Isolation of Three Flavonoids

from
Withania Somnifera Leaves
(Solanaceae) and their
Antimicrobial Activities
Bashir, H. S.
Mohammed, A. M.
Magsoud, A. S.
Shaoub, A. M.4

Presented by
ERRISKA RAHMA PUTRI (3325102418)

Withania Somnifera (Solanaceae)

Taksonomi
170 cm (5 to 6 ft).
Plantae

Subkingdo
m

Tracheobionta

Division

Magnoliophyta

Class

Magnoliopsida
Asteridae

Order

Solanales

Family

Solanaceae

Subfamily

Asteroideae

Genus
Species

Withania
W. somnifera

30

-1
5

Subclass

cm

Kingdom

Plant Chemicals
(+)withanine,
somniferine,
somnine,
somniferinine,
withananine, anhydrine, methanol, hexane, diethyl ether,
alkaloid (0.13-0.31%), choline, tropanol, pseudotopanol,
cuscokygrene, 3-tigioyloxytropana, isopelletierine, withaferin-A,
starch, glycosides, dulcitol, withancil, aspartic acid, glycine,
tyrosine,
alanine,
glutamic
acid,
cysteine.

http://www.iloveindia.com/indian-herbs/ashwagandha.html

Ashwagandha
Withania somnifera, umumnya
dikenal sebagai ashwagandha,
Ginseng India, dan ceri musim
dingin.
obat herbal di Ayurvedic dan
ramuan dalam dunia medis selama
lebih dari 3000 tahun.
Manfaat ashwagandha antara lain
sebagai obat bronkitis, asma,
maag, anti - inflamasi, mengatasi
gangguan kognitif dan neurologis,
dan insomnia.
Berdasarkan manfaat Aswaganha
tersebut
diduga
mengandung

Bahan

MATERIALS AND
METHODS

Daun Withania somnifera (Solanaceae) yang

dikumpulkan pada Maret 2010 dari Erkowait (Timur
dari Sudan)
Reagensia pro analitis
Mikroorganisme yang digunakan :
Bacillus
subtilis,
Escherichia
coli,
Neisseria
gonorrhoeae,
Pseudomonas
aeruginosa,
dan
Staphylococcus aureus.
Diperoleh dari Departemen Botani, Universitas Cairo,
Cairo City, Mesir. Organisme yang disimpan dalam
Alat
agar
posisi
Alat
Gelas
Kaca dan disimpan di lemari
miring dalam
botol
McCartney
es.
Spektrofotometer UV

Lampu UV

Ekstraksi Konstituen Daun

Withania Somnifera
Daun Kering Withania Somnifera
1 kg
Diblender

Diekstraksi dengan kloroform (penghilangan klorofil, resin, dan bahan lilin).

Bubur Withania Somnifera

Dimaserasi dengan metanol 85%, 24 jam, suhu kamar, sesekali diaduk.
Disaring dengan vakum

Ekstrak Withania Somnifera

Proses ekstraksi daun kering Withania Somnifera diulangi 1 x dengan metanol 85%
dan pengulangan ekstraksi dilakukan 2 x dengan metanol 50%.

Ekstrak 1
(Metanol
85%)

Ekstrak 2
(Metanol
85%)

Ekstrak 3
(Metanol
50%)

Ekstrak 4
(Metanol
50%)

Dicampurkan
Pelarut diuapkan di rotary evaporator, T : 40C,
tekanan rendah

Ekstrak kering Withania

Somnifera (53 g)

Persiapan Uji Standar

Organisme
1 mL kaldu
organisme uji
Dioleskan pada permukaan agar.
Diinkubasi pada 37 C selama 24 jam.

Bakteri pada agar (108-109 koloni)

Dicuci saline steril normal
Suspensi disimpan dalam lemari es, T : 4C sampai digunakan.

Testing For Antibacterial

2 mL standard
bacteria stock
Activity

suspension
Mixed with 200 mL of sterile molten nutrient agar, at 45 C.
Cut and distributed 20 mL into sterile Petri dishes.

Bacteria in nutrient agar

Filled with 0.1 ml extract (pure component).
Allowed to diffuse at room temperature for two hours.
Incubated in the up right position at 37 C for 18 hours.
Measured the diameter inhibition zones and averaged.

Preliminary Phytochemical screening of the

Withania somnifera

Flavonoids

3 mL ekstrak daun Withania

somnifera

Diberi beberapa tetes larutan AlCl3

+ if Larutan Berwarna Kekuning

3 mL ekstrak daun Withania

somnifera

Diberi beberapa tetes larutan KOH

+ if Larutan Berwarna Kuning Tua

Sedikit ekstrak daun Withania

Somnifera

Dimasukkan potongan kecil pita Magnesium

Ditambahkan beberapa tetes HCl pekat

If Larutan Berwarna Merah Tua + Flavon

Glikosida

Shinoda Test

Preliminary Phytochemical screening of the

Withania somnifera

Steroid dan Terpenoid

40 mL ekstrak daun Withania
somnifera

Diuapkan pada water bath

Ekstrak kering (Residu)

Ditambahkan petroleum eter
Diekstraksi dengan 20 mL kloroform

5 mL ekstrak kloroform
Ditambahkan 0,5 mL acetic anhydride
Ditambahkan 2 tetes asam sulfat pekat

Ekstrak kering (Residu)

Diekstraksi dengan 20 mL kloroform

+ Steroid
If Larutan
Hijau

+ Terpenoid
If no pink-violet
colour

Preliminary Phytochemical screening of the

Withania somnifera

Alkaloid
30 mL ekstrak daun Withania
somnifera
Diuapkan pada water bath
Ditambahkan 5 mL HCl 2 N dan dipanaskan 10 menit
Didinginkan, saring dan ambil filtrat.

2 mL filtrat
Ditambahkan beberapa tetes Reagen Mayer
(Potassium mercuric iodide solution).

+ Alkaloid if terdapat endapan

Preliminary Phytochemical screening of the

Withania somnifera

Tannin
25 mL ekstrak daun Withania
somnifera

Diuapkan pada water bath

Ekstrak Kering (Residu)

Diekstraksi dengan n-heksana
Disaring dan simpan filtrat

Filtrat n-heksana
Dicampurkan dengan larutan garam panas (NaCl 0,9%)
Didinginkan, saring, dan ditambahkan 10 mL FeCl3

+ Tannin jika filtrat menjadi

berwarna biru

Preliminary Phytochemical screening of the

Withania somnifera

Isolation of flavonoids
Ekstrak kering daun Withania
somnifera Dimasukkan dalam kolom poliamida 6S (80x3 cm)
Dielusi dengan air dan pencampuran air-metanol

7 Fraksi
Fraksi utama digabungkan dan dibagi 3 fraksi

Fraksi A (5g)

Fraksi B
Dikromatografi dengan sepadex LH 20 dan kertas saring (3g)

W1
(29 mg)

W2
(36
mg)

W3
(27 mg)

W4
(21
mg)

RESULTS AND
DISCUSSION
1. Weight and percentage yield of
some compounds extracted from W.
somnifera leaves.
components

weight

Percentage
yield

Compound W1
(mg)

29

0.58

Compound W2
(mg)

36

0.72

Compound W3
(mg)

27

0.77

2.

The Rf values and colour reactions of pure compounds

3.

The IR spectroscopic analysis of pure compounds extracts

of Withania somnifera leaves gave the following
characteristic absorption peaks

4. The Pure compounds dissolved in

methanol, were subjected to UV
spectrophotometric.

Terdapatnya NaOMe, AlCl3, AlCl3 / HCl, dan pencampuran reagen NaOAc / H3BO3
yang terpisah ditambahkan ke dalam larutan metanol yang diselidiki material dan
pengukuran UV (tabel 4) untuk menentukan posisi gugus hidroksil.

5.

The antibacterial activity of crude and pure compounds

extracted from Withania somnifera

Ekstrak kasar Withania somnifera menunjukkan penghambatan terhadap Escherichia coli,

Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus dan penghambatan lemah terhadap
Neisseria gonorrhoeae dan Bacillus subtilis.
Komponen W1 cukup menghambat lima organisme tersebut tetapi lebih kecil dari ekstrak
kasar.
Senyawa W2 menunjukkan penghambatan lemah terhadap semua organisme.
Senyawa W3 memiliki nilai penghambatan yang paling tinggi terhadap semua organisme,
namun pada Pseudomonas aeruginosa aktivitasnya rendah.

H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) gambar (1) menunjukkan (ppm): 3.0 - 3.5 (m,
3H) ditetapkan untuk fungsi metoksil; 4,2-5 (m, 6H) terhitung proton gula,
6,04 (s, 1H) dan 6,25 (d, 1H), masing-masing merupakan C6-dan C8-H.
Resonansi pada 6.84 dan 7.98 ppm merupakan informasi adanya senyawa
aromatik H dari cincin B.

Senyawa W2 menyerap pada max (MeOH) 267, 350 nm, spektrum NaOMe
ditunjukkan pergeseran batokromik dari +49 nm (tabel 4) menunjukkan
adanya 4-OH dan tidak adanya 3-OH. Hasil pergeseran UV dan 1H-NMR
menjelaskan struktur senyawa W2 (gambar: 2).

Data spektrum UV senyawa W 3 dalam MeOH ditandai sebuah flavon dengan tiga gugus hidroksil.
Penambahan NaOMe memberikan pergeseran batokromik dari 30 nm (tabel 4) menunjukkan 4- OH. Juga 7OH dan katekol gugus dalam cincin B adalah ditandai dengan reagen pergeseran NaOAc dan NaOAc / H 3BO3
masing-masing. 1H-NMR spektrum W3 (Gambar: 3) menunjukkan: 3,2-3,9 (m) ditetapkan untuk proton gula.
Selain itu, hanya ada satu sinyal proton anomerik gula gugus yang melekat pada kerangka flavonoid (doublet
pada 5,4) membuktikan adanya rhamnosyl gugus (dengan gugus metil pada 1,1 ppm). Resonansi pada
6.15 dan 6,7 (d, 2H) ditugaskan untuk sinyal juga C 6-dan C8-H pada 6.92 (s, 1H), 7.03 (s, 1H) dan 7,41 (d,
1H) yang khas untuk flavon cincin B dengan 3 - dan 4 -OH fungsi. Resonansi pada 8 ppm adalah

BIOSINTESIS

http://www.enzyme-database.org/reaction/phenol/querc3gly.html

KESIMPULAN
Dari ekstrak metanol Withania somnifera
tiga flavonoid diisolasi dan dimurnikan
menggunakan teknik kromatografi yang
berbeda. Senyawa ini (W1, W2 dan W3)
telah
diidentifikasi
melalui
alat
spektroskopi IR, UV, 1H NMR, dan MS
spektroskopi. Ekstrak kasar dan murni
senyawa
menunjukkan
aktivitas
penghambatan
yang
baik
terhadap
patogen manusia : Bacillus subtilis,
Escherichia coli, Neisseria gonorrhoeae,
Pseudomonas
aeruginosa
dan
Staphylococcus aureus.