Halaman 1

Stres oksidatif pada pelari maraton: bunga suplementasi antioksidan

Mari-Carmen Gomez-Cabrera
1 Agustin martin 2 , Gustavo Santangelo 2 , Federico V. Pallard 2 , Juan Sastre 2 dan Jose
Vin~a 2
*
1 Universitas Katolik Valencia, Spanyol
2 Departemen Fisiologi, Universitas Valencia, School of Medicine, Blasco Iban~ez 15, E-46010
Valencia
Kami baru-baru ini melaporkan bahwa xanthine oxidase terlibat dalam generasi radikal bebas
dalam latihan lengkap. Allopurinol, penghambat
xantin oksidase, mencegah itu. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menjelaskan peran spesies
oksigen reaktif latihan yang diturunkan dalam sel signal
jalur ling terlibat dalam adaptasi untuk latihan di man. Kami telah menemukan bahwa olahraga
menyebabkan peningkatan aktivitas xanthine plasma
oksidase dan aktivasi NF-kB dalam limfosit darah perifer setelah lari marathon. Aktivasi ini
tergantung pada pembentukan radikal bebas
dalam latihan: pengobatan dengan allopurinol sepenuhnya mencegah. Dalam model hewan, kami
sebelumnya menunjukkan bahwa aktivasi NF-kB disebabkan oleh habisnya persediaan
latihan fisik tive menyebabkan peningkatan ekspresi superoksida dismutase, enzim yang terlibat
dalam pertahanan antioksidan. Kami melaporkan buktidence dalam manusia yang reaktif spesies oksigen bertindak sebagai sinyal dalam latihan sebagai
penurunan pembentukan mereka mencegah aktivasi sinyal penting
jalur yang dapat menyebabkan adaptasi berguna dalam sel.
NF k B: spesies oksigen reaktif: Sinyal transduksi: Pelari maraton
Latihan terbiasa meningkatkan generasi reaktif
spesies oksigen (ROS) di jaringan biologis (Davies et al.
1982). Kami menunjukkan bahwa radikal ini menyebabkan kerusakan sel
hanya ketika latihan lengkap (Sastre et al 1992;. GomezCabrera et al. 2003). Kami juga melaporkan bahwa allopurinol melindungi
terhadap kerusakan sel yang disebabkan oleh latihan lengkap baik dalam
man (Gomez-Cabrera et al. 2003) dan pada hewan percobaan
(Vin~a et al. 2000a, b), sehingga menyoroti peran xanthine oksidatif
Dase (XO) di ROS selama latihan. Namun, gratis
radicalsnotonlycausedamagebutalsohavearoleincellsignalling (Reid, 2001). Hewan sering terkena berolahraga
(pelatihan kronis) telah menunjukkan kerusakan oksidatif kurang setelah
Latihan lengkap dari yang terlatih. Hal ini sebagian besar atribusi
ted ke up-regulasi enzim antioksidan endogen
seperti mitokondria Mn superoksida dismutase (MnSOD), gluTATHIONE peroksidase dan g-glutamylcysteine sintetase (Salminen et al. 1984). Karena sifat adaptif akibat dari
Efek kumulatif dari serangan latihan berulang, sinyal awal
untuk stimulasi yang mengarah ke jangka panjang modulasi keharusan
terjadi setelah setiap pertarungan latihan individu (Hollander et al.

2001). Beberapa jalur sinyal stres oksidatif sensitif

operasional dalam sistem mamalia dan memainkan penting
peran dalam menjaga keseimbangan oksidan-antioksidan seluler. Satu
dari jalur yang paling penting yang dapat diaktifkan oleh ROS
melibatkan protein nuklir NF-kB (Baeuerle & Baltimore, 1988).
Kami baru-baru menunjukkan bahwa olahraga akut mengaktifkan NF-kB signal
ling jalur tikus otot rangka, yang menyebabkan peningkatan
ekspresi MnSOD, enzim yang terlibat dalam antioksidan
pertahanan (Ji et al. 2004). Sejak MnSOD adalah antiox- terkenal
enzim idant yang memodulasi ekspresi gen dalam menanggapi
seluler pro-oksidatif dan status antioksidan, kami berspekulasi bahwa
NF-kB aktivasi oleh ROS dihasilkan selama latihan mungkin
mekanisme yang mendasari untuk adaptasi untuk pelatihan dan
peningkatan ekspresi enzim antioksidan.
Dalam tulisan ini, kami meneliti peran ROS di generAting sinyal penting untuk adaptasi sel untuk latihan
pada atlet setelah lari maraton. Kami melaporkan bahwa ROS generated selama maraton berjalan menginduksi aktivasi plasma
XO, enzim superoxide-pembangkit, yang telah kita yang ditampilkan adalah
penting untuk generasi stres oksidatif dalam latihan di
hewan. Kami juga melaporkan NF-kB aktivasi latihan-induced
dalam limfosit darah perifer dari pelari maraton. Pracampur pembentukan ROS oleh penghambatan XO dengan allopurinol dihapuskan efek ini. Hasil ini sesuai
dengan data dari studi hewan sebelumnya di mana kita
melaporkan aktivasi mitogen-diaktifkan protein kinase,
yang pada gilirannya mengaktifkan NF-kB mengakibatkan peningkatan
ekspresi protein seluler penting seperti diinduksi
oksida nitrat sintase, endotel nitrat oksida sintase dan
MnSOD. Pencegahan pembentukan ROS oleh penghambatan XO
menghapuskan efek ini.
Implikasi praktis dari penelitian kami adalah bahwa penurunan
ROS efek oleh antioksidan dapat menghambat adaptif sel menguntungkan
sultasi selama latihan.
metode
subyek
Relawan direkrut dari peserta di 23
Maraton Valencia (semua laki-laki, usia rata-rata 37 (
SD
8 tahun
* Sesuai penulis: Dr Jose Vin~a, fax 34 96 386 46 42, jose.vina@uv.es email
Singkatan: MnSOD, Mn superoksida dismutase; ROS, spesies oksigen reaktif; XO xantin
oksidase.
British Journal of Nutrition (2006), 96, Suppl. 1, S31-S33
DOI: 10,1079 / BJN20061696
q Penulis 2006

Halaman 2
dan dengan rata-rata 6 (
SD
2) ras maraton selesai).
Pelari (n 25) secara acak dibagi dengan menggambar banyak ke
dua kelompok: plasebo (n 14) dan allopurinol ditambah
(300mg diberikan secara oral, 2 jam sebelum perlombaan; n 11). Itu
farmakokinetika allopurinol menunjukkan bahwa dosis ini sufmencukupi untuk secara efektif menghambat XO, dan untuk mengobati hiperurisemia di
praktek klinis (Heunks et al. 1999). Waktu untuk menyelesaikan
maraton secara statistik tidak berbeda antara kedua
kelompok atlet.
Darah diambil dari 1d vena antecubital sebelum dan
segera setelah maraton. Semua pelari memberi
informasi, persetujuan tertulis. Eksperimental protokol condibentuk untuk standar yang ditetapkan oleh Deklarasi Helsinki
dan prosedur telah disetujui oleh Komite
Etika dalam Penelitian Fakultas Kedokteran Universitas
Valencia, Spanyol.
Isolasi limfosit dan uji NF-kB
Limfosit diisolasi dari seluruh darah segar menggunakan
Ficoll-Paque Ditambah (17-1440-02; Pharmacia) dan kecepatan rendah
sentrifugasi (Harris & Ukaejiofo, 1970). The sus- terisolasi
pensiun limfosit menjadi sasaran protein whole-cell
ekstraksi untuk penentuan NF-kB aktivasi p50,
yang dilakukan dengan menggunakan metode ELISA menurut
instruksi dari pabriknya (TransAm NF-kB p50
Chemi: Motif Aktif). Secara singkat, antibodi primer yang digunakan untuk
mendeteksi NF-kB mengakui epitop pada p50 yang dapat diakses
hanya ketika NF-kB diaktifkan dan terikat untuk DNA target.
penentuan malondialdehid
Konsentrasi malondialdehid ditentukan pada manusia
plasma menggunakan HPLC seperti yang dijelaskan oleh Young et al. (1987).
Penentuan aktivitas oksidase xanthine
Amplex
w
Red Xanthine / Xanthine Oxidase Assay Kit (mol
Probe ecular) digunakan untuk menentukan aktivitas xantin oksidase
dalam plasma manusia seperti yang dijelaskan oleh produsen.
Analisis statistik
Hasil dinyatakan sebagai sarana dan standar deviasi. Lembaran Negara Republik
Analisis istical dilakukan oleh setidaknya-signifikan berbedaTes ence yang terdiri dari dua langkah. Pertama sebuah ANOVA
dilakukan. Hipotesis nol diterima untuk semua num
bers dari mereka set di mana F adalah non-signifikan pada tingkat
P # 0 05. Kedua, set data di mana F adalah signifikan

diperiksa dengan uji t yang dimodifikasi menggunakan P # 0 05 sebagai

batas kritis.
hasil
Aktivasi xanthine plasma oksidase setelah lari marathon
Kegiatan XO meningkat dari 0,65 (
SD
0,1) IU / l sebelum latihan
1,5 (
SD
0,3) IU / l setelah maraton (n 14, P, 0 05). Ini
dicegah oleh pengobatan dengan allopurinol (0,90 (
SD
0,05)
IU / l sebelum latihan v. 0.97 (
SD
0,1) IU / l setelah maraton run
ning, n 11).
Aktivasi NF-kB setelah lari marathon dan pencegahan
oleh allopurinol
Marathon berjalan diinduksi aktivasi subunit p50 dari
NF-kB kompleks dalam limfosit (F ig. 1) . Ini dicegah
oleh pengobatan dengan allopurinol.
Penghambatan xantin oksida mencegah lipid plasma
peroksidasi di lari marathon
Untuk menentukan apakah XO memang bertanggung jawab oksidatif
stres yang terkait dengan lari marathon, kami mengukur lipid
peroksidasi dalam plasma atlet sebelum dan sesudah mara- sebuah
thon. Malondialdehid (ukuran hidroperoksida lipid
tingkat) meningkat secara signifikan setelah lari marathon
(P, 0 05). Namun, peningkatan ini berikut absen allopengobatan purinol ( Gbr. 1) .
Diskusi
Latihan menghasilkan radikal bebas (Davies et al. 1982). Kapan
pembentukan radikal bebas menguasai pertahanan antioksidan,
Ara. 1. aktivasi NF-kB dalam limfosit dan tingkat Malondialdehyde plasma (MDA) setelah lari
marathon yang diblokir oleh pengobatan dengan allopurinol. nilai-nilai
berarti dengan standar deviasi yang ditunjukkan oleh garis vertikal selama sebelas mata pelajaran
pada kelompok plasebo dan empat belas subyek dalam kelompok allopurinol diobati. Berarti
nilai-nilai yang berbeda secara signifikan dibandingkan dengan mereka sebelum maraton: * P,
0,05, ** P, 0,01.
M. -C. Gomez-Cabrera et al.
S32
halaman 3
stres oksidatif terjadi. Dalam konteks ini, latihan menyebabkan oksidatif
stres oksidatif hanya ketika lengkap (Sastre et al. 1992).

Mekanisme pembentukan radikal bebas dalam latihan belum

telah sepenuhnya dijelaskan. Kami menunjukkan bahwa XO terlibat
di generasi radikal bebas pada hewan dilakukan. Baru-baru ini, kami
menemukan bahwa allopurinol (penghambat XO) mencegah kerusakan
terkait dengan latihan lengkap di Tour de France
(Gomez-Cabrera et al. 2003).
Dalam studi saat ini, kami menunjukkan bahwa XO-berasal ROS mengaktivasi
Vates sebuah sinyal jalur NF-kB di limfoma darah perifer
phocytes setelah lari maraton.
Kami sebelumnya melaporkan bahwa penghambatan XO dengan allopurinol mencegah kerusakan yang terkait dengan olahraga lengkap di
hewan (Vin~a et al. 2000a, b) dan manusia (Gomez-Cabrera et al.
2003). Kami telah menggunakan allopurinol untuk menghambat XO (Heunks et al.
1999; Vin~a et al. 2000a, b; Gomez-Cabrera et al. 2003).
Meskipun allopurinol dapat bertindak sebagai antioksidan kimia, kami
ditemukan ini tidak terjadi pada dosis yang digunakan pada saat ini
belajar. Dalam subyek manusia diobati dengan 300mg allopurinol, yang
konsentrasi plasma tidak mencapai level yang dibutuhkan untuk
menunjukkan sifat antioksidan (Heunks et al. 1999).
Gagasan bahwa latihan menghasilkan sinyal penting dalam sel
fisiologi telah diduga untuk waktu yang lama. Vider et al.
(2001) pertama menunjukkan bahwa latihan fisik menginduksi aktivasi
NF-kB dalam limfosit darah perifer manusia. Dua
tahun kemudian, Khassaf et al. (2003) menemukan bahwa suplementasi
subyek dengan vitamin C berkurang secara signifikan kemampuan
limfosit untuk mengekspresikan enzim pelindung (SOD dan kucingAlase) dan protein heat shock setelah paparan ke
oksidan eksogen. Mereka menyimpulkan bahwa vitamin C-dukungan
subyek plemented, tanggapan adaptif untuk oksidan yang attenuated. Kami melaporkan, untuk pertama kalinya, bahwa XO-berasal ROS
terbentuk selama lari marathon yang bertanggung jawab untuk NF-kB
aktivasi karena, seperti yang ditunjukkan pada Fi g. 1, menghambat untuk- mereka
mation (dengan allopurinol) mencegah aktivasi NF-kB dan,
mungkin, selanjutnya up-regulasi ekspresi
pelindung, enzim antioksidan.
Dalam tulisan ini, kami melaporkan bahwa ROS diproduksi di exercise bertindak sebagai sinyal yang mengatur peristiwa molekul penting dalam
sel adaptasi latihan pada atlet. Dengan demikian, radikal bebas bertindak
sebagai pedang bermata dua: mereka menyebabkan kerusakan oksidatif, tetapi
mereka juga up-mengatur ekspresi enzim yang
penting untuk pertahanan antioksidan. Konsekuensi praktis
adalah bahwa antioksidan administrasi mencegah adaptasi seperti
dan, dengan demikian, rekomendasi dari mengambil antioksidan dukungan
merupakan pelengkap sebelum latihan harus direvisi karena dapat pramelampiaskan adaptasi berguna diinduksi oleh latihan.
Ucapan Terima Kasih

Karya ini didukung oleh dana dari CICYT (BFI-20012849 dan SAF2004-03755 untuk JV; SAF2002 / 00.885 untuk
FVP) dan dari Instituto de Salud Carlos III, RCMN
(C03 / 08), Madrid, Spanyol. M.-CG-C. adalah penerima
DANONE hibah untuk penelitian. Kami berterima kasih Pilar Monforte untuk
Bantuan teknis yang sangat baik padanya dan Correcaminos Running Masyarakat untuk kerja sama mereka dalam pekerjaan ini.
Referensi
Baeuerle PA & Baltimore D (1988) Aktivasi DNA mengikat
Kegiatan dalam prekursor tampaknya sitoplasma dari NF-kB tranFaktor scriptional. Sel 53, 211-217.
Davies KJA, Quintanilha AT, Brooks GA & Packer L (1982) Gratis
radikal dan kerusakan jaringan yang dihasilkan oleh olahraga. Biochem Biophys
Res Commun 107, 1198-1205.
Gomez-Cabrera MC, Pallardo FV, Sastre J, Vin~a J & L Garcia-del-Moral
(2003) Allopurinol dan penanda kerusakan otot di antara peserta
di Tour de France. JAMA 289, 2503-2504.
Harris R & Ukaejiofo EO (1970) Tissue mengetik menggunakan satu-rutin
langkah prosedur pemisahan limfosit. Br J Haematol 18,
229-235.
Heunks LM, Vin~a J, van Herwaarden CL, Folgering HT, Gimeno A &
Dekhuijzen PN (1999) oksidase Xanthine terlibat dalam exercisediinduksi stres oksidatif pada penyakit paru obstruktif kronis.
Am J Physiol 277, 1697-1704.
Hollander J, Fiebig R, Gore M, Ookawara T, Ohno H & Ji LL
(2001) Superoxide ekspresi gen dismutase diaktifkan oleh
pertarungan tunggal latihan dalam tikus otot rangka. Pflugers Arch
442, 426-434.
Ji LL, Gomez-Cabrera MC, Steinhafel N & Vin~a J (2004) exer- akut
cise mengaktifkan faktor inti (NF) kB signaling jalur tikus
otot rangka. FASEB J 18, 1500-1506.
Khassaf M, McArdle A, Esanu C, et al. (2003) Pengaruh vitamin C
suplemen pada antioksidan pertahanan dan stres protein pada manusia
limfosit dan otot rangka. J Physiol 549, 645-652.
Reid MB (2001) Redox modulasi kontraksi otot rangka:
apa yang kita tahu dan apa yang kita tidak lakukan. J Appl Physiol 90, 724-731.
Salminen A, Kainulainen H & Vihko V (1984) pelatihan Ketahanan
dan antioksidan dari paru-paru. Experientia 15, 822-823.
Sastre J, Asensi N, GASCO E, et al. (1992) fisik Exhaustive
latihan menyebabkan oksidasi status glutathione dalam darah: pencegahan
tion dengan pemberian antioksidan. Am J Physiol 32,
R992-R995.
Vider J, Laaksonen DE, Kilk A, et al. (2001) Latihan fisik
menginduksi aktivasi NF-kB dalam limfosit darah perifer manusia
cytes. Antioxid Redox Signal 3, 1131-1137.
Vin~a J, Gimeno A, Sastre J, et al. (2000a) Mekanisme radikal bebas

produksi dalam latihan lengkap pada manusia dan tikus; peran

xantin oksidase dan perlindungan dengan allopurinol. IUBMB Hidup 49,
539-544.
Vin~a J, Gomez-Cabrera MC, Lloret A, et al. (2000b) Radikal bebas di
lengkap latihan fisik: mekanisme produksi, dan proproteksi oleh antioksidan. IUBMB Hidup 50, 271-277.
Muda SHY, Ksatria JA, Hopfer SM, Zaharia O, Leach CN &
Sunderman FW (1987) lipoperoksida dalam plasma yang diukur dengan
cair kromatografi pemisahan malondialdehid-thiobarbiadduct asam turic. Clin Chem 33, 214-220.
Oksidan memodulasi sinyal sel dalam latihan
S33