Deteksi Protein

gumilar

PAGE

PolyAcrylamide Gel Electrophoresis

Cara termudah untuk menguji kemurnian protein
Pada PAGE protein dijaga dalam bentuk native dan
aktif
Pemisahan didasarkan pada muatan dan ukuran
protein

gumilar

Aplikasi PAGE

PAGE sangat sensitif thd proses-proses yang

mempengaruhi konformasi dan muatan dari
protein. Sehingga native PAGE dapat
dimanfaatkan sbg alat untuk mendeteksi:

gumilar

Perubahan muatan akibat degradasi kimia (ex:

deaminasi)
Unfolded atau peristiwa perubahan konformasi lainnya
Oligomer atau agregat
Binding event (protein-protein atau protein ligan)

SDS-PAGE

SDS:

Protein terdenaturasi selama proses

elektroforesis
Pemisahan berdasarkan ukuran (BM)

gumilar

Penentuan berat molekul protein dengan SDS-PAGE

ELISA

gumilar

Enzyme-Linked Immunosorbent Assay

Didasari oleh interaksi antigen antibodi
Protein di dalam sampel diadsorbsi pada
permukaan inert, biasanya plat polystyrene
Treatment dengan antibodi, kemudian dengan
anti-antibodi
Identifikasi: warna produk

gumilar

(A) In indirect ELISA, the production of color indicates the amount of an

antibody to a specific antigen. (B) In sandwich ELISA, the production of
color indicates the quantity of antigen
gumilar

An ELISA to test for the presence of herpes simplex virus (HSV)

antibodies in blood samples.

Wells were coated

with an HSV
antigen, to which
antibodies against
HSV will bind. The
second antibody is
antihuman IgG
linked to horseradish
peroxidase. Blood
samples with greater
amounts of HSV
antibody turn
brighter yellow

Western Blot

Didasari oleh interaksi antigen antibodi

(immunoassay)
Tahapan:

gumilar

Sampel dielektroforesis SDS-PAGE

Bloting: transfer protein yang terlarut dalam gel ke
lembaran polimer/membran
Penambahan antibodi yang sudah dilabel
Pembacaan: expose film (autoradiogram)

Western Blotting. Proteins on an SDS-polyacrylamide gel are transferred to

a polymer sheet and stained with radioactive antibody. A band corresponding
to the protein to which the antibody binds appears in the autoradiogram.

gumilar