapan
mum (
max
) Adalah dibandingkan dengan standar fucoxanthin.
Hasil dapat dilihat dari Gambar 4 (a) bahwa kedua standar
dan senyawa dimurnikan dipamerkan spektroskopi yang sama
profil dengan serupa
max
(331, 446, dan 468 nm). Fucoxanthin
showsacharacteristicabsorptionpattern (
max
) Inthisregion
seperti yang dilaporkan oleh peneliti lain [1, 18]. Sebelumnya, hal yang sama
Senyawa telah diidentifikasi dalam ekstrak kasar H.
elongata dan Hizikia Fusiformis rumput laut dengan menggunakan UVspektroskopi [4, 10].
Dalam percobaan berikutnya, spektrum karakteristik
senyawa dimurnikan direkam oleh FT-IR alamiah lainnya
troscopy dengan tujuan atribusi band penyerapan
yang merupakan ciri khas dari kelompok-kelompok fungsional hadir di
Halaman 6
6
International Journal of Kimia Analitik
senyawa. Hal ini dapat dilihat dari Gambar 4 (b) bahwa kedua
senyawa dan fucoxanthin standar dimurnikan menunjukkan
identik sidik jari spektral di wilayah yang sama. Itu
bilangan gelombang karakteristik kelompok fungsional tertentu
diidentifikasi dalam kedua sampel dimurnikan dan standar adalah sebagai folterendah: OH (3441 cm
-1
), C-H peregangan (3031-2849 cm
-1
),

Allene (1929 cm
-1
), C = O asetat (1732 cm
-1
), Conjugated
C = O (1649 cm
-1
), CH
2
stretch (1603-1450 cm
-1
), Geminal
metil (1381 dan 1362 cm
-1
), C-O asetat (1335, 1259, dan
1246 cm
-1
), Dan trans -distributed -C = C- (1201-958 cm
-1
),
yang setuju dengan baik dengan melaporkan data [19, 20]. Dengan demikian,
Data cochromatography, UV-vis, dan FT-IR mendukung bahwa
karotenoid utama dalam H. elongata adalah fucoxanthin.
4. Kesimpulan
Pendekatan dalam kesimpulan, TLC-dipandu (analitis, preparatif,
dan bio-autographic) digunakan untuk menyaring dan memurnikan
senyawa bioaktif dari H. elongata rumput laut. Satu aktif
senyawa dengan potensi antioksidan dan antimikroba
Sifat diidentifikasi sebagai fucoxanthin. H. elongata mungkin
Oleh karena itu dianggap sebagai sumber potensial fungsional
bahan.
Pengakuan
TheauthorswouldliketoacknowledgefundingfromtheIrish
Pemerintah di bawah Teknologi Sektor Skema Penelitian
(Strand III) dari Rencana Pembangunan Nasional.
Referensi
[1] A. Rodriguez-Bernaldo de Quiros, FS Frecha, PA Vidal,
dan HJ Lopez, "senyawa antioksidan dalam cokelat dimakan
rumput laut, "Food Research Eropa dan Teknologi, vol.231, tidak ada.
3, pp. 495-498, 2010.
[2] L. Jaime, JA Mendiola, M. Herrero et al., "Pemisahan dan char
acterization antioksidan dari Spirulina platensis mikroalga
menggabungkan ekstraksi cair bertekanan, TLC, dan HPLCDAD, "JournalofSeparationScience, vol.28, no.16, pp.2111-2119,
2005.
[3] A. Rodriguez-Bernaldo de Quiros dan HS Costa, "Analisis

karotenoid dalam sampel sayuran dan plasma: review, "Journal

Komposisi Pangan dan Analisis, vol. 19, no. 2, pp. 97-111 2006.
[4] M. Plaza, S. Santoyo, L. Jaime et al., "Skrining untuk bioaktif
senyawa dari alga, "JournalofPharmaceuticaland Biomedical Analisis, vol. 51, no. 2, pp. 450-455, 2010.
[5] B. Schoefs, "Klorofil dan karotenoid analisis-produk makanan
produk-. Sifat pigmen dan metode analisis, "
Tren Ilmu dan Teknologi Pangan, vol. 13, no. 11, hlm. 361371 2002.
[6] S. Liaaen-Jensen, "Karotenoid di chemosystematics," di
Karotenoid, Biosintesis dan Metabolisme, G. Britton, S.
Liaaen-Jensen, dan H. Pfander, Eds., Vol. 3, pp. 217-247,
Birkhauser, Basel, Swiss 1998.
[7] ND 'Orazio, E. Gemello, MA Gammone, M. de Girolamo, C.
Ficoneri, dan G. Riccioni, "Fucoxantin: harta dari laut,"
Kelautan Obat, vol. 10, no. 3, pp. 604-616, 2012.
[8] SJHeo andY.J.Jeon, "Protectiveeffect of fucoxanthin terisolasi
dari Sargassum siliquastrum pada UV-B kerusakan sel yang disebabkan, "
Jurnal Photochemistry dan Photobiology B, vol. 95, no. 2, pp.
101-107 2009.
[9] H. Maeda, M. Hosokawa, T. Sashima, K. Funayama, dan K.
Miyashita, "Fucoxanthin dari rumput laut yang dapat dimakan, Undaria kental diujung
natifida, menunjukkan efek antiobesity melalui ekspresi UCP1 di
jaringan adiposa putih, "Penelitian Biokimia dan Biofisik
Komunikasi, vol. 332, no. 2, pp. 392-397, 2005.
[10] X. Yan, Y. Chuda, M. Suzuki, dan T. Nagata, "Fucoxanthin sebagai
antioksidan utama dalam Hijikia fusiformis, umum dimakan
rumput laut, "Bioscience, Bioteknologi dan Biokimia, vol. 63,
no. 3, pp. 605-607, 1999.
[11] G. Rajauria, AK Jaiswal, N. Abu-Gannam, dan S. Gupta,
"Antimikroba, antioksidan dan radikal bebas-pemulungan capacity coklat rumput laut Himanthalia elongata dari pantai barat
Irlandia, "Journal of Food Biochemistry 2012.
[12] L. Gu, T. Wu, dan Z. Wang, "TLC bioautografi-dipandu
isolasi antioksidan dari buah Perilla frutescens var.
acuta, "LWT-Ilmu dan Teknologi Pangan, vol. 42, no. 1, hlm.
131-136 2009.
[13] KA Reid, AK Jager, ME Cahaya, DA Mulholland, dan J.
Van Staden, "fitokimia dan skrining farmakologi dari
Spesies Sterculiaceae dan isolasi senyawa antibakteri, "
Journal of Ethnopharmacology, vol. 97, no. 2, pp. 285-291, 2005.
[14] AR Shahverdi, F. Abdolpour, HR Monsef-Esfahani, dan
H. Farsam, "A TLC assay bioautographic untuk deteksi
dari nitrofurantoin senyawa pembalikan resistensi, "Journal of
Kromatografi B, vol. 850, no. 1-2, hlm. 528-530, 2007.
[15] T. Nomura, M. Kikuchi, A. Kubodera, dan Y. Kawakami,

"Aktivitas antioksidan Proton-derma dari fucoxanthin dengan 1,1diphenyl-2-pikrilhidrazil (DPPH), "Biokimia dan Molecular Biologi Internasional, vol. 42, no. 2, pp. 361-370, 1997.
[16] S. Bhagavathy, P. Sumathi, dan I. Jancy Sherene Bell, "Hijau
ganggang Chlorococcum humicola-sumber baru com- bioaktif
pound dengan aktivitas antimikroba, "Asian Pacific Journal of
Tropis Biomedik, vol. 1, no. 1, pp. S1-S7, 2011.
[17] N. Shimidzu, M. Goto, dan W. Miki, "Karotenoid sebagai singlet
quenchers oksigen dalam organisme laut, "Ilmu Perikanan, vol.
62, no. 1, hlm. 134-137, 1996.
[18] T. Sugawara, V. Baskaran, W. Tsuzuki, dan A. Nagao, "Brown
ganggang fucoxanthin dihidrolisis menjadi fucoxanthinol selama
penyerapan oleh Caco-2 sel usus manusia dan tikus, "Journal
Nutrisi, vol. 132, no. 5, pp. 946-951, 2002.
[19] JA Haugan, G. Englert, E. Glinz, dan S. Liaaen-Jensen, "Algal
karotenoid. 48. tugas struktural isomer geometri
dari fucoxanthin, "Acta Chemica Skandinavia, vol. 46, pp. 389395, 1992.
[20] JA Haugan, T. Aakermann, dan S. Liaaen-Jensen, "Isolasi
dari fucoxanthin dan peridinin, "Metode dalam enzim, vol.213,
pp. 231-245, 1992