PENGUJIAN

Sumber S. invicta Koloni berasal dari Semua koloni monogyne dan

queenright (Ratu fungsional, merenung, dan pekerja), dan berasal dari ratu
baru yang dikawinkan atau dari monogyne koloni yang dikumpulkan dari
Daerah Gainesville, FL, USA , sekitar satu tahun sebelumnya. Koloni
dipertahankan sebagaimana dijelaskan sebelumnya (Bank et al. 1981), diberi
makan jangkrik tiga kali seminggu, dan minum air didalam tabung reaksi dan
tabung reaksi yang berisi 10% larutan sukrosa encer. Secara Umum
pengujian alaram digunakan Sepuluh sampai 15 koloni untuk setiap bioassay,
kecuali dinyatakan lain. Setidaknya 2 jam sebelum untuk mulai percobaan,
sekitar 100-200 semut pekerja dan beberapa induk dari setiap koloni
ditambahkan ke wadah plastik kecil dengan bagian dalam dilapisi dengan
Fluon untuk mencegahnya melarikan diri. Selain itu, sepotong plastik merah
ditempatkan di atas salah satu ujung wadah untuk mensimulasikan kondisi
gelap dan untuk mendorong semut bergerak merenung dan mereka
menetap ke dalam kelompok yang diam; Percobaan itu tidak mulai jika semut
pekerja tidak duduk diam ber kelompok. Semua perlakuan dan kontrol
ditempatkan di 20-ml vial sintilasi. sebelum waktu evaluasi, cap botol telah
dihapus dan 3 ml headspace yang cepat ditarik ke dalam jarum suntik plastik
5-ml (Henke-Sass Serigala Co). Sebuah jarum suntik tunggal digunakan
untuk setiap kontrol dan pengobatan. Satu mililiter headspace udara
kemudian dibuang kelebihan kelompok semut dari diam, pada tingkat yang
udara bersih (kosong) tidak akan menghasilkan respon, dan respon dari
semut diamati dan dicatat.
Tanggapan dievaluasi pada skala 1 sampai 4, dengan 1 = tidak ada
respon, 2 = beberapa antennation, 3 = 1-3 pekerja kehabisan kelompok
istirahat,dan 4 => 3 pekerja berjalan tak menentu dari istirahat dalam
kelompok. Setiap evaluasi berlangsung tidak lebih dari panjang waktu yang
dibutuhkan untuk membuang 1 ml kontrol udara tanpa mengkhawatirkan
semut. Penelitian dilakukan buta, dengan satu orang mempersiapkan sampel
headspace dan kedua menerapkan sampel yang tidak diketahui dan
pelaporan tanggapan. Semua unit bioassay semut diuji dengan semua
kontrol dan perawatan. Unit bioassay dievaluasi dalam urut, tetapi sampel
yang diberikan kepada evaluator yang acak. Dengan cara ini, unit uji yang
khawatir telah

cukup waktu untuk pulih sebelum tes berikutnya. Menghindari rumit

tanggapan intra-koloni, para pekerja di unit bioassay tidak menerima sampel
headspace dari mereka
koloni sendiri dalam botol pengobatan / control. Jika negatif atau kontrol
positif tidak mendapatkan respon yang tepat, Percobaan dihentikan.
Tes McNemar untuk signifikansi perubahan digunakan untuk
menganalisis data alarm bioassay. Untuk analisis, bioassay skor 1-2
dianggap tidak ada reaksi dan skor 3-4 dihitung sebagai alarm. Jumlah
kelompok pekerja yang ditampilkan reaksi alarm untuk sampel uji, tetapi tidak
dengan kontrol negatif, dibandingkan dengan jumlah
pekerja yang bereaksi terhadap kontrol negatif tetapi tidak untuk sampel uji.
Terguncang vs tergoyahkan Pekerja Diam pekerja semut api memiliki respon
alarm untuk volatil headspace dari terguncang pekerja, tetapi tidak untuk tak
tergoyahkan pekerja atau udara bersih (Vander Meer dkk. 2002). Kecuali
ditentukan lain, terguncang dan pekerja tak tergoyahkan (100-200 di 20-ml
kaca kilau botol dilapisi di dalam permukaan atas dengan Fluon) menjabat
sebagai kontrol positif dan negatif, masing-masing. Udara diambil dari kosong
20-ml vial menjabat sebagai lain negatif
kontrol.
Jumlah Venom Alkaloid di Terguncang Ant Vial Kami menguji apakah
gemetar disebabkan pekerja semut api untuk melepaskan racun alkaloid.
Lapisan tipis Fluon dicat pada bagian atas seperempat dari permukaan
dalam botol kilau 20-ml, dan
sekitar 100 semut api yang ditempatkan di setiap vial dan ditimbang. Botol
terguncang keras selama 3-5 detik, dan semut telah dihapus. n-Pentacosane
(200 ng di 20 ml heksana) adalah ditambahkan sebagai standar internal
untuk vial, yang kemudian dibilas 3 dengan heksana (100 ml masingmasing). The bilasan yang gabungan dan sampel terkonsentrasi, jika perlu,
dengan aliran lembut dari nitrogen. Sebuah Varian 3700 GC, dilengkapi
dengan detektor ionisasi nyala (FID) dan DB-1 menyatu silika kolom
(ketebalan 0.32id 30 m, 0,25 m Film, J & W Scientific, Folsom, CA, USA),
diprogram dari 150 untuk 285 C pada 10 C min-1, setelah 2 menit terus,
digunakan
untuk analisis. Injector dan detektor suhu yang 300 C. Data dianalisis
dengan analisis data Turbochome Workstation (Perkin-Elmer). Tugas puncak
didasarkan pada kali retensi otentik S. alkaloid invicta, diperoleh merendam
pekerja di heksana semalam (lihat Ross et al. 1987).
Jumlah total alkaloid, relatif terhadap standar internal, ditentukan
Prosedur ini diulang lima kali. Semut Api Alarm Respon untuk Venom

Komponen api ant pekerja kantung racun yang dibedah (Vander Meer dkk.
2002) dan diekstraksi dalam heksana pada konsentrasi yang didekati jumlah
yang ditemukan dalam botol dari semut terguncang (0.01 KAMI / 10 ml
heksana; KAMI = setara pekerja) dan pada 1 KAMI (per 10 ml heksana),
digunakan sebelumnya oleh Wilson (1962).Ekstrak (10 ml) yang diletakkan di
atas potongan persegi 1-cm dari kertas filter, pelarut dibiarkan menguap, dan
kotak ditempatkan di 20-ml botol kilau. Pelarut kontrol disiapkan dengan cara
yang sama. Sampel dievaluasi dalam bioassay alarm, seperti dijelaskan di
atas, bersama
dengan kontrol positif terguncang-semut. Jumlah Rekrutmen Feromon di
Terguncang Ant Vial Semut terguncang mungkin melepaskan feromon
perekrutan dari mereka
Kelenjar Dufour, yang bisa menyebabkan reaksi alarm di semut diam, seperti
yang dijelaskan oleh Wilson (1962).
Sebuah sensitif orientasi perekrutan bioassay (dimodifikasi dari
Barlin et al. 1976; Jouvenaz dkk. 1978) digunakan untuk mendeteksi Dufour
ini produk kelenjar dari semut terguncang. Metode ini menggunakan api alam
trail makanan semut yang berlangsung dari lantai mencari makan daerah
sampai lidah depressor terhubung ke dua platform plastik, platform pertama
kali digunakan untuk bioassay yang observasi dan makanan yang
mengandung kedua (jangkrik dan 20% larutan sukrosa diserap kepada buah
kapas). Aliran Lembut Dari nitrogen. SEBUAH Varian 3700 GC, dilengkapi
Dengan detektor ionisasi nyala (FID) Dan DB-1 menyatu silika Kolom
(ketebalan 0.32id 30 m, 0,25 m Film, J & W Scientific, Folsom, CA, USA),
diprogram Dari 150 untuk review 285 C PADA 10 C min-1, Penghasilan
kena pajak 2 Menit Terus, digunakan
analisis untuk review. Injector Dan detektor Suhu Yang 300 C Data
dianalisis Data Dengan analisis Turbochome Workstation (Perkin-Elmer).
Tugas Puncak didasarkan Pada kali ditambah hutang otentik S. invicta
alkaloid, TIMAH merendam pekerja di heksana Semalam (lihat Ross et al.
1987). Jangka Waktu Total alkaloid, relatif Terhadap standar internal
ditentukan Prosedur Suami diulang lima kali. Semut Api Alarm Respon untuk
review Venom Komponen api ant pekerja kantung racun Yang dibedah
(Vander Meer dkk. 2002) Dan diekstraksi hearts heksana Pada konsentrasi
Yang Jangka Waktu didekati Yang ditemukan hearts botol Dari semut
terguncang (0.01 KAMI / 10 ml heksana; KAMI = Setara pekerja) Dan Pada 1
KAMI (per 10 ml heksana), digunakan sebelumnya Diposkan Wilson (1962).
Ekstrak (10 ml) Yang diletakkan di differences Potongan Persegi 1-cm Dari
Kertas filter, pelarut dibiarkan menguap, Dan

kotak ditempatkan di 20-ml botol Kilau. Pelarut Kontrol disiapkan DENGAN

Cara Yang sama. Sampel dievaluasi hearts bioassay alarm, seperti dijelaskan
di differences, Bersama Dengan Kontrol positif terguncang-Semut.
Jangka Waktu Rekrutmen feromon di Terguncang Ant Vial Semut terguncang
mungkin melepaskan feromon perekrutan Dari mereka Kelenjar Dufour, Yang
Bisa menyebabkan Reaksi alarm di semut diam, Seperti Yang Diposkan
dijelaskan Wilson (1962). Sebuah sensitif orientasi bioassay perekrutan
(dimodifikasi Dari Barlin et al. 1976; Jouvenaz dkk. 1978) digunakan untuk
review mendeteksi Dufour Suami Produk kelenjar Dari semut terguncang.
Metode Suami menggunakan api alam trail Makanan semut Yang
berlangsung Dari Lantai Mencari Makan daerah adalah Sampai lidah
depressor terhubung Ke doa Platform plastik, Platform Pertama kali
digunakan bioassay untuk review Yang Observasi dan Makanan Yang
mengandung kedua (jangkrik Dan 20% Larutan sukrosa diserap Kepada
buah Kapas). karena volatilitas dari feromon perekrutan , bioassay adalah
berakhir setelah 2 menit .
Tiga terpisah ekstrak kelenjar Dufour ini disiapkan (Vander Meer dkk.
2002) dan diencerkan sampai konsentrasi 0,1 KAMI / 10 ml heksana.
Konsentrasi ini menjadi sasaran bioassay dan pengenceran diulang oleh
sepertiga sampai aktivitas adalah kalah. Hal ini memungkinkan kita untuk
menentukan perkiraan Konsentrasi kelenjar minimum Dufour yang diperlukan
untuk bioassay positif. Ekstrak terguncang botol semut yang dibuat seperti
yang dijelaskan di atas, kecuali ada standar internal yang sudah
ditambahkan. Sampel ekstrak terkonsentrasi ke 20 ml, dengan 10 ml
digunakan dalam bioassay awal dan sisanya 10 ml digunakan untuk
pengenceran, jika perlu. Tanggapan semut untuk ekstrak ini dibandingkan
dengan tanggapan semut ke standar pengenceran kelenjar Dufour,
determinasi memungkinkan dari konsentrasi kelenjar perkiraan Dufour di
KAMI. Semut Api Alarm Respon untuk Rekrutmen Feromon Kelenjar Dufour
ini yang dibedah seperti yang dijelaskan sebelumnya (Vander Meer dkk.
2002). Dua konsentrasi yang disiapkan: a) 1 KAMI / 10 ml heksana, yang
digunakan oleh Wilson (1962) dan b) 0,01 KAMI / 10 ml heksana, perkiraan
jumlah dirilis oleh semut terguncang (lihat Hasil). Kelenjar Dufour ini ekstrak
(10 ml) diendapkan pada selembar 1-cm dari kertas filter, pelarut dibiarkan
menguap (ca. 20 detik), dan kertas ditempatkan dalam 20 ml kilau vial. Itu
kontrol pelarut disiapkan dengan cara yang sama. Sampel dievaluasi dalam
bioassay alarm seperti dijelaskan di atas.

Fase Padat Micro Extraction (SPME) Koleksi Hitam (Carboxen /

Polydimethylsiloxane) serat SPME (Supelco, Belefonte, PA, USA) digunakan
untuk mengumpulkan dan desorb alarm volatil feromon untuk analisis. Serat
yang termal dibersihkan di pelabuhan injeksi dari GC selama 2 jam pada 290
C atau semalam di 280 C, sebelum dan setelah digunakan. Sekitar 1-1,2 g
semut pekerja ditempatkan di kaca 20 ml kilau vial, dilapisi dengan Fluon
sepanjang kuartal atas untuk mencegah melarikan diri. Setiap botol disegel
dengan topi mengandung lubang kecil (cukup besar untuk penyisipan SPME
jarum) di tengah. Semut diizinkan untuk menetap selama kurang lebih 1 jam
sebelum koleksi headspace. Untuk pengobatan semut tak tergoyahkan,
sebuah botol dengan semut pekerja ditempatkan hati-hati di bawah
pemegang SPME, dan serat diturunkan dalam botol; volatil dikumpulkan
selama 1 menit. The SPME serat kemudian ditarik dan proses berulang
sembilan lebih kali sebelum desorpsi. Untuk pengobatan terguncang-semut,
sebuah vial, mengandung semut pekerja, terguncang keras untuk 5 detik dan
kemudian sampel oleh SPME, seperti yang dijelaskan untuk semut tak
tergoyahkan.
Senyawa diserap ke serat SPME adalah dianalisis awalnya pada
Agilent 6890 GC , dilengkapi dengan sebuah FID ( 250 C ) , pisah injektor
( 250 C ) , dan 30 m
0,25 mm i.d. DB - 23 kolom kapiler . Kolom oven diprogram dari 40 C
sampai 100 C pada kemudian 5 C min - 1 , kemudian ke 250 C pada 25
C min - 1 . The SPME serat itu ditarik 2,5 menit . setelah insersi ke injektor .
Serat SPME juga dianalisis dengan kromatografi gas - spektrometri
massa( GC - MS ) , dengan menggunakan model GC dan kondisi yang
sama , dihubungkan dengan Agilent Mass Selective Detector 5973 ( Palo Alto
, CA ) dalam dampak elektron ( EI ) mode.
Identifikasi Pyrazine Dirilis oleh Terguncang Semut Api Pekerja The
sementara
diidentifikasi
komponen
alarm
feromon,
2-etil-3,5dimethylpyrazine, adalah komersial tersedia sebagai campuran dengan 2-etil3,6-dimethylpyrazine isomer (Aldrich Chemical Co, Milwaukee, WI, USA).
Sampel dari dua isomer ini juga diperoleh (dimurnikan dengan kromatografi
gas preparatif dan 99% murni secara individual; Mentega dan Ling 1997) dari
laboratorium Dr R. M. mentega.
Identitas feromon alarm alami Senyawa didirikan oleh co-injection
dan perbandingan waktu retensi dengan orang-orang dari standar. Bahan
kimia sintetik diuji di bioassay alarm di 1 ng / ml dan 100 ng / ml dalam
minyak mineral ringan (Fisher Scientific, Fairlawn, NJ, USA). Minyak tidak

menimbulkan reaksi alarm dan bertindak untuk memperlambat pelepasan

pirazin volatile. Itu kontrol negatif untuk tes ini adalah mineral minyak, udara,
dan semut tak tergoyahkan. Kontrol positif adalah semut terguncang. Untuk
semua bioassay minyak mineral, 1 ml bahan uji ditempatkan dalam 20-ml
kilau vial dan erat dibatasi sampai digunakan.
Kuantifikasi Pyrazine Konsentrasi di Headspace dari Standar Minyak
mineral Solusi dari 100, 66, 33, 10, 6, dan 3 pg / ml, dalam heksana, dari 2etil-3,6 (3,5) -dimethylpyrazine dianalisis pada Agilent 6890 N-5973, di
Selektif Pemantauan ion (SIM) modus, pemantauan m / z 39, 42, 56, 81, 108,
135, dan 136, untuk menghasilkan kurva standar. Sejak standar terdiri dari
dua isomer, ion kelimpahan untuk setiap isomer ditambahkan untuk
menghasilkan kurva standar. Untuk menentukan konsentrasi pyrazine sintetis
dalam headspace perawatan minyak mineral yang digunakan dalam bioassay
alarm, standar dalam minyak mineral ringan, dari konsentrasi 100, 50, 25, 10,
dan 1 ng / ml, disiapkan, dan 1 ml setiap dipindahkan untuk memisahkan 20ml vial sintilasi. Headspace dari masing-masing standar yang digunakan
dalam bioassay alarm, sementara yang lain set standar identik disiapkan
dianalisis dengan GCMS (sampel 100 ml dari headspace) dan digunakan
untuk menentukan pyrazine konsentrasi headspace oleh perbandingan
dengan kurva standar.
Analisis kualitatif 2-Ethyl-3,6-Dimethylpyrazine di Mandibula Gland,
Kepala dan Thorax Kuantitas dari pyrazine di ekstrak kelenjar mandibula dari
laki-laki dan sexuals alate perempuan dan pekerja ditentukan. Perempuan
atau sexuals alate laki-laki, atau pekerja yang besar, dikumpulkan dalam
botol kilau dengan kuartal atas permukaan dalam dicat dengan Fluon.
Semut diizinkan untuk menjadi diam selama setidaknya 20 menit dan
kemudian membeku di tempat yang kering-es mandi aseton. Semut
ditempatkan pada kaca arloji, beristirahat di atas es di bawah mikroskop,
dengan sisi punggung atas, dan atas kepala tertusuk, dan lapisan kutikula
yang dikupas pergi ke arah depan. Sisanya (bawah) bagian dari Kepala
exoskeleton diadakan, dan salah satu rahang adalah menarik lembut. Jika
mandibula terlepas dari terkait otot dan tidak ada lumen terlihat, sampel
dibuang. Jika mandibula ditarik keluar dengan beberapa otot dan / atau
lumen terlihat, itu ditransfer ke probe bersih dan ditempatkan dalam heksana
dalam botol memasukkan. Dua puluh rahang adalah akumulasi per sampel,
dan masing-masing sampel diekstraksi di 50 ml heksana pada 4 Csemalam
sebelum analisis. Standar internal (IS) 2-metil-3-etil pyrazine (100 pg),
ditambahkan ke sampel. Kemudian, untuk mempersingkat waktu yang
dibutuhkan untuk pembedahan kelenjar mandibula, kita membedah minimum

bagian depan dari kepala yang termasuk kelenjar mandibula, tapi

dikecualikan kelenjar postpharyngeal dan antena. Kepala dan sampel thorax
(20 masing-masing) dari laron wanita dan pria, dan pekerja juga dikumpulkan
dan diekstraksi seperti di atas. Sampel dianalisis dengan GC-MS
menggunakan DB-23
kolom, dengan helium sebagai gas pembawa. GC oven diadakan pada 40
C selama 2 menit, kemudian meningkat menjadi 150 C pada 15 C min-1,
diselenggarakan selama 5 menit., kemudian meningkat menjadi 250 C pada
10 C min-1. Senyawa yang diukur dengan SIM, pemantauan m / z 121 dan
122 (untuk IS) dan 108, 135, dan 136 (untuk 2-etil-3,6- dimethylpyrazine).
Kuantifikasi feromon alarm dicapai dengan membandingkan daerah ion total
komponen pyrazine ke daerah ion total IS. Analisis
dilakukan pada pekerja (N = 16), laron perempuan (N = 19), dan laron lakilaki (N = 10). Hasil dianalisis dengan nonparametric analisis sebagai jajaran
(Fisher PLSD, ANOVA) menggunakan Statview 5.0 software.
Hasil Jumlah Venom Alkaloid di Terguncang Ant Vial Mean berat ca.
100 semut pekerja adalah 73,3 4,4 mg (rata-rata SE, N = 5). Berat ratarata alkaloid racun yang dikeluarkan oleh semut ke botol setelah terguncang
adalah 211,0 48,6 ng
per botol (mean SE, N = 5). Setiap kantung racun berisi ca. 30 ug total
alkaloid (Vander Meer 1988); oleh karena itu, semut terguncang disimpan
hanya 0.007 setara racun kantung ke botol kaca. Jumlah Rekrutmen
Feromon di Terguncang Ant Botol terendah terdeteksi Dufour ini Gland setara
dari standar ekstrak kelenjar Dufour di bioassay adalah 0,0033 0,0013
KAMI (mean SE, N = 3). Ini mewakili sekitar 1,3 0,8 pg dari Z, E-farnesene per cm dari trail, (rata-rata SE, N = 3), karena kelenjar pekerja
Dufour ini berisi sekitar 4 ng dari Z, E--farnesene (RVM, tidak diterbitkan).
Bioassay orientasi perekrutan dengan residu di botol dari semut
terguncang menunjukkan tidak ada aktivitas di 2 dari 3 ulangan. Replikasi
aktif menunjukkan minimal Kegiatan (satu semut benar-benar mengikuti jejak
dalam 2 menit. batas waktu bioassay), dan aktivitas hilang dengan
pengenceran seri berikutnya. Semut karena itu, terguncang mungkin
melepaskan tingkat yang sangat rendah dari feromon perekrutan,
antara 0,0067 dan 0,0033 KAMI dari kelenjar Dufour ini.
Api Ant Respon alarm untuk Poison Sac dan Dufour ini Kelenjar
Komponen Headspace dari 1 KAMI racun kantung sampel menimbulkan
respon alarm lebih rendah pada pekerja semut api dibandingkan kontrol
positif semut terguncang (G = 4,167, P = 0,041, df = 1, N = 15), tetapi
menimbulkan respon signifikan lebih besar daripada udara kontrol negatif (G

= 6,125, P = 0,013, df = 1, N = 15) (Gambar. 1). Tanggapan alarm dari bawah

kantung racun konsentrasi (0,01 KAMI) tidak berbeda dari udara kontrol
negatif (G = 0,8, P = 0,371, df = 1, N = 15) (Gambar. 1). Salah satu KAMI
racun kantung dapat menghasilkan respon alarm di semut Api; Namun,
sejumlah kecil racun isi kantung dirilis oleh semut terguncang tidak
memberikan kontribusi yang signifikan untuk respon alarm diamati
disebabkan oleh headspace yang atas semut terguncang (Gbr. 1). Ekstrak
kelenjar Dufour ini pada 1,0 KAMI memberi respon alarm yang tidak berbeda
dengan Tanggapan alarm dari semut terguncang (G = 1,333, P = 0,248, df =
1; N = 14). Ketika konsentrasi berkurang menjadi 0,01 KAMI dari kelenjar
Dufour ini, respon alarm tidak berbeda dari yang dari kontrol udara negatif (G
= 0,000, P = 1,000, df = 1; N = 14). Tanggapan alarm dari 1,0 KAMI Dufour ini
konsentrasi kelenjar lebih besar dari respon dari 0.01 konsentrasi KAMI (G =
8.100, P = 0,004, df = 1; N = 14).
Sebagai terguncang pekerja semut api melepaskan kurang dari 0,01 KAMI
dari Produk kelenjar Dufour ini, hasil ini menunjukkan bahwa Reaksi alarm
dari semut terguncang bukan karena pelepasan Produk kelenjar Dufour ini.
Analisis SPME Diserap volatil Perbandingan GC profil dari diam dan pekerja
terguncang menunjukkan perbedaan satu senyawa utama. Spektrum massa
puncak ini memiliki pola fragmentasi yang cocok 2-etil- 3,5-dimethylpyrazine
(2,6-dimetil-3-ethylpyrazine; NIST 98 Mass spectral Perpustakaan,
Rev.D.02.00, Palo Alto, CA, AMERIKA SERIKAT). Analisis kromatografi gas
dari standar senyawa ini dan isomer 2-etil-3,6-dimethylpyrazine (Gambar. 2),
pada kolom polar, menunjukkan bahwa 2-etil-3,6- dimethylpyrazine dielusi
pertama (mentega dan Ling 1997). Kami Analisis GC menunjukkan bahwa
senyawa alami co-dielusi
dengan senyawa ini.
Alarm Feromon Bioassay dari 2-Ethyl-3,6-Dimethylpyrazine dan 2Ethyl-3,5-Dimethylpyrazine Alarm bioassay hasil untuk campuran komersial
2-etil-3,5 (3,6) - dimethylpyrazine (ca. 60% isomer 3,5-dimetil dan 40%
Isomer 3,6-dimetil) dan isomer individu ditunjukkan pada Ara. 3. Responses
to 1 ng / ml 2-etil-3,6-dimethylpyrazine tidak berbeda secara signifikan (G =
3.20, df = 1, P = 0,074, N = 15) dari tanggapan terhadap kontrol positif
terguncang semut, tapi secara signifikan lebih besar (G = 6,125, df = 1, P =
0.013, N = 15) dibandingkan dengan kontrol negatif dari tergoyahkan semut.
Sebaliknya, respon alarm ke 1 ng / ml sintetis campuran 2-etil-3,5 (3,6)
-dimethylpyrazine kurang (G = 6,125, df = 1, P = 0,013, N = 15) dibandingkan
dengan semut terguncang kontrol positif, tetapi tidak berbeda dari yang
negative kontrol semut tak tergoyahkan (G = 3,2, df = 1, P = 0,074, N = 15).

Dengan inferensi, respon alarm yang disebabkan oleh headspace yang di

atas 1 ng / ml 2-etil-3,5-dimethylpyrazine secara signifikan kurang dari itu
disebabkan oleh semut terguncang, dan tidak berbeda
dari yang oleh semut tak tergoyahkan. Tanggapan terhadap semua 100 ng /
ml sampel perlakuan tidak berbeda nyata kontrol positif semut terguncang.
Singkatnya, 2-etil-3,6dimethylpyrazine, memiliki respon alarm aktif rendah ambang daripada
isomer 2-etil-3,5-dimethylpyrazine dan campuran dari dua isomer.
Respon alarm untuk Pyrazine Feromon alarm Konsentrasi Api respon
alarm semut untuk headspace dari serangkaian konsentrasi campuran
sintetis dari 2-etil-3,6 (3,5) - dimethylpyrazine ditunjukkan pada Gambar. 4.
Tanggapan alarm menimbulkan dari headspace atas 1 ng / ml adalah
campuran lebih besar dari itu untuk ruang atas di atas semut tak tergoyahkan
(G = 4.900, df = 1, P = 0,027, N = 15), tetapi tidak berbeda dari yang
headspace kontrol semut positif terguncang (G = 3,200, df = 1, P = 0,074, N =
15). Dengan kesimpulan, semua konsentrasi campuran sintetis dari 2-etil-3,6
(3,5) -dimethylpyrazine dievaluasi menghasilkan respon alarm lebih besar
dari volatil dari ruang atas di atas semut tak tergoyahkan, dengan
pengecualian dari terendah konsentrasi, 100 pg / ml (G = 0,167, df = 1, P =
0,683,N = 15). Dengan menggunakan kurva standar (y = 1,3 * 106 -628; R2
= 0,9974), yang berasal dari analisis GC konsentrasi dari Campuran pyrazine
sintetis di heksana, headspace yang konsentrasi 100, 50, 25, 10, 1, dan 0,1
ng / ml dari 2-etil-3,6 (3,5) campuran -dimethylpyrazine di mineral cahaya
minyak ditentukan 0,5, 0,36, 0,24, 0,1, 0,03, dan tidak terdeteksi, pg / ml,
masing-masing. Pyrazine Feromon Alarm Dewasa Semut Api Ekstrak wanita
dan pria alate dan pekerja kepala, dan rahang ditambah kelenjar mandibula,
semua yang terkandung terdeteksi jumlah 2-etil-3,6-dimethylpyrazine.
Sebaliknya, senyawa ini
tidak terdeteksi dalam ekstrak toraks dari serangga ini, menunjukkan
spesifisitas terhadap kelenjar mandibula. Pekerja yang terkandung signifikan
kurang 2-etil-3,6-dimethylpyrazine (316,6 42 pg / ant, N = 16) dari baik
perempuan (746,9 80,8 pg / ant, N = 19) atau laki-laki (959,4 215,3 pg /
ant, N = 10) laron (Fisher PLSD, ANOVA, P = 0,002 dan P <0,001, masingmasing). Jumlah 2-etil-3,6-dimethylpyrazine di laron pria dan wanita tidak
berbeda nyata (Fisher PLSD, ANOVA, P = 0,197) (Gambar. 5).

PEMBAHASAN

Feromon alarm Ant disintesis dalam berbagai kelenjar eksokrin dan

terdiri dari bahan kimia struktur beragam (Vander Meer dan Alonso 1998).
Identifikasi kami dari 2-etil-3,6 dimethylpyrazine sebagai feromon alarm
komponen S. invicta meningkatkan diketahui keragaman feromon alarm
semut. Pirazin telah dilaporkan memiliki berbagai fungsi, termasuk
membuntuti (rekrutmen), pertahanan, dan alarm (El-Sayed 2009). Pyrazine
yang dilaporkan di sini, 2- etil-3,6-dimethylpyrazine, telah dilaporkan terutama
dari semut Subfamili Myrmicinae, yang meliputi genus Solenopsis, dan juga
dari Ectatomminae, Dolichoderinae, dan Ponerinae. Dalam semua kasus,
fungsi dikaitkan dengan 2-etil-3,6-dimethylpyrazine yang tertinggal
(rekrutmen).
Meskipun ada laporan dari 2-etil-3,6-dimethylpyrazine di kelenjar
mandibula semut, tidak ada fungsi yang dikaitkan sebelumnya untuk
senyawa ini di semut (Cavill et al 1984;. Morgan et al. 1999). Isomer lain, 2etil-3,5-dimethylpyrazine, Namun, telah dilaporkan untuk menjadi bagian dari
alarm feromon dari Odontomachus brunneus (Longhurst dkk. 1978). Ini
adalah laporan pertama dari 2-etil-3,6-dimethylpyrazine dari spesies
Solenopsis, dan adalah laporan pertama dari ini fungsi alkaloid sebagai
feromon alarm semut. Meskipun tanggapan semut api untuk alarm feromon
sebelumnya telah didokumentasikan (Wilson 1962), dan sumber utama dari
feromon dikenal sebagai kelenjar kepala, dengan daya tarik yang berasal dari
kombinasi kelenjar cephalic dan kelenjar Dufour ini (Wilson 1962), identifikasi
kimia dari alarm semut api feromon telah terhindar ilmuwan. Pekerjaan kami
sebelumnya telah menunjukkan bahwa kebakaran bersemangat perempuan
semut dan laki-laki seksual laron menghasilkan reaksi alarm pada pekerja
dan kelenjar mandibula adalah sumber dari feromon alarm (Alonso dan
Vander Meer 1997). The fana sifat semut api feromon alarm ditunjukkan
ketika headspace diambil segera setelah semut pekerja di botol yang elektrik
dirangsang, menimbulkan alarm reaksi. Namun, meninggalkan botol terbuka
selama 2 menit mengakibatkan tidak ada reaksi alarm (Vander Meer dkk.
2002).
Ini juga sebagian menjelaskan ketidakmampuan beberapa peneliti
untuk memverifikasi sumber cephalic untuk semut api feromon alarm (Blum
1980). Gemetar botol semut pekerja mengungkapkan bahwa kedua Dufour
ini kelenjar racun dan kantung isi diendapkan ke botol, tetapi pada jumlah
kurang dari seperseratus setara kelenjar. Konsentrasi ini tidak menimbulkan

alarm respon dari semut pekerja, meskipun satu Dufour atau kelenjar racun
setara lakukan menghasilkan alarm signifikan reaksi. Hasil ini mendukung
feromon alarm awal Laporan oleh Wilson (1962), yang digunakan hancur
tubuh pekerja bagian (satu KAMI) untuk menentukan bahwa kepala, dan
mungkin Dufour ini kelenjar, kebakaran disebabkan respon alarm semut.
Namun, hasil kami menunjukkan bahwa pada tingkat fisiologis yang relevan,
tidak kelenjar atau kelenjar racun produk Dufour ini adalah terlibat dalam
memunculkan respon alarm alami di semut api, dan api kelenjar mandibula
semut adalah sumber dari feromon alarm. Karena kesulitan dalam
memperoleh perilaku aktif ekstrak dari pekerja kelenjar mandibula, kami
menggunakan SPME untuk bandingkan headspace atas pekerja tenang dan
terguncang untuk mengidentifikasi 2-etil-3,6-dimethylpyrazine sebagai
komponen unik dilepaskan dari pekerja semut api terguncang. Kami
kemudian berada mampu mendeteksi dan mengukur senyawa ini di
mandibula yang kelenjar pekerja, dan laki-laki dan laron seksual wanita. Hasil
penelitian kami menunjukkan bahwa pekerja hanya berisi sekitar 300 pg dari
pyrazine, yang konsisten dengan morfologindeskripsi kelenjar mandibula
semut api kecil dan terdiri dari hanya sel sekretori beberapa (Phillips dan
Vinson 1980; Billen 1990). Kuantitas kecil alarm feromon dari pekerja semut
api sangat bertentangan dengan jumlah mikrogram (> 3.000 kali lipat lebih
banyak) dari alarm feromon ditemukan pada spesies semut lain, misalnya,
Lasius alienus Kelenjar Dufour mengandung jumlah mikrogram alarm
feromon (Regnier dan Wilson 1969). Volatilitas tinggi dari pyrazine semut api
dan kuantitas kecil diproduksi menjelaskan mengapa isolasi dan identifikasi
alarm feromon S. invicta telah terbukti sulit. Semut api menanggapi campuran
pyrazine pada konsentrasi yang dari 30 pg / cm3, atau 1,3 1011 molekul /
cm3, yang sebanding dengan sensitivitas alarm dari 1010-1013 molekul /
cm3 diprediksi oleh model (Regnier dan Wilson 1968), dan pengukuran
ambang alarm> 1011 molekul / cm3 untuk Pogonomyrmex badius (Wilson
1958). Ambang deteksi dari 2-etil-3,6-dimethylpyrazine oleh manusia sangat
rendah, sekitar 3,8 1013 molekul / cm3 (mentega dan Ling 1997). Sebagai
perbandingan, semut api adalah sekitar 300 kali lebih sensitif terhadap
senyawa ini. Semut menghasilkan berbagai macam alkaloid (lihat El-Sayed
2009).
Semut
api
menghasilkan
berbagai
2-metil-6-alkil
atau
alkenylpiperidines (MacConnell et al. 1971) yang digunakan oleh pekerja
dalam berbagai konteks defensif (Obin dan Vander Meer 1985) dan untuk
pengadaan mangsa. Ini alkaloid diproduksi oleh kelenjar racun dan disimpan
dalam jumlah besar dalam kantung racun (Vander Meer 1988) dan memiliki

berbagai fungsi fisiologis misalnya, insektisida, antimikroba, dan herbisida

(Obin dan Vander Meer 1985;
Escoubas dan Blum 1990). Pola piperidin homolog alkaloid telah terbukti
speciesspecific dan alat taksonomi yang berguna (Brand 1978; Vander Meer
dan Lofgren 1988). Identifikasi kami dari pyrazine komponen alarm feromon,
yang diproduksi oleh mandibula kelenjar semut api, menambah pengetahuan
kita tentang berbagai biosintesis alkaloid dalam kelenjar semut. Penelitian di
masa depan akan fokus pada ontogeni 2-etil- Produksi 3,6-dimethylpyrazine
di semut api, isolasi dan identifikasi api tambahan feromon alarm ant
komponen, dan kekhususan spesies 2-etil-3,6- dimethylpyrazine.

TUGAS KULIAH
FITOMEDISIN
Isolation of a Pyrazine Alarm Pheromone Component
from the Fire Ant, Solenopsis invicta

NAMA
NIM
KELAS

OLEH
: NURUL IFTIKHAN
: N111 13 343
: FITOMEDISIN

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS HASANUDDIN
2015

GOLONGAN A (SENIN SIANG)

MAKASAR
2015