EFEKTIVITAS SUBSTITUSI SITOKININ DENGAN AIR

KELAPA PADA MEDIUM MULTIPLIKASI TUNAS

KRISAN (Chrysanthemum indicum L.)
SECARA IN VITRO

SKRIPSI
disajikan sebagai salah satu syarat memperoleh gelar
Sarjana Sains Program Studi Biologi

oleh
Betty Shinta Indriani
4411409028

JURUSAN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS NEGERI SEMARANG

2014

PERNYATAAN KEASLIAN SKRIPSI

Saya menyatakan dengan sebenar-benarnya bahwa skripsi saya yang berjudul
Efektivitas Substitusi Sitokinin dengan Air Kelapa pada Multiplikasi Tunas krisan
(Chrysanthemum indicum L.) secara In Vitro disusun berdasarkan hasil penelitian saya
dengan arahan dosen pembimbing. Sumber informasi atau kutipan yang berasal atau
dikutip dari karya yang diterbitkan telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam
daftar pustaka di bagian akhir skripsi ini. Skripsi ini belum pernah diajukan untuk
memperoleh gelar dalam program sejenis di perguruan tinggi manapun.

ii

iii

ABSTRAK
Indriani, B.S. 2014. Efektivitas Substitusi Sitokinin dengan Air Kelapa pada
Medium Multiplikasi Krisan (Chrysanthemum indicum L.) secara In Vitro. Skripsi,
Jurusan Biologi FMIPA Universitas Negeri Semarang. Dr. Enni Suwarsi R, M.Si
dan Drs. Krispinus Kedati Pukan, M.Si.

Krisan (Crhysanthemum indicum L) merupakan salah satu komoditas bunga

potong yang sangat digemari di Indonesia. Rendahnya ketersediaan dan kualitas bibit
merupakan masalah yang ada di lapangan. Penggunaan teknik kultur jaringan
diharapkan dapat menjadi solusi atas permasalahan tersebut. Salah satu masalah dalam
teknik kultur jaringan adalah mahalnya zat pengatur tumbuh (ZPT). Penambahan ZPT
sintetik pada medium multiplikasi umumnya menyebabkan biaya produksi bibit
meningkat. Oleh karena itu, diperlukan penelitian untuk menguji efektivitas air kelapa
yang dapat menggantikan peran sitokinin sintetik. Penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui konsentrasi air kelapa yang efektif dalam multiplikasi tunas krisan.
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental rancangan acak lengkap
dengan dua faktorial. Faktor pertama adalah konsentrasi BA (0 ppm, 0.5 ppm, 1 ppm &
1.5 ppm), sedangkan faktor kedua adalah konsentrasi air kelapa (5%, 10%, 15%, 20%,
25%). Eksplan yang digunakan adalah meristem lateral. Multiplikasi krisan diukur
berdasarkan tiga parameter yaitu tinggi eksplan, jumlah tunas & jumlah daun. Data
dianalisis dengan ANAVA dua jalan dan uji lanjut beda nyata terkecil (BNT).
Hasil penelitian menunjukkan bahwa BA berpengaruh signifikan terhadap
jumlah tunas dan jumlah daun namun tidak signifikan terhadap tinggi tunas. Air kelapa
berpengaruh signifikan terhadap semua parameter pengamatan. Hasil uji BNT
menunjukkan bahwa BA 0.5 ppm berpengaruh paling efektif untuk meningkatkan
jumlah tunas dan jumlah daun, sedangkan air kelapa pada konsentrasi 5%-15%
berpengaruh efektif dalam meningkatkan tinggi tunas, jumlah tunas dan jumlah daun.
Interaksi BA dan air kelapa berpengaruh signifikan terhadap tinggi tunas, jumlah
tunas dan jumlah daun. Interaksi yang paling optimal dalam meningkatkan tinggi tunas
krisan sebesar 5.03-6.57 adalah BA 0 ppm dan 1 ppm yang diinteraksikan dengan air
kelapa sebesar 5%. Interaksi yang paling optimal dalam meningkatkan jumlah tunas dan
jumlah daun adalah BA 0.5 ppm yang diinteraksikan dengan air kelapa 5% dan 15%.
Untuk meningkatkan tinggi tunas dapat menggunakan 5% air kelapa tanpa
penambahan BA, sedangkan untuk meningkatkan jumlah tunas dan jumlah daun
penggunaan 5% & 15% air kelapa masih perlu ditambahkan dengan BA 0.5 ppm.
Berdasarkan hasil penelitian yang telah diperoleh, maka perlu dilakukan penelitian
selanjutnya untuk mengetahui pengaruh air kelapa pada multiplikasi tanaman lainnya.

Kata kunci: Chrysanthemum indicum L., Multiplikasi, benzil adenin (BA), air kelapa.

iv

KATA PENGANTAR
Dengan mengucapkan puji syukur kehadirat Allah SWT, yang telah
memberikan nikmat iman, nikmat islam serta rahmat dan hidayah-NYA. Shalawat dan
salam senantiasa tercurah limpahkan kepada Rasulullah SAW yang senantiasa
memberikan inspirasinya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul
Efektivitas Substitusi Sitokinin dengan Air Kelapa pada Medium Multiplikasi Tunas
Krisan (Chrysanthemum indicum L.) secara In Vitro.
Penulis menyadari masih banyak kekurangan dalam menyusun skripsi ini.
Namun dengan segala upaya, bantuan dan dorongan dari berbagai pihak, penulis dapat
menyelesaikan skripsi ini dengan baik. Dalam kesempatan ini penulis menyampaikan
terima kasih yang sebesar-besarnya kepada:
1. Dekan FMIPA Universitas Negeri Semarang yang telah memberi izin penulis
sehingga dapat menyelesaikan penulisan skripsi ini.
2. Ketua Jurusan Biologi yang memudahkan jalan penulis dalam menyusun skripsi.
3. Dr. Enni Suwarsi R, M.Si, dosen pembimbing I atas bimbingan, pengarahan dan
dorongannya selama ini.
4. Drs. Krispinus Kedati Pukan, M.Si dosen pembimbing II untuk dukungan, ilmu dan
perhatiannya.
5. Noor Aini Habibah, S.Si, M.Si, dosen penguji untuk waktu dan kesabaran yang
sangat berarti, tanpanya penulisan skripsi ini tidak menjadi lebih baik.
6. Mbak Tika, Mas Solikhin dan segenap pengurus Laboratoium Biologi FMIPA
UNNES atas bantuannya.
7. Bapak Ibu dosen dan seluruh staf pengajar Jurusan Biologi, untuk ilmu yang
diberikan.
8. Ibu, Bapak (alm), Mas Adit, Desi, dan Bagas serta saudara-saudaraku tercinta untuk
kasih sayang, kesabaran, doa dan dukungannya.
9. Mbak Ambar dan Mbak Nida, terimakasih untuk kebaikan dan kesabarannya
mengajari penulis mengolah data.
10. Teman-teman botani (Osi, Ika, Umi semoga lancar penelitiannya), kos IR 28, dan
saudara-saudaraku seperjuangan di kampus tercinta, terimakasih untuk semangat,
kebersamaan, pengingatan dan tegurannya.

11. Semua pihak yang turut membantu dalam penyelesaian skripsi ini yang tidak bisa
penulis sebutkan satu persatu.
Penulis menyadari akan adanya kekurangan dalam penulisan skripsi ini, maka segala
kritik maupun saran yang bersifat membangun akan penulis terima dengan senang hati.
Akhir kata penulis berharap semoga skripsi ini dapat berguna bagi semua pihak yang
membutuhkan.

Semarang,
Penulis

vi

DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL

PERNYATAAN KEASLIAN SKRIPSI.

PENGESAHAN..

ABSTRAK...

KATA PENGANTAR.

DAFTAR ISI...

DAFTAR TABEL...

DAFTAR GAMBAR..

DAFTAR LAMPIRAN

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang.

12

B. Rumusan Masalah...

14

C. Penegasan Istilah..

14

D. Tujuan Penelitian.

15

E. Manfaat Penelitian

16

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA DAN HIPOTESIS

A. Tinjauan Pustaka
1. Kedudukan taksonomi dan morfologi krisan..............................................

17

2. Kultur Jaringan..

19

3. Fisiologi multiplikasi tunas krisan..

22

a.

Multiplikasi meristem apikal

22

b.

Peran ZPT dalam multiplikasi..

24

c.

Komposisi kimia air kelapa....

25

d.

Mekanisme multiplikasi......

26

e.

Mekanisme pembelahan dan pembentangan sel oleh sitokinin dan air

kelapa

27

B. Kerangka Berfikir..

29

C. Hipotesis....

29

BAB III METODE PENELITIAN

vii

17

A. Lokasi dan Waktu Penelitian

30

B. Bahan dan Alat Penelitian.

30

C. Variabel Penelitian....

31

D. Rancangan Penelitian....

32

E. Langkah Kerja

34

F. Analisis Data.

36

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Penelitian.

37

B. Pembahasan..

43

1. Pengaruh BA terhadap multiplikasi...

43

2. Pengaruh air kelapa terhadap multiplikasi

45

3. Kenampakan visual planlet krisan

48

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan...

52

B. Saran.

52

DAFTAR PUSTAKA..

53

LAMPIRAN-LAMPIRAN

viii

DAFTAR TABEL
Tabel

Halaman

1 Rancangan Percobaan substitusi BA dengan air kelapa terhadap

multiplikasi krisan secara in vitro
33
2 Rerata tinggi planlet hasil multiplikasi Chrysanthemum indicum L. pada
media subtitusi sitokinin dengan air kelapa........................................
37
3 Rerata jumlah daun hasil multiplikasi Chrysanthemum indicum L. pada
media subtitusi sitokinin dengan air kelapa.........................................
37
4 Rerata jumlah tunas hasil multiplikasi Chrysanthemum indicum L. pada
media subtitusi sitokinin dengan air kelapa.........................................
38
5 Ringkasan hasil ANAVA dua jalan untuk menguji efektivitas subtitusi
sitokinin dengan air kelapa serta interaksinya terhadap parameter
pengamatan tinggi, jumlah tunas dan jumlah daun pada planlet
Chrysanthemum indicum L....................................................................
39
6 Uji BNT pengaruh konsentrasi BA terhadap tinggi, jumlah tunas dan
jumlah daun pada planlet Chrysanthemum indicum L.............................. 40
7 Uji BNT pengaruh konsentrasi air kelapa terhadap tinggi planlet, jumlah
tunas dan jumlah daun pada planlet Chrysanthemum indicum
40
L.........................................................................................................
8 Pengaruh interaksi berbagai kombinasi BA dan air kelapa terhadap
parameter multiplikasi Chrysanthemum indicum L secara in vitro
41
9 Analisis deskriptif visual multiplikasi tunas Chrysanthemum indicum L

ix

41

DAFTAR GAMBAR
Gambar

Halaman

1 Chrysanthemum indicum L. (Dokumentasi pribadi)..............................

17

2 Lokasi meristem utama (Campbel et al. 2003)........... 23

3 Struktur kimia Sitokinin - BA (Salisbury & Ross 1995)............................ 25
4 Kerangka berfikir............................ 29
5 Denah pengacakan multiplikasi krisan secara in vitro...........................

33

6 Multiplikasi krisan pada media B0K1 (a) dan B1K1 (b).................................... 42

7 Kenampakan visual daun hasil multiplikasi Chrysanthemum indicum L. pada
media B0K1 (a) dan B1K5 (b)

48

DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran

Halaman

1. Langkah kerja penelitian.

56

2. Hasil multiplikasi tunas krisan secara in vitro pada berbagai

media....
3. Pengambilan dan analisis data.

xi

61
66

BAB I
PENDAHULUAN

A.

Latar Belakang Masalah

Krisan (Chrysanthemum indicum L.) merupakan salah satu jenis tanaman hias

berupa bunga potong yang sangat populer di Indonesia (Wediyanto et al. 2007).
Tanaman ini memiliki nilai jual yang tinggi serta memiliki prospek ekonomis yang
cerah. Keindahan warna dan variasi bentuk bunga yang beraneka ragam serta tingkat
kelayuan bunga yang rendah menyebabkan krisan banyak diminati oleh masyarakat.
Pasar potensial penjualan bunga krisan Indonesia antara lain Jerman, Inggris, Italia,
Swiss, Australia, Amerika Selatan, Swedia, Denmark, Jepang dan beberapa negara
Eropa lainnya (Zamroni & Maryani 2005).
Soedarjo et al. (2012) menyatakan bahwa produktivitas dan permintaan bunga
krisan terus meningkat dari tahun ke tahun sehingga membutuhkan ketersediaan
varietas-varietas unggul baru dan bibit berkualitas secara berkesinambungan. Data
statistik menyatakan bahwa nilai ekspor bunga krisan di Indonesia pada tahun 2003
mengalami surplus sekitar US $ 1 juta tangkai dan pada tahun 2010 produktivitas dan
penjualan bunga krisan sudah mencapai angka 186 juta tangkai (BPS 2011).
Muhit (2007) menyatakan bahwa perkiraan permintaan bunga krisan di
Indonesia selalu meningkat pada kisaran 25% pertahun. Kualitas dan konsistensi
produksi bunga krisan masih menjadi permasalahan umum yang terjadi. Oleh karena itu
sering ditemui harga penjualan bunga krisan yang fluktuatif dengan kualitas bunga yang
tidak seragam. Pengamatan yang telah dilakukan di lapangan memperlihatkan bahwa
perbanyakan krisan yang dilakukan oleh petani masih menggunakan cara konvensional
yaitu dengan cara stek pucuk. Perbanyakan krisan dengan cara ini dapat menyebabkan
terjadinya penurunan produktivitas dan kualitas keturunan krisan (Muhit 2007) .
Yusnita (2003) menerangkan bahwa penggunaan teknik kultur jaringan yang
dilakukan selama ini dirasa cukup efektif untuk mengembangkan bibit yang berkualitas
dan seragam pada berbagai jenis tanaman (tanaman pot, bunga potong, buah-buahan
dan tanaman berumbi). Perbanyakan yang dilakukan dengan cara kultur jaringan
diharapkan dapat menghasilkan kualitas bibit krisan yang unggul dan seragam, tahan

terhadap penyakit, tingkat produksi tinggi serta waktu yang relatif lebih singkat jika
dibandingkan dengan perbanyakan secara konvensional
Proses penggandaan tunas yang dipelihara dalam kondisi tertentu sehingga
sewaktu-waktu dapat digunakan untuk proses berikutnya disebut multiplikasi. Kondisi
ini memerlukan adanya kerja zat pengatur tumbuh (ZPT) sitokinin seperti benzil adenin
(BA), 2-iP dan kinetin (Yusnita 2003). Aplikasi penambahan ZPT dalam kultur jaringan
merupakan salah satu faktor yang menyebabkan tingginya biaya produksi. Hal ini
dikarenakan harga ZPT sintetik cukup mahal dan tidak selalu ready stock. Oleh
karenanya diperlukan adanya ZPT alami yang dapat digunakan untuk menggantikan
peran ZPT (sitokinin) sintetik. ZPT alami dapat diperoleh dari berbagai buah-buahan,
salah satu diantaranya adalah air kelapa (Seswita 2010).
Pemanfaatan air kelapa sebagai ZPT alami terbukti efektif pada kultur jaringan
temulawak (Seswita 2010, Kristina & Syahid 2012 ), nilam (Surrachman 2011), anggrek
kantong semar (Sari et al. 2011), dan beberapa spesies tanaman lainnya. Seswita (2010)
menerangkan lebih lanjut bahwa penambahan air kelapa dapat meningkatkan respon
tumbuh dan multiplikasi temulawak sebanyak 3,4 tunas/2 bulan, lebih tinggi
dibandingkan dengan penambahaan ZPT BA 1,5 mg/l yaitu 2,4 tunas/2 bulan.
Pada penelitian lain, Surachman (2010) menunjukkan bahwa penggunaan
media MS ditambah dengan air kelapa 10% pada perbanyakan nilam secara in vitro
menunjukkan respon terbaik dengan prosentase tunas hidup rata-rata 100%, jumlah
tunas 3 dan daun sebanyak 9,10 serta tinggi tunas 1.61 cm. Pada penelitian kultur
jaringan krisan, Maltatula (2003) menunjukkan bahwa perlakuan media MS, air kelapa
dengan penambahan Gandasil-9 pada Chrysanthemum sp. berpengaruh sangat nyata
terhadap pertambahan tinggi tanaman, jumlah daun, pertambahan berat basah tunas,
jumlah akar dan berat basah akar tanaman krisan secara in vitro.
Kristina & Syahid (2012) menyebutkan bahwa dalam 1 liter air kelapa muda
mengandung ZPT kinetin (sitokinin) sebesar 273,62 mg dan beberapa mineral lainnya.
Berdasarkan hasil penelitian tersebut belum dapat disimpulkan bahwa adanya
kandungan sitokinin dalam air kelapa dapat menggantikan peran ZPT (sitokinin)
sintetik. Oleh karenanya diperlukan penelitian mengenai konsentrasi air kelapa yang
berpengaruh optimal terhadap peningkatan multiplikasi tunas krisan, sehingga dapat
digunakan sebagai dasar pertimbangan untuk menggantikan peran sitokinin sintetik.

B.

Permasalahan
Berdasarkan latar belakang tersebut muncul permasalahan yang dapat

dirumuskan sebagai berikut:

1. Bagaimana pengaruh konsentrasi sitokinin (BA) dalam medium terhadap
multiplikasi tunas krisan secara in vitro?
2. Bagaimana pengaruh konsentrasi air kelapa dalam medium terhadap multiplikasi
tunas krisan secara in vitro?
3. Bagaimana pengaruh interaksi antara BA dengan air kelapa terhadap multiplikasi
tunas krisan secara in vitro?
4. Berapakah konsentrasi BA dan air kelapa yang paling efektif dalam meningkatkan
multiplikasi tunas krisan secara in vitro?
Efektivitas substitusi sitokinin dengan air kelapa ditentukan berdasarkan interaksi
BA dengan air kelapa yang paling optimal.

C.

Penegasan Istilah
Dalam penelitian ini perlu dijelaskan batasan istilah yang digunakan untuk

menghindari adanya salah pengertian. Beberapa istilah tersebut yaitu:

1.

Subtitusi
Dalam penelitian ini, yang dimaksud dengan subtitusi adalah penggantian
sitokinin sintetik (BA) dengan ZPT alami (air kelapa) pada konsentrasi tertentu
sehingga dapat mempengaruhi multiplikasi krisan secara efektif.

2.

Sitokinin
Sitokinin adalah salah satu ZPT sintetik yang berperan dalam pembelahan dan
diferensiasi sel. Sitokinin sintetik yang digunakan dalam penelitian ini adalah
Benzil Adenin (BA).

3.

Multiplikasi
Multiplikasi adalah tahap perbanyakan atau penggandaan eksplan yang
ditumbuhkan secara in vitro (Gunawan 2004). Pada tahap ini terjadi perbanyakan
tunas dengan mendorong tunas lateral atau merangsang tunas adventif (Yusnita
2003).

4.

Air kelapa
Air kelapa adalah endosperm cair pada kelapa yang terbentuk sekitar 2 bulan
setelah penyerbukan. Menurut penelitian, air kelapa menyumbang 25% dari berat
buah, dengan komposisi dasar terdiri atas

95.5% air, 4% karbohidrat, 0.1%

lemak, 0.02% kalsium, 0.01% fosfor, 0.5% besi. Selain terdapat komposisi
mineral, air kelapa juga mengandung asam amino, vitamin C dan vitamin B
kompleks serta garam mineral (Vigliar et al. 2006). Air kelapa yang digunakan
dalam penelitian ini berasal dari kelapa hijau yang dicirikan dengan volume air
masih memenuhi buah dan keadaan endosperm padat (daging kelapa) yang belum
menebal.
5.

Efektif
Dalam penelitian ini, yang dimaksud dengan efektif adalah adanya respon positif
multiplikasi tunas pada parameter jumlah tunas, tinggi tunas, jumlah daun dan
kenampakan visual tunas. Pengertian efektif dalam penelitian ini berdasarkan
hasil analisis statistik pada uji beda nyata terkecil (BNT) dengan parameter
multiplikasi meliputi: tinggi tunas, jumlah tunas dan jumlah daun.

D.

Tujuan Penelitian
Tujuan penelitian ini adalah:

1.

menguji pengaruh konsentrasi sitokinin (BA) dalam medium terhadap multiplikasi

tunas krisan secara in vitro.

2.

menguji pengaruh air kelapa dalam medium terhadap multiplikasi tunas krisan
secara in vitro.

3.

menguji interaksi BA dan air kelapa terhadap multiplikasi tunas krisan secara in
vitro.

4.

mengetahui konsentrasi air kelapa yang paling efektif dalam multiplikasi krisan
secara in vitro, sehingga dapat digunakan untuk mensubtitusi peran sitokinin
dalam media.

E.

Manfaat Penelitian
Hasil penelitian ini diharapkan mampu memberikan referensi yang dapat

digunakan untuk pengembangan penelitian selanjutnya yang berkaitan dengan

multiplikasi tunas Chrysanthemum indicum L., serta memberikan informasi kepada
petani krisan tentang perbanyakan bibit yang berkualitas dalam skala besar.

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA DAN HIPOTESIS
A. Tinjauan Pustaka
4. Kedudukan taksonomi dan morfologi krisan
Krisan merupakan salah satu tanaman semusim yang memiliki habitus berupa
semak setinggi 30-200 cm. Umumnya masyarakat Indonesia mengenal krisan dengan
nama seruni atau bunga emas (golden flower). Tanaman ini memiliki sistem perakaran
tunggang dengan pertulangan daun menyirip. Batang krisan berupa herba yang tumbuh
agak tegak dan umumnya jarang membentuk percabangan. Bunga krisan termasuk
bunga majemuk lengkap terminalis yang terdiri atas bungan pita dan bunga tabung
(Wediyanto et al. 2007).
Tanaman krisan berasal dari daratan China dan dewasa ini dikembangkan
secara komersial di Indonesia (Anonim 2006). Chrysantemum indicum (Gambar 1)
merupakan salah satu varietas unggul krisan nasional. Krisan varietas ini diminati oleh
petani dan masyarakat karena warna bunga yang cerah dan memiliki tingkat resistensi
yang cukup tinggi terhadap penyakit karat (Bety & Suhardi 2009).

Gambar 1. Chrysanthemum indicum L.

(Dokumentasi pribadi)

Kedudukan krisan secara taksonomi menurut National Chrysanthemum Society

(NCS) (2012) adalah sebagai berikut:
Kingdom

: Plantae

Sub divisi

: Angiospermae

Divisi

: Magnoliophyta

Kelas

: Magnoliopsida

Ordo

: Asterales

Famili

: Asteraceae

Genus

: Chrysanthemum

Spesies

: Chrysanthemum indicum L.

Bety & Suhardi (2009) menyatakan bahwa tingkat keminatan masyarakat

terhadap bunga krisan berdasarkan atas beberapa hal diantaranya adalah warna, bentuk
dan ukuran bunga, produktivitas tanaman, penanganan pasca panen, serta ketahanan
tanaman terhadap hama dan penyakit. C. indicum L. merupakan salah satu varietas
krisan yang telah diuji terbukti resisten terhadap penyakit karat yang umumnya
merugikan petani dalam skala besar.
Pengamatan di lapangan menunjukkan bahwa fluktuatifnya harga jual krisan
merupakan salah satu masalah yang belum dapat teratasi. Hal ini dikarenakan kualitas
tanaman yang tidak seragam dan suplai bunga yang tidak tetap. Berbagai cara telah
dilakukan oleh petani untuk menjaga stabilitas bibit krisan yang akan diproduksi. Salah
satunya adalah perbanyakan bibit secara sederhana. Umumnya,metode perbanyakan
yang dilakukan adalah stek pucuk. Walaupun biasa digunakan sebagai metode
perbanyakan, stek pucuk dianggap belum menyelesaikan masalah karena krisan
memiliki sifat degenerasi kualitas bibit sejalan dengan bertambahnya usia vegetatif
tanaman (Muhit 2007). Oleh karenanya diperlukan pembaruan bibit secara kontinyu
agar produktivitas dan kualitas bunga yang dihasilkan dapat seragam dan konsisten .
5. Kultur Jaringan
Kultur jaringan adalah teknik menumbuhkembangkan bagian tanaman baik
berupa sel, jaringan atau organ yang dilakukan secara in vitro (Yusnita 2003). Kultur
jaringan dianggap suatu teknik yang tepat untuk digunakan sebagai solusi keterbatasan
bibit. Teknik ini dirasa lebih efektif digunakan karena memiliki beberapa kelebihan
yaitu bibit yang dihasilkan lebih banyak, seragam dan bebas dari patogen (Soedarjo et
al. 2012).
Secara garis besar, umumnya teknik kultur jaringan merupakan kegiatan
mengisolasi suatu bagian tanaman yang selanjutnya dikembangkan dalam media
bernutrisi. Yusnita (2003) menyatakan bahwa sifat totipotensi sel merupakan teori dasar
pengembangan teknik kultur jaringan. Teori ini menyatakan bahwa setiap sel tumbuhan

yang hidup mempunyai informasi genetik dan perangkat fisiologis lainnya sehingga
menyebabkan sel tersebut dapat membelah menjadi sel yang utuh sesuai sifat sel
induknya (Salisburry & Ross 1995).
Teknik kultur jaringan merupakan suatu teknik yang memperhatikan faktor
aseptik dimana alat dan bahan yang digunakan dalam pelaksanaan teknik ini harus
dalam keadaan steril. Wattimena (1988) menyatakan bahwa kesesuaian semua faktor
yang dibutuhan dalam kultur jaringan (ZPT & media tanam) akan mempercepat proses
perbanyakan tanaman dan menghasilkan tanaman yang berkualitas. Sedangkan, adanya
ketidaksesuai

perbandingan

faktor

tersebut

dapat

menyebabkan

terjadinya

hiperhidrisitas, yaitu pertumbuhan eksplan yang tidak normal secara morfologi,

anatomi, maupun fisiologi. Hal ini mengakibatkan daun dan/atau batang menjadi
transparan, berwarna hijau muda hingga pucat dengan kandungan klorofil yang rendah
(Marlina & Rohayati 2009).
Berbagai formulasi media kultur telah dibuat sesuai dengan tujuan
perbanyakan. Murashige and Skoog (MS) adalah salah satu formula media kultur yang
populer digunakan. Yusnita (2003) menyatakan bahwa kompleksitas komposisi nutrisi
pada medium MS menyebabkan media tanam ini sering digunakan dalam pemanfaatan
perbanyakan tanaman. Selain komposisi nutrisi yang komplek, media MS merupakan
media kultur yang sederhana sehingga mudah untuk dibuat. Media kultur tersebut dapat
digunakan dalam bentuk padat maupun cair.
Kandungan medium kultur jaringan terdiri atas makronutrien dan mikronutrien
berupa garam anorganik, sumber karbohidrat, air, asam amino, vitamin dan zat pengatur
tumbuh (ZPT). Selengkapnya, Yusnita (2003) menyatakan komponen-komponen yang
ada dalam media kultur lengkap meliputi:
a. Akuades
Lebih dari 95% komponen media adalah air. Oleh karena itu dperlukan air
penyusun media dengan kualitas yang tinggi. Rendahnya kualitas air yang digunakan
dapat menyebabka terhambatnya pertumbuhan tanaman yang dikuturkan. Untuk tujuan
penelitian, umumnya digunakan air distilata (akuades) atau air distilata ganda
(akuabides)
b. Garam anorganik (hara makro & mikro)

Kebutuhan nutrisi mineral untuk tanaman yang dikulturkan secara in vitro pada
dasarnya sama dengan kebutuhan hara tanaman yang ditumbuhkan di tanah, yaitu
meliputi hara makro dan mikro. Hara makro merupakan hara yang dibutuhkan dalam
jumlah banyak, sedangkan hara mikro merupakan unsur hara yang dibutuhkan dalam
jumlah sedikit. Unsur-unsur tersebut diformulasikan dalam bentuk garam arorganik agar
mudah dilarutkan dalam air hingga dapat diserap dan digunakan oleh tanaman.
Terdapat 9 unsur yang tergolong dalam hara makro yaitu N, P, K, Ca, Mg dan
S. Sedangkan, unsur-unsur hara yang termasuk dalam hara mikro adalah Fe, Mn, B, Zn,
Cu, Mo, dan Co. Kekurangan satu atau lebih unsur mikro dapat menghambat
pertumbuhan, menurunkan hasil dan kualitas, serta menurunkan resistensi terhadap
hama dan penyakit pada tanaman kultur.
c. Sumber karbohidrat
Sumber karbohidrat yang diperlukan oleh eksplan in vitro biasa dipenuhi
dalam bentuk sukrosa. Adanya sukrosa yang ditambahkan kedalam media kultur
sebagai sumber karbon dan sumber energi yang digunakan tanaman untuk tumbuh. Hal
ini dikarenakan eksplan atau bagian tanaman yang dikulturkan tidak autrotof dan
memiliki laju fotosintesis yang rendah. Penambahan sukrosa dalam medium umumnya
digunakan dengan konsentrasi 2-3% (berat/voume).
d. Vitamin
Vitamin merupakan salah satu komponen dalam perkembangan dan
pertumbuhan tanaman. Vitamin berfungsi sebagai katalisator, stimulator pertumbuhan
dan meminimalkan stres dalam keadaan in vitro. Vitamin yang sering digunakan dari
kelompok vitamin B yaitu: thiamin-HCl (vitamin B1), piridoksin-HCl (vitamin B6),
asam nikotinat, dan riboflavin. Vitamin C seperti asam sitrat dan asam askorbat
seringkali digunakan sebagai antioksidan untuk mencegah atau mengurangi pencoklatan
eksplan. Mio-inositol merupakan heksitol (gula alkohol berkarbon-6) yang ditambahkan
dalam media kultur untuk merangsang pertumbuhan jaringan (pada konsentrasi 100
mg/L).
e. Asam amino
Asam amino merupakan sumber nitrogen organik untuk pembentukan kultur
sel dan protoplas. Asam amino menyediakan sumber nitrogen lebih baik dibandingkan

10

dengan nitrogen anorganik. Asam amino yang biasa digunakan dalam media kultur
jaringan meliputi L-glutamin, L-asparagin, L-arginin, L-sistein, glisisn dan adenin.
f. Bahan suplemen alami (Complex adenda)
Bahan suplemen alami meliputi jus tomat, jus jeruk, air kelapam ekstrak ragi,
kentang dan bubur pisang. Bahan-bahan ini seringkali ditambahkan dalam media kultur
karena dipercaya merupakan sumber asam amino, peptida, vitamin dan zat pengatur
tumbuh alami. Penggunaan air kelapa sebagai senyawa alami terbukti mampu
menumbuhkan eksplan mawar, krisan dan beberapa tanaman lainnya.
g. Bahan pengatur pH
Medium kultur harus memiliki kadar pH yang sesuai untuk menunjang
metabolisme pertumbuhan tanaman. Dalam proses pertumbuhannya, sel tumbuhan
membutuhkan pH yang sedikit asam yaitu berkisar antara 5,6-6 (Salisburry & Ross
1995). Media tanam dengan pH terlalu basa/asam dapat mengakibatkan perubahan
struktur media yang semula padat menjadi cair. Pengaturan pH dalam medium
dilakukan dengan cara menambahkan NaOH/KOH atau HCl.
h. Bahan pemadat
Media tanam kultur jaringan dapat digunakan dalam bentuk cair ataupun padat.
Medium padat umumnya ditambahkan agar atau gelrite dalam konsentrasi tertentu.
Penggunaan agar sebagai bahan pemadat medium memiliki kelebihan diantaranya
mampu bercampur dengan air membentuk gel pada suhu 60-100C dan stabil pada
berbagai suhu inkubasi, tidak dapat diurai enzim dan tidak bereaksi dengan komponen
media.
i. Zat pengatur tumbuh
Zat Pengatur Tumbuh (ZPT) merupakan senyawa-senyawa lain yang memiliki
karakteristik yang sama dengan hormon, tetapi diproduksi secara endogen (Zulkarnain
2009). ZPT bertugas dalam pengaturan metabolik dalam pertumbuhan tanaman. ZPT
ditambahkan karena eksplan belum mampu menciptakan hormon pertumbuhan secara
endogen dengan kadar yang dibutuhkapn dalam proses pertumbuhannya.
Konsentrasi pemberian ZPT dalam media kultur biasanya diberikan sesuai
dengan tujuan kultur. Pada pengulturan untuk menumbuhkan dan menggandakan tunas
aksilar atau menumbuhkan unas adventif, ZPT yang digunakan adalah sitokinin. Jenis

11

sitokin
nini yang serring digunakkan adalah BA
B (benzilad
denin) karenna efektivitassnya tinggi
dan haarganya relattif murah.

6. Fisiiologi multipplikasi tunass

f. Muultiplikasi meeristem apikkal
Multiplik
kasi adalah salah satu ttahap dalam
m pertumbuhhan tanamann secara in
vitro dimana terrjadi perkem
mbangan (ddeferensiasi)) sel menjjadi banyak
k sel dan
oss 1995).
membbentuk tunas atau orggan lain yaang dibutuhhkan (Salisbbury & Ro
Pertum
mbuhan adallah bertambahnya jumlaah sel, beratt jaringan daan faktor laiinnya yang
menjadikan suatuu eksplan daapat hidup menjadi
m
inddividu yang utuh (Hidaayat 1995).
Defereensiasi terjaddi pada tingk
kat sitologis yang menyeebabkan pem
mbelahan paada struktur
dan in
nfrastruktur dalam
d
sel (Y
Yusnita 2003)).
Proses multiplikasi
m
s
secara
in vittro ini umum
mnya terjadii pada sel yang
y
belum
mengaalami pertum
mbuhan sek
kunder. Perrtumbuhan sel ini dipengaruhi olleh bagian
tanam
man/eksplan yang
y
diisolaasi. Umumnnya sel yangg belum meengalami peertumbuhan
sekundder terdapat pada bagiann meristem (H
Hidayat 19995).

m
utaama (Campbbel et al. 20003)
Gambaar 2. Lokasi meristem
Campbel et al. (20003) menyaatakan bahw
wa meristem
m (Gambar 2) adalah
populaasi sel-sel yaang memperrbaharui dirii sendiri den
ngan membeelah dan meenghasilkan

12

sel-sel untuk pertumbuhan tumbuhan. Sel dikatakan bersifat meristematik apabila sel
tersebut masih mungkin mengalami pembelahan secara primer dan belum terspesifikasi
dalam bentuk jaringan lain (bersifat embrionik). Dinding sel meristem biasanya tipis
dan bentuk sel lebih isodiametrik dibandingkan sel dewasa serta jumlah protoplasnya
lebih banyak, oleh karenanya bagian tersebut dapat menjelaskan pertumbuhan
organisasi primer dan adanya pertumbuhan bagian tanaman yang tak terbatas (Hidayat
1995).
Abidin (1985) menyatakan bahwa dalam kultur jaringan, sel yang belum
mengalami diferensiasi disebut sebagai kalus. Kalus merupakan hasil dari pembelahan
eksplan yang apabila dipindahkan dalam medium pertumbuhan dapat membentuk tunas
atau organ lainnya. Proses multiplikasi melibatkan faktor-faktor abiotik yang dapat
menunjang pertumbuhan yaitu komposisi medium dan faktor abiotik seperti suhu dan
cahaya inkubasi (Yusnita 2003). Proses multiplikasi suatu eksplan diharapkan dapat
membentuk organ/bagian tubuh lain yang menunjang pertumbuhan selanjutnya seperti
tunas,akar dan daun. Sedangkan parameter terjadinya multiplikasi dapat diukur
berdasarkan jumlah tunas pada tiap eksplan, jumlah daun dan tinggi tunas.
Ozel & Arslan (2006) menyatakan bahwa teknik terpenting dalam multiplikasi
adalah proliferasi meristem, dimana nodus yang menghasilkan tunas aksiler dikulturkan
untuk meregenerasi perbanyakan tunas tanpa melalui fase kalus terlebih dahulu. Teknik
multiplikasi terdiri atas dua metode yaitu metode percabangan tunas lateral dan
pembentukan tunas adventif. Perbanyakan eksplan dengan metode percabangan tunas
lateral lebih banyak digunakan karena relatif sederhana, aberasi genetik sangat kecil,
perbanyakannya berlangsung cukup cepat, dan tanaman yang dihasilkan tumbuh dengan
baik (Yusnita 2003).
g. Peran ZPT dalam multiplikasi
Selain keadaan eksplan yang dikultur, proses multiplikasi juga melibatkan
faktor eksternal lain berupa ZPT. Fungsi ZPT dalam hal ini adalah membantu
pembelahan dan perkembangan sel serta meningkatkan metabolisme dalam tubuh
eksplan. Sitokinin adalah salah satu jenis hormon tumbuhan yang berperan dalam
pembelahan sel serta mengatur pertumbuhan dan perkembangan. Mekanisme kerja
sitokinin hampir sama dengan kinetin namun dalam praktek kultur jaringan umumnya
peneliti menggunakan sitokinin (Zulkarnain 2009).

13

Gam
mbar 3. Struk
ktur kimia Siitokinin - BA
A (Salisburyy & Ross 19995)
Golongan
n sitokinin sintesis
s
yangg umumnyaa digunakan dalam kultu
ur jaringan
adalahh benziladen
nin (BA) (Gambar 3). Hal
H ini dikarrenakan BA mampu meenyebabkan
pemannjangan sel yang
y
lebih nyata
n
jika dibandingkann dengan kinnetin ataupuun sitokinin
lainnyya. Mekanissme kerja sitokinin adalah denngan cara memacu sitokinensis
s
(pemb
belahan sel) pada jarin
ngan yang sedang ditu
umbuhkan ddalam mediia in vitro
(Salisbburi & Ross 1995).
ZPT pada media kulttur bergantuung pada tuujuan hasil
p
Alasan penambahan
kultur yang diingginkan. Penaambahan sitookinin dalam
m media in vitro bertujjuan untuk
l
pada tumbuhan. Pemberian ssitokinin inii umumnya
memacu pembentuukan tunas lateral
mpingi dengaan hormon dari
d kelompook auksin unntuk meninggkatkan pem
mbentangan
didam
sel.
h. Kom
mposisi kim
mia air kelapaa
Air kelappa merupakaan endosperm
m atau cadanngan makannan cair, sum
mber energi
dan mengandung
m
zat pengatuur tumbuh. A
Air kelapa yang
y
baik unntuk digunaakan dalam
kultur jaringan addalah air kelaapa muda yaang daging buahnya
b
berw
warna putih dan masih
gan menggu
unakan sendook (Haryadi & Pamenanng 1983).
dapat diambil deng
Air kelappa menganduung hormonn alami kelom
mpok auksinn dan sitokin
nin. Dalam
mbat kerja
kultur jaringan, auksin berpperan memaacu pembenntukan kaluus, mengham
nin, membentuk kloroffil dalam kaalus, mendoorong proses morfogenesis kalus,
sitokin
membbentuk akar, dan mendoorong prosess embriogennesis. Sitokiinin berperaan memacu
pembeelahan sel, proliferasi meristem ujung,
u
menghambat peembentukan akar dan
mendo
orong pembeentukan klorrofil pada kaalus (Surachm
man 2011).

14

Hasil analisis Kristina dan Syahid (2012) menyatakan bahwa kandungan kimia
air kelapa muda menunjukkan komposisi ZPT kinetin (sitokinin) sebesar 273,62 mg/l
dan zeatin 290,47 mg/l, sedangkan kandungan IAA (auksin) adalah 198,55 mg/l. Selain
kandungan ZPT, kandungan vitamin dalam air kelapa dapat dijadikan substitusi vitamin
sintetik yang terkandung pada media MS.
Kandungan hara makro seperti N, P, dan K, serta beberapa jenis unsur mikro
dalam air kelapa muda juga berpeluang dikembangkan lebih lanjut sebagai upaya
substitusi unsur hara makro dan mikro serta sumber karbon, yakni sukrosa. Menurut
Vigliar et al. (2006), konsentrasi garam mineral dan sukrosa air kelapa menurun seiring
dengan bertambahnya umur dari 6-9 bulan.
i. Mekanisme multiplikasi
Wattimena et al. (1991) menyatakan bahwa faktor-faktor yang mempengaruhi
pertumbuhan dan organogenesis tanaman dapat digolongkan menjadi 4, yaitu: (1)
genotipe sumber bahan tanaman yang digunakan, (2) media yang mencakup komponen
penyusunnya, (3) lingkungan tumbuh yaitu keadaan fisik tempat kultur di-tumbuhkan,
dan (4) fisiologi jaringan tanaman.
Adanya kandungan ZPT dalam media merupakan salah satu hal yang
mempengaruhi lingkungan tumbuh eksplan. Pertumbuhan dan organogenesis tanaman
secara in vitro dikendalikan oleh keseimbangan dan interaksi dari ZPT yang berada
dalam eksplan (Kasli 2009). Basri & Muslimin (2001) menjelaskan bahwa ZPT yang
ditambahkan dalam media sebagian akan masuk ke dalam sel tanaman secara difusi
ataupun melalui penyerapan aktif. Masuknya ZPT tersebut akan mengubah gradien atau
keseimbangan ZPT di dalam tubuh tanaman. Dalam mempengaruhi pertumbuhan
tanaman, ZPT harus berada pada gradien tertentu (Kasli 2009).
Kasli (2009) menyatakan bahwa sitokinin memacu sitokinesis yang
menyebabkan terjadinya peningkatan jumlah sel. Sitokinesis adalah proses pembelahan
sel, dimana sel-sel menyerap air lebih banyak sehingga terjadi penambahan plasma sel
serta diikuti dengan pertumbuhan memanjang sel. Salisbury & Ross (1995) menyatakan
bahwa pemberian sitokinin meningkatkan plastisitas dinding sel sehingga dinding sel
mengendur kemudian terjadi pembentangan lebih cepat secara tak terbalikkan dalam
tekanan turgor yang biasa. Selanjutnya sel mengalami diferensiasi yang menyebabkan
sel-sel tersebut mengalami spesialisasi fungsi. Perkembangan sel-sel atau jaringan yang

15

mendapat spesialisasi fungsi menyebabkan spesialisasi alat-alat atau organ sehingga

membentuk tunas, akar dan sebagainya (Kasli 2009).
j. Mekanisme pembelahan dan pembentangan sel oleh sitokinin dan air kelapa
Seswita (2010) menyatakan bahwa penambahan sitokinin eksogen dapat
memacu proses pembelahan dan pembentangan sel. Setiap tumbuhan memiliki kadar
sitokinin endogen pada konsentrasi tertentu. Penambahan sitokinin secara eksogen
dimungkinkan akan terjadi dua mekanisme yaitu meningkatnya pembelahan sel atau
menurunnya viabilitas sel.
Wattimena (1988) menyatakan bahwa pergerakan ZPT di dalam tubuh
tumbuhan dilakukan melalui jalur simplas, apoplas atau jaringan berkas pengangkut.
Pemberian ZPT pada jaringan yang bersifat meristematis jelas berbeda respon dengan
pemberian ZPT pada jaringan dewasa. Pemberian sitokinin dengan konsentrasi rendah
dalam media MS yang mengandung auksin dapat membantu inisiasi kalus, namun jika
digunakan dalam konsentrasi yang lebih tinggi akan terjadi pemanjangan dan
pembesaran sel yang lebih mengarah pada terbentuknya tunas.
Fosfet (1981) menyatakan bahwa sitokinin dapat mendorong pembelahan sel
dalam jaringan dengan cara meningkatkan peralihan proses pembelahan dari G2 ke
mitosis. Proses peralihan fase ini disebabkan karena sitokinin mampu menaikkan laju
sintesis protein di dalam sel. Protein tersebut adalah protein pembangun atau enzim
yang berperan dalam proses mitosis. Wijayani et al. (2007) menyebutkan bahwa
sitokinin juga memperpendek fase S yaitu dengan cara mengaktifkan DNA, sehingga
ukuran salinan DNA menjadi dua kali lebih besar sehingga menggandakan laju sintesis
DNA. Selain itu, Sitokinin dapat mempengaruhi ekspresi gen Knotted Like Homeobox
(KNOX) yang mengkode suatu protein yang berfungsi memacu pertumbuhan dan
pemeliharaan meristem ujung batang (MUB) supaya sel-selnya selalu bersifat
meristematik (Harni 2003).
Kristina & Syahid (2008) menyatakan bahwa kombinasi zat pengatur tumbuh
BA dengan TDZ dapat meningkatkan jumlah tunas yang terbentuk pada umur satu
hingga dua bulan setelah perlakuan. Menurut Watimena (1995), pengaruh sitokinin
dalam kultur jaringan tanaman dapat meningkatkan poliferasi tunas ketiak. Sitokinin
dapat menghambat dominansi tunas apikal dan merangsang poliferasi tunas ketiak serta

16

menginisiasi terbentuknya tunas ketiak baru. Sitokinin juga dapat menghambat

pembentukan akar dan memacu pembentukan klorofil pada kalus (Surachman 2011).
Hasil penelitian Seswita (2010) menyebutkan bahwa penambahan air kelapa
pada konsentrasi 15% sebagai substitusi ZPT sintetik Benzyl Adenin menghasilkan
multiplikasi tunas temulawak terbaik in vitro dengan rata-rata 3,4 tunas dalam waktu 2
bulan. Selanjutnya, Surachman (2011) menyebutkan penggunaan media MS ditambah
air kelapa 10% pada perbanyakan nilam secara in vitro menghasilkan persentase tunas
hidup rata-rata 100%, jumlah tunas 3, tinggi tunas 1,61 cm, dan jumlah daun 9,10,
paling baik dibanding perlakuan lainnya. Hal yang sama juga diteliti Kristina (2012)
dengan penambahan 15% air kelapa pada multiplikasi temulawak memberikan hasil
terbaik yaitu rata-rata 4,6 tunas dalam waktu 8 minggu dan keberhasilan aklimatisasi
sebesar 72%. Sedangkan Maltatula (2003) menyebutkan

media MS 50 % dengan

disubstitusi dengan air kelapa 50% memberikan hasil terbaik pada pertumbuhan
tanaman krisan (Chrysanthemum morifolium Ramat) secara in vitro dibanding dengan
perlakuan media MS 100 %.
Kerangka berfikir
Meningkatnya permintaan krisan,
belum terpenuhinya bibit secara
maksimal dan berkualitas

Perlu dilakukan budidaya

krisan untuk memenuhi
kebutuhan

Air kelapa
mengandung
sitokinin

Perbanyakan secara konvensional

memiliki banyak faktor pembatas

BA (Benzil
adenin)

Perbanyakan bibit krisan

dengan teknik kultur jaringan

merangsang sitokinesis
dan pertunasan

Multiplikasi tunas secara

langsung

Menghambat dominansi
tunas apikal

Muncul tunas lateral baru dalam

jumlah banyak dengan keadaan
yang normal

Merangsang dan menginisiasi

proliferasi tunas lateral

Gambar 4. Kerangka berfikir

17

B.

Hipotesis
Berdasarkan tinjauan pustaka tersebut, maka dapat dirumuskan hipotesis

sebagai berikut:
1.

BA berpengaruh sigfikan terhadap multiplikasi krisan secara in vitro.

2.

Air kelapa berpengaruh signifikan terhadap multiplikasi krisan secara in vitro.

3.

Interaksi antara BA dan air kelapa berpengaruh signifikan terhadap multiplikasi

krisan secara in vtro.

4.

Interaksi antara BA dan air kelapa pada konsentrasi tertentu dapat mengefektifkan
multipikasi krisan secara in vitro.

BAB III
METODE PENELITIAN

A.

Waktu dan Lokasi Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Kultur Jaringan Tumbuhan, Jurusan

Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri

Semarang pada bulan Oktober-Desember 2013.
B.

Sample Penelitian
Bahan penelitian yang digunakan adalah meristem lateral krisan yang sebelumnya

telah dipelihara secara in vitro.

C.

Alat dan Bahan Penelitian

1. Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah:
a. Alat gelas terdiri atas: gelas kimia, erlenmeyer ukuran 1 liter, gelas ukur dengan
skala 50 ml, batang pengaduk, botol kultur dengan diameter 2 cm, pipet dan cawan
petri.
b. Laminar Air Flow (LAF) cabinet sebagai meja steril yang dilengkapi dengan blower
vertikal dan lampu UV (Argatama tipe vertikal).
c. Autoclave manual bertekanan 20 psi,bersuhu 121C dan berbahan bakar gas.
d. Kertas pH indikator.
e. Shaker listrik dengan kecepatan 151 rpm (Barnstead).
f. Neraca analitik dengan ketelitian 0.01 gr (Kern).
g. Alat deseksi yang terdiri atas: pinset, gunting, skapel, pinset dan pisau tanam.
2. Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah:

18

19

a. Eksplan berupa meristem lateral krisan sepanjang 2 cm yang telah dipelihara secara in
vitro.
b. Akuades.
c. BA (Merck) 0 ppm, 0.5 ppm, 1 ppm, 1.5 ppm.
d. Air kelapa kelapa muda yang diindikasikan dengan air kelapa yang masih memenuhi
buah dan daging buah yang masih berlendir.
e. Gula pasir 30 g/L.
f. Agar 7,5 g/L.
g. Mikronutrien komposisi media MS (Merck).
h. Makronutrien komposisi media MS (Merck).
i. Vitamin komposisi media MS (Merck).
j. Bahan sterilan

eksplan berupa:

bakterisida, fungisida,

tween20,

detergen

cair,betadine dan clorox.

k. Myo-inositol

D.
1.

Variabel Penelitian
Variabel Bebas
Dalam penelitian ini variabel yang diteliti sebagai berikut:

a. Konsentrasi air kelapa: 5%, 10%, 15%, 20%, 25% (Surachman 2010) .
b. Konsentrasi sitokinin (BA): 0, 0,5, 1, 1,5 ppm (Seswita 2010).
2. Variabel tergantung
a. Tinggi tunas
Tinggi tunas adalah ukuran panjang batang yang diukur dari pangkal batang hingga
ujung batang.
b. Jumlah daun.
Jumlah daun dihitung berdasarkan daun pada tiap tunas dan diukur dari berapa
banyak jumlah daun yang muncul dan membuka.

c. Jumlah Tunas
Jumlah tunas dihitung berdasarkan banyaknya tunas lateral yang muncul.
d. Kenampakan visual kultur

20

Kenampakan visual adalah kenampakan fisik dari tiap tunas yang tumbuh sehingga
dapat diamati secara visual. Visual kultur tunas diamati berdasarkan warna, teksur
dan normalitas daun serta morfologi tunas.
3.

Variabel kendali

a. Suhu ruang tanam dan ruang inkubasi 240-260C.

b. pH media MS.
c. Cahaya 1000 lux atau setara dengan 1 lampu TL 40 Watt.
E.

Rancangan Penelitian
Dalam penelitian ini rancangan penelitian yang digunakan adalah Rancangan

Acak Lengkap (RAL) faktorial dengan mengkombinasikan 2 faktor pengamatan, faktor

pertama adalah konsentrasi BA dengan 4 taraf perlakuan, sedangkan faktor kedua adalah
konsentrasi air kelapa dengan 5 taraf perlakuan. Unit penelitian adalah satu botol kultur
dengan satu eksplan setiap botol. Penelitian ini dilakukan dengan 3 ulangan, sehingga
total botol yang digunakan dalam penelitian berjumlah 60 botol.

21

Rancangan percobaan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut

Tabel 1. Rancangan Percobaan substitusi BA dengan air kelapa terhadap
multiplikasi krisan secara in vitro.
Konsentrasi BA

air kelapa (K)

5%(K1) 10%(K2)

15%(K3)

20%(K4)

25%(K5)

0 ppm (B0)

B0K1

B0K2

B0K3

B0K4

B0K5

0.5 ppm (B1)

B1K1

B1K2

B1K3

B1K4

B1K5

1 ppm (B2)

B2K1

B2K2

B2K3

B2K4

B2K5

1.5 ppm (B3)

B3K1

B3K2

B3K3

B3K4

B3K5

Denah penelitian dalam penelitian ini adalah sebagai berikut:

B2K2c

B2K1a

B2K1c

B1K5b

B1K4c

B2K1b

B2K1a

B0K5c

B1K4b

B2K2a

B1K4a

B0K4b

B3K2b

B3K3a

B1K5c

B2K4c

B3K2c

B2K3c

B1K2c

B3K2a

B3K5b

B0K5b

B1K5a

B3K5a

B1K3c

B1K3a

B3K1a

B1K2b

B3K4b

B2K5b

B0K4c

B3K4c

B3K3b

B0K5a

B2K5a

B2K2b

B2K3b

B1K3b

B2K4b

B0K1c

B2K4a

B2K3a

B0K3b

B2K5c

B1K1b

B3K5c

B0K2c

B0K3a

B1K2a

B0K4a

B3K3c

B0K2b

B0K1a

B0K2a

B3K4a

B3K1b

B3K1c

B0K3c

B1K1c

B0K1b

Gambar 5. Denah pengacakan multiplikasi krisan secara in vitro.

Keterangan:
B0:konsentrasi BA 0 ppm.
B1:konsentrasi BA 0.5 ppm.
B2:konsentrasi BA 1 ppm.
B3:konsentrasi BA 1.5 ppm

K1: konsentrasi air kelapa 5%

K2: konsentrasi air kelapa 10%
K3: konsentrasi air kelapa 15%
K4: konsentrasi air kelapa 20%
K5: konsentrasi air kelapa 25%

22

F.

Langkah Kerja
Langkah kerja dalam penelitian ini adalah sebagai berikut:

1.

Persiapan

2.

Sterilisasi alat
Alat penelitian berupa satu set alat deseksi (pinset, skapel, gunting dan pisau),
botol kultur dengan diameter 3 cm serta cawan petri, dicuci dan dibersihkan
dengan sabun, dibilas dengan air mengalir kemudian dimasukkan

kedalam

autoclave dan dipanaskan dengan suhu 121C selama 1 jam.

3.

Persiapan & pembuatan media

Bahan yang terdiri atas larutan stok disiapkan, diukur sesuai dengan ukuran
pembuatan media (1 liter), ditambahkan gula sebanyak 30 gram. Media MS yang
telah dibuat kemudian ditambahkan BA dan air kelapa pada konsentrasi sesuai
dengan perlakuan yang diberikan.

4.

Pemasakan media
Larutan media tiap perlakuan dimasak didalam panci selama 5 menit,
ditambahkan agar, diaduk hingga jernih dan homogen selama 15 menit. Media
perlakuan yang telah dimasak kemudian dituang kedalam botol kultur steril dan
ditutup dengan plastik tahan panas dengan bantuan karet gelang.

5.

Sterilisasi media
Media yang telah dituang kedalam masing-masing botol kultur kemudian
dimasukkan kedalam autoclave dan disterilisasi dengan suhu 121C dalam
tekanan 20 psi selama 20 menit. Media yang telah disterilkan kemudian di
pindahkan di ruang media steril.

6.

Penyiapan eksplan
Eksplan berasal dari tunas apikal tanaman krisan yang diambil dari lahan petani di
desa Jimbaran kec. Bandungan kab. Semarang. Eksplan ini berupa stek pucuk
sepanjang 5 cm. Untuk menjaga kesegaran eksplan, eksplan tersebut dipotong
bagian daunnya kemudian di bungkus dengan kertas tissu yang dibasahi kemudian
disimpan dalam suhu 23-26 C.

7.

Sterilisasi permukaan eksplan

23

Sterilisasi permukaan eksplan dilakukan dengan tujuan untuk menghilangkan

kontaminan yang berasal dari lapangan. Sterilisasi ini dilakukan dengan 3
tahapan. Tahap pertama eksplan dimasukkan kedalam botol kultur steril,
ditambahkan air steril sebanyak 300 ml, ditambahkan sabun cair sebanyak 3 tetes
+ 3 tetes twin 20 dan digojok selama 15 menit menggunakan shaker dengan
kecepatan 151 rpm. Eksplan dibilas dengan aquades steril sebanyak 2-3x. Tahap
sterilisasi kedua yaitu penambahan betadine sebanyak 10 tetes + 2 tetes tween20
dalam 200 ml air steril kemudian digojog dengan shaker selama 20 menit. Tahap
sterilassi yang ketiga dilakukan dengan cara menambahkan fungisida dan
bakterisida sebanyak 1 gr/300 ml + 2 tetes tween20 kedalam beaker glas yang
berisi eksplan kemudian dishaker kembali selama 20 menit. Eksplan dibilas
dengan aquades steril sebanyak 3-4 kali. kemudian dibawa ke ruang LAF untuk
disterilasi tahap kedua.
8.

Persiapan dan penyiapan LAF

Alat dan bahan penelitian yang terdiri atas: lampu bunsen dan korek,media kultur,
alat deseksi, clorox 5 %, tween 20, botol kosong, 100 ml alkohol 96%, aquades
steril serta alat tambahan seperti tisu dan karet gelang dimasukkan dalam LAF
untuk disinari dengan lampu UV selama 1 jam.

9.

Sterilisasi eksplan dalam LAF

Clorox 5%+ 2 tetes tween dituangkan kedalam botol eksplan dan digojog selama
15 menit, dibilas dengan aquades steril sebanyak 3-4 kali.

10.

Penanaman eksplan
Eksplan dipotong 2 cm diatas petridisk dengan bantuan scapel dan pinset.
Sebelum digunakan, pinset dan scapel dimasukkan kedalam alkohol 96% dan
dibakar diatas bunsen. Potongan eksplan siap ditanam dalam media kultur dengan
1 buah eksplan dalam satu botol kultur.

11.

Perbanyakan eksplan secara in vitro.

Perbanyakan eksplan secara in vitro dilakukan didalam ruang inkubator guna
mendapatkan eksplan steril yang lebih banyak sebagai bahan penelitian.
Perbanyakan secara in vitro dilakukan di ruang inkubator pada suhu 24-26C dan
40 watt cahaya lampu TL. Waktu yang dibutuhkan pada tahap ini adalah 2 bulan.

24

12.

Subkultur ke media perlakuan

Subkultur dilakukan didalam LAF guna memindahkan eksplan steril hasil
perbanyakan in vitro. Pada tahap ini, eksplan hasil perbanyakan dipotong
sepanjang 2 cm kemudian ditanam kedalam media perlakuan.

13. Inkubasi multiplikasi dan pengamatan

Inkubasi dilakukan didalam ruang inkubator pada suhu 24-26C dengan
pencahayaan lampu TL sebesar 40 watt. Inkubasi dilakukan guna mendapatkan
tunas hasil multiplikasi pada medium perlakuan. Inkubasi multiplikasi dilakukan
selama 2 bulan, kemudian pengamatan dan pengambilan data dimulai pada satu
hari setelah tanam (HST).
G.

Analisis Data
Data pengamatan yang diperoleh dari penelitian ini terdiri atas data kuantitatif

dan kualitatif. Data pengamatan dalam bentuk kualitatif adalah kenampakan visual
planlet yaitu data yang diperoleh secara deskriptif dari keadaan tunas yang tumbuh per
satuan perlakuan. Sedangkan data kuantitatif terdiri atas 1) Tinggi tunas, 2) Jumlah
tunas, 3) Jumlah daun,
Data pengamatan hasil multiplikasi yang telah didapat kemudian dianalisis
menggunakan program SPSS 16 dengan analisis uji ANAVA dua jalan untuk melihat
pengaruh tiap perlakuan. Jika hasil uji Anava signifikan maka dilakukan uji BNT (Beda
Nyata Terkecil) dengan tingkat kepercayaan 95%. Perlakuan dinyatakan berbeda nyata
apabila perbedaannya melebihi nilai BNT yang dihitung (Gomes & Gomes 1995).
Dalam penelitian ini, beda nyata antar perlakuan dinotasikan dengan huruf yang
berbeda.

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Penelitian
Hasil penelitian efektivitas subtitusi sitokinin dengan air kelapa terhadap
multiplikasi tunas Chrysanthemum indicum L., pada parameter pengamatan tinggi tunas,
jumlah daun dan jumlah tunas tersaji pada Tabel 2, 3 dan 4.
Tabel 2. Rerata tinggi tunas hasil multiplikasi Chrysanthemum indicum L. pada
berbagai konsentrasi BA dan air kelapa
konsentrasi BA
(ppm)
0
0.5
1.0
1.5
Rata-rata

konsentrasi air kelapa (%)

5
10
15
20
25
6.57 3.13 2.33 2.80 1.90
2.17 2.20 3.43 2.70 2.27
5.03 1.83 3.13 2.47 1.03
3.33 2.90 2.53 2.00 1.80
4.27 2.52 2.86 2.49 1.75

Rata-rata
3.35
2.55
2.70
2.51
2.78

Data pada Tabel 2 menunjukkan bahwa tinggi tunas cenderung semakin

menurun seiring bertambahnya konsentrasi BA dan air kelapa pada medium perlakuan.
Untuk mengetahui pengaruh substitusi sitokinin dengan air kelapa serta interaksinya
terhadap tinggi tunas, data diuji dengan analisis varian (ANAVA) dua jalan (Tabel 5).
Tabel 3. Rerata jumlah daun pada tunas hasil multiplikasi Chrysanthemum indicum L.
dalam berbagai konsentrasi BA dan air kelapa
konsentrasi
konsentrasi air kelapa (%)
Rata-rata
BA (ppm)
5
10
15
20
25
0
21.67
22.00 23.33 21.67 10.33
19.80
0.5
32.67
21.00 32.00 24.67 16.33
25.33
1.0
15.33
23.67 23.67 24.00 10.67
19.47
1.5
23.33
28.00 19.33 15.33
8.33
18.87
Rata-rata
18.60
18.93 19.66 17.13 9.13
20.87
Data pada Tabel 3 menunjukkan bahwa jumlah daun cenderung meningkat
pada konsentrasi BA 0.5 ppm dengan kombinasi air kelapa 15% dan cenderung
mengalami penurunan seiring bertambahnya konsentrasi BA dan air kelapa. Untuk
mengetahui pengaruh substitusi sitokinin dengan air kelapa serta interaksinya terhadap

25

26

jumlah daun pada tiap tunas, selanjutnya data diuji dengan analisis varian (ANAVA)
dua jalan (Tabel 5).
Tabel 4. Rerata jumlah tunas hasil multiplikasi Chrysanthemum indicum L. pada
berbagai konsentrasi BA dan air kelapa
konsentrasi BA
konsentrasi air kelapa (%)
Rata-rata
(ppm)
5
10
15
20
25
0
0.67 1.00 2.33 1.33 0.67
1.20
0.5
3.33 2.00 2.00 1.00 2.33
2.13
1.0
1.33 1.67 2.00 1.67 1.33
1.60
1.5
1.67 1.67 1.33 1.33 0.67
1.33
Rata-rata
1.40 1.27 1.53 1.07 1.00
1.57
Data pada Tabel 4 menunjukkan bahwa jumlah tunas yang muncul pada tiap
eksplan cenderung meningkat pada konsentrasi BA 0.5 ppm dengan kombinasi air
kelapa 15% dan cenderung mengalami penurunan seiring bertambahnya konsentrasi BA
dan air kelapa. Untuk mengetahui pengaruh substitusi sitokinin dengan air kelapa serta
interaksinya terhadap jumlah tunas pada tiap eksplan, maka selanjutnya data diuji
dengan analisis varian (ANAVA) dua jalan (Tabel 5).
Tabel 5. Ringkasan hasil ANAVA dua jalan untuk menguji efektivitas substitusi
sitokinin dengan air kelapa serta interaksinya terhadap parameter pengamatan
tinggi, jumlah tunas dan jumlah daun pada tunas Chrysanthemum indicum L.
Sumber
Variabel
Jumlah Df
Rerata
F
Sig.
Terikat
konsentrasi

Tinggi eksplan

BA

Interaksi

Kuadrat

7.052

2.351

1.719

0.175

Jumlah daun

370.333

123.444

0.039*

Jumlah tunas

1.25

0.417

0.807

0.049*

42.695

10.674

7.804

0**

Jumlah daun

1740.9

435.225

10.578

0**

Jumlah tunas

8.9

2.225

4.312

0.004**

84.793

19

4.463

4.948

0**

Jumlah daun

3188.07

19

167.793

6.316

0**

Jumlah Tunas

18.983

19

0.999

2.22

0.017**

Konsentrasi Tinggi eksplan

Air Kelapa

Kuadrat

Tinggi eksplan

Tanda (**) menunjukkan sangat signifikan, tanda (*) menunjukkan signifikan.

Tabel 5 menunjukkan hasil ANAVA dua jalan untuk parameter tinggi tunas,
jumlah tunas dan jumlah daun pada tingkat signifikasi 5%.

Penambahan BA

27

berpengaruh signifikan terhadap jumlah daun dan jumlah tunas namun tidak
berpengaruh signifikan terhadap tinggi tunas. Penambahan air kelapa menunjukkan
adanya pengaruh sangat signifikan terhadap tinggi tunas, jumlah daun dan jumlah tunas.
Interaksi antara BA dan air kelapa menunjukkan adanya pengaruh sangat signifikan
terhadap semua parameter multiplikasi. Untuk mengetahui konsentrasi air kelapa dan
BA serta interaksi yang efektif terhadap parameter pengamatan, maka dilakukan uji
BNT yang disajikan pada Tabel 6, 7, 8.
Tabel 6. Uji BNT pengaruh berbagai konsentrasi BA terhadap jumlah tunas dan
jumlah daun pada multiplikasi Chrysanthemum indicum L. secara in vitro.
Konsentrasi BA
Jumlah daun
Jumlah tunas
(ppm)
0
19.80b
1.20b
0.5
25.33a
2.13a
1.0
19.47b
1.60b
c
1.5
18.87
1.33b
Angka yang diikuti oleh notasi huruf yang berbeda pada kolom yang
sama berarti berbeda signifikan pada uji BNT 5%. Hasil paling efektif
ditunjukkan dengan notasi huruf a.
Data hasil uji BNT pada Tabel 6 menunjukkan bahwa penambahan BA pada
konsentrasi 0.5 ppm berpengaruh paling efektif terhadap jumlah daun dan jumlah tunas
pada multiplikasi Chrysanthemum Indicum L. secara in vitro.

Tabel 7. Uji BNT pengaruh berbagai konsentrasi air kelapa terhadap tinggi tunas,
jumlah tunas dan jumlah daun pada multiplikasi Chrysanthemum indicum L
secara in vitro.
Konsentrasi Air
Tinggi (cm)
Jumlah daun
Jumlah tunas
Kelapa (%)
5
4.27a
18.60a
1.40a
10
2.52b
18.93a
1.27a
b
a
15
2.86
19.66
1.53a
17.13b
1.07b
20
2.49c
d
c
25
1.75
9.13
1.00b
Angka yang diikuti oleh notasi huruf yang berbeda pada kolom yang sama, berarti
berbeda signifikan pada uji BNT 5%. Hasil paling efektif ditunjukkan dengan notasi
huruf a.
Data hasil uji BNT pada Tabel 7 menunjukkan bahwa air kelapa pada
konsentrasi 5% berpengaruh paling efektif terhadap tinggi tunas. Pada parameter

28

pengamatan terhadap jumlah daun dan jumlah tunas, air kelapa berpengaruh efektif
pada rentang konsentrasi 5%-15%.

Tabel 8. Pengaruh interaksi berbagai kombinasi BA dan air kelapa terhadap parameter
multiplikasi Chrysanthemum indicum L secara in vitro.
Perlakuan
tinggi (cm)
Jumlah Daun
Jumlah tunas
c
a
B0K1
0.67d
21.67
6.57
B0K2
3.13b
22.00c
1.00cd
c
bc
B0K3
2.33
23.33
2.33b
B0K4
2.80c
21.67c
1.33c
d
e
B0K5
1.90
10.33
0.67d
B1K1
2.17c
32.67a
3.33a
c
c
B1K2
2.20
21.00
2.00b
B1K3
3.43b
32.00a
3.00a
c
b
B1K4
2.70
24.67
1.00c
B1K5
2.27c
16.33d
2.33b
d
B2K1
1.33c
15.33
5.03ab
B2K2
1.83d
23.67bc
1.67bc
B2K3
3.13b
23.67bc
2.00b
c
b
B2K4
2.47
24.00
1.67bc
B2K5
1.03d
10.67e
1.33c
b
bc
B3K1
3.33
23.33
1.67bc
B3K2
2.90c
28.00b
1.67bc
c
cd
B3K3
2.53
19.33
1.33c
B3K4
2.00cd
15.33d
1.33c
d
e
B3K5
1.80
8.33
0.67d
Angka yang diikuti oleh notasi huruf yang berbeda pada kolom yang sama berarti
berbeda signifikan pada uji BNT 5%. Hasil paling efektif ditunjukkan dengan
notasi huruf a.
Data pada Tabel 8 menunjukkan bahwa interaksi 0 ppm BA dengan 5% air
kelapa (B0K1) dan 1.5 ppm BA dengan 5% air kelapa (B2K1) berpengaruh efektif
terhadap tinggi eksplan. Pada parameter pengamatan jumlah tunas dan jumlah daun,
konsentrasi 1 ppm BA dengan 5% air kelapa dan 1 ppm BA dengan 15% air kelapa
berpengaruh paling efektif.

29

a
Gambar 6. Multiplikasi krisan pada media B0K2 (a) dan B1K3 (b)

Tabel 9. Analisis deskriptif visual multiplikasi tunas Chrysanthemum indicum L

konsentrasi BA
Konsentrasi air kelapa(%)
(ppm)
5 (K1)
10 (K2)
15 (K3)
20 (K4)
25 (K5)
Warna daun
++++
++++
+++
+++
+++
0 (B0)
++++
++
+++
++
+
0.5 (B1)
++++
++++
++++
++++
+++
1.0 (B2)
+++
+++
+++
+++
++
1.5 (B3)
Normalitas dan morfologi daun
++++
++++
+++
+++
+++
0 (B0)
++++
++
+++
++
+
0.5 (B1)
++++
++++
++++
++++
+++
1.0 (B2)
+++
+++
+++
+++
++
1.5 (B3)
0 (B0)
0.5 (B1)
1.0 (B2)
1.5 (B3)

++++
++++
++++
+++

Keterangan
Warnadaun
++++=Hijautua
+++=Hijaumuda
++=Hijaukekuningan
+=Kuningkecokelatan

Tekstur batang
++++
+++
++
+++
++++
++++
+++
+++
Morf.&normalitasdaun
++++=lebarbergerigi
+++=sempitbergerigi
++=lebartidakbergerigi
+=sempittidakbergerigi

+++
++
++++
+++

+++
+
+++
++

Teksturbatang
++++=hijautua
+++=hijaumuda
++=hijaukekuningan
+=kuningkecokelatan

30

Pada Tabel 9 dapat dideskripsikan bahwa kenampakan visual eksplan krisan

bervariasi bergantung pada perlakuan yang diberikan. Semakin tinggi tingkat solut
dalam media, menunjukkan tingkat visual tunas yang semakin menurun.

B. Pembahasan
Hasil ANAVA dua jalan menunjukkan bahwa konsentrasi BA dan air kelapa
menghasilkan tingkat efektivitas hasil multiplikasi yang berbeda. Uji ANAVA dua jalan
pada BA menunjukkan bahwa BA hanya berpengaruh signifikan terhadap jumlah daun
dan tunas,namun tidak berpengaruh signifikan terhadap tinggi planlet. Sedangkan uji
ANAVA pada air kelapa dan interaksinya berpengaruh terhadap tinggi planlet,jumlah
tunas dan daun secara signifikan
4. Pengaruh BA terhadap multiplikasi.
Setiap tumbuhan memiliki kandungan ZPT endogen pada kadar yang berbeda di
dalam tubuhnya. Akba et al. (2009) menyebutkan bahwa BA merupakan salah satu jenis
sitokinin yang dibutuhkan dalam multiplikasi tunas dari jaringan dewasa dalam medium
MS. Menurut Seswita (2010) Benzil Adenin (BA) merupakan salah satu jenis sitokinin
yang berperan dalam proses pembelahan sel. Pemberian BA secara eksogen
menyebabkan peningkatan konsentrasi sitokinin endogen sehingga dapat meningkatkan
aktivitas pembelahan sel .
Proses pembelahan sel pada tanaman dipengaruhi oleh enzim Cyclin-dependent
kinase (CDK). Protein kinase adalah enzim yang memfosforilasi protein menggunakan
ATP. Enzim ini mempengaruhi peralihan fase dari G1 ke S dan G2 ke M dalam siklus
pembelahan sel. Peralihan dari fase G1S diatur oleh cyclin-D (CYCD). Kerja enzim
CYCD dipengaruhi oleh faktor eksternal yaitu hormon dan sukrosa. Adanya sukrosa
dan hormon akan menginisiasi terbentuknya kompleks aktif antara CDK dan CYCD.
Kompleks tersebut akan mengaktifkan promotor E2F sehingga mengaktifkan gen-gen
transkripsi yang terlibat pada siklus pembelahan fase S. Sedangkan peralihan fase G2-M
dipengaruhi oleh adanya aktivitas CDK-CYC. Peningkatan aktivitas kompleks CDKCYC selama fase G2 akan mempercepat peralihan dari fase G2 ke M (Pereira et al.
2012).
Berdasarkan hasil ANAVA diketahui bahwa BA berpengaruh signifikan terhadap
jumlah tunas dan jumlah daun, namun tidak signifikan terhadap tinggi tunas. Menurut
Abidin (1985) hal ini dikarenakan BA tidak berperan dalam proses pengembangan dan

31

pemanjangan sel. Hormon pada tumbuhan yang berperan dalam pemanjangan dan
pengembangan sel adalah auksin. Penambahan BA secara eksogen dalam medium
dimungkinkan mempengaruhi aktivitas auksin sehingga tidak terjadi pengembangan dan
pemanjangan sel secara signifikan.
Berdasarkan uji BNT diketahui bahwa BA pada konsentrasi 0.5 ppm berpengaruh
signifikan terhadap peningkatan jumlah tunas sebesar 2.13 dan jumlah daun sebanyak
25.33. Hal ini dikarenakan penambahan BA secara eksogen pada konsentrasi tertentu
dapat meningkatkan konsentrasi endogen sehingga pertumbuhan tunas dan daun dapat
berlangsung lebih efektif. Abidin (1985) menyebutkan bahwa apabila konsentrasi
sitokinin lebih besar dari auksin maka akan menstimulasi pertumbuhan tunas dan daun.
Selain itu, Nimah et al. (2012) menyeebutkan bahwa sitokinin dapat menghambat
dominansi apikal dan merangsang proliferasi tunas ketiak dan munculnya tunas-tunas
ketiak baru sehingga secara signifikan dapat meningkatkan jumlah tunas ketiak.
Semakin banyaknya tunas ketiak yang muncul akan meningkatkan jumlah nodus pada
eksplan sehingga, peningkatan jumlah tunas berbanding lurus dengan peningkatan
jumlah daun.
Hasil uji BNT menyebutkan bahwa konsentrasi BA diatas 0.5 ppm menyebabkan
jumlah tunas dan jumlah daun semakin menurun. Wattimena (1988) menyebutkan
bahwa ZPT pada tanaman hanya akan bekerja efektif pada konsentrasi tertentu. Selain
itu, Magdalena et al. (2002) menyebutkan bahwa penambahan sitokinin eksogen secara
berlebih justru dapat menghambat sintesis sitokinin endogen sehingga mengganggu
proses pembelahan sel.

5. Pengaruh air kelapa terhadap multiplikasi

Berdasarkan uji ANAVA diketahui bahwa air kelapa berpengaruh secara
signifikan terhadap semua parameter pengamatan (tinggi, jumlah tunas dan jumlah
daun) pada Chrysanthemum indicum L. Hal ini dikarenakan penambahan air kelapa
dalam media kultur berarti menambahkan nutrisi pada tanaman. Berdasarkan hasil
analisis Kristina & Syahid (2012) dalam satu liter air kelapa tidak hanya mengandung
ZPT tetapi juga mengandung mineral lain seperti thiamin, piridoksin dan hara makro
(N,P,K).

32

Kompleksitas kandungan hormon dan mineral dalam air kelapa mengakibatkan air
kelapa lebih mempengaruhi multiplikasi secara signifikan jika dibandingkan dengan
penambahan BA. Walaupun air kelapa mengandung ZPT alami yang bersifat termolabil,
namun perlakuan autoclave tidak mengurangi aktivitasnya dalam proses pembelahan sel
sehingga multiplikasi tunas dapat tetap berjalan efektif (Seswita 2010).
Berdasarkan uji BNT diketahui bahwa air kelapa pada konsentrasi rendah (5%)
berpengaruh paling efektif terhadap pertumbuhan tinggi tunas krisan sebesar 4.27 cm.
Hal ini dimungkinkan karena penambahan air kelapa pada konsentrasi ini menyebabkan
pembelahan dan pembentangan sel berlangsung lebih optimal. Maltatula (2003)
menjelaskan bahwa penambahan air kelapa dalam media tanam dengan kadar yang
rendah justru akan membantu proses pertumbuhan vegetatif tanaman karena kandungan
N yang dibutuhkan oleh tanaman krisan cukup.
Uji BNT menyebutkan bahwa penambahan konsentrasi air kelapa sebesar
5%,10% dan 15% menunjukkan adanya respon yang sama yaitu berpengaruh efektif
terhadap pertumbuhan jumlah tunas 1.27-1.53 dan jumlah daun sebanyak 18.60-19.66.
Hal ini menunjukkan bahwa penambahan konsentrasi air kelapa yang berbeda
menunjukkan respon tumbuh yang berbeda pula. Air kelapa pada konsentrasi rendah
berpengaruh efektif terhadap pertumbuhan tinggi tunas, sedangkan pada konsentrasi
tinggi berpengaruh efektif terhadap pertumbuhan jumlah tunas dan jumlah daun.
Seswita (2010), Kristina & Syahid (2010) menyebutkan bahwa air kelapa pada kisaran
konsentrasi 15% merupakan konsentrasi yang efektif dalam mendukung pertumbuhan
kultur pada umur 2 bulan. Penambahan air kelapa pada konsentrasi diatas 15%
menyebabkan penurunan respon tumbuh tunas.
6. Interaksi BA dengan air kelapa
Substitusi sitokinin dengan air kelapa berarti membandingkan efektivitas
penggunaan BA dan air kelapa dalam mempengaruhi multiplikasi tunas krisan secara in
vitro. Penambahan BA pada medium multiplikasi menyebabkan bertambahnya biaya
produksi bibit krisan sehingga mempengaruhi harga jual bibit dipasaran. Oleh karena itu
penambahan air kelapa diharapkan dapat mengganti peran BA terhadap multiplikasi
tunas krisan sehingga dapat menurunkan biaya produksi bibit. Siantiavira et al. (2012)
menyebutkan bahwa dalam produksi tanaman secara massal, efisiensi biaya produksi
dalam perbanyakan kultur in vitro merupakan salah satu pertimbangan penting.

33

Efisiensi tersebut diantaranya dilakukan dengan cara subtitusi media sederhana yang
bertujuan untuk mengurangi biaya produksi.
Berdasarkan hasil uji ANAVA dapat diketahui bahwa interaksi antara BA dan air
kelapa menunjukkan respon signifikan terhadap semua parameter pengamatan yaitu
tinggi tunas, jumlah tunas dan jumlah daun. Hal ini menunjukkan penambahan BA dan
air kelapa yang dikombinasikan dalam media dapat mempengaruhi respon multiplikasi
secara signifikan.
Hasil uji BNT menyebutkan bahwa interaksi antara BA dan air kelapa memiliki
kadar efektif yang berbeda pada parameter pengamatan. Interaksi antara BA 0 ppm
dengan air kelapa 5% berpengaruh efektif terhadap parameter rataan tinggi tunas
sebesar 6.57 cm. Hal ini tidak berbeda nyata pada penambahan BA 1 ppm yang
diinteraksikan dengan air kelapa pada konsentrasi 5% yaitu adanya penambahan rataan
tinggi tunas sebesar 5.03 cm. Berdasarkan hasil analisis tersebut dapat disimpulkan
bahwa air kelapa 5% dapat efektif mensubtitusi secara menyeluruh penggunaan BA
pada parameter tinggi tunas. Hal ini dikarenakan air kelapa mengandung 273.62 mg/L
kinetin dan 290.47 mg/L zeatin sehingga dapat mempengaruhi tinggi tunas (Kristina &
Syahid 2010)
Hasil BNT menyebutkan bahwa interaksi antara BA 0.5 ppm dengan air kelapa
5% air kelapa berpengaruh paling efektif terhadap pertambahan rataan jumlah tunas
sebesar 3.33 dan jumlah daun sebanyak 32.67. Hal ini tidak berbeda nyata pada
penambahan BA 0.5 ppm yang dinteraksikan dengan air kelapa pada konsentrasi 15%
yaitu adanya penambahan rataan jumlah tunas sebesar 3.00 dan jumlah daun sebanyak
32.00. Berdasarkan hasil analisis tersebut dapat disimpulkan bahwa dalam
mengefektifkan pertumbuhan jumlah tunas dan jumlah daun hasil multiplikasi secara in
vitro, air kelapa hanya dapat mensubtitusi sebagian penggunaan BA. Hal ini
dimungkinkan karena ikatan adenin pada sitokinin sintetik (BA) dapat meningkatkan
pembelahan sel secara efektif apabila dibandingkan dengan sitokinin alami yang
terdapat pada air kelapa (Abidin 1985).
7. Kenampakan visual planlet
Berdasarkan Tabel 9 dapat diketahui bahwa pemberian perlakuan yang berbeda
pada medium multiplikasi krisan dapat memberikan respon visual yang berbeda pula.

34

H
Hasil
analisis pada Tabel
T
9 Peenambahan BA pada medium multiplikasi
m
menun
njukkan resp
pon positif teerhadap warrna daun. Peenambahan B
BA menyebaabkan daun
berwarna hijau mudam
hijauu tua. Hal ini dikareenakan sitokkinin berperan dalam
nsi (penuaann) sel dengaan mengham
mbat perombaakan butirmempperlambat proses senesen
butir klorofil
k
dann protein daalam sel (W
Wattimena 19991). Warnaa hijau tua pada daun
didugaa akibat kanddungan kloro
ofil yang tinnggi. Dalam Lizawati (20012) warna daun
d
hijautua diaakibatkan kaarena adanyaa krolofil-a ppada daun.
B
Berdasarkan
n Tabel 9 dapat
d
disimp
mpulkan bahw
wa penambbahan air keelapa pada
mediuum memberiikan respon
n terbaik terrhadap norm
malitas dan morfologi daun serta
teksturr batang. Hal
H ini dikarrenakan adaanya kandunngan kadar gula tinggi dalam air
kelapaa yang bervaariasi yakni glukosa 34-45%, sukrossa 18-53% ddan fruktosaa dari 12%36% (Kristina & Syahid
S
2010
0). Sukrosa memiliki
m
bebberapa perann penting dallam media,
mber karbonn, sumber eenergi, peng
gatur tekanaan osmotik,, mengatur
yaitu sebagai sum
stabilisasi membrran, dan berrperan sebaagai pelindung terhadapp stres. Peraan sukrosa
m mengatur tekanan osmotik m
mempengaruhhi kemamppuan jaringgan dalam
dalam
d
media ke
k dalam taanaman sehiingga membberikan resppon positif
penyerrapan air dari
terhaddap tekstur tuunas hasil mu
ultiplikasi krrisan secara in vitro.
B
Berdasarkan
n data yang telah diperooleh, penamb
bahan air keelapa pada konsentrasi
k
yang semakin
s
tingggi menyebaabkan warnaa daun kuninng kecoklataan dan morffologi daun
tidak normal
n
(Gam
mbar 7).

Gam
mbar 7. Ken
nampakan visual daunn hasil muultiplikasi C
Chrysanthem
mum
indiccum L. pada media B1K
K3 (a) dan B11K5 (b)

35

Menurut Maltatula (2003), Kandungan nitrogen dalam media tanam dengan kadar
yang seimbang (cukup) akan membantu proses pembentukan klorofil, namun kadar N
yang berlebih akan mengakibatkan toksik pada tanaman. Perlakuan air kelapa dan BA
dalam konsentrasi

tinggi menyebabkan warna hijau muda-kuning hingga kuning

kecokelatan pada daun (Gambar 7b). Widiastoety (1987)

menyebutkan bahwa

perubahan warna pada eksplan yang ditanam secara in vitro menandakan telah terjadi
proses fisis dan kimia yang energinya didapatkan dari media.
Perubahan warna daun hasil multiplikasi dimungkinkan karena tunas krisan tidak
dapat menyerap unsur hara secara maksimal. Hal ini dikarenakan penambahan air
kelapa konsentrasi tinggi menyebabkan medium multiplikasi lebih pekat sehingga
menghambat penyerapan unsur P. Maltatula (2003) menerangkan bahwa tanaman yang
kekurangan P memperlihatkan daun berwana kekuningan serta tanaman menjadi kerdil.
Respon perubahan warna daun hasil multiplikasi tunas krisan pada media yang
mengandung air kelapa dengan konsentrasi tinggi dimungkinkan juga karena kelebihan
unsur hara. Hal ini dikarenakan, medium yang digunakan merupakan medium MS yang
ditambahkan dengan air kelapa. Kristina & Syahid (2010) menerangkan bahwa
pertumbuhan batang yang tidak normal dan daun yang berwarna hijau kecoklatan
mengindikasikan adanya kelebihan unsur hara pada medium multiplikasi.
Maltatula (2003) menerangkan bahwa apabila jumlah nitrogen lebih banyak jika
dibandingkan dengan unsur lainnya, maka tanaman akan menghasilkan protein lebih
banyak dan daun akan tumbuh lebih lebar. Oleh sebab itu, lebarnya daun yang tersedia
bagi proses fotosintesis sebanding dengan jumlah N yang tersedia. Akumulasi unsur N
dalam tanaman dapat mempengaruhi pertumbuhan dan metabolisme tanaman. hal ini
dikarenakan unsur N akan membentuk amoniak (NH3) yang bersifat toksik karena dapat
melewati membran - membran sel. Bagian luar membran klorofil impermeabel terhadap
NH4 tetapi dapat dilalui oleh NH3. Efek toksik N-NH4 diakibatkan karena kerja NH3
merupakan uncoupling factor dalam proses fosfolirasi di membran tilakoid kloroplas.
Sehingga apabila dibiarkan dalam waktu yang lama, medium dengan konsentrasi air
kelapa tinggi dapat menyebabkan kematian pada tunas krisan.
Kepekatan solut dalam medium multiplikasi menyebabkan tanaman cenderung
mengalami cekaman air. Banyo & Nio Song Ai (2011) menyebutkna tanaman yang
mengalami kekurangan air secara umum mempunyai ukuran yang lebih kecil

36

dibandingkan dengan tanaman yang tumbuh normal. Cekaman (stress) lingkungan

adalah kondisi lingkungan yang memberikan tekanan pada tanaman dan mengakibatkan
respons tanaman terhadap faktor lingkungan tertentu lebih rendah daripada respons
optimumnya pada kondisi normal. Respons tanaman yang mengalami kekurangan air
dapat mempengruhi perubahan di tingkat selular dan molekular yang ditunjukkan
dengan penurunan laju pertumbuhan, berkurangnya luas daun dan peningkatan rasio
akar dan tajuk.
Cekaman abiotik seperti kekeringan, kadar garam tinggi (salinitas), suhu tinggi
atau rendah, keasaman tanah, tercatat menurunkan hasil pertanian dunia hingga lebih
dari 50%. Kekurangan air mempengaruhi semua aspek pertumbuhan tanaman, yang
meliputi proses fisiologi, biokimia, anatomi dan morfologi. Pada saat kekurangan air,
sebagian stomata daun menutup sehingga terjadi hambatan masuknya CO2 dan
menurunkan

aktivitas

fotosintesis.

Selain

menghambat

aktivitas

fotosintesis,

kekurangan air juga menghambat sintesis protein dan dinding sel (Salisbury dan Ross
1992).
Pemberian air kelapa dan BA dalam kadar yang tinggi dapat mengakibatkan
planlet berukuran kecil dan daun tidak mengalami pertumbuhan yang maksimal.
Kehadiran sitokinin berlebih dalam media dapat mengakibatkan terhambatnya
pertumbuhan tanaman. sedangkan kelebihan unsur hara dalam media memacu
pertumbuhan yang tidak normal.

BAB 5
SIMPULAN DAN SARAN

A. Simpulan
Berdasarkan hasil dari uraian pembahasan, dapat ditarik kesimpulan sebagai
berikut:
1. Konsentrasi BA dalam medium multiplikasi berpengaruh signifikan terhadap
jumlah tunas dan jumlah daun, namun tidak berpengaruh signifikan terhadap tinggi
tunas. Konsentrasi BA yang paling optimal dalam multiplikasi krisan adalah 0.5
ppm.
2. Konsentrasi air kelapa dalam medium multiplikasi berpengaruh signifikan terhadap
semua parameter pengamatan (tinggi tunas, jumlah tunas dan jumlah daun). Pada
tinggi tunas, konsentrasi air kelapa yang paling optimal adalah 5%, sedangkan pada
jumlah tunas dan jumlah daun, air kelapa optimal pada konsentrasi 5-15%.
3. Interaksi BA dengan air kelapa berpengaruh signifikan terhadap semua parameter
pengamatan (tinggi, jumlah daun dan jumlah tunas).
4. Interaksi yang paling optimal dalam meningkatkan tinggi tunas krisan adalah BA 0
ppm dan 1 ppm yang diinteraksikan dengan air kelapa sebesar 5%. Interaksi yang
paling optimal dalam meningkatkan jumlah tunas dan jumlah daun adalah BA 0.5
ppm yang diinteraksikan dengan air kelapa 5% dan 15%.

B. Saran
Berdasarkan hasil penelitian yang diperoleh dapat dirumuskan saran sebagai
berikut:
1. Untuk meningkatkan tinggi tunas dapat digunakan air kelapa dengan konsentrasi
5% tanpa penambahan BA.
2. Untuk meningkatkan jumlah tunas dan jumlah daun, penggunaan air kelapa pada
konsentrasi 5% dan 15% masih perlu ditambahkan BA sebesar 0.5 ppm.
3. Perlu dilakukan penelitian lanjut guna mengetahui efektivitas air kelapa pada

tanaman hias lainnya

37

38

DAFTAR PUSTAKA

Abidin, Zaenal. 1985.

Bandung:Angkasa.

Dasar-Dasar

Tentang

Zat

Pengatur

Tumbuhan.

Akba, Filiz., i_dem I_kalan., S. Naml., dan Bekir Erol Ak. 2009. Effect of plant
growth regulators on in vitro shoot multiplication of Amygdalus communis
L. cv. Yaltsinki. African Journal of Biotechnology, VIII (22), 6168-6174.
Anonim. 2006. Budidaya Tanaman Krisan. Yogyakarta: Balai Pengkajian
Tekhnologi Pertanian.
Anonim.
2013.
Classification
of
Chrysanthemum.
Online
at
http://www.mums.org/journal/articles/classifications.htm. [diakses tanggal 4
Februari 2013]
Aspiah,Y.P. Sari, H. Manurung. 2011. Pengaruh Pemberian Air Kelapa Terhadap
Pertumbuhan Anggrek Kantong Semar (Paphiopedilum supardii Braem &
Loeb) pada Media Knudson secara In Vitro. Mulawarman Scientifie, (10): 26.
Banyo, Yunia & Nio song Ai. 2011. Konsentrasi Klorofil daun Sebagai Indikator
Kekurangan Air pada Tanaman. Jurnal Ilmiah Sains, 11(2), 166-172.
Basri, Z. Muslimin. 2001. Pengaruh Sitokinin terhadap Organogenesis Krisan secara
In Vitro. Jurnal Agroland 15(4), 164-170.
Bety Y.A & Suhardi. 2009. Keragaman Tanaman dan Respon Pengguna terhadap
varietas Unggul Nasional Krisan di Kabupaten Magelang. Agrosains, 11 (2):
52-57.
Campbell NA, JB Reece & LG Mitchell. 2003. Biologi. Jakarta: Erlangga.
[BPS] Badan Pusat tatistik. 2011. Pendapatan Non Migas-Holtikultura 2011.
Jakarta: Badan Pusat Statistik. Jakarta: Badan Pusat Statistik.
Gomez K.A. & Gomez A.A. 1995. Prosedur Statistik untuk Penelitian Pertanian
(Ed.2). Jakarta: UI Press.
Gunawan. 2004. Untung Besar dari Usaha Pembibitan. Agromedia pustaka. Online
at
http://books.google.co.id/books?id=jx4yBLnzkAgC&pg=PA67&dq=multipli
kasi&hl=en&sa=X&ei=9SsYU_uEBMnV0QGGqIHgCQ&ved=0CEIQ6AEw
CQ#v=onepage&q=multiplikasi&f=false [diakses pada 6 maret 2014]
Haryadi & Pamenang. 1983. Pengaruh Sukrosa & Air Kelapa pada Kultur Jaringan
Anggrek. Bul. Agron, 14(1):4-8.
Hidayat E.B. 1995. Anatomi Tumbuhan Berbiji. Bandung: Penerbit ITB.

39

Indrianingsih, Citra. 2004. Pengaruh Lama Penambahan Cahaya terhadap

pertumbuhan Vegetatif tanaman Krisan (Chrysanthemum indicum cv. Town
talk) [Skripsi]. Semarang: Universitas Diponegoro.
Kasli. 2009. Upaya Perbanyakan Tanaman Krisan (Crysanthemum sp.) secara in
vitro. Jerami, 2 (3), 121-125.
Kristina N.N. & F.S. Syahid. 2008. Multiplikasi Tunas, Aklimatisasi dan Analisis
Mutu Simplisia Daun Encok (Plumbago zeylanica L.) Asal Kultur In Vitro
Periode Panjang. Bul. Littro, 212(2): 117 128.
_______. 2012. Pengaruh Air Kelapa terhadap Multiplikasi Tunam In Vitro,
Produksi Rimpang, dan Kandungan Xanthothizol, temulawak di Lapangan.
Jurnal Littri, 18(3): 125-134.
Lisan, Enny. 2005. Morfogenesis Langsung pada Tanaman Krisan (Chrysanthemum
sp.). J. Agrivor, 5(1):64-72.
Lizawati. 2012. Induksi Kalus Embriogenik dari Eksplan Tunas Apikal Tanaman
Jarak Pagar dengan penggunaan 2,4 D dan TDZ. Agriculture Universitas
Jambi, 1(2), 75-87.
Magdalena, T.S., L. Drozdowska., and M. Szota, 2002. Effect of cytokinins on in
Vitro Morphogenesis and Ploidy of Pepper Capsicum annuum L. Electronic
Journal of Polish Agricultural Universities Agronomy, 5(1). Online at
Www.ejpau. media.pl/series/volume5/issue1/agronomy/art-04.html. [diakses
pada tanggal 8 Desember 2013].
Matatula A.J. 2003. Substitution of MS Medium with Coconut Nater and GandasilD on Chrysanthemum Tissue Culture. Eugenia, 9 (4) : 203-211.
Marlina, N. & E. Rohayati. 2009. Teknik Aklimatisasi Planlet Anyelir (Dianthus
caryophyllus L.) untuk Tanaman Induk. Buletin Teknik Pertanian 14 ( 2): 7275.
Muhammad, Shakee & M. Ali. 2010. Effect of coconut water on callus growth of
Cyamopsis tetragonolobust. Pharmacia 1(1), 25-27.
Muhit A. 2007. Teknik Produksi Tahap Awal Benih Vegetatif Krisan
(Chrysanthemum morifolium R.). Buletin Teknik Pertanian, 12(1),14-18.
Miftakhurohmah & S. F. Syahid. 2006. Pengaruh Beberapa Taraf Konsentrasi BA
terhadap Multiplikasi Tunas Cincau Hitam (Mesona palustris) In Vitro.
Buletin Litro, 17(1):6-12.
Nimah, Fatriyatun, E. Ratnasari & L.S. Budipramana. 2012. Pengaruh Pemberian
Berbagai Kombinasi Konsentrasi Sukrosa dan Kinetin terhadap Induksi Umbi
Mikro Kentang (Solanum Tuberosum L.) Kultivar Granola Kembang secara
In Vitro. Lentera Bio, 1(1): 41-48.
Pereira PA, FV Sousa & JD Becker. 2012. Decision Making in the Plant Cell Cycle.
Canal BQ 9: 48-62.

40

Salisbury F.B. & C.W. Ross. 1995. Fisiologi Tumbuhan Jilid 3. Bandung: Penerbit
ITB.
Seswita D. 2010. Penggunaan Air Kelapa Sebagao Zat Pengatur Tumbuh pada
Multiplikasi Tunas Temulawak (Curcuma xanthorrhiza) In Vitro. Jurnal
Littri, 16(4): 135 140.
Shintiavira., H, Soedarjo., M, Suryawati & B. Wiranto. 2012. Studi pengaruh
substitusi hara makro dan mikro media MS dengan Pupuk majemuk dalam
kultur in vitro krisan. J Hort, 21(4): 334-341.
Soedarjo M, H. Shintiavira, Y. Supriyadi & Y. Nasihin. 2012. Peluang Bisnis
Inovasi Krisan Badan Litbang Pertanian. Jakarta Selatan: Agro inovasi.
Srivastava, L.M. 2002. Plant Growth and Development Hormones and environment.
California: Academic Press.
Surachman, D. 2011. Teknik Pemanfaatan Air Kelapa untuk Perbanyakan Nilam
secara In Vitro. Buletin Teknik Pertanian, (16) :31-33.
Vigliar R, V.L. Sdepanian & U.F Neto. 2006. Biochemical Profile of Coconut
Water from Coconut palms planted in Inland Region. Journal de pediatria,
82: 308-312.
Warisno. 2003. Budidaya Kelapa Genjah. Bandung: Kanisius. Online at
http://books.google.co.id/books?id=qo2wRGSoNkQC&pg=PA15&dq=air+ke
lapa&source=gbs_toc_r&cad=4#v=onepage&q=air%20kelapa&f=false
[diakses pada 6 Maret 2014]
Wattimena G.A. 1988. Zat Pengatur Tumbuh Tanaman. Bandung: Pusat Antar
Universitas IPB.
_______. 1995. In vitro Microtuber as an alternative Technology for Potato
Production. Tersedia di http://pdf.usaid.gov/pdf_docs/PNABW179.pdf,
[diakses tanggal 2 Maret 2012]
Wattimena, G.A., L.W. Gunawan, N.A. Mattjik, dan A. Ernawati. 1991.
Bioteknologi Tanaman. Bandung: Pusat Antar Universitas Bioteknologi IPB
Wediyanto A., B. Marwoto, R.G. Rochalia, M. Syai, F. Nuraini, D. Gandasari, K.
Lesmana, S. Ernawati. 2007. Standart Operasional Prosedur Budidaya
Krisan Potong. Jakarta: Departemen Pertanian.
Wijayani,Yuanita., Solichatun & W. Musyantini. 2007. Pertumbuhan Tunas dan
Struktur Anatomi Protocorm Like Body Anggrek Grammatophyllum scriptum
(Lindl.) Bl. Dengan pemberian Kinetin dan NAA. Biotekhnologi, 4(2):30-40.
Widiastoety, D. 1987. Percobaan Pendahuluan Kultur Jaringan pada Tanaman
Seruni (Chrysanthemum morifolium). Bull. Penel. Hort. 15(2).
Yusnita. 2003. Kultur Jaringan: Cara Memperbanyak Tanaman secara Efisien.
Jakarta: Agromedia Pustaka.

41

Yuniastuti, E., Praswanto., I. Harminingsih. 2010. Pengaruh Konsentrasi BAP

terhadap Multiplikasi Tunas Anthurium pada Beberapa Media Dasar secara In
Vitro. Caraka Tani, 25(1),1-8.
Zamroni & Y. Maryani. 2005. Penggandaan Tunas Krisan Melalui Kultur Jaringan.
Ilmu Pertanian, 12(1): 51-55.
Zulkarnain. 2009. Kultur Jaringan:Solusi Perbanyakan Tanaman. Jakarta:
Agromedia Pustaka.

42

LAMPIRAN I
LANGKAH KERJA PENELITIAN
A. Persiapan

B. Pembuatan Media

43

C. Sterilisasi Eksplan

44

45

D. Penanaman

46

LAMPIRAN II

Hasil Multiplikasi Krisan In Vitro

B0K1

B0K2

B0K3

B0K4

B0K5

B1K1

47

B1K
K2

B1K3
3

B1K
K4

B1K5

B2K
K1

B2K2
2

48

B2K
K3

B2K
K5

B3K22

B2K
K4

B3K
K1

B3K
K3

49

B3K4

Keterangan
B0K1:BA0ppm+5%
airkelapa
B0K2:BA0ppm+10%
airkelapa
B0K3:BA0ppm+15%
airkelapa
B0K4:BA0ppm+20%
airkelapa
B0K5:BA0ppm+25%
airkelapa

B3K5

B1K1:BA0.5ppm+
5%airkelapa
B1K2:BA0.5ppm+
10%airkelapa
B1K3:BA0.5ppm+
15%airkelapa
B1K4:BA0.5ppm+
20%airkelapa
B1K5:BA0.5ppm+
25%airkelapa

B2K1:BA1ppm+
5%airkelapa
B2K2:BA1ppm+
10%airkelapa
B2K3:BA1ppm+
15%airkelapa
B2K4:BA1ppm+
20%airkelapa
B2K5:BA1ppm+
25%airkelapa

B3K1:BA1.5ppm+
5%airkelapa
B3K2:BA1.5ppm+
10%airkelapa
B3K3:BA1.5ppm+
15%airkelapa
B3K4:BA1.5ppm+
20%airkelapa
B3K5:BA1.5ppm+
25%airkelapa

50

LAMPIRAN III
Pengambilan dan Analisis Data
A. Rekap pengambilan data
Tabel 1. Rekap pengambilan data hasil multiplikasi krisan pada parametes
pengamatan tinggi tunas
BA (ppm) Ulangan

0.5

1.5

Total
rata-rata

1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3

5
8.5
8.0
3.2
1.5
2.2
2.8
7.5
3.1
4.5
4.0
2.7
3.3
51.3
4.28

Tinggi planlet (cm)

Air kelapa (%)
10
15
20
25
3.0 3.7 3.0 1.7
2.4 2.0 2.7 2.0
4.0 1.3 2.7 2.0
2.1 3.3 2.8 2.7
2.3 4.0 2.5 2.3
2.2 3.0 2.8 1.8
2.0 3.0 2.4 1.1
1.7 4.0 2.6 1.1
1.8 2.4 2.4 1.0
3.0 2.2 2.0 2.1
3.0 3.0 2.0 1.6
2.7 2.4 2.0 1.7
30.2 34.3 29.9
21
2.52 2.86 2.50 1.75

total Rata-Rata

19.9
17.1
13.2
12.4
13.3
12.6
15.9
12.5
12.1
13.3
12.3
12.1

3.98
3.42
2.64
2.48
2.66
2.52
3.18
2.5
2.42
2.66
2.46
2.42

51

Tabel 2. Rekap pengambilan data hasil multiplikasi krisan pada parametes

pengamatan jumlah tunas
BA (ppm) Ulangan
5
0

0.5

1.5

1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3

Total
rata-rata

0
0
2
5
3
2
0
3
1
2
2
1
21
1.75

Jumlah tunas
Total Rata-Rata
Air kelapa (%)
10
15
20 25
1
3
2 0
6
1.2
1
2
1 0
4
0.8
1
2
1 0
6
1.2
2
2
1 4
14
2.8
2
3
1 2
11
2.2
2
1
1 1
7
1.4
2
2
2 2
8
1.6
2
2
1 2
10
2
1
2
2 0
6
1.2
2
2
2 0
8
1.6
2
1
1 1
7
1.4
1
1
1
4
0.8
19
23
16 12
1.58 1.92 1.33 1

Tabel 3. Rekap pengambilan data hasil multiplikasi krisan pada parametes

pengamatan jumlah daun
BA (ppm) Ulangan

0.5

1.5

total
rata-rata

1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3

5
16
15
34
40
35
23
7
23
16
32
14
24
279
23.3

Jumlah daun
total Rata-Rata
Air kelapa (%)
10
15
20
25
24
26
23
8
97
19.4
16
22
21
12
86
17.2
26
22
21
11 114
22.8
20
35
28
35 158
31.6
22
31
20
8 116
23.2
21
30
26
6 106
21.2
28
27
28
12 102
20.4
23
24
18
12 100
20
20
20
26
8
90
18
30
20
16
11 109
21.8
30
20
12
6
82
16.4
24
18
18
8
92
18.4
284 295 257
137
1.60 1.92 1.33 11.42

52

B. Analisis Data pada program SPSS 16

1. ANAVA Interaksi terhadap parameter pengamatan
General Linear Model
Multivariate Testsc
Effect

Value

Hypothesis df Error df

Sig.

.981 6.388E2a

3.000

38.000

.000

.019 6.388E2a

3.000

38.000

.000

Hotelling's Trace

50.432 6.388E2a

3.000

38.000

.000

Roy's Largest Root

50.432 6.388E2a

3.000

38.000

.000

Intercept Pillai's Trace

Wilks' Lambda

Interaksi Pillai's Trace

1.860

3.433

57.000

120.000

.000

.038

4.015

57.000

114.130

.000

7.334

4.718

57.000

110.000

.000

5.041

19.000

40.000

.000

Wilks' Lambda
Hotelling's Trace
Roy's Largest Root

10.613

Tests of Between-Subjects Effects

Source
Corrected
Model

Intercept

Interaksi

Error

Total

Dependen Type III Sum

t Variable of Squares

df

Sig.

19

4.463

4.948

.000

19

167.793

6.316

.000

Tunas

18.983

19

.999

2.220

.017

Tinggi

459.267

459.267

509.165

.000

Daun

22971.267

22971.267

864.665

.000

Tunas

84.017

84.017

186.704

.000

Tinggi

84.793

19

4.463

4.948

.000

Daun

3188.067

19

167.793

6.316

.000

Tunas

18.983

19

.999

2.220

.017

Tinggi

36.080

40

.902

Daun

1062.667

40

26.567

Tunas

18.000

40

.450

Tinggi

580.140

60

Daun

27222.000

60

Tunas

121.000

60

Tinggi
Daun

84.793
3188.067

Mean Square

53

Corrected
Total

Tinggi

120.873

59

Daun

4250.733

59

Tunas

36.983

59

2. ANAVA Pengaruh BA dan Air kelapa terhadap parameter pengamatan

Multivariate Testsc
Effect
Intercept Pillai's Trace
Wilks'
Lambda
Hotelling's
Trace
Roy's Largest
Root
BA
Pillai's Trace
Wilks'
Lambda
Hotelling's
Trace
Roy's Largest
Root
Kelapa
Pillai's Trace
Wilks'
Lambda
Hotelling's
Trace
Roy's Largest
Root

Value

.962 4.211E2a
.038 4.211E2a

Hypothesis Error df
df
3.000 50.000
3.000 50.000

Sig.
.000
.000

25.264 4.211E2a

3.000

50.000

.000

25.264 4.211E2a

3.000

50.000

.000

.308
.715

1.980
2.003

9.000 156.000
9.000 121.837

.045
.044

.368

1.990

9.000 146.000

.044

.255

4.412b

3.000

52.000

.008

.846
.292

5.104
6.541

12.000 156.000
12.000 132.579

.000
.000

1.965

7.969

12.000 146.000

.000

1.712

22.256b

4.000

52.000

.000

Tests of Between-Subjects Effects

Source

Depen
dent
Variabl Type III Sum
e
of Squares

Corrected Model tinggi

daun

df

Sig.

7.107

5.196

.000

301.605

7.330

.000

49.747
2111.233

Mean Square

54

tunas

10.150c

1.450

2.810

.015

tinggi

459.267

459.267

335.767

.000

daun

22971.267

22971.267

558.311

.000

tunas

84.017

84.017

162.815

.000

tinggi

7.052

2.351

1.719

.175

daun

370.333

123.444

3.000

.039

tunas

1.250

.417

.807

.495

tinggi

42.695

10.674

7.804

.000

daun

1740.900

435.225

10.578

.000

tunas

8.900

2.225

4.312

.004

tinggi

71.126

52

1.368

daun

2139.500

52

41.144

tunas

26.833

52

.516

tinggi

580.140

60

daun

27222.000

60

tunas

121.000

60

Corrected Total tinggi

120.873

59

daun

4250.733

59

tunas

36.983

59

Intercept

BA

Kelapa

Error

Total

3. Uji BNT Pengaruh BA dan Air kelapa terhadap Multiplikasi

Multiple Comparisons

LSD

Air
kelapa

(J)
kelapa

tinggi 5 %

10 %

1.7583*

.47746

.001

.8002

2.7164

15 %

.47746

.004

.4669

2.3831

.47746

.000

.8252

2.7414

20 %

Mean
Difference
(I-J)
Std. Error Sig.

1.4250
1.7833

95% Confidence
Interval

Depen
dent
Variabl (I)
e
kelapa

Lower
Bound

Upper
Bound

55

10 %

15 %

20 %

25 %

daun

5%

10 %

15 %

20 %

25 %

2.5750*

.47746

.000

1.6169

3.5331

5%

-1.7583*

.47746

.001

-2.7164

-.8002

15 %

-.3333

.47746

.488

-1.2914

.6248

20 %

.0250

.47746

.958

-.9331

.9831

25 %

.8167

.47746

.093

-.1414

1.7748

-1.4250*

.47746

.004

-2.3831

-.4669

10 %

.3333

.47746

.488

-.6248

1.2914

20 %

.3583

.47746

.456

-.5998

1.3164

25 %

1.1500*

.47746

.020

.1919

2.1081

5%

-1.7833*

.47746

.000

-2.7414

-.8252

10 %

-.0250

.47746

.958

-.9831

.9331

15 %

-.3583

.47746

.456

-1.3164

.5998

25 %

.7917

.47746

.103

-.1664

1.7498

.47746

.000

-3.5331

-1.6169

10 %

-.8167

.47746

.093

-1.7748

.1414

15 %

.47746

.020

-2.1081

-.1919

20 %

-.7917

.47746

.103

-1.7498

.1664

10 %

-.42

2.619

.874

-5.67

4.84

15 %

.08

2.619

.975

-5.17

5.34

20 %

1.00

2.619

.704

-4.25

6.25

25 %

2.619

.000

8.33

18.84

5%

.42

2.619

.874

-4.84

5.67

15 %

.50

2.619

.849

-4.75

5.75

20 %

1.42

2.619

.591

-3.84

6.67

25 %

14.00*

2.619

.000

8.75

19.25

5%

-.08

2.619

.975

-5.34

5.17

10 %

-.50

2.619

.849

-5.75

4.75

20 %

.92

2.619

.728

-4.34

6.17

25 %

13.50*

2.619

.000

8.25

18.75

5%

-1.00

2.619

.704

-6.25

4.25

10 %

-1.42

2.619

.591

-6.67

3.84

15 %

-.92

2.619

.728

-6.17

4.34

5%

5%

-2.5750

-1.1500

13.58

56

25 %

25 %

12.58*

2.619

.000

7.33

17.84

5%

-13.58*

2.619

.000

-18.84

-8.33

-14.00

2.619

.000

-19.25

-8.75

15 %

-13.50

2.619

.000

-18.75

-8.25

20 %

-12.58*

2.619

.000

-17.84

-7.33

10 %

-.42

.293

.161

-1.01

.17

15 %

-.50

.293

.094

-1.09

.09

20 %

-.17

.293

.572

-.76

.42

25 %

.58

.293

.052

.00

1.17

5%

.42

.293

.161

-.17

1.01

15 %

-.08

.293

.777

-.67

.51

20 %

.25

.293

.398

-.34

.84

25 %

.293

.001

.41

1.59

5%

.50

.293

.094

-.09

1.09

10 %

.08

.293

.777

-.51

.67

20 %

.33

.293

.261

-.26

.92

25 %

.293

.001

.49

1.67

5%

.17

.293

.572

-.42

.76

10 %

-.25

.293

.398

-.84

.34

15 %

-.33

.293

.261

-.92

.26

25 %

.75

.293

.014

.16

1.34

5%

-.58

.293

.052

-1.17

.01

.293

.001

-1.59

-.41

.293

.001

-1.67

-.49

-.75*

.293

.014

-1.34

-.16

10 %

tunas

5%

10 %

15 %

20 %

25 %

10 %
15 %
20 %

1.00

1.08

-1.00
-1.08

BA
Multiple Comparisons
LSD
Depen
dent
Variabl
e
(I) BA

95% Confidence Interval

(J) BA

Mean
Differenc
e (I-J) Std. Error

Sig.

Lower
Bound

Upper
Bound

57

tinggi 0 ppm

0.5 ppm

.8333

.42705

.056

-.0236

1.6903

1 ppm

.6533

.42705

.132

-.2036

1.5103

1.5 ppm

.8333

.42705

.056

-.0236

1.6903

0.5 ppm 0 ppm

-.8333

.42705

.056

-1.6903

.0236

1 ppm

-.1800

.42705

.675

-1.0369

.6769

.0000

.42705

1.000

-.8569

.8569

-.6533

.42705

.132

-1.5103

.2036

0.5 ppm

.1800

.42705

.675

-.6769

1.0369

1.5 ppm

.1800

.42705

.675

-.6769

1.0369

-.8333

.42705

.056

-1.6903

.0236

.0000

.42705

1.000

-.8569

.8569

-.1800

.42705

.675

-1.0369

.6769

-3.47

2.342

.145

-8.17

1.23

3.47

2.342

.145

-1.23

8.17

.93

2.342

.692

-3.77

5.63

0.5 ppm 0 ppm

3.47

2.342

.145

-1.23

8.17

1 ppm

2.342

.005

2.23

11.63

4.40

2.342

.066

-.30

9.10

-3.47

2.342

.145

-8.17

1.23

2.342

.005

-11.63

-2.23

-2.53

2.342

.284

-7.23

2.17

-.93

2.342

.692

-5.63

3.77

-4.40

2.342

.066

-9.10

.30

1 ppm

2.53

2.342

.284

-2.17

7.23

0.5 ppm

-.40

.262

.133

-.93

.13

1 ppm

-.20

.262

.449

-.73

.33

1.5 ppm

-.13

.262

.613

-.66

.39

0.5 ppm 0 ppm

.40

.262

.133

-.13

.93

1 ppm

.20

.262

.449

-.33

.73

1.5 ppm

.27

.262

.314

-.26

.79

0 ppm

.20

.262

.449

-.33

.73

-.20

.262

.449

-.73

.33

1.5 ppm
1 ppm

0 ppm

1.5 ppm 0 ppm

0.5 ppm
1 ppm
daun

0 ppm

0.5 ppm
1 ppm
1.5 ppm

1.5 ppm
1 ppm

0 ppm
0.5 ppm
1.5 ppm

1.5 ppm 0 ppm

0.5 ppm
tunas

0 ppm

1 ppm

0.5 ppm

6.93

-6.93

58

1.5 ppm

.07

.262

.800

-.46

.59

.13

.262

.613

-.39

.66

0.5 ppm

-.27

.262

.314

-.79

.26

1 ppm

-.07

.262

.800

-.59

.46

1.5 ppm 0 ppm

4.

Uji BNT Pengaruh Interaksi terhadap Multiplikasi

Multiple Comparisons

Dependent
Variable
Tinggi

(I)
interaksi
11

12

Mean
(J)
Difference Std.
interaksi (I-J)
Error
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
13
14
15
21
22

3.4333*
4.2333*
3.7667*
4.6667*
4.4000*
4.3667*
3.1333*
3.8667*
4.5000*
1.5333
4.7333*
3.4667*
4.1000*
5.5333*
3.2333*
3.6667*
4.0333*
4.5667*
4.7667*
-3.4333*
0.8
0.3333
1.2333
0.9667
0.9333

0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546

95% Confidence
Interval
Sig.
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.055
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.308
0.670
0.120
0.220
0.236

Lower
Upper
Bound
Bound
1.8661 5.0006
2.6661 5.8006
2.1994 5.3339
3.0994 6.2339
2.8327 5.9673
2.7994 5.9339
1.5661 4.7006
2.2994 5.4339
2.9327 6.0673
-0.0339 3.1006
3.1661 6.3006
1.8994 5.0339
2.5327 5.6673
3.9661 7.1006
1.6661 4.8006
2.0994 5.2339
2.4661 5.6006
2.9994 6.1339
3.1994 6.3339
-5.0006 -1.8661
-0.7673 2.3673
-1.2339 1.9006
-0.3339 2.8006
-0.6006 2.5339
-0.6339 2.5006

59

13

14

23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
15
21
22
23
24
25

-0.3
0.4333
1.0667
-1.9000*
1.3
0.0333
0.6667
2.1000*
-0.2
0.2333
0.6
1.1333
1.3333
-4.2333*
-0.8
-0.4667
0.4333
0.1667
0.1333
-1.1
-0.3667
0.2667
-2.7000*
0.5
-0.7667
-0.1333
1.3
-1
-0.5667
-0.2
0.3333
0.5333
-3.7667*
-0.3333
0.4667
0.9
0.6333
0.6
-0.6333
0.1
0.7333

0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546

0.701
0.579
0.177
0.019
0.101
0.966
0.395
0.010
0.798
0.765
0.444
0.152
0.093
0.000
0.308
0.551
0.579
0.831
0.864
0.164
0.639
0.733
0.001
0.523
0.329
0.864
0.101
0.205
0.469
0.798
0.670
0.496
0.000
0.670
0.551
0.253
0.419
0.444
0.419
0.898
0.350

-1.8673
-1.1339
-0.5006
-3.4673
-0.2673
-1.5339
-0.9006
0.5327
-1.7673
-1.3339
-0.9673
-0.4339
-0.2339
-5.8006
-2.3673
-2.0339
-1.1339
-1.4006
-1.4339
-2.6673
-1.9339
-1.3006
-4.2673
-1.0673
-2.3339
-1.7006
-0.2673
-2.5673
-2.1339
-1.7673
-1.2339
-1.0339
-5.3339
-1.9006
-1.1006
-0.6673
-0.9339
-0.9673
-2.2006
-1.4673
-0.8339

1.2673
2.0006
2.6339
-0.3327
2.8673
1.6006
2.2339
3.6673
1.3673
1.8006
2.1673
2.7006
2.9006
-2.6661
0.7673
1.1006
2.0006
1.7339
1.7006
0.4673
1.2006
1.8339
-1.1327
2.0673
0.8006
1.4339
2.8673
0.5673
1.0006
1.3673
1.9006
2.1006
-2.1994
1.2339
2.0339
2.4673
2.2006
2.1673
0.9339
1.6673
2.3006

60

15

21

31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
22
23
24
25
31
32
33

-2.2333*
0.9667
-0.3
0.3333
1.7667*
-0.5333
-0.1
0.2667
0.8
1
-4.6667*
-1.2333
-0.4333
-0.9
-0.2667
-0.3
-1.5333
-0.8
-0.1667
-3.1333*
0.0667
-1.2
-0.5667
0.8667
-1.4333
-1
-0.6333
-0.1
0.1
-4.4000*
-0.9667
-0.1667
-0.6333
0.2667
-0.0333
-1.2667
-0.5333
0.1
-2.8667*
0.3333
-0.9333

0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546

0.006
0.220
0.701
0.670
0.028
0.496
0.898
0.733
0.308
0.205
0.000
0.120
0.579
0.253
0.733
0.701
0.055
0.308
0.831
0.000
0.932
0.130
0.469
0.270
0.072
0.205
0.419
0.898
0.898
0.000
0.220
0.831
0.419
0.733
0.966
0.110
0.496
0.898
0.001
0.670
0.236

-3.8006
-0.6006
-1.8673
-1.2339
0.1994
-2.1006
-1.6673
-1.3006
-0.7673
-0.5673
-6.2339
-2.8006
-2.0006
-2.4673
-1.8339
-1.8673
-3.1006
-2.3673
-1.7339
-4.7006
-1.5006
-2.7673
-2.1339
-0.7006
-3.0006
-2.5673
-2.2006
-1.6673
-1.4673
-5.9673
-2.5339
-1.7339
-2.2006
-1.3006
-1.6006
-2.8339
-2.1006
-1.4673
-4.4339
-1.2339
-2.5006

-0.6661
2.5339
1.2673
1.9006
3.3339
1.0339
1.4673
1.8339
2.3673
2.5673
-3.0994
0.3339
1.1339
0.6673
1.3006
1.2673
0.0339
0.7673
1.4006
-1.5661
1.6339
0.3673
1.0006
2.4339
0.1339
0.5673
0.9339
1.4673
1.6673
-2.8327
0.6006
1.4006
0.9339
1.8339
1.5339
0.3006
1.0339
1.6673
-1.2994
1.9006
0.6339

61

22

23

34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
24
25
31
32
33
34
35
41

-0.3
1.1333
-1.1667
-0.7333
-0.3667
0.1667
0.3667
-4.3667*
-0.9333
-0.1333
-0.6
0.3
0.0333
-1.2333
-0.5
0.1333
-2.8333*
0.3667
-0.9
-0.2667
1.1667
-1.1333
-0.7
-0.3333
0.2
0.4
-3.1333*
0.3
1.1
0.6333
1.5333
1.2667
1.2333
0.7333
1.3667
-1.6000*
1.6000*
0.3333
0.9667
2.4000*
0.1

0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546

0.701
0.152
0.140
0.350
0.639
0.831
0.639
0.000
0.236
0.864
0.444
0.701
0.966
0.120
0.523
0.864
0.001
0.639
0.253
0.733
0.140
0.152
0.372
0.670
0.798
0.609
0.000
0.701
0.164
0.419
0.055
0.110
0.120
0.350
0.086
0.046
0.046
0.670
0.220
0.004
0.898

-1.8673
-0.4339
-2.7339
-2.3006
-1.9339
-1.4006
-1.2006
-5.9339
-2.5006
-1.7006
-2.1673
-1.2673
-1.5339
-2.8006
-2.0673
-1.4339
-4.4006
-1.2006
-2.4673
-1.8339
-0.4006
-2.7006
-2.2673
-1.9006
-1.3673
-1.1673
-4.7006
-1.2673
-0.4673
-0.9339
-0.0339
-0.3006
-0.3339
-0.8339
-0.2006
-3.1673
0.0327
-1.2339
-0.6006
0.8327
-1.4673

1.2673
2.7006
0.4006
0.8339
1.2006
1.7339
1.9339
-2.7994
0.6339
1.4339
0.9673
1.8673
1.6006
0.3339
1.0673
1.7006
-1.2661
1.9339
0.6673
1.3006
2.7339
0.4339
0.8673
1.2339
1.7673
1.9673
-1.5661
1.8673
2.6673
2.2006
3.1006
2.8339
2.8006
2.3006
2.9339
-0.0327
3.1673
1.9006
2.5339
3.9673
1.6673

62

24

25

42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
31
32
33
34
35
41
42
43
44

0.5333
0.9
1.4333
1.6333*
-3.8667*
-0.4333
0.3667
-0.1
0.8
0.5333
0.5
-0.7333
0.6333
-2.3333*
0.8667
-0.4
0.2333
1.6667*
-0.6333
-0.2
0.1667
0.7
0.9
-4.5000*
-1.0667
-0.2667
-0.7333
0.1667
-0.1
-0.1333
-1.3667
-0.6333
-2.9667*
0.2333
-1.0333
-0.4
1.0333
-1.2667
-0.8333
-0.4667
0.0667

0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546

0.496
0.253
0.072
0.042
0.000
0.579
0.639
0.898
0.308
0.496
0.523
0.350
0.419
0.005
0.270
0.609
0.765
0.038
0.419
0.798
0.831
0.372
0.253
0.000
0.177
0.733
0.350
0.831
0.898
0.864
0.086
0.419
0.000
0.765
0.190
0.609
0.190
0.110
0.289
0.551
0.932

-1.0339
-0.6673
-0.1339
0.0661
-5.4339
-2.0006
-1.2006
-1.6673
-0.7673
-1.0339
-1.0673
-2.3006
-0.9339
-3.9006
-0.7006
-1.9673
-1.3339
0.0994
-2.2006
-1.7673
-1.4006
-0.8673
-0.6673
-6.0673
-2.6339
-1.8339
-2.3006
-1.4006
-1.6673
-1.7006
-2.9339
-2.2006
-4.5339
-1.3339
-2.6006
-1.9673
-0.5339
-2.8339
-2.4006
-2.0339
-1.5006

2.1006
2.4673
3.0006
3.2006
-2.2994
1.1339
1.9339
1.4673
2.3673
2.1006
2.0673
0.8339
2.2006
-0.7661
2.4339
1.1673
1.8006
3.2339
0.9339
1.3673
1.7339
2.2673
2.4673
-2.9327
0.5006
1.3006
0.8339
1.7339
1.4673
1.4339
0.2006
0.9339
-1.3994
1.8006
0.5339
1.1673
2.6006
0.3006
0.7339
1.1006
1.6339

63

31

32

33

45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12

0.2667
-1.5333
1.9000*
2.7000*
2.2333*
3.1333*
2.8667*
2.8333*
1.6000*
2.3333*
2.9667*
3.2000*
1.9333*
2.5667*
4.0000*
1.7000*
2.1333*
2.5000*
3.0333*
3.2333*
-4.7333*
-1.3
-0.5
-0.9667
-0.0667
-0.3333
-0.3667
-1.6000*
-0.8667
-0.2333
-3.2000*
-1.2667
-0.6333
0.8
-1.5
-1.0667
-0.7
-0.1667
0.0333
-3.4667*
-0.0333

0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546

0.733
0.055
0.019
0.001
0.006
0.000
0.001
0.001
0.046
0.005
0.000
0.000
0.017
0.002
0.000
0.034
0.009
0.003
0.000
0.000
0.000
0.101
0.523
0.220
0.932
0.670
0.639
0.046
0.270
0.765
0.000
0.110
0.419
0.308
0.060
0.177
0.372
0.831
0.966
0.000
0.966

-1.3006
-3.1006
0.3327
1.1327
0.6661
1.5661
1.2994
1.2661
0.0327
0.7661
1.3994
1.6327
0.3661
0.9994
2.4327
0.1327
0.5661
0.9327
1.4661
1.6661
-6.3006
-2.8673
-2.0673
-2.5339
-1.6339
-1.9006
-1.9339
-3.1673
-2.4339
-1.8006
-4.7673
-2.8339
-2.2006
-0.7673
-3.0673
-2.6339
-2.2673
-1.7339
-1.5339
-5.0339
-1.6006

1.8339
0.0339
3.4673
4.2673
3.8006
4.7006
4.4339
4.4006
3.1673
3.9006
4.5339
4.7673
3.5006
4.1339
5.5673
3.2673
3.7006
4.0673
4.6006
4.8006
-3.1661
0.2673
1.0673
0.6006
1.5006
1.2339
1.2006
-0.0327
0.7006
1.3339
-1.6327
0.3006
0.9339
2.3673
0.0673
0.5006
0.8673
1.4006
1.6006
-1.8994
1.5339

64

34

35

13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15

0.7667
0.3
1.2
0.9333
0.9
-0.3333
0.4
1.0333
-1.9333*
1.2667
0.6333
2.0667*
-0.2333
0.2
0.5667
1.1
1.3
-4.1000*
-0.6667
0.1333
-0.3333
0.5667
0.3
0.2667
-0.9667
-0.2333
0.4
-2.5667*
0.6333
-0.6333
1.4333
-0.8667
-0.4333
-0.0667
0.4667
0.6667
-5.5333*
-2.1000*
-1.3
-1.7667*
-0.8667

0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546

0.329
0.701
0.130
0.236
0.253
0.670
0.609
0.190
0.017
0.110
0.419
0.011
0.765
0.798
0.469
0.164
0.101
0.000
0.395
0.864
0.670
0.469
0.701
0.733
0.220
0.765
0.609
0.002
0.419
0.419
0.072
0.270
0.579
0.932
0.551
0.395
0.000
0.010
0.101
0.028
0.270

-0.8006
-1.2673
-0.3673
-0.6339
-0.6673
-1.9006
-1.1673
-0.5339
-3.5006
-0.3006
-0.9339
0.4994
-1.8006
-1.3673
-1.0006
-0.4673
-0.2673
-5.6673
-2.2339
-1.4339
-1.9006
-1.0006
-1.2673
-1.3006
-2.5339
-1.8006
-1.1673
-4.1339
-0.9339
-2.2006
-0.1339
-2.4339
-2.0006
-1.6339
-1.1006
-0.9006
-7.1006
-3.6673
-2.8673
-3.3339
-2.4339

2.3339
1.8673
2.7673
2.5006
2.4673
1.2339
1.9673
2.6006
-0.3661
2.8339
2.2006
3.6339
1.3339
1.7673
2.1339
2.6673
2.8673
-2.5327
0.9006
1.7006
1.2339
2.1339
1.8673
1.8339
0.6006
1.3339
1.9673
-0.9994
2.2006
0.9339
3.0006
0.7006
1.1339
1.5006
2.0339
2.2339
-3.9661
-0.5327
0.2673
-0.1994
0.7006

65

41

42

21
22
23
24
25
31
32
33
34
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23

-1.1333
-1.1667
-2.4000*
-1.6667*
-1.0333
-4.0000*
-0.8
-2.0667*
-1.4333
-2.3000*
-1.8667*
-1.5
-0.9667
-0.7667
-3.2333*
0.2
1
0.5333
1.4333
1.1667
1.1333
-0.1
0.6333
1.2667
-1.7000*
1.5
0.2333
0.8667
2.3000*
0.4333
0.8
1.3333
1.5333
-3.6667*
-0.2333
0.5667
0.1
1
0.7333
0.7
-0.5333

0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546

0.152
0.140
0.004
0.038
0.190
0.000
0.308
0.011
0.072
0.005
0.021
0.060
0.220
0.329
0.000
0.798
0.205
0.496
0.072
0.140
0.152
0.898
0.419
0.110
0.034
0.060
0.765
0.270
0.005
0.579
0.308
0.093
0.055
0.000
0.765
0.469
0.898
0.205
0.350
0.372
0.496

-2.7006
-2.7339
-3.9673
-3.2339
-2.6006
-5.5673
-2.3673
-3.6339
-3.0006
-3.8673
-3.4339
-3.0673
-2.5339
-2.3339
-4.8006
-1.3673
-0.5673
-1.0339
-0.1339
-0.4006
-0.4339
-1.6673
-0.9339
-0.3006
-3.2673
-0.0673
-1.3339
-0.7006
0.7327
-1.1339
-0.7673
-0.2339
-0.0339
-5.2339
-1.8006
-1.0006
-1.4673
-0.5673
-0.8339
-0.8673
-2.1006

0.4339
0.4006
-0.8327
-0.0994
0.5339
-2.4327
0.7673
-0.4994
0.1339
-0.7327
-0.2994
0.0673
0.6006
0.8006
-1.6661
1.7673
2.5673
2.1006
3.0006
2.7339
2.7006
1.4673
2.2006
2.8339
-0.1327
3.0673
1.8006
2.4339
3.8673
2.0006
2.3673
2.9006
3.1006
-2.0994
1.3339
2.1339
1.6673
2.5673
2.3006
2.2673
1.0339

66

43

44

24
25
31
32
33
34
35
41
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31

0.2
0.8333
-2.1333*
1.0667
-0.2
0.4333
1.8667*
-0.4333
0.3667
0.9
1.1
-4.0333*
-0.6
0.2
-0.2667
0.6333
0.3667
0.3333
-0.9
-0.1667
0.4667
-2.5000*
0.7
-0.5667
0.0667
1.5
-0.8
-0.3667
0.5333
0.7333
-4.5667*
-1.1333
-0.3333
-0.8
0.1
-0.1667
-0.2
-1.4333
-0.7
-0.0667
-3.0333*

0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546

0.798
0.289
0.009
0.177
0.798
0.579
0.021
0.579
0.639
0.253
0.164
0.000
0.444
0.798
0.733
0.419
0.639
0.670
0.253
0.831
0.551
0.003
0.372
0.469
0.932
0.060
0.308
0.639
0.496
0.350
0.000
0.152
0.670
0.308
0.898
0.831
0.798
0.072
0.372
0.932
0.000

-1.3673
-0.7339
-3.7006
-0.5006
-1.7673
-1.1339
0.2994
-2.0006
-1.2006
-0.6673
-0.4673
-5.6006
-2.1673
-1.3673
-1.8339
-0.9339
-1.2006
-1.2339
-2.4673
-1.7339
-1.1006
-4.0673
-0.8673
-2.1339
-1.5006
-0.0673
-2.3673
-1.9339
-1.0339
-0.8339
-6.1339
-2.7006
-1.9006
-2.3673
-1.4673
-1.7339
-1.7673
-3.0006
-2.2673
-1.6339
-4.6006

1.7673
2.4006
-0.5661
2.6339
1.3673
2.0006
3.4339
1.1339
1.9339
2.4673
2.6673
-2.4661
0.9673
1.7673
1.3006
2.2006
1.9339
1.9006
0.6673
1.4006
2.0339
-0.9327
2.2673
1.0006
1.6339
3.0673
0.7673
1.2006
2.1006
2.3006
-2.9994
0.4339
1.2339
0.7673
1.6673
1.4006
1.3673
0.1339
0.8673
1.5006
-1.4661

67

45

daun

11

32
33
34
35
41
42
43
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35

0.1667
-1.1
-0.4667
0.9667
-1.3333
-0.9
-0.5333
0.2
-4.7667*
-1.3333
-0.5333
-1
-0.1
-0.3667
-0.4
-1.6333*
-0.9
-0.2667
-3.2333*
-0.0333
-1.3
-0.6667
0.7667
-1.5333
-1.1
-0.7333
-0.2
-0.33
-1.67
0
11.33*
-11.00*
0.67
-10.33*
-3
15.67*
9.67*
1.33
7
-2.33
11.00*

0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
0.77546
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208

0.831
0.164
0.551
0.220
0.093
0.253
0.496
0.798
0.000
0.093
0.496
0.205
0.898
0.639
0.609
0.042
0.253
0.733
0.000
0.966
0.101
0.395
0.329
0.055
0.164
0.350
0.798
0.937
0.694
1.000
0.010
0.013
0.875
0.019
0.480
0.001
0.027
0.753
0.104
0.582
0.013

-1.4006
-2.6673
-2.0339
-0.6006
-2.9006
-2.4673
-2.1006
-1.3673
-6.3339
-2.9006
-2.1006
-2.5673
-1.6673
-1.9339
-1.9673
-3.2006
-2.4673
-1.8339
-4.8006
-1.6006
-2.8673
-2.2339
-0.8006
-3.1006
-2.6673
-2.3006
-1.7673
-8.84
-10.17
-8.51
2.83
-19.51
-7.84
-18.84
-11.51
7.16
1.16
-7.17
-1.51
-10.84
2.49

1.7339
0.4673
1.1006
2.5339
0.2339
0.6673
1.0339
1.7673
-3.1994
0.2339
1.0339
0.5673
1.4673
1.2006
1.1673
-0.0661
0.6673
1.3006
-1.6661
1.5339
0.2673
0.9006
2.3339
0.0339
0.4673
0.8339
1.3673
8.17
6.84
8.51
19.84
-2.49
9.17
-1.83
5.51
24.17
18.17
9.84
15.51
6.17
19.51

68

12

13

41
42
43
44
45
11
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43

-1.67
-6.33
2.33
6.33
13.33*
0.33
-1.33
0.33
11.67*
-10.67*
1
-10.00*
-2.67
16.00*
10.00*
1.67
7.33
-2
11.33*
-1.33
-6
2.67
6.67
13.67*
1.67
1.33
1.67
13.00*
-9.33*
2.33
-8.67*
-1.33
17.33*
11.33*
3
8.67*
-0.67
12.67*
0
-4.67
4

4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208

0.694
0.140
0.582
0.140
0.003
0.937
0.753
0.937
0.008
0.015
0.813
0.022
0.530
0.000
0.022
0.694
0.089
0.637
0.010
0.753
0.162
0.530
0.121
0.002
0.694
0.753
0.694
0.004
0.032
0.582
0.046
0.753
0.000
0.010
0.480
0.046
0.875
0.005
1.000
0.274
0.348

-10.17
-14.84
-6.17
-2.17
4.83
-8.17
-9.84
-8.17
3.16
-19.17
-7.51
-18.51
-11.17
7.49
1.49
-6.84
-1.17
-10.51
2.83
-9.84
-14.51
-5.84
-1.84
5.16
-6.84
-7.17
-6.84
4.49
-17.84
-6.17
-17.17
-9.84
8.83
2.83
-5.51
0.16
-9.17
4.16
-8.51
-13.17
-4.51

6.84
2.17
10.84
14.84
21.84
8.84
7.17
8.84
20.17
-2.16
9.51
-1.49
5.84
24.51
18.51
10.17
15.84
6.51
19.84
7.17
2.51
11.17
15.17
22.17
10.17
9.84
10.17
21.51
-0.83
10.84
-0.16
7.17
25.84
19.84
11.51
17.17
7.84
21.17
8.51
3.84
12.51

69

14

15

21

44
45
11
12
13
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11

8
15.00*
0
-0.33
-1.67
11.33*
-11.00*
0.67
-10.33*
-3
15.67*
9.67*
1.33
7
-2.33
11.00*
-1.67
-6.33
2.33
6.33
13.33*
-11.33*
-11.67*
-13.00*
-11.33*
-22.33*
-10.67*
-21.67*
-14.33*
4.33
-1.67
-10.00*
-4.33
-13.67*
-0.33
-13.00*
-17.67*
-9.00*
-5
2
11.00*

4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208

0.065
0.001
1.000
0.937
0.694
0.010
0.013
0.875
0.019
0.480
0.001
0.027
0.753
0.104
0.582
0.013
0.694
0.140
0.582
0.140
0.003
0.010
0.008
0.004
0.010
0.000
0.015
0.000
0.002
0.309
0.694
0.022
0.309
0.002
0.937
0.004
0.000
0.039
0.242
0.637
0.013

-0.51
6.49
-8.51
-8.84
-10.17
2.83
-19.51
-7.84
-18.84
-11.51
7.16
1.16
-7.17
-1.51
-10.84
2.49
-10.17
-14.84
-6.17
-2.17
4.83
-19.84
-20.17
-21.51
-19.84
-30.84
-19.17
-30.17
-22.84
-4.17
-10.17
-18.51
-12.84
-22.17
-8.84
-21.51
-26.17
-17.51
-13.51
-6.51
2.49

16.51
23.51
8.51
8.17
6.84
19.84
-2.49
9.17
-1.83
5.51
24.17
18.17
9.84
15.51
6.17
19.51
6.84
2.17
10.84
14.84
21.84
-2.83
-3.16
-4.49
-2.83
-13.83
-2.16
-13.16
-5.83
12.84
6.84
-1.49
4.17
-5.16
8.17
-4.49
-9.16
-0.49
3.51
10.51
19.51

70

22

23

12
13
14
15
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14

10.67*
9.33*
11.00*
22.33*
11.67*
0.67
8
26.67*
20.67*
12.33*
18.00*
8.67*
22.00*
9.33*
4.67
13.33*
17.33*
24.33*
-0.67
-1
-2.33
-0.67
10.67*
-11.67*
-11.00*
-3.67
15.00*
9.00*
0.67
6.33
-3
10.33*
-2.33
-7
1.67
5.67
12.67*
10.33*
10.00*
8.67*
10.33*

4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208

0.015
0.032
0.013
0.000
0.008
0.875
0.065
0.000
0.000
0.006
0.000
0.046
0.000
0.032
0.274
0.003
0.000
0.000
0.875
0.813
0.582
0.875
0.015
0.008
0.013
0.389
0.001
0.039
0.875
0.140
0.480
0.019
0.582
0.104
0.694
0.186
0.005
0.019
0.022
0.046
0.019

2.16
0.83
2.49
13.83
3.16
-7.84
-0.51
18.16
12.16
3.83
9.49
0.16
13.49
0.83
-3.84
4.83
8.83
15.83
-9.17
-9.51
-10.84
-9.17
2.16
-20.17
-19.51
-12.17
6.49
0.49
-7.84
-2.17
-11.51
1.83
-10.84
-15.51
-6.84
-2.84
4.16
1.83
1.49
0.16
1.83

19.17
17.84
19.51
30.84
20.17
9.17
16.51
35.17
29.17
20.84
26.51
17.17
30.51
17.84
13.17
21.84
25.84
32.84
7.84
7.51
6.17
7.84
19.17
-3.16
-2.49
4.84
23.51
17.51
9.17
14.84
5.51
18.84
6.17
1.51
10.17
14.17
21.17
18.84
18.51
17.17
18.84

71

24

25

15
21
22
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22

21.67*
-0.67
11.00*
7.33
26.00*
20.00*
11.67*
17.33*
8
21.33*
8.67*
4
12.67*
16.67*
23.67*
3
2.67
1.33
3
14.33*
-8
3.67
-7.33
18.67*
12.67*
4.33
10.00*
0.67
14.00*
1.33
-3.33
5.33
9.33*
16.33*
-15.67*
-16.00*
-17.33*
-15.67*
-4.33
-26.67*
-15.00*

4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208

0.000
0.875
0.013
0.089
0.000
0.000
0.008
0.000
0.065
0.000
0.046
0.348
0.005
0.000
0.000
0.480
0.530
0.753
0.480
0.002
0.065
0.389
0.089
0.000
0.005
0.309
0.022
0.875
0.002
0.753
0.433
0.212
0.032
0.000
0.001
0.000
0.000
0.001
0.309
0.000
0.001

13.16
-9.17
2.49
-1.17
17.49
11.49
3.16
8.83
-0.51
12.83
0.16
-4.51
4.16
8.16
15.16
-5.51
-5.84
-7.17
-5.51
5.83
-16.51
-4.84
-15.84
10.16
4.16
-4.17
1.49
-7.84
5.49
-7.17
-11.84
-3.17
0.83
7.83
-24.17
-24.51
-25.84
-24.17
-12.84
-35.17
-23.51

30.17
7.84
19.51
15.84
34.51
28.51
20.17
25.84
16.51
29.84
17.17
12.51
21.17
25.17
32.17
11.51
11.17
9.84
11.51
22.84
0.51
12.17
1.17
27.17
21.17
12.84
18.51
9.17
22.51
9.84
5.17
13.84
17.84
24.84
-7.16
-7.49
-8.83
-7.16
4.17
-18.16
-6.49

72

31

32

23
24
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25

-26.00*
-18.67*
-6
-14.33*
-8.67*
-18.00*
-4.67
-17.33*
-22.00*
-13.33*
-9.33*
-2.33
-9.67*
-10.00*
-11.33*
-9.67*
1.67
-20.67*
-9.00*
-20.00*
-12.67*
6
-8.33
-2.67
-12.00*
1.33
-11.33*
-16.00*
-7.33
-3.33
3.67
-1.33
-1.67
-3
-1.33
10.00*
-12.33*
-0.67
-11.67*
-4.33
14.33*

4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208

0.000
0.000
0.162
0.002
0.046
0.000
0.274
0.000
0.000
0.003
0.032
0.582
0.027
0.022
0.010
0.027
0.694
0.000
0.039
0.000
0.005
0.162
0.055
0.530
0.007
0.753
0.010
0.000
0.089
0.433
0.389
0.753
0.694
0.480
0.753
0.022
0.006
0.875
0.008
0.309
0.002

-34.51
-27.17
-14.51
-22.84
-17.17
-26.51
-13.17
-25.84
-30.51
-21.84
-17.84
-10.84
-18.17
-18.51
-19.84
-18.17
-6.84
-29.17
-17.51
-28.51
-21.17
-2.51
-16.84
-11.17
-20.51
-7.17
-19.84
-24.51
-15.84
-11.84
-4.84
-9.84
-10.17
-11.51
-9.84
1.49
-20.84
-9.17
-20.17
-12.84
5.83

-17.49
-10.16
2.51
-5.83
-0.16
-9.49
3.84
-8.83
-13.49
-4.83
-0.83
6.17
-1.16
-1.49
-2.83
-1.16
10.17
-12.16
-0.49
-11.49
-4.16
14.51
0.17
5.84
-3.49
9.84
-2.83
-7.49
1.17
5.17
12.17
7.17
6.84
5.51
7.17
18.51
-3.83
7.84
-3.16
4.17
22.84

73

33

34

31
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33

8.33
5.67
-3.67
9.67*
-3
-7.67
1
5
12.00*
-7
-7.33
-8.67*
-7
4.33
-18.00*
-6.33
-17.33*
-10.00*
8.67*
2.67
-5.67
-9.33*
4
-8.67*
-13.33*
-4.67
-0.67
6.33
2.33
2
0.67
2.33
13.67*
-8.67*
3
-8
-0.67
18.00*
12.00*
3.67
9.33*

4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208

0.055
0.186
0.389
0.027
0.480
0.076
0.813
0.242
0.007
0.104
0.089
0.046
0.104
0.309
0.000
0.140
0.000
0.022
0.046
0.530
0.186
0.032
0.348
0.046
0.003
0.274
0.875
0.140
0.582
0.637
0.875
0.582
0.002
0.046
0.480
0.065
0.875
0.000
0.007
0.389
0.032

-0.17
-2.84
-12.17
1.16
-11.51
-16.17
-7.51
-3.51
3.49
-15.51
-15.84
-17.17
-15.51
-4.17
-26.51
-14.84
-25.84
-18.51
0.16
-5.84
-14.17
-17.84
-4.51
-17.17
-21.84
-13.17
-9.17
-2.17
-6.17
-6.51
-7.84
-6.17
5.16
-17.17
-5.51
-16.51
-9.17
9.49
3.49
-4.84
0.83

16.84
14.17
4.84
18.17
5.51
0.84
9.51
13.51
20.51
1.51
1.17
-0.16
1.51
12.84
-9.49
2.17
-8.83
-1.49
17.17
11.17
2.84
-0.83
12.51
-0.16
-4.83
3.84
7.84
14.84
10.84
10.51
9.17
10.84
22.17
-0.16
11.51
0.51
7.84
26.51
20.51
12.17
17.84

74

35

41

35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
42

13.33*
0.67
-4
4.67
8.67*
15.67*
-11.00*
-11.33*
-12.67*
-11.00*
0.33
-22.00*
-10.33*
-21.33*
-14.00*
4.67
-1.33
-9.67*
-4
-13.33*
-12.67*
-17.33*
-8.67*
-4.67
2.33
1.67
1.33
0
1.67
13.00*
-9.33*
2.33
-8.67*
-1.33
17.33*
11.33*
3
8.67*
-0.67
12.67*
-4.67

4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208

0.003
0.875
0.348
0.274
0.046
0.001
0.013
0.010
0.005
0.013
0.937
0.000
0.019
0.000
0.002
0.274
0.753
0.027
0.348
0.003
0.005
0.000
0.046
0.274
0.582
0.694
0.753
1.000
0.694
0.004
0.032
0.582
0.046
0.753
0.000
0.010
0.480
0.046
0.875
0.005
0.274

4.83
-7.84
-12.51
-3.84
0.16
7.16
-19.51
-19.84
-21.17
-19.51
-8.17
-30.51
-18.84
-29.84
-22.51
-3.84
-9.84
-18.17
-12.51
-21.84
-21.17
-25.84
-17.17
-13.17
-6.17
-6.84
-7.17
-8.51
-6.84
4.49
-17.84
-6.17
-17.17
-9.84
8.83
2.83
-5.51
0.16
-9.17
4.16
-13.17

21.84
9.17
4.51
13.17
17.17
24.17
-2.49
-2.83
-4.16
-2.49
8.84
-13.49
-1.83
-12.83
-5.49
13.17
7.17
-1.16
4.51
-4.83
-4.16
-8.83
-0.16
3.84
10.84
10.17
9.84
8.51
10.17
21.51
-0.83
10.84
-0.16
7.17
25.84
19.84
11.51
17.17
7.84
21.17
3.84

75

42

43

43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
44
45

4
8
15.00*
6.33
6
4.67
6.33
17.67*
-4.67
7
-4
3.33
22.00*
16.00*
7.67
13.33*
4
17.33*
4.67
8.67*
12.67*
19.67*
-2.33
-2.67
-4
-2.33
9.00*
-13.33*
-1.67
-12.67*
-5.33
13.33*
7.33
-1
4.67
-4.67
8.67*
-4
-8.67*
4
11.00*

4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208

0.348
0.065
0.001
0.140
0.162
0.274
0.140
0.000
0.274
0.104
0.348
0.433
0.000
0.000
0.076
0.003
0.348
0.000
0.274
0.046
0.005
0.000
0.582
0.530
0.348
0.582
0.039
0.003
0.694
0.005
0.212
0.003
0.089
0.813
0.274
0.274
0.046
0.348
0.046
0.348
0.013

-4.51
-0.51
6.49
-2.17
-2.51
-3.84
-2.17
9.16
-13.17
-1.51
-12.51
-5.17
13.49
7.49
-0.84
4.83
-4.51
8.83
-3.84
0.16
4.16
11.16
-10.84
-11.17
-12.51
-10.84
0.49
-21.84
-10.17
-21.17
-13.84
4.83
-1.17
-9.51
-3.84
-13.17
0.16
-12.51
-17.17
-4.51
2.49

12.51
16.51
23.51
14.84
14.51
13.17
14.84
26.17
3.84
15.51
4.51
11.84
30.51
24.51
16.17
21.84
12.51
25.84
13.17
17.17
21.17
28.17
6.17
5.84
4.51
6.17
17.51
-4.83
6.84
-4.16
3.17
21.84
15.84
7.51
13.17
3.84
17.17
4.51
-0.16
12.51
19.51

76

44

45

tunas

11

11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
12
13
14

-6.33
-6.67
-8
-6.33
5
-17.33*
-5.67
-16.67*
-9.33*
9.33*
3.33
-5
0.67
-8.67*
4.67
-8
-12.67*
-4
7
-13.33*
-13.67*
-15.00*
-13.33*
-2
-24.33*
-12.67*
-23.67*
-16.33*
2.33
-3.67
-12.00*
-6.33
-15.67*
-2.33
-15.00*
-19.67*
-11.00*
-7
-0.33
-1.33*
-0.67

4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
4.208
0.548
0.548
0.548

0.140
0.121
0.065
0.140
0.242
0.000
0.186
0.000
0.032
0.032
0.433
0.242
0.875
0.046
0.274
0.065
0.005
0.348
0.104
0.003
0.002
0.001
0.003
0.637
0.000
0.005
0.000
0.000
0.582
0.389
0.007
0.140
0.001
0.582
0.001
0.000
0.013
0.104
0.546
0.019
0.231

-14.84
-15.17
-16.51
-14.84
-3.51
-25.84
-14.17
-25.17
-17.84
0.83
-5.17
-13.51
-7.84
-17.17
-3.84
-16.51
-21.17
-12.51
-1.51
-21.84
-22.17
-23.51
-21.84
-10.51
-32.84
-21.17
-32.17
-24.84
-6.17
-12.17
-20.51
-14.84
-24.17
-10.84
-23.51
-28.17
-19.51
-15.51
-1.44
-2.44
-1.77

2.17
1.84
0.51
2.17
13.51
-8.83
2.84
-8.16
-0.83
17.84
11.84
3.51
9.17
-0.16
13.17
0.51
-4.16
4.51
15.51
-4.83
-5.16
-6.49
-4.83
6.51
-15.83
-4.16
-15.16
-7.83
10.84
4.84
-3.49
2.17
-7.16
6.17
-6.49
-11.16
-2.49
1.51
0.77
-0.23
0.44

77

12

13

15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
14
15
21
22

0.67
-1
-1.33*
-1.33*
-0.33
0.33
0
-0.67
-0.33
-1
-0.67
-0.67
-1
-0.67
-0.33
0.33
0.33
-1
-0.33
1
-0.67
-1
-1
0
0.67
0.33
-0.33
0
-0.67
-0.33
-0.33
-0.67
-0.33
0
0.67
1.33*
1
0.67
2.00*
0.33
0

0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548

0.231
0.075
0.019
0.019
0.546
0.546
1.000
0.231
0.546
0.075
0.231
0.231
0.075
0.231
0.546
0.546
0.546
0.075
0.546
0.075
0.231
0.075
0.075
1.000
0.231
0.546
0.546
1.000
0.231
0.546
0.546
0.231
0.546
1.000
0.231
0.019
0.075
0.231
0.001
0.546
1.000

-0.44
-2.11
-2.44
-2.44
-1.44
-0.77
-1.11
-1.77
-1.44
-2.11
-1.77
-1.77
-2.11
-1.77
-1.44
-0.77
-0.77
-2.11
-1.44
-0.11
-1.77
-2.11
-2.11
-1.11
-0.44
-0.77
-1.44
-1.11
-1.77
-1.44
-1.44
-1.77
-1.44
-1.11
-0.44
0.23
-0.11
-0.44
0.89
-0.77
-1.11

1.77
0.11
-0.23
-0.23
0.77
1.44
1.11
0.44
0.77
0.11
0.44
0.44
0.11
0.44
0.77
1.44
1.44
0.11
0.77
2.11
0.44
0.11
0.11
1.11
1.77
1.44
0.77
1.11
0.44
0.77
0.77
0.44
0.77
1.11
1.77
2.44
2.11
1.77
3.11
1.44
1.11

78

14

15

23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
21
22
23
24
25

0
1
1.67*
1.33*
0.67
1
0.33
0.67
0.67
0.33
0.67
1
1.67*
0.67
0.33
-0.67
1.33*
-0.33
-0.67
-0.67
0.33
1
0.67
0
0.33
-0.33
0
0
-0.33
0
0.33
1
-0.67
-1
-2.00*
-1.33*
-1.67*
-2.00*
-2.00*
-1
-0.33

0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548

1.000
0.075
0.004
0.019
0.231
0.075
0.546
0.231
0.231
0.546
0.231
0.075
0.004
0.231
0.546
0.231
0.019
0.546
0.231
0.231
0.546
0.075
0.231
1.000
0.546
0.546
1.000
1.000
0.546
1.000
0.546
0.075
0.231
0.075
0.001
0.019
0.004
0.001
0.001
0.075
0.546

-1.11
-0.11
0.56
0.23
-0.44
-0.11
-0.77
-0.44
-0.44
-0.77
-0.44
-0.11
0.56
-0.44
-0.77
-1.77
0.23
-1.44
-1.77
-1.77
-0.77
-0.11
-0.44
-1.11
-0.77
-1.44
-1.11
-1.11
-1.44
-1.11
-0.77
-0.11
-1.77
-2.11
-3.11
-2.44
-2.77
-3.11
-3.11
-2.11
-1.44

1.11
2.11
2.77
2.44
1.77
2.11
1.44
1.77
1.77
1.44
1.77
2.11
2.77
1.77
1.44
0.44
2.44
0.77
0.44
0.44
1.44
2.11
1.77
1.11
1.44
0.77
1.11
1.11
0.77
1.11
1.44
2.11
0.44
0.11
-0.89
-0.23
-0.56
-0.89
-0.89
0.11
0.77

79

21

22

31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
23
24
25
31
32
33

-0.67
-1.33*
-1
-1.67*
-1.33*
-1.33*
-1.67*
-1.33*
-1
-0.33
1
0.67
-0.33
0.33
1.67*
-0.33
-0.33
0.67
1.33*
1
0.33
0.67
0
0.33
0.33
0
0.33
0.67
1.33*
1.33*
1
0
0.67
2.00*
0.33
0
1
1.67*
1.33*
0.67
1

0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548

0.231
0.019
0.075
0.004
0.019
0.019
0.004
0.019
0.075
0.546
0.075
0.231
0.546
0.546
0.004
0.546
0.546
0.231
0.019
0.075
0.546
0.231
1.000
0.546
0.546
1.000
0.546
0.231
0.019
0.019
0.075
1.000
0.231
0.001
0.546
1.000
0.075
0.004
0.019
0.231
0.075

-1.77
-2.44
-2.11
-2.77
-2.44
-2.44
-2.77
-2.44
-2.11
-1.44
-0.11
-0.44
-1.44
-0.77
0.56
-1.44
-1.44
-0.44
0.23
-0.11
-0.77
-0.44
-1.11
-0.77
-0.77
-1.11
-0.77
-0.44
0.23
0.23
-0.11
-1.11
-0.44
0.89
-0.77
-1.11
-0.11
0.56
0.23
-0.44
-0.11

0.44
-0.23
0.11
-0.56
-0.23
-0.23
-0.56
-0.23
0.11
0.77
2.11
1.77
0.77
1.44
2.77
0.77
0.77
1.77
2.44
2.11
1.44
1.77
1.11
1.44
1.44
1.11
1.44
1.77
2.44
2.44
2.11
1.11
1.77
3.11
1.44
1.11
2.11
2.77
2.44
1.77
2.11

80

23

24

34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
25
31
32
33
34
35
41

0.33
0.67
0.67
0.33
0.67
1
1.67*
1.33*
1
0
0.67
2.00*
0.33
0
1
1.67*
1.33*
0.67
1
0.33
0.67
0.67
0.33
0.67
1
1.67*
0.33
0
-1
-0.33
1
-0.67
-1
-1
0.67
0.33
-0.33
0
-0.67
-0.33
-0.33

0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548

0.546
0.231
0.231
0.546
0.231
0.075
0.004
0.019
0.075
1.000
0.231
0.001
0.546
1.000
0.075
0.004
0.019
0.231
0.075
0.546
0.231
0.231
0.546
0.231
0.075
0.004
0.546
1.000
0.075
0.546
0.075
0.231
0.075
0.075
0.231
0.546
0.546
1.000
0.231
0.546
0.546

-0.77
-0.44
-0.44
-0.77
-0.44
-0.11
0.56
0.23
-0.11
-1.11
-0.44
0.89
-0.77
-1.11
-0.11
0.56
0.23
-0.44
-0.11
-0.77
-0.44
-0.44
-0.77
-0.44
-0.11
0.56
-0.77
-1.11
-2.11
-1.44
-0.11
-1.77
-2.11
-2.11
-0.44
-0.77
-1.44
-1.11
-1.77
-1.44
-1.44

1.44
1.77
1.77
1.44
1.77
2.11
2.77
2.44
2.11
1.11
1.77
3.11
1.44
1.11
2.11
2.77
2.44
1.77
2.11
1.44
1.77
1.77
1.44
1.77
2.11
2.77
1.44
1.11
0.11
0.77
2.11
0.44
0.11
0.11
1.77
1.44
0.77
1.11
0.44
0.77
0.77

81

25

31

42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
31
32
33
34
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
32
33
34
35
41
42
43
44

-0.67
-0.33
0
0.67
-0.33
-0.67
-1.67*
-1
0.33
-1.33*
-1.67*
-1.67*
-0.67
-0.33
-1
-0.67
-1.33*
-1
-1
-1.33*
-1
-0.67
0
0
-0.33
-1.33*
-0.67
0.67
-1
-1.33*
-1.33*
-0.33
0.33
-0.67
-0.33
-1
-0.67
-0.67
-1
-0.67
-0.33

0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548

0.231
0.546
1.000
0.231
0.546
0.231
0.004
0.075
0.546
0.019
0.004
0.004
0.231
0.546
0.075
0.231
0.019
0.075
0.075
0.019
0.075
0.231
1.000
1.000
0.546
0.019
0.231
0.231
0.075
0.019
0.019
0.546
0.546
0.231
0.546
0.075
0.231
0.231
0.075
0.231
0.546

-1.77
-1.44
-1.11
-0.44
-1.44
-1.77
-2.77
-2.11
-0.77
-2.44
-2.77
-2.77
-1.77
-1.44
-2.11
-1.77
-2.44
-2.11
-2.11
-2.44
-2.11
-1.77
-1.11
-1.11
-1.44
-2.44
-1.77
-0.44
-2.11
-2.44
-2.44
-1.44
-0.77
-1.77
-1.44
-2.11
-1.77
-1.77
-2.11
-1.77
-1.44

0.44
0.77
1.11
1.77
0.77
0.44
-0.56
0.11
1.44
-0.23
-0.56
-0.56
0.44
0.77
0.11
0.44
-0.23
0.11
0.11
-0.23
0.11
0.44
1.11
1.11
0.77
-0.23
0.44
1.77
0.11
-0.23
-0.23
0.77
1.44
0.44
0.77
0.11
0.44
0.44
0.11
0.44
0.77

82

32

33

34

45
0.33
11
0.67
12
0.33
13
-0.67
14
0
15 1.33*
21
-0.33
22
-0.67
23
-0.67
24
0.33
25
1
31
0.67
33
0.33
34
-0.33
35
0
41
0
42
-0.33
43
0
44
0.33
45
1
11
0.33
12
0
13
-1
14
-0.33
15
1
21
-0.67
22
-1
23
-1
24
0
25
0.67
31
0.33
32
-0.33
34
-0.67
35
-0.33
41
-0.33
42
-0.67
43
-0.33
44
0
45
0.67
11
1
12
0.67

0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548

0.546
0.231
0.546
0.231
1.000
0.019
0.546
0.231
0.231
0.546
0.075
0.231
0.546
0.546
1.000
1.000
0.546
1.000
0.546
0.075
0.546
1.000
0.075
0.546
0.075
0.231
0.075
0.075
1.000
0.231
0.546
0.546
0.231
0.546
0.546
0.231
0.546
1.000
0.231
0.075
0.231

-0.77
-0.44
-0.77
-1.77
-1.11
0.23
-1.44
-1.77
-1.77
-0.77
-0.11
-0.44
-0.77
-1.44
-1.11
-1.11
-1.44
-1.11
-0.77
-0.11
-0.77
-1.11
-2.11
-1.44
-0.11
-1.77
-2.11
-2.11
-1.11
-0.44
-0.77
-1.44
-1.77
-1.44
-1.44
-1.77
-1.44
-1.11
-0.44
-0.11
-0.44

1.44
1.77
1.44
0.44
1.11
2.44
0.77
0.44
0.44
1.44
2.11
1.77
1.44
0.77
1.11
1.11
0.77
1.11
1.44
2.11
1.44
1.11
0.11
0.77
2.11
0.44
0.11
0.11
1.11
1.77
1.44
0.77
0.44
0.77
0.77
0.44
0.77
1.11
1.77
2.11
1.77

83

35

41

13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
35
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
41
42
43
44
45
11
12
13
14
15

-0.33
0.33
1.67*
0
-0.33
-0.33
0.67
1.33*
1
0.33
0.67
0.33
0.33
0
0.33
0.67
1.33*
0.67
0.33
-0.67
0
1.33*
-0.33
-0.67
-0.67
0.33
1
0.67
0
0.33
-0.33
0
-0.33
0
0.33
1
0.67
0.33
-0.67
0
1.33*

0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548

0.546
0.546
0.004
1.000
0.546
0.546
0.231
0.019
0.075
0.546
0.231
0.546
0.546
1.000
0.546
0.231
0.019
0.231
0.546
0.231
1.000
0.019
0.546
0.231
0.231
0.546
0.075
0.231
1.000
0.546
0.546
1.000
0.546
1.000
0.546
0.075
0.231
0.546
0.231
1.000
0.019

-1.44
-0.77
0.56
-1.11
-1.44
-1.44
-0.44
0.23
-0.11
-0.77
-0.44
-0.77
-0.77
-1.11
-0.77
-0.44
0.23
-0.44
-0.77
-1.77
-1.11
0.23
-1.44
-1.77
-1.77
-0.77
-0.11
-0.44
-1.11
-0.77
-1.44
-1.11
-1.44
-1.11
-0.77
-0.11
-0.44
-0.77
-1.77
-1.11
0.23

0.77
1.44
2.77
1.11
0.77
0.77
1.77
2.44
2.11
1.44
1.77
1.44
1.44
1.11
1.44
1.77
2.44
1.77
1.44
0.44
1.11
2.44
0.77
0.44
0.44
1.44
2.11
1.77
1.11
1.44
0.77
1.11
0.77
1.11
1.44
2.11
1.77
1.44
0.44
1.11
2.44

84

42

43

21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
42
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
43
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23

-0.33
-0.67
-0.67
0.33
1
0.67
0
0.33
-0.33
0
-0.33
0
0.33
1
1
0.67
-0.33
0.33
1.67*
0
-0.33
-0.33
0.67
1.33*
1
0.33
0.67
0
0.33
0.33
0.33
0.67
1.33*
0.67
0.33
-0.67
0
1.33*
-0.33
-0.67
-0.67

0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548

0.546
0.231
0.231
0.546
0.075
0.231
1.000
0.546
0.546
1.000
0.546
1.000
0.546
0.075
0.075
0.231
0.546
0.546
0.004
1.000
0.546
0.546
0.231
0.019
0.075
0.546
0.231
1.000
0.546
0.546
0.546
0.231
0.019
0.231
0.546
0.231
1.000
0.019
0.546
0.231
0.231

-1.44
-1.77
-1.77
-0.77
-0.11
-0.44
-1.11
-0.77
-1.44
-1.11
-1.44
-1.11
-0.77
-0.11
-0.11
-0.44
-1.44
-0.77
0.56
-1.11
-1.44
-1.44
-0.44
0.23
-0.11
-0.77
-0.44
-1.11
-0.77
-0.77
-0.77
-0.44
0.23
-0.44
-0.77
-1.77
-1.11
0.23
-1.44
-1.77
-1.77

0.77
0.44
0.44
1.44
2.11
1.77
1.11
1.44
0.77
1.11
0.77
1.11
1.44
2.11
2.11
1.77
0.77
1.44
2.77
1.11
0.77
0.77
1.77
2.44
2.11
1.44
1.77
1.11
1.44
1.44
1.44
1.77
2.44
1.77
1.44
0.44
1.11
2.44
0.77
0.44
0.44

85

44

45

24
25
31
32
33
34
35
41
42
44
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31
32
33
34
35
41
42
43
45
11
12
13
14
15
21
22
23
24
25
31

0.33
1
0.67
0
0.33
-0.33
0
0
-0.33
0.33
1
0.33
0
-1
-0.33
1
-0.67
-1
-1
0
0.67
0.33
-0.33
0
-0.67
-0.33
-0.33
-0.67
-0.33
0.67
-0.33
-0.67
-1.67*
-1
0.33
-1.33*
-1.67*
-1.67*
-0.67
0
-0.33

0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548

0.546
0.075
0.231
1.000
0.546
0.546
1.000
1.000
0.546
0.546
0.075
0.546
1.000
0.075
0.546
0.075
0.231
0.075
0.075
1.000
0.231
0.546
0.546
1.000
0.231
0.546
0.546
0.231
0.546
0.231
0.546
0.231
0.004
0.075
0.546
0.019
0.004
0.004
0.231
1.000
0.546

-0.77
-0.11
-0.44
-1.11
-0.77
-1.44
-1.11
-1.11
-1.44
-0.77
-0.11
-0.77
-1.11
-2.11
-1.44
-0.11
-1.77
-2.11
-2.11
-1.11
-0.44
-0.77
-1.44
-1.11
-1.77
-1.44
-1.44
-1.77
-1.44
-0.44
-1.44
-1.77
-2.77
-2.11
-0.77
-2.44
-2.77
-2.77
-1.77
-1.11
-1.44

1.44
2.11
1.77
1.11
1.44
0.77
1.11
1.11
0.77
1.44
2.11
1.44
1.11
0.11
0.77
2.11
0.44
0.11
0.11
1.11
1.77
1.44
0.77
1.11
0.44
0.77
0.77
0.44
0.77
1.77
0.77
0.44
-0.56
0.11
1.44
-0.23
-0.56
-0.56
0.44
1.11
0.77

86

32
-1
33
-0.67
34 -1.33*
35
-1
41
-1
42 -1.33*
43
-1
*. The mean difference is significant at the .05 level.
Based on observed means.
The error
term is Mean
Square(Error)
= .450.
44
-0.67
0.548

0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548
0.548

0.075
0.231
0.019
0.075
0.075
0.019
0.075

0.231

-1.77

-2.11
-1.77
-2.44
-2.11
-2.11
-2.44
-2.11

0.44

0.11
0.44
-0.23
0.11
0.11
-0.23
0.11