Perokdasi Lipid dan Status Total Antioksidan dalam Patogenesis Terkait

Usia dan Katarak Diabetes : Penelitian pada Lensa dan Darah

Dr. Ashok V. Katta*
Dr. R.V. Katkam**
Dr. H. Geetha***
*Assistant Proffesor, Department of Biochemistry, Dhanalakshmi Srinivasan Medical
College, Perambalur, Tamil Nadu, India.
**Associate Professor, Department of Biochemistry, Dr. V. M. Government Medical
College, Solapur, Tamil Nadu, India.
***Professor and HOD, Department of Biochemistry, Dhanalakshmi Srinivasan
Medical College, Perambalur, Tamil Nadu, India.
Journal Of Clinical and Diagnostic Research. 2013 June, Vol-7(6): 678-981
ABSTRAK
Latar Belakang : Katarak merupakan salah satu penyebab utama dari gangguan penglihatan,
yang akhirnya menyebabkan kebutaan. Sebuah kerusakan oksidatif protein lensa adalah
factor utama yang menyebabkan pembentukan katarak. Oleh karena itu, kita dimaksudkan
untuk mempelajari hubungan antara penanda biokimia stress oksidatif dan berbagai katarak.
Metode : Kami memeriksa lensa dan serum 120 subyek yang berusia 50 sampai 80 tahun,
yang didistribusikan dalam dua kelompok, yaitu kelompok studi (90 pasien) dan kelompok
kontrol (30 orang). Stres oksidatif dinilai dengan memperkirakan produk peroksidasi lipid
dalam bentuk zat asam thiobarbituric reaktif (TBARS), status antioksidan dengan mengukur
kadar vitamin E dan total kapasitas antioksidan (TAC). Para pasien kelompok studi yang
dibagi lagi dengan orang-orang dengan katarak nuklir (30 pasien), katarak kortikal (30
pasien), dan katarak diabetes (30 pasien).
Hasil : Dalam penelitian ini, ditemukan bahwa tingkat TBARS dalam kelompok studi yang
cukup tinggi (p<0,001), sedangkan tingkat TAC (p<0,001) dan vitamin E (p<0,001) secara
signifikan rendah, pada keduanya yaitu lensa dan darah kelompok studi dibandingkan dengan
orang-orang dari kelompok kontrol.
Kesimpulan : Dengan demikian, penelitian ini menunjukkan bahwa ketidakseimbangan
antara radikal bebas oksigen dan antioksidan dapat menyebabkan peroksidasi lipid dalam
lensa. Juga, peningkatan kadar glukosa pada katarak diabetes menyebabkan auto-antioksidasi
glukosa dan glikasi non enzimatik dari protein lensa. Dengan demikian, berat molekul protein
agregat tinggi dalam katarak.

Kata kunci : Katarak, Lensa, Peroksidasi Lipid, Vitamin E, Protein Glikasi, Status
Antioksidan Total.
PENDAHULUAN
Setiap perubahan dalam homogenitas optic lensa atau penurunan transparasi dikenal
sebagai katarak. Katarak adalah salah satu penyebab utama dari gangguan penglihatan, yang
akhirnya menyebabkan kebutaan[1]. Dampak dari peroksidasi lipid pada onset berkembangnya
kematangan katarak dan hubungan peroksidasi lipid dengan diabetes baru-baru ini telah
diketahui. Peroksidasi lipid, suatu peristiwa yng disebabkan oleh ketidakseimbangan antara
produksi radikal bebas dan pertahanan antioksidan, dapat memainkan peran dalam
pathogenesis katarak [2].
Mengingat luasnya kecacatan yang disebabkan oleh katarak, beberapa tindakan harus
diambil untuk memperlambat perkembangan katarak dan kita tidak bisa mencegahnya sampai
terjadinya katarak. Penundaan dalam pembentukan katarak selama 10 tahun, akan
mengurangi prevalensi katarak sebesar 50%, penundaan tersebut akan meningkatkan kualitas
hidup untuk banyak penduduk yang lebih tua dan dapat mengurangi beban ekonomi yang
disebabkan oleh kecacatan visual dan operasi [3].
Dalam lensa, baik spesies oksigen reaktif (ROS) dan glikasi protein dapat memicu
reaksi biokimia yang bersifat toksik, yang menyebabkan kerusakan yang luas. Antioksidan
seperti tokoferol dan asam askorbat, dan enzim antioksidan yang meliputi superoksida
dismutase (SOD), katalase (CAT) dan glutathione peroxidase (GPx) bertanggung jawab untuk
menetralkan efek merusak dari ROS [3,4].
Jadi penelitian ini dilakukan untuk mengevaluasi kontribusi dari radikal bebas dan
antioksidan patofisiologi katarak.
BAHAN DAN METODE
Penelitian ini dilakukan di Sholapur (Maharashtra, India) pada lensa dan serum dari
120 orang yang berusia 50 sampai 80 tahun, yang didistribusikan dalam dua kelompok, yaitu
kelompok studi dan subjek kontrol. Kelompok penelitian termasuk 90 pasien katarak. Subyek
penelitian dibagi lagi menjadi orang-orang dengan katarak nuklir, katarak kortikal dan
katarak diabetes, dengan 30 pasien di masing-masing kelompok. Kelompok kontrol terdiri
dari 30 orang dengan aktivitas visual 6/6 atau lebih baik di kedua mata dan pada kelompok
kontrol obat antioksidan tidak diberikan. Mereka semua orang sehat tanpa penyakit sistemik
dan tanpa kebiasaan seperti merokok, alkoholisme, dan lain-lain, pasien dengan riwayat mata

operasi, trauma, infeksi dan radang mata juga dikeluarkan dari penelian. Sebelum memulai
penelitian, izin etis kelembagaan yang diperoleh dari lembaga yang disebutkan di atas.
Informed consent diberikan kepada semua subjek penelitian.
Pengumpulan Lensa dan Penyusunan Homogenat
Lensa katarak yang diangkat melalui pembedahan oleh PECCE + IOL (Planned extra
capsular cataract extraction + intraocular lensa). Lensa diambil kemudian disimpan di dalam
lemari es saline yang dingin dan segera dibawa ke laboratorium. Setiap lensa yang
dihomogenisasi menggunakan batang Teflon dan diencerkan sampai 1:10 (w/v) dengan
menambahkan penyangga/buffer kalium fosfat 50 mm (2mm EDTA), PH 7,00. Homogenate
lensa itu diperoleh setelah disentrifugasi pada 10.000 rpm selama 15 menit pada suhu 40C.
supernatan yang diperoleh dari sentrifugasi diproses untuk perkiraan parameter biokimia [5].
Pengumpulan Darah
Lima ml sampel darah dikumpulkan oleh venipuncture dari pasien yang menjalani operasi
katarak pada hari yang sama. 3 ml darah ini dikumpulkan dalah bohlam biasa dan secara
terpisah serum digunakan untuk estimasi nilai TBARS dan vitamin E. sisa 2 ml darah
dikumpulkan dalam bola heparized untuk penilaian TAC.
Penentuan TBARS
Tingkat TBARS, sebagai indeks perokidasi lipid, ditentukan oleh thiobarbituric asam
(TBA) reaksi sesuai metode Yagi

[6]

. Prinsip metode ini tergantung pada pengukuran warna

merah muda yang dihasilkan oleh interaksi TBA dengan MDA. Sampel (untuk kosong, H2O
digunakan), SDS, asam asetat, asam thiobarbituric, dan H2O ditambahakan ke tabung reaksi,
masing-masing. Kemudian, mereka diinkubasi pada 951C selama 30 menit dalam bak air.
Setelah inkubasi ini, larutan butanolpiridine (15:1) ditambahkan ke tabung. Kemudian tabung
disentrifugasi pada 4000rpm selama 10 menit. Lapisan atas butanol diukur dengan
spektrofotometri kosong pada panjang gelombang 432 nm. 1,1,3,3 tetraetoxypropane
digunakan sebagai standar primer.
Penentuan Vitamin E
Vitamin E diukur dengan metode colourimetric dari Baker dan Frank [7]. Metode ini
didasarkan pada pengurangan ion ferri menjadi ion besi, yang membentuk kompleks
berwarna merah dengan a-Dipyridyl, yang dibaca pada 520nm.

Pengukuran Kapasitas Antioksidan Total

TAC diukur dengan diuji kemampuan Ferri mereduksi Plasma (FRAP/Ferric reducing
ability of plasma assay)[8]. Hal ini didasarkan pada kekuatan antioksidan untuk mengurangi
ion besi untuk ion besi pada pH rendah, yang membentuk warna besi kompleks
tripyridyltriazine dan absorbansi kompleks ini diukur pada 593 nm.
ANALISIS STATISTIK
Semua hasilnya dinyatakan dalam mean SD. Salah satu cara analisis varians
(ANOVA) digunakan untuk menguji perbedaan signifikans dan uji t test digunakan untuk
menguji perbedaan signifikansi antara kedua kelompok. Sebuah p-value dari <0,05 dianggap
sebagai signifikan secara statistic.
HASIL DAN DISKUSI
Penelitian ini menunjukkan peroksidasi lipid meningkat baik di sera dan lensa pasien
katarak [Tabel/Gambar-1 dan 2]. Peningkatan signifikan secara statistic diamati pada level
peroksida lipid (p<0,001), baik dalam sera dan lensa mata kelompok studi yang dibandingkan
dengan orang-orang dari subyek kontrol. Level TBARS 2-3 kali lebih tinggi di lensa dengan
katarak dibandingkan dengan yang ada di lensa normal, yang tertinggi pada katarak nuklir,
diikuti oleh orang-orang pada katarak diabetes. Level vitamin E plasma secara signifikan
menurun pada katarak nuklir dibandingkan dengan yang dikontrol (p<0,001). Tapi tidak ada
penurunan yang signifikan dalam level vitamin E plasma diamati pada katarak kortikal dan
katarak diabetes dibandingkan dengan mereka di kontrol. Selanjutnya, level vitamin lensa E
secara signifikan menurun pada katarak nuklir, katarak kortikal dan katarak diabetes
(p<0,001) dibandingkan dengan yang ada di lensa kontrol, level tertinggi yang diamati dalam
lensa katarak diabetes. Padahal, TAC secara signifikan menurun pada semua pasien katarak
dibandingkan dengan yang di kontrol. Level plasma dan lensa antioksidan total secara
signifikan menurun pada kortikal, nuklir, dan katarak diabetes (p<0,001) dibandingkan
dengan yang dikontrol.
Kemungkinan peran peroksidasi lipid dalam menyebabkan modifikasi oksidatif yang
terjadi pada lensa membrane plasma manusia selama penuaan dan perkembangan katarak
senile, saat ini menjadi topic yang menarik[9].

Penelitian sebelumnya telah melaporkan peningkatan kadar produk peroksidasi lipid,

MDA, pada pasien katarak dibandingkan dengan kontrol, yang sesuai dengan temuan kami
[5,10,13]

. Tingginya tingkat TBARS dalam lensa pasien katarak, merupakan hasil dari

peroksidasi lipid pada membrane sel lensa yang diproduksi secara local atau mungkin migrasi
produk dari retina[14-16]. Sebuah kerusakan peroksidatif pada membrane plasma dari serat
Kristal lensa dapat menyebabkan gangguan permeabilitas ion, hilangnya kelompok tiol dari
membrane terikat kristalin dan juga agregat protein besar dengan kelarutan rendah dalam
lensa[9].
Kerusakan oksidatif yang diukur dengan TBARS dapat meningkat karena penuaan
dan paparan hiperglikemia sehingga menyebabkan glikasi nonenzimatik dari protein.
Kemungkinan sumber stress oksidatif pada diabetes akibat pergeseran kesseimbangan redoks,
hasil dari perubahan karbohidrat dan metabolisme lipid, peningkatan generasi ROS, dan
penurunan tingkat antioksidan. Produk glikasi dapat dioksidasi oleh ROS, untuk memberikan
manfaat akhir produk glikasi (AGEs). Pembentukan AGE ini dapat menyebabkan kerusakan
jaringan. Baik terglikasi dan protein dimodifikasi ole AGE dapat menyebabkan stress
oksidatif

[17,18]

. Mekanisme lain yang diusulkan oleh Katta AV et al., Hipotesis bahwa

glikosilasi non enzimatik mungkin meningkatkan kerentanan lensa untuk mengalami oksidasi
sulphydryl dan agregasi protein berat molekul tinggi yang tidak larut. Protein larut terikat
pada membrane dan oksidasi mereka telah terbukti dimulai pada membrane. MDA yang

dikenal untuk memainkan peran dalam kekeruhan lensa dapat membentuk crosslink antara
membrane lipid dan protein. Kerusakan oksidatif protein adalah salah satu modifikasi yang
mengarah ke kegagalan yang parah dalam fungsi biologis dan kematian[19,20].
Dalam diabetes, setidaknya ada enam jalur yang berbeda melalui konsentrasi tinggi
glukosa dapat menyebabkan akumulasi ROS dalam lensa. ROS ini dapat menyebabkan
peroksidasi lipid dalam jaringan ini[21]. Sejak diketahui katarak mungkim terkait dengan
proses kerusakan jaringan, adalah wajar untuk berharap mengangkat konsentrasi peroksida
lipid dalam serum dan lensa pasien katarak.[9].
Tingkat vitamin E lensa secara signifikan rendah di semua kelompok katarak
dibandingkan dengan mereka pada lensa kelompok kontrol. Hal ini mungkin disebabkan oleh
fakta bahwa vitamin E dan vitamin C vitamin antioksidan bertindak sinergis dengan sistem
enzim antioksidan, yaitu tingkat tinggi satu enzimdihadapan tingkat rendah lain atau tingkat
tinggi salah satu vitamin antioksidan dihadapan kadar enzim rendah dapat memberikan
perlindungan yang memadai. Juga vitamin E, terutama -tokoferol, fungsi in vivo sebagai
rantai pemutus antioksidan dan juga merupakan scavenger radikal peroksil ampuh. Jadi,
selama proses radikal bebas memainkan peran, vitamin E banyak digunakan sehingga tingkat
vitamin E menurun pada lensa[23]. Tapi Pradhan AK et al.,[18] dan Garg et al.,

[10]

tidak

menemukan korelasi yang signifikan antara kadar serum atau plasma vitamin E dan katarak
terkait usia.
Dalam penelitian ini, tingkat TAC dinilai dengan uji FRAP, berdasarkan kekuatan
antioksidan dari antioksidan berat molekul rendah seperti vitamin (A,E dan C) dan elemen
(Zinc, Selenium dan tembaga). Status antioksidan total dalam penelitian ini secara signifikan
menurun pada suatu kondisi ketika produksi ROS meningkat. TAC ini mungkin telah
berpartisipasi dalam pertahanan terhadap efek merugikan dari ROS yang berbeda yang dirilis
karena peroksidasi lipid meningkat, protein glikasi dan agregasi protein berat molekul tinggi.
Dengan demikian, rendahnya tingkat ekstra seluler dan antioksidan membrane membuat
jaringan lensa rentan terhadap berbagai jenis oksidasi dan produk sampingan mereka.
KESIMPULAN
Katarak adalah gangguan terkait usia dan mempertimbangkan sejauh mana kecacatan
yang disebabkan oleh katarak, sehingga beberapa tindakan harus diambil untuk
memperlambat perkembangan katarak, karena katarak tidak dapat dicegah. Stres oksidatif
meningkat, terkait usia dan pada pasien katarak diabetes. Hasil penelitian kami menunjukkan
produksi yang lebih tinggi dari peroksida lipid dan turunnya status antioksidan total pada

pasien katarak diabetes terkait usia. Tapi pasien diabetes yang mengalami stress oksidatif
lebih tinggi yang paling banyak terjadi pada usia lebih awal dibandingkan dengan pasien
katarak senilis. Oleh karena itu, pemberian suplementasi dosis yang memadai dari
antioksidan untuk pasien-pasien katarak pada usia lebih awal mungkin bermanfaat dalam
menunda komplikasi katarak lebih lanjut.

DAFTAR PUSTAKA
[1] Jansirani, Anathanaryanan PH. A comparative study of lens protein glycation in various
forms of cataract. Indian Journal of Clinical Biochemistry. 2004; 19(1): 110-12.
[2] Micelli-Ferrari T, Vendemiale G, Grattagliano I, Boscia F, Arnese L. Role of lipid
peroxidation in the pathogenesis of myopic and senile cataract. British Journal
of Ophthalmology. 1996; 80: 840-43.
[3] Balasubramanian D, Bansal AK, Basti S, et al. The biology of cataract. Ind. J.
Ophthalmology. 1993; 41(4): 153-71.
[4] Hashim Z, Zarina S. Antioxidant markers in human senile and diabetic cataractous lenses.
JCPSP 2006; 16(10): 637-40.
[5] Orkide D, Yorulmaz EO, Pekel H, Suyugul N. Blood and lens lipid peroxidation and
antioxidant status in normal individuals, senile and diabetic cataractous patients.
Cur. Eye Res. 2002; 25(1): 9-16.
[6] Yagi K. Lipid peroxides and related radicals in clinical medicine. In: Armstrong D (ed)
Free Radicals in Diagnostic Medicine. Plenum Press: New York 1994; 115.
[7] Baker, Frank. Determination of serum tocopherol by colorimetric method. In: Varleys
Practical Clinical Biochemistry, Heinmann Professional Publishing 1988; 6 th
edition: 902.
[8] Iris, Benzie FF, Strain JJ. The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as a measure of
Antioxidant Power: The FRAP assay. Analytical Biochem 1966; 239: 70-76.
[9] Mark A, Babizhayev, Deyev AI. Lens opacity induced by lipid peroxidation products as a
model of cataract associated with retinal disease. Biochimica et Biophysica
Acta, 1989; 1004: 124-33.
[10] Garg R, Verma M, Mathur SP, Murthy PS. Blood lipid peroxidation products and
antioxidants in senile cataract. Ind. J. Clin. Biochem. 1996; 11(2): 182-86.
[11] Sonja Cekic, Gordana Zlatanovic, Tatjana Cvetkovic, Branislav Petrovic. Oxidative
stress in cataractogenesis. Bosnian journal of basic medical sciences 2010; 10
(3): 265-69.
[12] Ates NA, Yildirim O, Tamer L, Unlu A, Ercan B, Muslu N, Kanik A, et. al. Plasma
catalase activity and malondialdehyde level in patients with cataract. Eye
(Lond). 2004 Aug;18(8):785-88.

[13] Manjunatha Goud BK, Nandini M, Asha Kamath, Sudhir, Bhavna Nayal. Oxidative
stress and calcium levels in senile and type 2 diabetic cataract patients. Int J
Pharm. Bio. Sci. 2011; 2(1): 109-16
[14] Vasavada AR, Thampi P, Yadav S, Rawal UM. Acid phosphatase and lipid peroxidation
in human cataractous lens epithelium. Indian Journal of Ophthalmology 1993;
41(4): 173-75.
[15] Matteucci E. Advanced oxidation protein products in plasma: Stability during storage
and correlation with other clinical characteristics. Acta Diabetol. 2001; 38: 18789.
[16] Paul RR, Harmon JS. Diabetes, glucose toxicity and oxidative stress: A case of double
jeopardy for the pancreatic islet cell. Free Radical Biology and Medicine 2006;
41: 177-84.
[17] Frei B, Boston, Massachusetts. Reactive Oxygen Species and Antioxidant Vitamins:
Mechanisms of Action. The American Journal of Medicine 1994; 97(suppl 3A):
5S-13S.
[18] Pradhan AK, Shukla AK, Reddy MVR, GargN. Assessment of oxidative stress and
antioxidant status in age related cataract in a rural population. Indian J. of
Clinical Biochemistry. 2004; 19(1): 83-87.
[19] Ashok V Katta, AN Suryakar, RV Katkam, Kayyum Shaikh, Santoshi R. Ghodake.
Glycation of lens crystalline protein in the pathogenesis of various forms of
cataract. Biomedical Research 2009; 20 (2): 119-21
[20] Francesco Boscia, Ignazio Grattagliano, Gianluigi Vendemiale, et al. Protein Oxidation
and Lens Opacity in Humans. IOVS 2000; 41(9): 2461-65. [21] Paul K,
Heliovaara M, Rissanen A. Serum antioxidant vitamins and risk of cataract.
BMJ 1992; 305: 1392-94.
[22] Issa N, Gohari L, Moddares M. Evaluation of erythrocyte glutathione peroxidase,
Superoxide dismutase and total antioxidants in cataract patients. Arch Irn Med.
2001; 3: 123-26.
[23] Saeed SA, Urfy MZS, Ali TM, Khimani FW, Gilani A-ul-H. Antioxidants: in health and
disease. International J of Pharmacology 2005; 1(3): 226-33.