KROMATOGRAFI

Kromatografi adalah proses di mana komponen dari suatu campuran

dipisahkan oleh perbedaan distribusi antara fase gerak (mobile) dan fase statis .
komponen dengan distribusi yang lebih besar

bertahan dalam fase statis dan

bergerak dalam sistem yang lebih lambat. Awalnya teknik ini dideskripsikan oleh
Mikhail Tsweet pada tahun 1903 dengan mensyaratkan pemisahan pigmen tanaman
menjadi pita-pita berwarna pada kalsium karbonat. Istilah kromatografi, berasal dari
chroma dan graphein (Yunani untuk "warna" dan "menulis"), dan istilah ini terus
digunakan meskipun sebagian pemisahan tidak melibatkan berwarnai komponen.

Planar dan kolom adalah dua bentuk dasar kromatografi. Dalam

kromatografi planar, yang fase statis

dilapisi pada

selembar kertas

(kromatografi kertas) atau terikat untuk permukaan padat kromatografi lapis

tipis (TLC : thin layer chromatography ). Untuk kromatografi kertas, fase
statis

adalah lapisan air atau pelarut polar dilapisi serat kertas. Dalam

kromatograpi lapis tipis , lapisan tipis dilapisi material

seperti silika gel

secara merata di atas piring kaca atau plastik atau lapisan aluminium.
Lapisan tipis terdiri partikel-partikel dengan diameter kecil (4,5 m), teknik ini
dikenal sebagai kinerja tinggi kromatografi lapis tipis (HPTLC:

high-

performance thin-layer chromatography).

Pada kolom kromatografi, fase statis bisa silika murni atau polimer,
atau mungkin dilapisi, atau terikat secara kimia, sebagai partikel dukungan.
Fase statis dapat dikemas ke dalam tabung, atau mungkin dilapisi pada
permukaan tabung. Kolom kromatografi meliputi kromatografi gas (GC) dan
kromatografi cair (LC), klasifikasi tersebut tergantung pada fase begerak
yaitu fase cair atau gas. Instrument ini digunakan untuk membentuk gas
atau cairan yang dipisahkan disebut gas atau liquid chromatograph. Ketika
fase statis pada liquid chromatography

terdiri atas partikel berdiameter

kecil, teknik ini dikenal sebagai kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC). Ketika
sebuah gas atau liquid kromatografi

terhubung ke massa spektrometer,

dikombinasikan atau "ditulis dgn tanda penghubung" teknik adalah gas

kromatografi-mass

spectrometry

(GC-MS)

dan

cair

kromatografi-mass

spectrometry (LC-MS).
Dalam analitis gas chromatography dan liquid chromatography , fase
gerak,

atau

eluen,

keluar

dari

kolom

dan

melewati

detektor

yang

menghasilkan sinyal elektronik yang menghasilkan berbagai fungsi dari (1)

waktu, (2) jarak, atau (3) volume. tampilan grafis yang dihasilkan
kromatogram.
waktu retensi atau volume adalah interval atau volume yang
diperlukan untuk zat terlarut untuk melewati dari injektor, melalui kolom,
dan detector. Data yang diperlihatkan pada kromatogram digunakan untuk
membantu mengidentifikasi dan mengukur zat terlarut. Karena eluting zat
terlarut ditampilkan secara grafis sebagai rangkaian puncak, dan sering
disebut sebagai kromatografi puncak. puncak ini dijelaskan dalam hal
puncak (1) lebar, (2) tinggi, dan (3) daerah. Pada planar kromatografi , yang
dipisahkan zona terdeteksi oleh warna-warna alami divisualisasikan melalui
modifikasi kimia yang menghasilkan berwarna "Spot" atau "band," yang
digunakan untuk mengidentifikasi.
Separation Mechanisms

pemisahan kromatografi diklasifikasikan oleh mekanisme kimia atau

mekanisme fisik yang digunakan untuk memisahkan zat terlarut.

Komponen :
1. Doxepin
2. Desipramine
3. Imipramine
4. Nortriptyline
5. Amitriptyline

These include (1) ion-exchange, (2) adsorption, (3) partition, (4) affinity, and (5) sizeexclusion mechanisms. Predominantly, clinical applications use chromatographic separations
based on ion-exchange and partition mechanisms.

Ion-Exchange

pertukaran ion pada kromatografi bergantung pada pertukaran ion

antara kelompok ditentukan pada ikatan

pada fase stasioner dan ion

muatan yang berlawanan dalam fase gerak. Tergantung pada biaya dari fase
diam, komponen mengikat kolom mungkin kation (bermuatan positif) atau
anion (bermuatan negatif). Pertukaran kation pada fase padat berisi kovalen
yang terikat, bermuatan negatif kelompok fungsional. Contohnya termasuk
kelompok asam kuat, seperti ion sulfonat, atau lemah kelompok asam,
seperti karboksil atau karboksimetil. Pertukaran anion fase padat memiliki
amina kuartener sangat dasar, seperti kelompok triethylaminoethyl, atau
lemah kelompok dasar, seperti aminoethyl (AE) dan diethylaminoethyl

(DEAE) kelompok. Pemisahan dilakukan dalam kondisi di mana analit

dibebankan dan mengikat ke fase diam pertukaran ion. Zat terlarut dielusi
dengan larutan yang mengandung ion lawan bersaing, seperti natrium untuk
pertukaran kation dan klorida untuk pertukaran anion, dan, dalam beberapa
kasus, dengan penyesuaian pH untuk mengurangi biaya ion terikat atau
permukaan pertukaran ion. faktor penting dalam kinerja kromatografi
pertukaran ion meliputi (1) jenis fase diam gugus ionik, (2) kerapatan
muatan, (3) matriks fase diam, (4) jenis dan konsentrasi ion di fase gerak,
dan (5) pH fase gerak. Banyak fase stasioner menunjukkan campuran retensi
modus dengan kombinasi pertukaran ion dan serap mengikat. Sebagai
contoh, resin pertukaran ion digunakan untuk analisis asam amino yang
mampu memisahkan asam amino dengan hampir muatan yang sama karena
interaksi serap variabel asam amino yang berbeda dengan fase diam.
Beberapa media ekstraksi fase padat dirancang untuk memiliki campuran
retensi

hidrofobik-ion-exchange,

menawarkan

peningkatan

selektivitas

terhadap ekstraksi media yang dirancang terutama untuk hidrofobik atau

ekstraksi pertukaran ion.
pertukaran ion dalam kromatografi memiliki sejumlah klinis aplikasi,
termasuk analisis asam amino dan hemoglobin. Hal ini juga digunakan untuk
menganalisis

ion

anorganik

kecil

dan

organic

ion

dengan

deteksi

konduktivitas, teknik yang disebut ion kromatografi. pemurnian air adalah

persiapan

penting

aplikasi

kromatografi

pertukaran

ion

terdiri

dari

menggunakan campuran-resin dengan kedua kation dan penukar anion. Ion

dikeluarkan oleh pertukaran ion hidrogen untuk lainnya kation dan ion
hidroksil untuk anion lainnya. Ion hydrogen dan ion hidroksil mengungsi
akibat ion garam membentuk air.
Adsorption

Dasar pemisahan dalam kromatografi adsorpsi adalah perbedaan

antara adsorpsi dan desorpsi zat terlarut di permukaan partikel padat.

elektrostatik, ikatan hidrogen, dan dispersif (van der Waals) interaksi adalah
kekuatan fisik yang mengontrol jenis kromatografi. Molekul Sebagai pelarut
bersaing untuk mengikat ke fase statis, kekuatan mengikat

fase statis

tergantung pada sifat-sifat fase diam dan fase gerak. Secara umum, untuk
fase diam polar, elusi melacak polaritas komponen dalam campuran: kurang
yang polar mengelusi pertama, diikuti oleh zat yang polaritasnya meningkat .
Dalam kromatografi gas ,ini digunakan untuk memisahkan berat
molekul rendah senyawa seperti metil, etil, alkohol isopropil dari senyawa
yang biasanya gas pada suhu kamar. Hal tersebut

menggunakan partikel

dukungan, seperti "saringan molekul," alumina, dan kopolimer stirenadivinilbenzena. Pada kromatografi liquid , tiga jenis adsorben umumnya
digunakan: (1) nonpolar, (2) asam polar, dan (3) dasar polar. adsorben
nonpolar termasuk arang dan polystyrene-divinilbenzena. asam utama polar
adsorben adalah silika gel, yang silanol permukaan (SiOH) kelompok yang
menyerap zat dasar. Alumina adalah dasar utama

adsorben untuk

mempertahankan zat asam. Florisil juga memiliki kegunaan absorben.

interaksi

hidrofilik

chromatography)

kromatografi

cair

(HILIC:

Hydrophilic

interaction

liquid

adalah jenis kromatografi adsorpsi yang digunakan untuk

memisahkan senyawa yang sangat polar yang membentuk ikatan hidrogen

dengan fase diam memiliki surface. Relatif polar Contoh fase stasioner
digunakan untuk HILIC termasuk (1) silika dimodifikasi, (2) silika dengan
zwiterionik berikat kelompok, (3) senyawa-kaya hidroksil, dan (4) amida-kaya
senyawa. Awal mengikat zat terlarut pada fase diam dilakukan dalam pelarut
yang

relatif

hidrofobik,

dan

elusi

adalah

dicapai

dengan

pelarut

meningkatkan polaritas. Keterbatasan HILIC untuk penggunaan laboratorium

klinis adalah bahwa cairan biologis yang sangat polar dan termasuk sejumlah
besar garam yang juga berinteraksi dengan fasa diam polar. Oleh karena itu,
spesimen mungkin perlu diekstraksi atau dimodifikasi dengan penambahan
pelarut

yang

kurang

polar

seperti

asetonitril

untuk

mempromosikan

mengikat ke fase diam. Bunga tumbuh dalam penerapan HILIC sebagai

teknik pemisahan terkait dengan spektrometri massa, tetapi kebanyakan

pemisahan di laboratorium klinis telah mengandalkan fase terbalik atau
pertukaran ion perpisahan.