METODE KERJA

Salmonella
Pengayaan
1.

Ditimbang 25 gram kelapa kopyor kemudian dimasukkan ke dalam 225 ml

2.
3.

media LB steril (suspensi sampel)

Diinkubasi selama 24 jam 2 jam pada suhu 30oC.
Dipipet 1 ml suspensi tersebut kemudian dimasukkan ke dalam 10 ml media

4.

TTB (Tetrathionate broth)

Diinkubasi kembali selama 24 jam 2 jam pada suhu 30oC.

Isolasi
1.

Media TTB yang berisi sampel kemudian dikocok menggunakan vortex

2.
3.

mixer.
Dipipet suspensi tersebut ke dalam cawan petri steril sebanyak 1 ml.
Dituang media selektif XLD, SSA, dan BS Agar pada masing-masing cawan

4.
5.

petri.
Diinkubasi selama 24 jam 2 jam pada suhu 30oC.
Diamati penampakan koloni yang tumbuh pada masing-masing media
selektif.
XLD : koloni berwarna pink dengan/tidak hitam ditengah, beberapa

kuning dengan/tidak hitam di tengah

SSA : koloni berwarna hitam
BS : koloni berwarna coklat, abu, hitam, kadang-kadang metalik sheen.
6. Diambil koloni Salmonella yang tumbuh, sebanyak 1 mata ose, kemudian
7.
8.

digoreskan ke media Mc. Conkey Agar.

Diinkubasi kembali selama 2 hari pada suhu 30oC.
Salmonella pada media Mc. Conkey Agar akan tumbuh dengan koloni

9.

berwarna ungu.
Koloni yang berwana ungu kemudian dipindahkan ke media NA miring
dalam tabung reaksi untuk disimpan.

Preparasi Sampel
1. Ditimbang secara aseptik 25 gram sampel kopyor.
2. Dimasukkan ke dalam 225 ml media LB steril dalam botol (pengenceran
10-1).
3. Diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37oC.
E. coli dan Koliform
Uji penduga
1. Pengenceran 10-1 dipindahkan menggunakan pipet steril ke dalam 3 seri tabung
ulir yang berisi tabung durham,
b) Pindahkan dengan menggunakan pipet steril, sebanyak 1 ml larutan
dari setiap pengenceran ke dalam 3 seri tabung lauryl tryptose Broth (LTB)
yang berisi tabungdurham.
c) Inkubasi tabung-tabung tersebut selama 48 jam 2 jam pada suhu
35oC 1oC. Perhatikan gas yang terbentuk setelah inkubasi 24 jam dan
inkubasikan kembali tabung-tabung negatif selama 24 jam. Tabung positif
ditandai dengan kekeruhan dan gas dalam tabung durham.
d) Lakukan Uji penegasan coliform untuk tabung-tabung positif
TPC
1. Disediakan 5 seri tabung steril yang berisi 9 ml buffer phosfat.
2. Dibuat pengenceran sampai 10-6 dari