Anda di halaman 1dari 3

HPLC Gandum hitam adalah makanan dan obat-obatan dan sereal tanaman berfungsi ganda.

Spesies soba ditanam kebanyakan Tartary soba (Fagopyrum tataricum (L.) Gaertn) dan umum soba (F. esculentum Moench). Soba Tartary adalah terutama tumbuh di barat daya Cina dan umumn soba ditanam di Cina utara. Buckwheat memiliki banyak menarik efek pada tubuh manusia pada penyakit kronis. [ 1,2,3,4] Komponen fungsional utama soba mengandung flavonoid, polifenol, inositol, organik asam, dll [5] Komponen fungsional dipengaruhi berdasarkan lokasi, kondisi lingkungan, dan varietas; untuk Misalnya, kandungan rutin di soba Tartary benih lebih tinggi dari soba umum [6]. Ada banyak jenis soba di Cina. Pembuktian dan kualitas kontrol soba sulit. Itu metode umum untuk otentikasi soba tidak cukup sensitif. Untuk kontrol kualitas dan otentikasi soba, metode cepat dan akurat harus ditetapkan. Teknik fingerprinting diterima untuk kontrol kualitas dan otentikasi herbal di Cina, tetapi jarang digunakan dalam biji-bijian dan produk-produknya. Metode analisis kimia sidik jari termasuk kromatografi lapis tipis, [7,8] tinggi kromatografi cair kinerja, [9,10] UV, [11,12] IR, [13,14] dll Metode HPLC digunakan paling banyak karena yang cepat dan akurat, analisis komponen utama [15] dan pengelompokan analisis hirarkis [16] digunakan dalam sidik jari normal, karena mereka dapat menangani variabel yang kompleks baik. Untuk pengetahuan kita, tidak ada penelitian yang telah dilakukan untuk mengidentifikasi soba oleh sidik jari. Berdasarkan yang kaya sumber daya soba, kami mendirikan sebuah metode untuk identifikasi dan kontrol kualitas soba dengan HPLC sidik jari. Data menjadi sasaran kemometrika umum analisis, termasuk analisis kesamaan (SA), Kepala komponen analisis (PCA) dan clustering hirarkis Analisis (HCA). Hasil penelitian menunjukkan bahwa sidik jari HPLC bervariasi antara sampel soba dari berbagai sumber. Itu jelas untuk membedakan tataricum Fagopyrum (L.) Gaertn dan F. esculentum Moench dengan cara mereka chemical features.

MATERIALS AND METHODS

Kimia dan pelarut Quercetin, rutin dan kaempferol digunakan sebagai referensi standar dan dibeli dari Institut Nasional untuk Pengendalian Farmasi dan Produk Biologi (Beijing, China). Asetonitril dan metanol (HPLC grade) dibeli dari Fisher Ilmiah Co Semua bahan kimia lainnya dan pelarut yang digunakan dalam penelitian adalah kelas analisis.
Sampel Bahan Tanaman varietas gandum dianalisis tercantum pada Tabel 1. Ada 25 Tartary soba dan9 varietas soba biasa. Bahan-bahan yang dikeringkan,dikelompokkan dan kemudian melewati 40 layar mesh. Persiapan sampel dan larutan stok standar Ekstraksi dilakukan dengan mencampurkan 0,5 g sampel dengan 10 ml metanol 60% dalam satu bobot kerucut, termos, refluks ekstraksi selama 1 jam. Ketika pendinginan sampai suhu kamar,membuat berat badan dengan pelarut ekstraktif. Ekstrak kemudian disaring dan disimpan dalam botol autosampler HPLC untuk segera dianalisis HPLC-UV. Kaempferol, rutin dan quercetin standar larutan dibuat dengan melarutkan kaempferol, quercetin dan rutin dalam metanol 60%, sehingga untuk membuat larutan yang mengandung 0,0914 mg / mL kaempferol, 0,0932 mg / mL rutin dan 0,0726 mg / mL quercetin.

Instrumentasi dan kromatografi Kinerja tinggi kromatografi cair (HPLC) terdiri dari dua macam yaitu LC-20A pompa Shimadzu dan Shimadzu LC-20A autosampler (Kyoto, Jepang). Sebuah Kromasil-ODS C18 (250 mm x 4,6 mm x 5 m) kolom yang digunakan. Pemisahan dilakukan dengan menggunakan campuran asetonitril dan air suling yang mengandung H3PO4 0,3% dengan gradien elusi berikut: 0-5 min (asetonitril 10%), 5-10 menit (10% -15% asetonitril), 10-25 min (15% -30% asetonitril), 25-45 min (30% -45% asetonitril), 45-50 min (45% -100% asetonitril), 50-60 min (100 asetonitril%). Laju aliran ditetapkan pada 1 mL / menit. Setelah itu eluen pada kolom dilanjutkan ke detektor UV / VIS. panjang gelombang yang ditetapkan sebesar 280 nm. Suhu dari kolom yang ditetapkan sebesar 40 C. Analisis kesamaan/kemiripan derajat Kesamaan dari sampeldievaluasi dengan analisis kesamaan (SA). sidik jari dari 34 varietas buckweat didirikan dan cocok dengan perangkat lunak profesional yang disebut Kesamaan/kemiripan.Evaluasi Sistem Sidik Jari kromatografi dari Pengobatan Tradisional Cina disusun oleh Chinese Pharmacopoeia Komite (Version 2004 Sebuah) (Beijing, Cina). analisis Komponen utama Principal komponen Analisis (PCA) dari 25 varietas soba Tartary dilakukan DPS menggunakan software statistik (DPS untuk Windows v3.01, Cina) berdasarkan luas puncak area. Hierarchical clustering analysis Hierarchical Clustering Analisis (HCA) dari 25 varietas soba Tartary dilakukan dengan menggunakan software statistik DPS (DPS untuk Jendela v3.01, Cina) berdasarkan metode Ward dan Euclidean jarak. Puncak Area umum / daerah puncak Total digunakan sebagai variabel independen dan dinormalisasi sebelum HCA. HASIL dan PEMBAHASAN Persiapan sampel dengan berbagai ekstraktif pelarut (60% metanol, metanol, kloroform, aseton). Hal ini luas puncak total tertinggi menggunakan metanol 60% sebagai pelarut ekstraktif (Gambar 1). Tiga cara yang berbeda dibandingkan ekstraktif (refluks ekstraksi, ekstraksi ultrasonik, ekstraksi terguncang); ekstraksi refluks memiliki luas puncak tertinggi total, oleh karena itu, kami memilih metode ekstraksi refluks. Berbeda kali ekstraksi dibandingkan, kita diekstraksi selama 1 jam. Untuk memperoleh sidik jari HPLC dan analisis kesamaan/kemiripan Sidik jari kimia yang digunakan untuk otentikasi dan kontrol kualitas obat-obatan herbal di cina. untuk memperoleh Informasi puncak yg berlimpah,berbagai kondisi pemisahan dan panjang gelombang dibandingkan. Sementara itu, kami berupaya untuk mencari kolom yang paling tepat seperti KromasilODS C18 (200 mm x 4,6 mm x 5 m) dan Kromasil-BPO C18 (150 mm x 4,6 mm x 5 m).Namun, bahan

kimia tidak baik dipisahkan. Dua puluh lima varietas gandum dan Tartary 9 varietas soba biasa diperoleh dan ditampilkan Dalam Angka 2a dan 2c. Kromatogram referensi Tartary soba dan soba umum adalah dihasilkan dalam Angka 2b dan 2d. Sepuluh puncak biasa ditemukan dari referensi kromatogram soba Tartary dan 12 biasa puncak soba biasa ditemukan dengan perbandingan waktu retensi. Quercetin terpilih dan digunakan untuk referensi puncak, waktu retensi relatif (waktu retensi / retensi waktu kuersetin) dari puncak soba Tartary menunjukkan sebagai 0,0673,, 0,0755 0,1207, 0,3500, 0,6267, 0,6476, 0,7022, 1,0000, 1,1839, 1,8224, sementara 0,0783, 0,0862, 0,1210, 0,1887, 0,2981, 0,3364, 0,6278, 0,8567, 0,9311, 1,0000, 1,7947, 1,8281 soba biasa. Itu kesamaan antara profil kromatografi seluruh soba dan kromatogram referensi dievaluasi dengan analisis kesamaan dan koefisien

kesamaan dari sidik jari kimia ditampilkan sebagai Tabel 2. hasil penelitian menunjukkan bahwa ada perbedaan besar antara buckweat Tartary dan buckweat umum Itu jelas untuk membedakan buckweat Tartary dan buckweat umum berdasarkan sidik jari, puncak 7 (senyawa yang tidak diketahui) dan kaempferol soba tarary adalah puncak karakteristik dari buckweat Tartary sedangkan puncak 4 (senyawa yang tidak diketahui) dari umum gandum hitam adalah puncak karakteristik. puncak lain seperti rutin dan quercetin yang terkandung dalam buckweat Tartary dan buckweat umum memiliki perbedaan besar dalam peak area.
PCA Hasil PCA (analisis komponen utama) ditunjukkan pada Tabel 3 dan Gambar 3. Kepala tiga pertama komponen menjelaskan 72,8% dari total varian dalam Data, komponen utama pertama (PC1) menjelaskan 43,7% varians. Ini berkorelasi positif dengan rutin, puncak 2 dan puncak 7, Komponen Utama II menjelaskan 17,0% dari varians dan berkorelasi erat dengan kuersetin dan kaempferol. Komponen ketiga principal (PC3) berkorelasi erat dengan puncak 6 dan puncak 10 dan menyumbang 12,1% dari varians. Dari hasil PCA, kami menyimpulkan yang rutin, kuersetin, kaempferol, puncak 2, 6 puncak, puncak 7 dan puncak 10 adalah komponen kimia karakteristik buckweat . Dari Gambar 4, itu adalah jelas bahwa sampel dapat dikelompokkan ke dalam empat cluster. Cluster A sampel tertinggi DI puncak 6 konten (senyawa yang tidak diketahui) dan puncak 10 (senyawa yang tidak diketahui). Cluster B (Qinwei No 3 dan No Miqiao 1, diperoleh dari profesor Zhaogang (Chengdu University) dengan menggunakan fisik dan kimia mutagen pada biji buckweat Tartary (hankuqiao)) konten memiliki rutin tertinggi, dan dengan demikian bahan yang cocok untuk memperkaya makanan fungsional, kosmetik dan obat-obatan yang kaya rutin. Cluster konten C memiliki quercetin dan kaempferol tertinggi. Senyawa yg diketahui diperlukan untuk diidentifikasi oleh metode analisis lain dalam pekerjaan di masa depan. HCA Prosedur HCA ditemukan sampel alami dan dikelompokkan sesuai dengan sidik jari. Metode The Ward didasarkan pada pengelompokkan diaplikasikan dengan jarak Euclidean digunakan untuk perhitungan. Hasil HCA ditunjukkan pada Gambar 4. Tergantung pada jarak, sampel dikelompokkan menjadi dua. Semua kelompok II berasal dari utara Cina, sementara klaster/kelompok saya dari Cina barat daya kecuali Pinzi-115 dan ping 01-34. Oleh karena itu, lokasi dapat mempengaruhi konsentrasi senyawa bioaktif. Kesimpulannya adalah analisis sederhana dan penentuan metode sidik jari menggunakan oleh HPLC YG digabungkan dengan detektor UV / VIS dalam pekerjaan ini.Hasil penelitian menunjukkan bahwa sidik jari HPLC bervariasi antara sampel gandum hitam dari sumber yang berbeda. Itu jela suntuk membedakan Fagopyrum tataricum (L.) Gaertn dan F. Esculentum Moench atas dasar chemicalfeatures mereka. Metode ini sederhana, akurat, dan berguna untuk mengontrol kualitas dan membedakan dari gandum hitam.