LAPORAN PRAKTIKUM

PEWARNAAN BAKTERI
Diajukan untuk Memenuhi Tugas Mata Kuliah Mikrobiologi

Disusunoleh:
Arinda Eka L
140210103074

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN BIOLOGI

JURUSAN PENDIDIKAN MIPA
FAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKAN
UNIVERSITAS JEMBER
2016

I.
II.

JUDUL: Pewarnaan dan Identifikasi (Uji Biokimia) Bakteri

TUJUAN
II.1
Mahasiswa dapat mengetahui macam-macam teknik
pewarnaan bakteri
II.2
Mahasiswa dapat mengetahui bentuk-bentuk koloni bakteri
dengan morfologi makroskopis
II.3
Mahasiswadapatmengenalcirisifatbiokimiapadamikrobadne

III.

ganbeberapaujisifatbiokimia.
METODE PENELITIAN
III.1
Alatdanbahan
III.1.1 Alat
a. Tabungreaksi
h. Cawan petri
b. Ose
i. Mikropipetdan tip
c. Bunsen
j. Kacabendadankacapenutup
d. Beaker glass
k. Mikroskop
e. Kertaslakmus
l. Tissue
f. Pipet
m. Kertaskayu
g. Incubator
n. Tusukgigi
h. Tabungdurham
III.1.2 Bahan
a. Biakanbakteripada medium miring 24 jam
b. Methilen blue
c. Safranin
d. Aquadessteril
e. Violet Kristal
f. Larutanlugol
g. KOH 3%
h. Tintacina
i. Larutan green malakhit 5%
j. Alkohol 70%
k. Medium SSA (Soluble Strach Agar)
l. Larutanyodium
m. Medium SMA (Skim Milk Agar)
n. Medium nitratcair
o. Larutanasamsulfanilat
p. Larutan -napthylamine
q. Larutan H2O23%
r. Medium NB
s. LarutanRegensiakovacs
t. Glukosa, fruktosa, sukrosa, danlaktosa
u. Alkohol 95%
III.2
Skemakerja
III.2.1 Identifikasimakroskopis
Melakukanidentifikasimakroskopispada
telahdiinokulasibakteritertentu
tidakdiketahuinamanyadantelahdiinkubasi

medium

yang
yang

Mengamatiwarnakolonibakteridanmengamatimarginnya.

III.2.2 Identifikasimikroskopis (Pewarnaan)

a. PewarnaanSederhana
Membuat 2 sediaanbakteripadakacabenda yang sudahsteril
Menetesimethilen
blue
padasediaanbakteripertamadanmenetesisafraninpadasediaanbakteri
2, tunggu 1-2 menithinggalarutanmeresap.

Membuangsisamethilen
blue
maupunsafranindarikacabendadanmembilasnyadenganaquadessteri
ldanmengeringkandengankertaspengering

Mengamatidibawahmikroskopuntukmengetahuibentuk,
ukurandanmorfologiselbakteri.

Apabila
di
warnaidenganmethilen
bakteriakantampakberwarnabirusedagkanapabila
warnaidengansafraninbakteriakantempakberwarnamerah.

blue
di

b. Pewarnaan gram
Membuatsediaanbakteripadakacabenda yang sudahsteril
Menetesisediaanbakteritersebutdenganlarutan
kristalmenunggunyahingga 1 menit agar meresap.

violet

Membuangsisa violet kristaldarikacabenda

Menetesisediaanbakteridenganlarutanlugol, menunggunyaselama
1 menit

Membuangsisalugoldarikacabendadanmembilasnyadenganaquades
steril

Melunturkandenganalkohol
95%
selama
10-20
detiksampaisisazatwarnahilangdanmembilasnyalagidenganaquades

Menetesisafraninpadasediaanbakteridanmembiarkanselama 10-30
detik

Membuangsisasafranindarikacabendadanmengeringkandengankert
aspengering.

Apabilabakteriberwarnaungudisebutbakteri
gram
positifsedangkanbakteri yang berwarnamerahdisebutbakteri gram
c. Pewarnaandenganuji KOH 3%
Meneteskan KOH 3% diataskacabenda

Menambahkan isolate bakteridari medium padat

Meratakan KOH 3% dan isolatebakteridengantusukgigiatauose

Menarikoseatautusukgigidiatascampuran isolate dan KOH 3%,

jikaterdapat lender saatditarik, makabakteritermasuk gram negative

d. Pewarnaantintacina (Negative)
Membuatcampuranbakteridengan 1 tetestintacinapadakacabenda
yang bersihdansterilmenggunakanose
Membuathapusan
tipis
dengancaramengusapkancampuranmemakaitepikacabenda
yang
lain dan mongering anginkansedian
Bakteriakantampaksebagaibentukantidakterwarnai
(transparan)
e. PewarnaanEndospora
diantaralatarbelakang yang gelap.
Membuatsediaanbakteripadakacabenda yang sudahsteril, fiksasi

Menetesisediaanbakteritersebutdengan green malakhit

danmemanaskandiatasnyalabunsenataumendidihkandiatas
sampaitimbuluapselama 1 menit
Membuangsisa
malakhitdarikacabendadanmembilasdenganaquadessteril
Menetesisafraninpadasediaanbakteridanmembiarkanselama
detik

5%
air
green

30

Membuangsisasafranindarikacabendadanmembilasdenganaquadess
terildanmengeringkandengankertaspengering
Endosporabakteriakan
Nampak
berwarnahijau,
III.2.3 Ujibiokimia
sedangkanbagianvegetatifnyaakan Nampak berwarnamerah.
a. FermentasiKarbohidrat
Menyiapkan isolate bakteridan medium Nutient broth dengangulagulayakniglukosa, fruktosa, sukrosa, danlaktosa.
Menjentikkanisloatbakteridenganosepadatabung
medium dantabungdurhamdengan pH 7,2
Menginkubasipadasuhu
37C
dankemudianmengamatinya

selama

yang

berisi

14

jam

Positifapabilawarna medium berubahmenjadiwarnakuning (asam)

da nada gelembung, negative apabila medium tetap (merah)
b. Reduksinitrat
dantidakadagelembung
Menyiapkan isolate bakteridan medium Nitratcair

Menginokulasiisloatbakterikedalam
nitratcairkemudianmenginkubasi 48 jam

medium

Menetesi isolate bakteridalamtabungdenganasamsulfanilatdan nepthylaminesebanyak 1-2 tetessambilmengocoknya

Mengamati, apabilaberwarnamerahberartimengandungnitrit
c. Pembentukanindol
Menginokulasiisloatbakterikedalam
kemudianmenginkubasi 48 jam

medium

nutrient

broth

Menetesi
isolate
bakteridalamtabungdenganreagenkovacsindolsebanyak
1-2
tetessambilmengocoknya
Mengamati,
apabilaterbentukwarnamerahpadalapisanatasdanmembentukseperti
d. Hidrolisapati
Menginokulasiisloatbakterikedalam medium pati agar dalamcawan
petri yang telahdibagimenjadi 2 kuadran yang 1 kuadransebagai
control kemudianmenginkubasi 48 jam

Menetesi isolate bakteriiodiumsebanyak 3-4 tetes (medium

tertutupolehiodium)

Mengamati,
apabilapositifterdapatzonabeningjika
tidakterbentukzonabening

negative

e. Ujikatalase (ReduksiHidrogenPeroksida)
Menginokulasiisloatbakterikedalam
medium
danmenginkubasipadasuhu 37C selama 24 jam
Menyiapkankacabendalalumenetesisebanyak
H2O23%

NA

teteslarutan

Mengambilsatu
isolate
H2O23% padakacabenda

bakteridanmeletakannyadiatastetesan

Mengamatijikaterjadireduksi
makaakanterlihatadanyagelembungf. PembentukanAmonia

gelembung

Menginokulasiisloatbakterikedalam
medium
danmenginkubasipadasuhu 37C selama 48 jam

H2O2,
yang

NB

Meletakkanlakmusmerahpadamasingmasingmuluttabungsehinggakertaslakmusterjepitolehtutupkapas

Meletakkantabungtersebutpada air mendidihselama 5 menit

Mengamatiperubahanwarnalakmus,
bilakertaslakmusmenjadibirumenunjukkanadanyaamoniak
g. UjiHidrolisa protein
Menginokulasibiakanbakteripada medium Skim Milk Agar (SMA)
padacawan petri yang dibagimenjadi 2 kuadran

Menginkubasiselama
48
danmengamatinyaapabilapositifakanterbentukzonabeningdan
negative tidakterbentukzonabening

jam

h. Perbandingansuhu
Menginokulasibiakanbakteripada medium NA dan NB kemasingmasing 3 tabung yang memilikiperbedaansuhuyaitudengansushu
2C, 37C, 60C
Menginkubasiselama 24 jam danmengamatinya

IV.

HASIL PENGAMATAN

Uji

Kelompok 1,2

Bakteri
Kelompok
3,4

Kelompok
5,6

Pewarnaan

Safranin : merah

Safranin:

Safranin:

(basil)

merah

merah

M : biru (basil)

(basil)
Mb: biru

(basil)
Mb: biru

(+)warnaungu

(basil)
(-)warnam

(basil)
(-)warnamer

(basil)

erah

ah (basil)

(basil )
Transpara

Transparan

sederhana

gram

Endospora
Negatif

n
Morfologimakro
Tepi

2C: Echinulate
37C: Filiform

2C: 37C:

2C: 37C:

Effuse

echinulate

Filamenta

Warna

60C: 2C: putih

37C: kuning

ous
60C: 2C: 37C:

60C: 2C: 37C: putih

60C: -

putih
60C: -

60C: -

Merah, sedikit

Merah

Kuning

Ujibiokimia
Fermentasika
rbohidrat
a. Glukosa

b. Sukrosa

orange
Jingga
Merahsedikit
orange
Merahdengancincin

orange, ada
Kuning
Merah

gas
Kuningada
gas
Orange

c. Fruktosa

merahdiatas

Merah

coklat, ada
gas
Kuningkeme

d. Laktosa

V.
VI.

Uji KOH 3%
Ujikatalase

Ujinitrat

Ujiamonia

Hidrolisapati

rahan, ada
Berlendir (-)

Tidakberle

gas
Berlendir (-)

(+)adagelembung

ndir (+)
(+)

(+)

adagelemb

adagelembu

ung
(+)

ng
(+)

warnamer

warnamerah

ah
(-)

(+)

warnateta

warnabiru

pmerah
Ada

Tidakadazon

zonabenin

abening
Tidakadazon

(+) warnamerah

(+) warnabiru

Ada zonabening

Hidrolisa

Tidakadazonabenin

g
Ada

protein

zonabenin

abening

(-) warnahijau

g
(-)

(-)

warnahija

warnahijau

u
Bergerak,

Bergerak,

basil

basil

UjiIndol

Ujimotilitas

PEMBAHASAN
PENUTUP

Bergerak, basil