Proliferasi berlebih terkait sel otot polos arteri pulmonalis (PASMCs) diperkirakan

terlibat dalam pathogenesis dari hipertensi pulmoner (PH). Penggunaan media

terkondisikan stem sel mesenkimal (MSC-CM) sudah memberikan keuntungan pada
terapi dari PH, bagaimanapun, mekanisme pasti belum bisa dijelaskan. Penelitian
sekarang bertujuan untuk menentukan apakah MSC-CM dapat menekan proliferasi
berlebih dari PASMCs dalam PH melalui imunoregulasi. Dengan penggunaan MSCCM kepada tikus terinduksi PH monokrotalin (MCT), dan perkembangan sebuah
system kultur in vitro yang meliputi PASMCs dan sel T teraktivasi, efek terapi dari
MSC-CM pada PH, dan perubahan ekspresi dari factor yang berhubungan, termasuk
TNF-a, kalsineurin (CaN) dan factor nuclear dari sel T teraktivasi (NFAT), dinilai. Hasil
pewarnaan imunohistokimia mengindikasikan bahwa MSC-CM dapat menekan
produksi dari TNF-a dalam PH terinduksi MCT dan system kultur secara signifikan;
dan transkripsi balik-kuantitatif polimerasi reaksi rantai (PCR) menunjukkan
penurunan signifikan dari ekspresi CaN dan NFATc2 dalamPASMCs (P>0,01). Lebih
jauh lagi, MSC-CM dapat menekan aktivitas CaN dan pengaktifan NFATc2 secara
signifikan (P>0.01), sehingga menghambat proliferasi berlebih dari PASMCs.
Akhirnya, MSC-CM meningkatkan abnormalitas dalam hemodinamika dan histologi
dalam PH terinduksi MCT. Sebagai kesimpulan, penemuan dari penelitian ini
menunjukkan bahwa penggunaan dari MSC-CM memiliki kemampuan untuk
menekan proliferasi berlebih terkait inflamasi dari PASMCs dikarenakan kemampuan
imunosupresifnya dalam PH sehingga dapat menjadikannya langkah terapi yang
baik.

Perkenalan
Hipertensi pulmoner (PH) adalah jenis dari penyakit paru yang sangat merugikan
bagi kesehatan manusia, dan sering ditunjukkan dengan penambahan yang
progresif dari tekanan arteri pulmonal, sehingga akhirnya menghasilkan kelebihan
beban (overload) pada ventrikel kanan dan akhirnya terjadi gagal jantung (1).
Meskupun pengobatan sekarang, termasuk penggunaan obat target seperti
sildenafil, membantu dalam mengurangi gejala klinis dari PH, prognosis jangka
panjang masih tetap rendah (2). Sebagai contoh, angka harapan hidup 5 tahun dari
fibrosis kistik pada pasien dengan PH adalah 40.8% (3); bagaimanapun, bahkan
dengan transplantasi paru, rata-rata angka harapan hidupnya hanya 7 tahun (4).
Maka dari itu, ada kebutuhan penting untuk pengembangan dari agen terapi yang
lebih efektif untuk pengobatan PH.
Berbagai penelitian sudah menyajikan mekanisme PH, dengan menyoroti pada
pentingnya inflamasi dan jalur sinyal kalsineurin (CaN)/factor nuclear dari sel T
teraktivasi (NFAT) (5-13). Sudah ditetapkan dalam percobaan dengan hewan dan
dalam percobaan manusia bahwa sel inflamasi muncul dalam daerah arteri
pulmonalis yang berubah bentuk (5-8). Lebih jauh lagi, sudah diketahui bahwa
akumulasi perivaskuler dari sel inflamasi adalah penting untuk pengubahan bentuk
pembuluh darah pulmonal (9). Oleh sebab itu, peningkatan produksi dari sitokin
inflamasi memiliki kemampuan untuk digunakan sebagai marker prediktif dari
pasien yang hidup dengan PH (9). Masih menjadi suatu ketidakpastian apakah

inflamasi menginisiasi remodeling dari vaskuler pulmonal, atau apakah inflamasi

adalah suatu efek samping. Bagaimanapun, adalah jelas bahwa inflamasi dan
sitokin inflamasi terlibat dalam perkembangan dari PH. Dari beberapa sitokin
inflamasi, peran TNF-a dalam proliferasi berlebih dari PASMCs dan dalam
remodeling vaskuler adalah signifikan. TNF-a memiliki kemampuan untuk
menyebabkan influx kalsium dan meningkatkan proliferasi dari SMCs (10);
pengaktivasian dari CaN/jalur sinyal NFAT adalah langkah penting dalam proses ini
(11-13). Oleh sebab itu, kami menduka bahwa inflamasi yang dikaitkan dengan
proliferasi berlebih dari PASMCs adalah target terapi dalam pengobatan PH.
Stem sel mesenkimal (MSCs), sebagai sel primitive yang dapat berdiferensiasi
multilineage dan pembaruan diri sendiri, sudah diamati untuk menghambat
produksi dari sitokin inflamasi secara efektif (14), dan menampah PH terinduksi
hipoksia dalam model percobaan hewan (15). Bagaimanapun, ada banyak factor
etis yang menghalangi kemajuan/perkembagan dari MSCs ke dalam klinis.
Penelitian kami sebelumnya menunjukkan bahwa efek imunosupresif dari MSCs
terkait erat dengan kemampuannya untu mengkespresikan sitokin imunoregulator
dan menghasilkan prostaglandin E2 (PGE2) (14). Juga ditemukan bahwa media yang
dikondisikan dari MSCs dapat memproduksi efek sitoprotektif (15). Bagaimanapun,
mekanisme dimana media terkondisi MSC (CM) yang menekan inflamasi terkait
proliferasi berlebih dari PASMCs masih belum diketahui.
Pada studi ini, model tikus yang memiliki PH dan system kultur yang meliputi
PASMCs dan sel T teraktivasi digunakan untuk menilai kemampuan MSC-CM untuk
menekan proliferasi berlebih dari PASMCs. Factor yang berhubungan, termasuk level
ekspresi dari TNF-a dalam model tikus dan system kultur, serta level ekspresi dan
aktivasi dari CaN/NFAT dalam PASMCs, juga dievaluasi, dalam rangka untuk lebih
mengerti mekanisme dimana MSC-CM mengakibatkan proliferasi berlebih pada
PASMCs dalam PH.

Hasil
(paragraph 4)
Penggunaan MSC-CM menghasilkan peningkatan dari hemodinamik abnormal. RVSP
berkurang menjadi 313.38 mmHg (Gbr. 2A) dan MAoP meningkat menjadi
112.9714.26 mmHg (Gbr. 2B) dalam terapi MSC-CM; nilai-nilai ini secara signifikan
berbeda dibandingkan degnan grup model (P<0.05). Sebagai tambahan, hipertrofi
medial dari arteriol musculus pulmonalis meningkat (Gbr. 2C), dan WT secara
signifikan
menurun
(13.281.78%)
dibandingkan
dengan
grup
model
(34.123.59%; P<0.01; Gbr. 2C).
MSC-CM mengurangi level ekspresi protein dari TNF-a dalam jaringan paru.
Dibandingkan dengan grup control (Gbr. 3A), pewarnaan imunohistokimia
menunjukkan bahwa kebanyakan sel positif untuk TNF-a di dalam jaringan paru 21
hari setelah injeksi dari MCT dalam grup model (Gbr. 3B). mengikuti penggunaan
MSC-CM, jumlah dari positif sel utnuk TNF-a berkurang (Gbr. 3C), dan rata-rata OD

secara signifikan berkurang dari 0.230.07 dalam grup model ke 0.170.06 dalam
grup terapi MSC-CM (P<0.01; Gbr. 3D).
MSC-CM menekan produksi dari TNF-a dan proliferasi dari PASMCs dalam system
kultur. Setelah 3 hari kultur, lebel TNF-a dalam supernatant dari system kultur
dianalisa dengan menggunakan ELISA. Hasilnya menunjukkan bahwa level TNF-a
yang tinggi (762.5142.35 pg/ml) diproduksi oleh sel T atas stimulasi dengan ConA
(Gbr. 1A). bagaimanapun, dalam keberadaan MSC-CM, produksi dari TNF-a secara
signifikan dihambat (218.2519.33 pg/ml; P<0.01; Gbr. 4A). Sebagai tambahan,
proliferasi dari PASMCs, yang dinilai menggunakan penilaian MTS, menunjukkan
bahwa profilefari dari PASMCs secara signifikan meningkat ketika kultur dengan sel
T terstimulasi ConA, dibandingkan dengan kultur PASMCs saja (0.940.05 vs
0.730.06; P<0.01; Gbr 4B). Lebih jauh lagi, kemampuan dari sel T dalam
meningkatkan proliferasi dari PASMCs secara signifikan dihambat dengan terapi
MSC-CM (0.780.07; PO<0.01; Gbr. 4B). MSC-CM menurunkan regulasi ekspresi CaN
dan NFATc2. CaN dan NFATc2 adalah factor pengatur yang penting dari proliferasi
SMC, sehingga, level ekspresi dari keduanya dihitung dengan transkripsi balik PCR
kuantitatif (11). Hasilnya menunjukkan bahwa setelah 3 hari kultur dengan sel T
terstimulasi ConA, level ekspresi dari CaN dan NFATc2 dalam PASMCs secara
signifikan meningkat dibandingkan dengan ekspresi dari PASMCs saja. Lebih lagi,
MSC-CM dapat mengurangi tingkat ekspresi dari CaN dan NFATc2 (P<0.01) yang
meningkat dengan efek peningkatan dari sel T teraktivasi (Gbr. 4C dan D).
MSC-CM menekan aktivitas CaN dan aktivasi dari NFATc2 pada PASMCs. Dalam
system kultur, diamati bahwa aktivitas CaN intraseluler meningkat drastis pada
PASMCs yang dikultur 3 hari dengan ConA-terstimulasi sel T, dibandingkan dengan
PASMCs yang dikultur sendiri (0.590.06 vs 0.320.04 U/mgprot; P<0.01; Gbr. 4E).
Kemudian, kebanyakan dari NFATc2 ditranslokasi pada nucleus, yang
mengindikasikan aktivasi dari NFATc2 (Gbr. 4G). Mengikuti penambahan dari MSCCM, aktivitas intraseluler CaN dari PASMCs berkurang drastic (0.370.06 U/mgprot;
P<0.01; Gbr. 4E). ketika PASMCs dikultur secara independen, ekspresi dari NFATc2
terlokalisir predominan di sitoplasma (Gbr. 4F). Akhirnya, penambahan dari MSC-CM
juga berakibat pada penekanan aktivasi dari NFATc2 (Gbr. 4H)