HPTLC densitometric evaluation by simultaneous estimation of galangin in

Alpinia galanga and Alpinia officinarum

Alpinia galangan Linn adalah tanaman aromatic. Dibudidayakan di India , Cina ,

Thailand , Malaysia dan Indonesia. Galanga ( juga disebut lengkuas , kencur , lengkuas atau)
adalah spesies dari keluarga jahe (Zingiberaceae) . Ada dua spesies yang berbeda dari galanga ,
galanga kecil (Alpinia officinarum Hance) dan galanga besar ( Alpinia galanga Willd . ) . Alpinia
galanga diketahui memiliki aktivitas analgesik, imunostimulant, antifungi, antiinflamasi,
antivirus dan antikanker. Galangin merupakan konstituen yang penting dari Alpinia galangan
dan Alpinia officinarum. Ada perbedaan metode analisis yang digunakan untuk mengisolasi
konstituen dari Alpinia galangan dan Alpinia officinarum. Fase terbalik dari metode High
Performance Liquid Chromatoghraphy (HPLC) digunakan untuk kuantifikasi Alpinia
officinarum dengan menggunakan galangin sebagain penanda. HPLC dikembangkan untuk
penilaian dua bioaktif utama flavonoid : galangin dan 3-O- metil galangin di Alpinia officinarum
Hance.
Ultra-performance liquid chromatography (UPLC). digabungkan ke electrospray
ionisasi ( ESI + ) massa tandem spektrometri ( MS ) dikembangkan untuk mengidentifikasi dan
mengkarakterisasi diarylheptanoids di extract cairan ( SFE ) dari Alpinia officinarum.
Material dan Metode.
Sampel menggunakan sampel Alpinia galangan dan Alpinia officinarum. Sebelumnya dibuat
terlebih dahulu larutan stok galangan dengan melarutkan 10 mg galangin ditimbang dalam 10
mL methanol. Dari larutan stok ini, solusi standar 100 ppm / mL disusun dalam 10 mL labu
volumetrik dan menyesuaikan volume dengan metanol.
Penyiapan sampel:
- Ekstrak kering dari Alpinia galanga ( 10 mg ) dipindahkan ke 10 mL labu volumetrik dan
volume dicukupkan 10 mL dengan metanol untuk memberikan final konsentrasi 100 mg /
mL .
- Ekstrak kering dari Alpinia officinarum ( 10 mg ) dipindahkan ke 10 mL labu volumetrik
dan volume dicukupkan 10 mL dengan metanol untuk memberikan final konsentrasi 100
mg / mL .
Kurva kalibrasi dari galangin:
Solusi standar galangin diterapkan dalam rangkap tiga pada plat HPTLC ( 20 10 mm ) dengan
ukuran 2,4,8,12,16 dan 20 uL. Plat ini dikembangkan dalam sistem pelarut asam heksana - etil
asetat - asetat ( 7,5 : 2 : 0,5 v / v ) pada suhu 25 2 C dan kelembaban relatif 40% sampai
dengan jarak 8 cm. Setelah dilakukan pengembangan, plat dikeringkan di udara dengan panjang
gelombang 254 nm. Daerah puncak tercatat. Kurva kalibrasi dibuat dengan memplot daerah
puncak vs konsentrasi.

Metode validasi:
Metode yang diusulkan divalidasi sesuai rekomendasi yang ditetapkan oleh pedoman
International Conference on Harmonization (ICH). (ICH Q2A, 1994; ICH Q2B, 1996). Metode
validasi yang diujikan adalah presisi, pengulangan, robustness, spesifitas, akurasi, LOD dan
LOQ.
-

Presisi: Instrumen presisi diujikan dengan scanning berulang (n=6) sesuai dengan tempat
galangin yang sama (240ng/spot) dan dinyatakan sebagai koefisien variasi (%CV) pada
area puncak. Keragaman metode dipelajari dengan menganalisis aliquot dari larutan
standar galangin ( 240 , 320 , 400 ng / spot) pada hari yang sama ( intraday presisi ) dan
hari yang berbeda ( interday presisi ) dan hasilnya dinyatakan sebagai % CV.

Pengulangan: Pengulangan metode ini dilakukan dengan menganalisis 240 ng / tempat

larutan standar galangin setelah aplikasi pada pelat HPTLC ( n = 6 ) kemudian
menganalisis seperti yang dijelaskan dalam penyusunan kalibrasi plot, yang dinyatakan
sebagai % CV.

Ketahanan : fase gerak memiliki perbedaan komposisi seperti seperti asam asetat - asetat
heksana - etil ( 7,5 : 2 : 0,5 v / v ) , ( 7,0 : 2,5 : 0,5 v / v ) , ( 8,0 : 1,5 : 0,5 v / v ) dll.
Jumlah fase gerak , suhu dan kelembaban relative bervariasi pada kisaran 5 %. Waktu
dari bercak ke kromatografi dan kromatografi dari pemindaian bervariasi dari 0, 30 , 60
dan 90 menit . Ketahanan dari metode ini berada di tiga tingkat konsentrasi yang
berbeda : 240 , 320 , 400 ng / spot for galangin.

Spesifitas: Metode spesifitas digunakan untuk analisa standard dan sampel. Identitas band
dari galangin pada kromatogram yang diperoleh dari sampel dilakukan dengan
perbandingan nilai Rf dan spectrum. Puncak kemurnian dinilai dengan membandingkan
standar dan sampel spektrum yang diperoleh pada awal puncak [ S ] , puncak puncak
[ M ] dan puncak akhir [ E ].

Akurasi: Akurasi metode ini diuji dengan melakukan studi pemulihan pada tiga tingkatan
( 80 % , 100 % dan 120 % ).

LOD dan LOQ: LOD merupakan konsentrasi terendah galangin yang dapat dideteksi ,
sedangkan LOQ merupakan konsentrasi terendah CPT yang dapat ditentukan dengan
presisi dan akurasi.

Hasil dan Diskusi

Untuk analisis bahan baku herbal dan obat herbal, analisa dengan menggunakan
metode HPTLC lebih unggul karena sederhana, ekonomis dan membutuhkan sampel yang
minimum.Waktu yang diperlukan untuk sampel pada analisa HPTLC jauh lebih singkat
dibandingkan dengan HPLC , kromatografi cair dan elektro - semprot spektrometri massa.

Dari sejumlah sistem pelarut, yang satu berisi hexaneethylacetate-asam asetat ( 7,5 : 2 :
0,5 v / v ) memberikan resolusi terbaik dari galangin dengan faktor retensi ( Rf ) 0,46. Profil
HPTLC dari galangin di Alpinia galanga dan Alpinia officinarum pada panjang gelombang 254
nm diilustrasikan dalam gambar dibawah ini.

Gambar selanjutnya menunjukkan linearitas dan densitogram dari galangin dalam rentang
konsentrasi 200 sampai 2000 ng / tempat dengan koefisien korelasi ( r2 ) dari 0,999 ( y = 7.765x
+ 3.739 ).

Linearitas galangin

Densitogram galangin

Presisi dan pengulangan pada tiga tingkat konsentrasi yang berbeda mencerminkan ketahanan
metode.

Standar deviasi area puncak dikalkulasikan pada beberapa kondisi dan %RSD telah ditemukan
presentase kurang dari 2%. Nilai %RSD yang rendah diindikasikan sebagai metode ketahanan.

Keakuratan metode ini dievaluasi oleh studi pemulihan. Kedua pemulihan persen dan rata-rata
persen recovery dihitung. Setelah penambahan galangin standar untuk jumlah yang sama dari
larutan sampel di tiga tingkat konsentrasi yang berbeda, pemulihan persentase galangin
ditemukan 100,04 % , 100,39 % dan 100,25 %
dengan rata-rata 100,22 %

Akurasi of Galangin

Kesimpulan:
Penelitian ini menjelaskan metode HPTLC untuk estimasi kualitatif dan kuantitatif dari galangin.
Uji reproduktifitas, pengulangan dan akurasi metode yang dilakukan ditemukan memuaskan oleh
nilai-nilai rendah deviasi standar dan persen deviasi standar relatif. Kedua metode yang
ditemukan menjadi sederhana, tepat, spesifik, direproduksi , sensitif dan akurat dan dapat
digunakan untuk kuantitatif galangin dan kontrol kualitas rutin bahan baku dan formulasi yang
mengandung galangin.