Hematopoietic Stem Cell

Stem Cell and Cancer Institute

Isolasi MNC dari Darah Tepi

(Peripheral Blood)
Workshop on Stem Cell Isolation, Culture, and Analysis

Stem Cell yang bersifat pluripotent, yang

dapat berdiferensiasi menjadi bermacam
tipe sel darah: Sel myeloid (monosit dan
makrofag, neutrofil, basofil, eosinofil,
eritrosit, megakariosit, sel dendritik), dan
sel limfoid (sel T, sel B, sel NK).

Camy Febrero Surjadi

Jakarta, 17 Maret 2009

Berbagai Sumber Stem Cell

Stem Cell Darah Tepi

Darah Tali Pusat (Umbilical Cord Blood)

kaya akan stem cell
Darah Tepi (Peripheral Blood)
Kadar stem cell sedikit
pre-treatment dgn G-CSF (Growth Colony Stimulating
Factor), jika kita ingin mengambil stem cell sumsum
tulang dari darah tepi

vena cubiti

Sumsum Tulang (Bone Marrow)

dll (lipoaspirate, pulpa gigi, dst)

Pemisahan Komponen Darah

Teknik Gradien Densitas berdasarkan
perbedaan densitas komponen darah
Mempermudah isolasi MNC
Memakai Ficoll mengagregasikan sel
darah merah menjadi sedimen
Ficoll molekul polisakarida hidrofilik
yang memiliki densitas tinggi ( 2-7 nm)

Plasma

Blood cells
Red blood cells
Platelets
Leukocytes
Stem cells
(mononucleated cells)

Pemisahan Komponen Darah

centrifugation

Plasma, platelets

Plasma
platelets

Blood

Mononucleated cells
Ficoll

MNC (+stem cell)

Wash 2x

Ficoll

Granulosit,
eritrosit

Ficoll
Granulosit
eritrosit
Collect MNC

Penghitungan Jumlah Sel

Hemasitometer

Perlengkapan yang dibutuhkan:

a) Hemasitometer,
b) Cell Counter
c) Trypan Blue,
d) Buffer PBS (untuk mengencerkan)
- Ditemukan oleh Louis-Charles Malassez
- Pertama kali dipakai untuk menghitung
sel darah tapi kemudian digunakan untuk
menghitung berbagai tipe sel

Untuk menghitung viabilitas dan jumlah

total sel dari sampel yang dimiliki

Hemasitometer

Trypan Blue

Ada 4 kuadran yang harus dihitung

1

sel = A x 104 x Pengenceran x volume suspensi

Ditemukan Paul Erlich pada tahun 1904

Sifatnya menembus membran sel yang
mati sehingga mewarnai sel yang mati dan
membedakannya dari sel yang hidup

C34H28N6O14S4

Visualisasi di Hemasitometer

Cara Perhitungan Viabilitas

Sel mati = blue, sel hidup = colorless

Sel hidup

Rerata sel hidup

Rerata sel total (hidup & mati)

100%

Sel mati

Hal-Hal yang Perlu Diperhatikan

Hal-Hal yang Perlu Diperhatikan

Menghitung harus cepat dan tepat (4 kuadran)

Tidak boleh ada gelembung sewaktu memipet
suspensi sel yang akan dihitung ke slide
chamber hemasitometer
Bedakan antara sel mati dan sel hidup dengan
tepat
Ingat area yang sudah dihitung

Pastikan suspensi sel dengan trypan blue

tercampur rata demikian pula suspensi sel
yang akan dihitung sebelum dicampur
dengan trypan blue
Hemasitometer harus bersih
Pergunakan Buffer isotonis (PBS)

Stem Cell and Cancer Institute

THANK YOU
FOR YOUR ATTENTION
Materi bisa di-download di website SCI :
www.sci-indonesia.org

Selamat Datang Para Peserta

Workshop on Stem Cell Isolation,
Culture, and Analysis
Jakarta, 17 Maret 2009