Isolasi dan identifikasi bakteri predator dari alga Microcystis mekar Sampel air diambil dari sebuah danau

hipertrofik, bendungan Hartbeespoort, dimana litik atau bakteri predator yang diisolasi. Sampel air yang tersebar pada agar BG 11 diinkubasi, plak diamati pada rumput Microcystis. Dua isolat lanjut mengalami penyaringan untuk mengevaluasi aktivitas litik pada sel Microcystis dan diidentifikasi. Isolat B2 dan B16 memiliki efek litik pada sel Microcystis dengan isolate B16 dan memiliki efek yang lebih besar pada isolat B2. Isolat B2 diidentifikasi sebagai Pseudomonas stutzeri dengan kepastian 99,9% dan B16 sebagai Bacillus mycoides dengan 99,7% kepastian menggunakan sistem API. Kata kunci: Microcystis, predator-mangsa rasio, mycoides Bacillus, Pseudomonas stutzeri. PENDAHULUAN Dam Hartbeespoort diklasifikasikan sebagai hipertrofik (WHO, 1999; Van Ginkel, 2002) karena frekuensi tinggi Alga Microcystis mekar, yang mungkin terjadi di seluruh tahun. Bendungan terus menerima beban besar nutrisi dari air limbah yang berasal dari metropolitan daerah Johannesburg, Midrand dan Krugersdorp (NIWR, 1985;. Harding et al, 2004). Microcystis telah telah terlibat dalam produksi microcystins, methylisoborneol dan geosmin (Codd et al., 1999). Para dampak langsung adalah pengurangan potensi pengguna, nilai estetika danau sebagai turis potensial tujuan dan ancaman yang signifikan terhadap hewan dan manusia kesehatan (Harding dan Paxton, 2001). Jangka panjang solusi adalah untuk mengatasi penyebab alga mekar: arus masuk dan nutrisi seimbang ekologi sistem yang didominasi oleh Microcystis aeruginosa (Harding dkk., 2004). Singkatnya, rekomendasi difokuskan pada pengembangan strategi untuk: (1) Mengurangi nutrisi eksternal (fosfor) arus masuk ke bendungan, (2) Mengelola di-danau ketersediaan hara (baik dari kolom air dan dari fosfor kaya sedimen), dan (3) Restrukturisasi struktur makanan terganggu web yang tidak lagi didukung atau disediakan alami ketahanan untuk proses eutrofikasi. Dalam lingkungan alam, ada patogen / predator mikroorganisme antagonis yang menuju organisme pengganggu tertentu (misalnya gulma dan cyanobacteria) sehingga memberikan cara alami untuk mengontrol mereka tingkat (Gumbo et al., 2008). Patogen seperti populasi mikroba ini disebut mikroba herbisida (Atlas dan Bartha, 1998). Jadi kontrol, biologis cyanobacteria memberikan ukuran jangka pendek potensi untuk mengurangi populasi ganggang gangguan. Dari perspektif ramah lingkungan, mikroba herbisida harus menjadi spesies asli yang danau lingkungan tertentu dan tidak mengalami apapun gen modifikasi atau tambahan (Sigee et al., 1999). Penambahan agen mikroba tersebut ke danau lingkungan dapat dilihat sebagai perubahan ke ada keseimbangan organisme yang sudah ada dalam ekosistem alami. Kontrol biologis cyanobacteria mirip dengan lainnya langkah pengendalian organisme pengganggu (gulma, serangga hama, bakteri patogen tanaman dan jamur, dll) sering dilihat dengan hati-hati. Hal ini mungkin disebabkan oleh pengalaman patolog pabrik yang mengamati penghancuran tanaman penting seperti hawar kastanye di Amerika Serikat dan hawar kentang di Irlandia setelah disengaja rilis patogen (Atlas dan Bartha, 1998). Ada tiga jenis strategi biokontrol, klasik, neoklasik dan augmentatif. Para biokontrol neoklasik adalah praktek kontroversial memperkenalkan non-pribumi spesies untuk mengontrol hama asli (Secord, 2003). Para Metode biokontrol klasik adalah pengenalan alami musuh dari hama dalam jangkauan baru, sedangkan augmentatif pengendalian biologis adalah praktek meningkatkan populasi predator untuk membantu dalam mengatur populasi OPT di habitat alaminya. Tujuan utamanya bukan untuk sepenuhnya memberantas hama melainkan untuk tetap ditekan pada sosial atau ekonomi dapat diterima tingkat (Secord, 2003). Agen mikroba (bakteri, jamur, virus dan protozoa) telah diisolasi dari ganggang berbahaya (Shilo, 1970; Burnham et al, 1981;. Daft et al, 1985;. Ashton dan Robarts, 1987; Burung dan Rashidan, 2001; Nakamura et. al, 2003a; Choi et al, 2005).. Ini bukan lengkap daftar tetapi studi Sigee et al. (1999) harus berkonsultasi untuk informasi lebih lanjut. Mikroba ini agen mungkin memainkan peran utama dalam regulasi, pencegahan dan penghentian ganggang berbahaya. Dalam banyak kasus, agen-agen bakteri spesies atau genus spesifik (Bird dan Rashidan, 2001), sementara yang lain menyerang beragam kelas cyanobacteria (Daft et al., 1975). Biologis metode kontrol akan melengkapi strategi lainnya seperti sebagai rencana pengelolaan air terpadu biologis yang telah diusulkan untuk bendungan (Harding dkk., 2004). Tujuan dari penelitian ini adalah isolasi, kultur dan identifikasi mikroorganisme yang terbentuk plak pada rumput Microcystis. Tujuan khusus adalah untuk melakukan tes untuk layar kegiatan litik ini agen mikroba dalam mengelola mekar alga Microcystis. Ashton dan Robarts (1987) mengisolasi saprospira seperti bakteri, Saprospira albida, yang asli Hartbeespoort bendungan. Yang menarik utama adalah bahwa ada tidak ada penelitian lebih lanjut dilakukan untuk mengevaluasi biologi kontrol potensial dari S. albida terhadap Microcystis. BAHAN DAN METODE Terbentuknya plak pada rumput Microcystis Sampel air dikumpulkan dari perairan permukaan Hartbeespoort bendungan mana alga Microcystis mekar telah terjadi. Air sampel (disebut air bendungan) dikumpulkan dalam 1 steril? Schott botol dan diangkut ke laboratorium dalam kotak pendingin dikemas dengan es. Sebuah alikuot (100 ?) Air bendungan berlapis tersebar ke dimodifikasi agar pelat BG 11 (Kruger dan Eloff, 1977). Agar-agar piring diinkubasi, tanpa gemetar, selama 30 hari pada suhu suhu (24 - 26 C) di bawah pencahayaan terus menerus dan

dimonitor untuk pengembangan plak. Pertumbuhan Microcystis pada dimodifikasi BG 11 piring agar-agar membentuk rumput hijau yang dihiasi plak (Gambar 1). Untuk pencahayaan kontinyu (2000 lux), dua 18 W keren lampu neon putih (Lohuis FT18W/T8 1200LM) adalah digantung di atas piring. Intensitas cahaya diukur dengan sebuah Extech Instrumen pengukur cahaya Datalogging Model 401036. Apakah bakteri atau cyanophage mendorong pengembangan plak? Sebuah tes kloroform dilakukan untuk menguji apakah perkembangan plak entah disebabkan oleh bakteri atau cyanophages (et Daft al, 1975;. Tucker dan Pollard, 2004). Sebuah alikuot (10 m?) Dari bendungan air dicampur dengan 0,5 m? kloroform dan pusaran dicampur selama 5 min. Dari 100 campuran? tersebar ke dimodifikasi BG 11 agar-agar dan diinkubasi piring, tanpa gemetar, pada suhu ruang untuk 30 hari di bawah petir terus menerus (2000 lux) dan dimonitor untuk pengembangan plak. Pertumbuhan Microcystis di BG dimodifikasi 11 piring agar-agar membentuk rumput hijau yang dihiasi plak (Gambar 1). Sebuah sampel kontrol, alikuot (10 m?) Air bendungan dan tidak ada kloroform adalah pusaran dicampur selama 5 menit dan diinkubasi seperti di atas. Isolasi bakteri predator dari plak dalam Microcystis rumput Sebuah loop steril digunakan untuk memilih bakteri dari plak dan zona melesat mereka ke piring agar nutrien (Biolab Merck). Nutrisi pelat agar diinkubasi pada 37 C selama 24 jam dan secara visual diperiksa untuk pengembangan koloni. Koloni campuran, setelah kemurnian cek dengan pewarnaan gram, yang berbudaya ke sub agar nutrien untuk mengisolasi koloni murni. Tujuh isolat bakteri yang diisolasi dan dikenakan untuk skrining untuk aktivitas litik mereka terhadap aeruginosa M. PCC7806, strain referensi standar. Litik aktivitas isolat bakteri terhadap Microcystis aeruginosa Kultur tuan cyanobacteria: M. aeruginosa PCC7806 adalah berbudaya dalam 500 m? Labu Erlenmeyer menggunakan dimodifikasi BG11 menengah (Kruger dan Eloff, 1977). Para termos kultur disimpan dalam gemetar inkubator (78 rpm, 25 C) selama 8 hari. Dua 18 W neon putih dingin lampu (Lohuis FT18W/T8 1200LM) ditangguhkan atas termos menyediakan pencahayaan kontinyu (2000 lux), diukur oleh Extech Instrumen Datalogging alat pengukur cahaya Model 401036. Setelah itu, suspensi sel berbudaya cyanobacteria digunakan sebagai mangsa dalam bentuk cair. Budaya isolat bakteri: Sebuah inokulum dari isolat berbudaya dalam m 250? Menggunakan labu Erlenmeyer 100 m? kaldu nutrisi dalam inkubator gemetar (128 rpm, 37 C) selama 24 jam Proses itu diulang untuk isolat bakteri lainnya. Sel bakteri berbudaya suspensi yang kemudian digunakan sebagai predator bakteri dalam cairan bentuk. Eksperimental set up: Budaya suspensi bakteri (20 m?) Dan cyanobacteria (20 m?) kemudian dicampur dalam 250 m? Erlenmeyer termos. Kontrol BG11 terdiri dari: 20 m? dari BG11 menengah dan 20 m? suspensi cyanobacteria tanpa suspensi bakteri. Para termos kemudian diinkubasi, tanpa gemetar, di kamar suhu selama 6 hari di bawah cahaya kontinyu (2000 lux). Sampel (5 m?) Telah dihapus setiap hari untuk sel cyanobacteria penghitungan dan analisis mikroskopis. Semua sampling eksperimental dan kontrol dilakukan dalam rangkap dua. Pemantauan pertumbuhan sel cyanobacteria: Pertumbuhan M. aeruginosa PCC7806 diukur melalui penghitungan utuh sel-sel di ruang penghitungan Petroff-Hauser yang dilihat melalui mikroskop labophot-2 Nikon dilengkapi dengan standar yang cerah Tujuan lapangan 40X dan gambar ditangkap dengan digital Nikon kamera DXM1200 (Burnham et al, 1973;. Guilard, 1978; Smayda, 1978). Sebelum menghitung sel campuran cairan bakteri predator dan cyanobacteria diencerkan dengan Fosfat-buffered saline (PBS) yang terdiri dari 0,01 M Na2HPO4: 0,15 M NaCl pada pH 7.35. Penghitungan sel dilakukan di duplikat. Identifikasi bakteri predator Pewarnaan Gram dilakukan pada isolat bakteri untuk memeriksa status Gram dari budaya. Gram noda diamati di bawah Nikon optiphot cahaya mikroskop dengan standar brightfield dan 100x. Tujuan (perendaman minyak). Fotofoto ditangkap dengan Nikon kamera digital DMX1200. Untuk identifikasi dan karakterisasi isolat bakteri, pendekatan yang berbeda digunakan termasuk: morfologi koloni, pigmentasi, dan sifat biokimia bakteri dan properti seperti sensitivitas terhadap antibiotik yang berbeda. API 20E, 20NE dan API 50CH tes (bioMerieux) yang memantau 20 dan 50 reaksi enzimatik menggunakan gula sebagai substrat masing-masing, digunakan untuk mengidentifikasi isolat bakteri. Hugh-Liefson itu DARI, katalase dan oksidase tes dilakukan pada dua isolat bakteri untuk menentukan menguji API untuk menggunakan dan viabilitas bakteri masing-masing di bawah kondisi kekurangan oksigen. HASIL DAN PEMBAHASAN Apakah bakteri atau cyanophage mendorong pengembangan plak? Setelah 10 hari inkubasi, mengambil keuntungan dari tersedia dalam 11 dimodifikasi agar BG, M. Nutrisi aeruginosa, cyanobacterium, dan tersedia pencahayaan (2000 lux) tumbuh pada plate agar membentuk rumput hijau. Pada kedua piring agar-agar, rumput hijau Microcystis diamati pada sampel keduanya dirawat dan kontrol (Gambar 1). Dalam sampel kontrol (kloroform tidak ada ditambahkan ke bendungan sampel air), plak yang diamati berkembang dalam Microcystis rumput (Gambar 1a dan c). Tidak ada plak diamati pada sampel bendungan air yang telah diolah dengan kloroform (Gambar 1b dan d). Kloroform adalah kimia yang dikenal untuk menghancurkan cyanophages (virus yang secara khusus menyerang cyanobacteria) tetapi tidak bakteri atau cyanobacteria (Daft et al, 1975;. Tucker dan Pollard, 2004). Jadi dalam sampel diobati, semua cyanophages telah dihancurkan oleh kloroform yang ditambahkan maka pertumbuhan Microcystis menyebar dan membentuk rumput tanpa plak. Sementara di sampel kontrol, ada pertumbuhan Microcystis dan plak, dikembangkan dalam halaman dan ini disebabkan oleh keberadaan bakteri tetapi tidak cyanophage. Asumsinya dibuat bahwa plak berasal dari bakteri tunggal (Daft et al, 1975;. Burung dan Rashidan,

2001) dan ini uji aktivitas cyanophage dilakukan untuk mengkonfirmasi asumsi. Dengan demikian penelitian berikutnya Tujuan adalah untuk mengidentifikasi bakteri memangsa pada cyanobacteria dan dalam proses yang sama membuat plak. Bakteri ini atau bakteri yang memanfaatkan cyanobacteria sebagai sumber nutrisi (Burung dan Rashidan, 2001). Aspek ini sangat penting karena Tujuan umum adalah untuk mengidentifikasi predator bakteri yang dapat digunakan untuk mengatur dan menghentikan pertumbuhan alga Microcystis mekar, melalui manajemen kontrol biologis. Isolasi bakteri predator dari plak dalam rumput Microcystis Sebagaimana ditunjukkan di atas, muncul plak dalam Microcystis rumput dan dikaitkan dengan bakteri kegiatan yang mungkin memberi makan pada cyanobacteria (Gambar 2). Zona ini adalah plak yang tidak beraturan dengan ukuran lebar mulai dari 2 sampai 8 mm. Sebuah steril nichrome kawat kemudian digunakan untuk memo bakteri dari plak zona dan kemudian melesat ke agar nutrien piring. Agar nutrien adalah media pilihan pertama karena itu adalah tujuan umum media untuk budidaya yang luas berbagai bakteri, yang tidak teliti dalam nutriational mereka persyaratan. Awalnya, dua puluh satu isolat bakteri, ditunjuk B1 untuk B21, diperoleh dengan melesat pada agar nutrisi. Gram noda dari kultur campuran isolat terungkap. Para isolat dengan demikian sub diulang dikultur pada agar nutrien dan PY agar (10 g pepton, ekstrak ragi 1 g dan 15 g agar-agar dalam 1? air suling, pH 7,0) ke titik di mana tujuh koloni murni diperoleh. Dari pewarnaan yang hasil, diamati bahwa flora bakteri terdiri dari batang dan coccoids. Gila dkk. (1975) menunjukkan bahwa bakteri litik yang berlimpah di perairan permukaan dan scums alga eutrophic freshwaters dari danau Skotlandia, waduk dan pengolahan air bekerja. Hasil ini (Gambar 2) menegaskan ini sebelumnya temuan yang alga sampah adalah sumber litik bakteri (Daft et al., 1975). Hasil penelitian menunjukkan bahwa baik satu dan / atau kombinasi dari bakteri bertanggung jawab untuk pengembangan plak. Pertanyaan utama karena itu adalah 'yang bakteri atau bakteri ini? Dengan demikian isolat mengalami skrining untuk mengevaluasi mereka litik aktivitas pada kultur cair M. aeruginosa. Litik aktivitas isolat bakteri pada Microcystis Aktivitas litik dievaluasi dengan memantau pertumbuhan aeruginosa, M. PCC7806 strain referensi standar terhadap dua isolat bakteri. Pertumbuhan Microcystis dipantau dengan menghitung sel utuh dalam sebuah Petroff-Hauser menghitung ruang yang dipandang melalui mikroskop labophot-2 Nikon dilengkapi dengan standar terang lapangan. Sebuah sel cyanobacteria telah dihitung jika tampak utuh dan sehat dan sel cyanobacteria adalah tidak dihitung jika muncul rusak atau tidak sehat saat dilihat di bawah mikroskop cahaya (Gambar 3). Berikutnya Pertanyaannya adalah bagaimana melakukan isolat bakteri berkontribusi pada penghambatan pertumbuhan atau cyanobacteria? Dari plak itu muncul sebagai jika bakteri telah menggunakan cyanobacteria sebagai sumber nutrisi oleh 'makan' cyanobacteria, sehingga membuat situs yang jelas di mana bakteri telah dikalikan bakteri isolat B2 demikian dan B16 dievaluasi dari litik mereka berpengaruh pada Microcystis laboratorium berbudaya. Pengaruh mengisolasi B2 pada sel Microcystis Isolat B2 menyebabkan penurunan 48% dalam sel Microcystis sedangkan jumlah sampel kontrol menunjukkan peningkatan eksponensial selama 6 hari (Gambar 4). Pada hari ke- 4 ada peningkatan jumlah sel Microcystis untuk kedua sampel (kontrol dan perlakuan). Setelah hari 4, ada penurunan cepat pada jumlah sel Microcystis sel nomor (perlakuan) dan peningkatan jumlah sel Microcystis (kontrol). Awalnya 2,45 x 108 cfu / ml dari isolat B2 mampu melisiskan 1,5 x 108 sel per ml Sel Microcystis, sehingga memberikan predator untuk rasio memangsa (1.6:1 2:1). Hal ini berimplikasi bahwa ada selsel predator yang lebih banyak daripada sel-sel mangsanya. Pertanyaannya kemudian, mengapa keterlambatan dalam lisis sel Microcystis? Agaknya, selama 'fase lag' populasi bateri pemangsa bakteri sedang menyesuaikan ke yang baru lingkungan sebelum memulai lisis cyanobacterial. Fraleigh dan Burnham (1988) mengamati bahwa panjang fase lag adalah berbanding terbalik dengan populasi pemangsa bakteri, yaitu, populasi predator rendah menghasilkan fase lag lagi. Atau tangan gemetar setiap hari (agitasi) dilakukan sebelum pengambilan sampel bertanggung jawab atas tindakan litik tertunda? Shilo (1970) dan Daft dan Stewart (1971) menunjukkan bahwa agitasi sampel dapat mengganggu atau mengganggu proses kontak fisik antara cyanobacteria dan bakteri sehingga mungkin telah menyebabkan keterlambatan dalam proses litik. Mungkin Microcystis mengadopsi mekanisme pertahanan untuk mengusir pemangsa dengan melepaskan microcystins. Choi et al. (2005) berspekulasi bahwa microcystins menghambat pertumbuhan organisme seperti cladocerans, copepoda, dan nyamuk larva dan telah terbukti allelopathic terhadap alga hijau, Chlamydomonas neglecta. Namun, ada ada laporan dipublikasikan tentang microcystin toksisitas dengan salam untuk bakteri (Choi et al., 2005). Oleh karena itu berspekulasi bahwa kombinasi dari pemangsa awal yang rendah populasi dan agitasi dari suspensi budaya dapat alasan utama penundaan dalam proses litik. Pengaruh isolat B16 pada sel Microcystis Isolat B16 disebabkan oleh pengurangan 87% dalam pertumbuhan Sel Microcystis sedangkan sampel kontrol menunjukkan peningkatan eksponensial pertumbuhan sel Microcystis selama 6 hari (Gambar 5). Untuk sampel diobati, ada suatu peningkatan dalam jumlah sel Microcystis pada hari 2 yang kemudian diikuti oleh penurunan bertahap. Ini mungkin dijelaskan oleh fase lag, suatu kondisi dimana cyanobacteria adalah mengalikan dan pemangsa itu menyesuaikan dengan kondisi baru. Setelah jeda singkat predator bakteri kemudian 'menyerang' cyanobacteria dan menggunakan cyanobacteria sel isinya sebagai sumber gizi, maka penurunan bertahap dalam jumlah sel cyanobacteria. Untuk sampel kontrol (tidak ada bakteri yang ditambahkan), ada konsisten peningkatan jumlah sel Microcystis hingga

4 hari. Setelah itu, ada peningkatan tajam di cyanobacteria sel nomor. Hal ini dapat dijelaskan oleh kolonial pertumbuhan M. aeruginosa. Sebagai cyanobacteria mengalikan itu membentuk koloni padat dari sel-sel saling bertautan diadakan bersama oleh lendir seperti bahwa pemisahan ini koloni ke dalam sel individu adalah sebuah tantangan. Ini fenomena agregasi kolonial juga diamati oleh Yang et al. (2005). Hasil penelitian menunjukkan bahwa awal 1,00 x 108 cfu / m? sel pemangsa dapat memulai lisis 4,3 x 108 sel per m? Microcystis sel, sehingga memberikan rasio predator mangsa (1:4.3 01:04?). Hal ini tersirat bahwa ada sel-sel mangsanya lebih dari sel-sel pemangsa meskipun 87% dari sel mangsa yang segaris dalam waktu singkat. Kecenderungan ini mungkin hasil lainnya faktor yang terlibat seperti agitasi sehari-hari yang mungkin telah mengakibatkan lisis cyanobacteria cepat, seperti kasus dengan Myxococcus xanthus PCO2 melisiskan Phormidium luridum (Burnham et al., 1981). Para peneliti mengamati bahwa agitasi cepat sampel cairan yang disebabkan suatu lisis lengkap 107 sel per m? P. luridum dalam 48 jam Dua isolat bakteri memiliki efek litik pada Microcystis sel. Mengisolasi B16 memiliki efek lebih besar dari mengisolasi B2. Sampel kontrol, di mana tidak ada bakteri menambahkan, menunjukkan peningkatan eksponensial dalam Microcystis sel nomor. Perbedaan dalam dua varian kontrol seperti ditunjukkan oleh faktor tunggal ANOVA (p <0,4). Ini dapat dijelaskan oleh perbedaan dalam cyanobacteria awal sel nomor pada awal percobaan. Para mekanisme lisis sel cyanobacteria antara B2 dan B16 tampaknya berbeda. Dengan mengisolasi B16, di harian tangan gemetar (agitasi), ada sebuah fase lag dari dua hari dan setelah itu terjadi penurunan bertahap dalam cyanobacteria sel nomor. Agitasi dari sampel mungkin telah mengakibatkan lisis sel Microcystis cepat. Burnham et al. (1981) melaporkan pengamatan serupa yang agitasi berkontribusi pada lisis lengkap dari cyanobacteria dan ada keterikatan fisik dari bakteri predator ke cyanobacteria. Namun pada panggung mekanisme lampiran dari predator sel bakteri ke sel cyanobacteria tidak diketahui. Ini Aspek sangat penting karena dalam dunia nyata, lingkungan air tidak pernah 'masih' tetapi ada kontinu pencampuran (agitasi) sehingga bakteri yang mampu beroperasi di bawah kondisi buruk seperti memiliki keuntungan berpotensi menjadi agen kontrol yang lebih baik biologis. Identifikasi bakteri predator Isolat B2 dan B16 yang dibudidayakan pada agar nutrisi dan budaya saham dipertahankan pada agar nutrisi miring dan disimpan pada suhu 4 C. Dalam mengisolasi B2, koloni berwarna keemasan, kompak, kecil, cembung dengan mulus tepi, sedangkan B16 mengisolasi koloni putih, menyebar, dan besar dengan tepi tidak teratur. Mengisolasi B2 adalah Batang Gram-negatif sementara mengisolasi B16 adalah Grampositive batang (Tabel 1). Kedua isolat bakteri (B2 dan B16) adalah oksidase dan katalase positif. Ini merupakan karakteristik penting karena memungkinkan bakteri untuk bertahan dalam anaerobik kondisi seperti yang ditemukan di Microcystis hyperscums (Zohary, 1987). Para hyperscums yang terbentuk di Hartbeespoort bendungan relatif tebal (0,75 m) seperti bahwa ada ketersediaan oksigen terbatas (Zohary dan Breen, 1989). Keterbatasan dalam ketersediaan oksigen adalah Kondisi menguntungkan bagi pengembangan biologi kontrol produk, karena bakteri yang digunakan untuk biologi kontrol harus mampu beradaptasi dengan semua kondisi apakah aerobik atau anaerobik. Bakteri isolat B2 diidentifikasi sebagai Pseudomonas stutzeri dengan 99,9% dan B16 kepastian sebagai Bacillus mycoides dengan kepastian 99,7% menggunakan sistem API. Tes lebih lanjut membentuk koloni dilakukan pada bakteri isolat dengan kultur mereka pada agar-agar 1,2% tryptone kedelai. Para pertumbuhan B2 dibatasi sedangkan untuk B16 adalah cepat dan menyebarkan meliputi cawan petri dalam 10 hari. Mengisolasi B16 membentuk koloni mirip kapas tersebar bahwa seorang karakteristik dari jenis liar B. mycoides SIN (Gambar 6) (Di Franco et al., 2002). Ada jenis liar lainnya dari B. mycoides DIX mana kurva filamen proyeksi searah jarum jam. Pentingnya proyek-proyek filamen (SIN atau DIX) dalam lisis cyanobacteria tidak diketahui di tahap ini. Microcystis koloni kepatuhan dan agregasi berkurang dalam sampel diperlakukan dengan B. mycoides (B16) ketika dibandingkan dengan sampel kontrol. Berbeda dengan pengamatan Jang dkk. (2003), yang melaporkan suatu peningkatan pembentukan koloni Microcystis (disertai oleh rilis di microcystins) sebagai langkah pertahanan terhadap spesies zooplanktonic Daphnia herbivora. Temuan ini mungkin menunjukkan bahwa ada yang terpisah modus aksi litik terhadap Microcystis oleh Daphnia spesies dan B. mycoides (B16). Beberapa spesies Daphnia telah menunjukkan strategi makan selektif dengan menargetkan beracun Microcystis spesies (Gliwicz, 1990). Dengan demikian, ada kemungkinan bahwa B. mycoides (B16) dirilis ekstraseluler zat yang mengurangi pembentukan koloni dan agregasi dan ini masih harus dieksplorasi. Berbeda dengan studi tentang Nakamura et al. (2003b), yang mengamati bahwa B. cereus N14 dikumpulkan ke permukaan menyebabkan lisis Microcystis sel cyanobacteria. B. mycoides (B16) belum pernah ditampilkan untuk memiliki aktivitas litik terhadap M. aeruginosa. Meskipun ada adalah spesies Bacillus beberapa seperti pumilis Bacillus, Bacillus megaterium, Bacillus subtilis, Bacillus licheniformes, Bacillus brevis dan Bacillus cereus yang telah ditemukan untuk menjadi antagonis terhadap M. aeruginosa. Bacillus ini spesies, yaitu B. pumilis, B. megaterium, B. Subtilis dan licheniformes B. telah terbukti untuk menghasilkan litik zat-zat volatil (Wright et al, 1991;. Wright dan Thompson, 1985) yang mengakibatkan lisis cyanobacteria. Reim et al. (1974) menunjukkan bahwa B. Brevis perilaku yang ditampilkan dalam fase stasioner litik pertumbuhannya, dengan produksi zat non-volatile litik bertepatan dengan sporulasi. Lain B. cereus N14 menunjukkan tingkat tinggi aktivitas litik terhadap aeruginosa M. dan Microcystis viridis (Nakamura et al., 2003b). B. cereus N14 dikenal untuk menghasilkan suatu zat yang bertanggung jawab atas aktivitas litik. Yang tidak teridentifikasi substansi yang dihasilkan dalam fase

stasioner pertumbuhan non-panas protein, hidrofilik dan stabil, dengan berat molekul kurang dari 2 kDa. B. mycoides telah terbukti berkaitan erat ke B.bcereus tetapi tidak menghasilkan enterotoksin (Wintzingerobe et al., 1997). Pada Daftar Terdaftar Nama bakteri, B. mycoides diklasifikasikan dalam terendah kelompok risiko 1 dan spesies lain yang termasuk dalam kelompok ini adalah B. thuringiensis, tanaman juga tahu hama mikroba kontrol agen. Yang menarik adalah bahwa strain tertentu dari B. cereus yang non-racun dan telah terbukti sukses sebagai hewan probiotik sehingga diturunkan ke kelompok risiko 1 (Fritze, 2004). B. mycoides (B16) ditunjukkan dalam penelitian ini membutuhkan kontak fisik untuk lisis, karena dengan B. cereus, tapi itu juga menemukan bahwa agregasi cyanobacteria adalah dikurangi dalam termos diobati. Hal ini mungkin menunjukkan bahwa litik substansi dan mekanisme lisis berbeda antara dua spesies yang terkait erat. P. stutzeri (B2) telah sama belum pernah terlibat dalam lisis cyanobacteria. Oleh karena itu, banyak pekerjaan yang diperlukan dalam rangka untuk mengevaluasi nya litik aktivitas. Kesimpulan Para plak yang muncul di halaman rumput dapat Microcystis dikaitkan dengan keberadaan bakteri tetapi tidak cyanophages. Isolat menjadi sasaran skrining untuk mengevaluasi aktivitas litik mereka pada budaya cair Microcystis. Kepentingan utama dari isolat bakteri terletak pada fakta bahwa mereka dapat mengatur berbahaya alami mekar alga. Kedua bakteri isolat B2 dan B16 telah efek litik pada sel-sel Microcystis dengan mengisolasi B16 memiliki efek yang lebih besar daripada mengisolasi B2. Mungkin dua bakteri memiliki mekanisme yang berbeda dari sel cyanobacteria lisis. API mengisolasi bakteri yang diidentifikasi sebagai P. B2 stutzeri dengan kepastian 99,9% dan B16 sebagai B. mycoides dengan 99,7% kepastian. Isolasi B16 memiliki karakteristik dari B. jenis liar mycoides SIN. Gambar 1. Analisis untuk kegiatan cyanophage pada rumput Microcystis. (a) Kontrol sampel (kloroform tidak ada ditambahkan) menunjukkan perkembangan plak menunjukkan bahwa bakteri mungkin bertanggung jawab untuk pengembangan plak. (b) Kloroform diperlakukan sampel menunjukkan adanya perkembangan plak. (c) Perbesaran plak dalam (a), seorang penguasa 30 cm menunjukkan ukuran dari plak dan (d) perbesaran rumput Microcystis dalam (b). Gambar 2. Penampilan plak pada rumput Microcystis setelah 30 hari inkubasi. Sampel diperoleh dari yang berbeda lokasi di bendungan Hartbeespoort: dari dermaga perahu (a) HB01, (b) HB02, HB03 dan (d) DWAF 2 dinding bendungan. Gambar 3. Cahaya mikrograf sampel Microcystis: (A) Kontrol Microcystis sel yang utuh dan sel-sel sehat dan (B) B. mycoides sel B16 Microcystis diperlakukan menunjukkan ukuran sel membengkak Gambar 4. Microcystis aeruginosa PCC7806 jumlah sel setelah paparan untuk mengisolasi B2. dengan Kontrol sampel menunjukkan perubahan densitas sel Microcystis tanpa pengobatan bakteri. Bar menunjukkan standar deviasi (duplikat). Gambar 5. Microcystis aeruginosa jumlah sel PCC7806 setelah terpapar untuk mengisolasi B16. Dengan sampel Kontrol menunjukkan perubahan densitas sel Microcystis tanpa pengobatan bakteri. Bar menunjukkan standar deviasi (duplikat). Gambar 6. (a) Cotton seperti koloni menyebar dan (b) B. mycoides B16 jenis SIN. Perhatikan kurva proyeksi filamen berlawanan arah jarum jam (hitam panah) seperti yang diamati dari dasar cawan Petri dan diklasifikasikan sebagai SIN.