PETUNJUK PRAKTIKUM

Kimia Instrumen
Oleh:
Imelda Fajriati, M.Si.

JURUSAN KIMIA
FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UIN SUNAN KALIJAGA

Kata Pengantar
Alhamdulillah, segala puji bagi Allah yang telah
memberikan barakahNya sehingga kami dapat menyelesaikan
penyusunan buku petunjuk bagi pelaksanaan Praktikum Kimia
Instrumen edisi 2015. Petunjuk Praktikum ini berisi cara-cara
analisis senyawa kimia. Diharapkan, melalui pengamatan secara
langsung di laboratorium, mahasiswa akan lebih memahami mata
kuliah Kimia Instrumen.
Petunjuk praktikum ini dibuat dan disesuaikan dengan
kondisi laboratorium Kimia UIN Sunan Kalijaga Yogyakarta dan
diharapkan materinya semakin disempurnakan pada setiap
tahunnya, untuk itu kritik dan saran dari mahasiswa maupun para
dosen sangat kami harapkan demi kesempurnaan petunjuk
praktikum ini.
Pada kesempatan kali ini, tak lupa pula penyusun
mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada:
1. Dekan Fakultas Sains dan Teknologi UIN Sunan Kalijaga
Yogyakarta, yang telah mendanai pembuatan buku petunjuk
praktikum ini.
2. Jurusan Kimia UIN Sunan Kalijaga Yogyakarta, yang telah
memberikan fasilitas sehingga buku petunjuk praktikum ini
dapat terselesaikan.
Semoga buku petunjuk praktikum Kimia Instrumen ini
dapat bermanfaat dan digunakan sebagaimana mestinya.

ii

Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

Daftar Isi
Kata Pengantar.................................................................................................................... ii
Daftar Isi ............................................................................................................................... iii
Tata Tertib Praktikum ......................................................................................................v
PERCOBAAN 1 Penentuan Amonia Dalam Air ...................................................... 1
A. Tujuan Percobaan ..................................................................................................... 1
B. Dasar Teori................................................................................................................... 1
C. Alat dan Bahan............................................................................................................ 2
D. Cara Kerja ..................................................................................................................... 3
E. Daftar Pustaka ............................................................................................................ 4
PERCOBAAN 2 Analisis Dua Komponen Tanpa Pemisahan ............................ 5
A. Tujuan Percobaan ..................................................................................................... 5
B. Dasar Teori................................................................................................................... 5
C. Alat dan Bahan............................................................................................................ 6
D. Cara Kerja ..................................................................................................................... 6
E. Daftar Pustaka ............................................................................................................ 7
PERCOBAAN 3 Penentuan Kadar Timbal (Pb) dengan Spektroskopi
Serapan Atom ...................................................................................................................... 9
A. Tujuan Percobaan ..................................................................................................... 9
B. Dasar Teori................................................................................................................... 9
C. Alat dan Bahan.......................................................................................................... 10
D. Cara Kerja ................................................................................................................... 10
E. Daftar Pustaka .......................................................................................................... 11
PERCOBAAN 4 Penentuan Asam Amino dengan HPLC .................................. 13
A. Tujuan Percobaan ................................................................................................... 13
B. Dasar Teori................................................................................................................. 13
C. Tugas ............................................................................................................................ 13
D. Daftar Pustaka .......................................................................................................... 13
PERCOBAAN 5 Penentuan Anion dan Kation dalam Air Laut dengan
Elektroda Ion Selektif .................................................................................................... 15
A. Tujuan Percobaan ................................................................................................... 15
Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

iii

B. Dasar Teori ............................................................................................................................................. 15

C. Alat dan Bahan ...................................................................................................................................... 15
D. Cara Kerja ............................................................................................................................................... 16
E. Daftar Pustaka ...................................................................................................................................... 16
PERCOBAAN 6 Analisis Alkohol dengan Kromatografi Gas ....................................................... 17
A. Tujuan ...................................................................................................................................................... 17
B. Dasar Teori ............................................................................................................................................. 17
C. Alat dan Bahan ...................................................................................................................................... 18
D. Cara Kerja ............................................................................................................................................... 18
E. Daftar Pustaka ...................................................................................................................................... 19

iv

Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

Tata Tertib Praktikum

1. Praktikan harus sudah datang 10 menit sebelum praktikum
dimulai.
2. Selama praktikum berlangsung, praktikan harus mengenakan
pakaian yang bebas, rapi, sopan, bersepatu dan mengenakan
jas laboratorium berwarna putih. Bagi yang putri, masukkan
ujung jilbab ke dalam jas laboratorium.
3. Tidak diperkenankan makan, minum, merokok dan bersenda
gurau di laboratorium selama praktikum berlangsung.
4. Setiap acara praktikum harus dibuat laporan sementara yang
diperiksakan dan ditandatangani oleh asisen pembimbing.
5. Laporan resmi praktikum harus dibuat dan diserahkan kepada
asisten pembimbing sebelum acara praktikum berikutnya
dimulai. Apabila belum menyerahkan laporan resmi, maka
praktikan tidak diperkenankan melanjutkan acara praktikum
berikutnya.
6. Setiap praktikan wajib mengisi daftar hadir sebelum dan
sesudah praktikum. Kehadiran praktikum 100 % dari
keseluruhan pertemuan. Apabila praktikan berhalangan hadir,
diwajibkan memberitahu atau mohon ijin kepada asisten
pembimbing dengan surat pernyataan resmi dan wajib
mengganti (INHAL) di hari yang lain.
7. Apabila praktikan tidak mengikuti praktikum selama 3 kali
berturut-turut, maka praktikan tidak diperkenankan
melanjutkan praktikum pada semester tersebut.
8. Selama melakukan praktikum, praktikan akan dikelompokkan
menjadi kelompok-kelompok kecil yang akan ditentukan
kemudian.
9. Setiap kelompok kecil, diharuskan membawa lap tangan, lap
meja, pipet, sikat tabung dan sabun pada setiap kali praktikum.
10. Setiap kelompok kecil, akan diberi peminjaman alat-alat yang
sudah disediakan dalam lemari alat.
Sebelum alat-alat
digunakan, periksa dan pastikan alat-alat dalam keadaan baik
dan utuh.
11. Sebelum dan sesudah praktikum, alat yang digunakan harus
dalam keadaan bersih, utuh dan disimpan kembali ke lemari.
Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

Apabila ada alat yang rusak, segera lapor kepada petugas. Kerusakan alat setelah
praktikum berlangsung menjadi tanggung jawab kelompok kecil.
12. Praktikan wajib menjaga kebersihan laboratorium.
13. Sebelum meninggalkan laboratorium, meja kerja harus bersih, kursi disimpan di
atas meja, dan ruangan harus bersih dari sampah.
14. Sistem evaluasi terdiri dari :
a. Penilaian selama berlangsungnya praktikum, yang dibagi menjadi:
Nilai pre test ( 25 %)
Nilai praktikum ( 25 %)
Nilai laporan ( 25 %)
b. Penilaian akhir, dari hasil responsi praktikum ( 25 %)
15. Bentuk dan pola laporan resmi adalah:
Sampul muka
Daftar isi
Judul percobaan
Tujuan percobaan
Dasar teori
Cara kerja (disajikan dalam bentuk diagram atau gambar)
Pengamatan
Perhitungan dan Pembahasan
Kesimpulan
Jawaban evaluasi
Daftar Pustaka
(Laporan ditulis tangan pada kertas HVS ukuran A4)
16. Hal-hal yang belum tercantum dalam tata tertib ini, akan diatur berdasarkan
kebijaksanaan asisten.

vi

Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

PERCOBAAN 1
Penentuan Amonia Dalam Air
A. Tujuan Percobaan
Untuk menentukan kandungan amonia dalam air secara spektrofotometri
sinar tampak
B. Dasar Teori
Amonia adalah salah satu senyawa kimia yang dapat menurunkan
kualitas suatu perairan. Senyawa ini biasanya dihasilkan dari industri yang
menggunakan bahan organik sebagai bahan bakunya. Kelebihan amonia
dalam system perairan akan menimbulkan pencemaran , mulai dari
timbulnya bau busuk sampai pada tingginya kadar Biological Oxygen
Demand (BOD) maupun Chemical Oxygen Demand (COD). Kerusakan di
perairan ini tak lepas dari ulah manusia di bumi, padahal secara nyata di
dalam Al-Quran Allah telah mengisyaratkan bahwa kerusakan yang terjadi
di alam ini sebagian besar diakibatkan oleh manusia seperti dijelaskan
dalam QS. Ar-Rum:41.
telah tampak kerusakan di darat dan di laut disebabkan
karena perbuatan tangan manusia, supaya Allah merasakan kepada
mereka sebahagian dari (akibat) perbuatan mereka, agar mereka
kembali ke jalan yang benar
Jika kandungan kedua parameter tersebut melampaui batas yang
diperbolehkan, maka gejala yang paling mudah diamati adalah matinya
organisme perairan.
Amonia dalam konsentrasi yang relatif tinggi dapat ditentukan
dengan cara titrasi asidimetri, tetapi pada konsentrasi yang lebih rendah
dan dengan semakin banyaknya penggangu, metode ini menjadi kurang
akurat. Amonia di dalam air mempunyai sifat-sifat yang mirip dengan ion
logam, yaitu mudah bereaksi dengan ligan membentuk senyawa kompleks.
Namun hal ini tidak berlaku bagi amonia, karena senyawa ini relatif sulit
untuk dikomplekskan secara langsung dengan suatu ligan. Oleh karena itu,
untuk menentukan amonia secara spektrofotometri sinar tampak maka
dapat dilakukan metode penentuan secara tidak langsung, yaitu salah
satunya dengan metode indofenol.
Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

Penentuan amonia dalam sampel secara tidak langsung dengan metode

indofenol didasarkan pada reaksi antara amonia yang ada dalam sampel dengan
hipoklorida dan fenol. Tahapan reaksi yang terjadi penentuan amonia secara tidak
langsung adalah: Mula-mula amonia yang ada dalam sampel akan dioksidasi oleh ion
hipoklorida menjadi suatu amina klorida, selanjutnya dalam suasana basa dengan
adanya katalis natrium nitroprussida, amina klorida ini akan bereaksi dengan fenol
yang telah terdeprotonisasi menghasilkan suatu senyawa intermediet (reaksi tahap 2).
Pada akhirnya senyawa intermediet ini akan bereaksi lagi dengan kelebihan fenol dalam
larutan membentuk spesies berwarna biru sehingga disebut Indophenol Blue. Spesies
Indophenol Blue inilah yang ditentukan dalam analisis.
Dari persamaan di atas terlihat bahwa 1 mol NH3 akan sebanding dengan 1 mol
indofenol biru. Namun demikian, sensitifitas penentuan dengan spektrometri ini sangat
dipengaruhi oleh keberhasilan reaksi-reaksi yang terjadi dalam membentuk larutan
produk yang berwarna, karena senyawa berwarna inilah yang akan dianalisis dengan
spektofotometer sinar tampak.

C. Alat dan Bahan

1. Alat:
a. Spektronik 20D
b. Gelas kimia 50, 100, 250 mL
c. Gelas arloji
d. Pipet tetes
e. Labu takar 100 mL
f. Neraca analitis
g. Bola hisap
h. Pipet ukur 10 mL
2. Bahan:
a. Etanol 95 %
b. Fenol. Dilarutkan 20 g fenol dalam 200 ml etanol
c. Larutan Natrium nitroprussida. Dilarutkan 1 g natrium nitroprussida dalam 200
ml air dan simpan dalam botol gelas yang gelap.
d. Natrium sitrat (padatan)
e. NaOH (padatan)
f. Larutan NaOCl 1,5 M (yang ada dalam perdagangan).
g. Larutan (NH4)Cl. Dibuat larutan amonium stok dengan melarutkan 0,132 g
padatan (NH4)2SO4 ke dalam 50 ml air bebas amonia dengan labu takar100 ml.
Ditambahkan 1 ml kloroform untuk penstabil dan diencerkan sampai tanda.
Disimpan dalam lemari es.
h. Sampel air sungai yang sudah disaring

Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

D. Cara Kerja
1. Pembuatan Pereaksi
a. Pereaksi alkali. Dilarutkan 20 g natrium sitrat dan 1 g NaOH dalam 100 ml air
suling.
b. Larutan oksidator. Dicampurkan 100 ml pereaksi alkali (1) dan 50 ml larutan
hipoklorida
c. Larutan standar. Diambil 2,5 ml larutan stok amonium ke dalam labu takar 250
ml dan diencerkan dengan air sampai tanda sehingga diperoleh konsentrasi 200
mmol/liter. Larutan ini dipakai untuk seluruh prosedur penentuan.
2. Pembuatan larutan blanko
Ke dalam labu takar 50 ml, ditambahkan 3 ml larutan fenol dan kocok sampai
sempurna. Selanjutnya ditambahkan 2 ml natrium nitroprussida dan 5 ml larutan
oksidator, diaduk sampai homogen, dan diencerkan dengan air sampai tanda. Bagian
atas labu takar ditutup dan dibiarkan dalam suhu kamar kira-kira 1 jam untuk
memaksimalkan pembentukan warna. Absorbansi larutan tersebut dimati dengan
spektrofotometer pada daerah panjang gelombang 550-720 nm.
3. Penentuan panjang gelombang maksimum larutan indofenol
Ke dalam labu takar 50 ml, diambil 5 ml larutan standar 200 mmol/l dan
ditambahakan 3 ml larutan fenol, dikocok sampai sempurna. Selanjutnya ditambahakan
2 ml natrium nitroprussida dan 5 ml larutan oksidator, diaduk sampai homogen, dan
diencerkan dengan air sampai tanda. Bagian atas labu takar ditutup dan dibiarkan
dalam suhu kamar kira-kira 1 jam untuk memaksimalkan pembentukan warna.
Absorbansi larutan tersebut dimati dengan spektrofotometer pada daerah panjang
gelombang 550-720 nm. Grafik dibuat antara panjang gelombang maksimum ( max) Vs
absorbansi (A).
4. Pembuatan Kurva Kalibrasi
Ke dalam 7 buah labu takar 50 ml, dipipet berturut-turut 0,0 ; 1,0 ; 2,0 ; 4,0 ; 6,0 ;
8,0 ; dan 10,0 ml larutan standar 200 mmol/l, ditambahkan masing-masing 3 ml larutan
fenol dan dikocok sampai sempurna. Kemudian ke dalam tiap-tiap labu ditambahkan 2
ml natrium nitroprussida dan 5 ml larutan oksidator, diaduk sampai homogen dan
diencerkan tiap-tiap larutan dengan air sampai tanda sehingga diperoleh larutan
dengan konsentrasi amonia berturut-turut 0, 4, 8, 16, 24, 32, dan 40 mmol/l. Tutup labu
takar dan biarkan larutan ada dalam suhu kamar selama kira-kira 24 jam. Absorbansi
tiap-tiap larutan diamati dengan spektrofotometer dan dibuat grafik antara konsentrasi
amonia larutan (mmol/l) Vs absorbansi (A).
5. Penentuan Kandungan Amonia dalam Sampel
Ke dalam labu takar 50 ml, dipipet 25 ml larutan sampel air sungai yang telah
disaring. Perlakukan seperti pada prosedur III dan diukur absorbansinya dengan
spektrofotometer. Konsentrasi ditentukan dalam tiap-tiap sampel air sungai dengan
Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

menggunakan persamaan linear yang diperoleh pada langkah III. Konsentrasi

ditentukan rata-rata dan simpangannya dari tiga pengukuran konsentrasi larutan
tersebut.
E. Daftar Pustaka
Day and Underwood., 1992, Kimia Analisis Kuantitatif, edisi kelima, Penerbit Erlangga,
Jakarta, hal: 189-191.
Khopkar. S.M., 1990, Konsep Dasar Kimia Analitik, cet 1., UI-Press, Jakarta, hal: 36-47.

Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

PERCOBAAN 2
Analisis Dua Komponen
Tanpa Pemisahan
A. Tujuan Percobaan
Untuk menentukan kadar KMnO4 dan K2Cr2O7 dalam campuran tanpa
pemisahan terlebih dahulu
B. Dasar Teori
Spektrofotometri merupakan metode analisis instrumen yang
relative cepat, mudah dan akurat. Prinsip dari spektrofotometri radiasi
adalah mengukur interaksi cahaya dan materi pada berbagai panjang
gelombang radiasi elektromagnetik yang dikenakan pada bahan. Besar
serapan materi terhadap radiasi elektromagnetik sebanding dengan zat
yang ditentukan. Hasil interaksi cahaya/radiasi elektromagnetik dengan
materi diukur pada panjang gelombang maksimum untuk mendapatkan
hasil hasil yang optimal. Pada panjang gelombang maksimum, pengukuran
dapat lebih teliti dan akurat. Radiasi elektromagnetik berada di daerah
energi yang berbeda-beda, antara lain daerah UV, Vis dan IR. Apabila
larutan yang ditentukan berwarna, maka digunakan radiasi
elektromagnetik pada panjang gelombang daerah visible, karena pada
panjang gelombang tersebut akan terjadi penyerapan oleh spesies dalam
larutannya.
Sinar tampak merupakan gelombang elektromagnetik dengan
panjang gelombang 400 750 nm. Spektrum sinar tampak terdiri dari
spektrum-spektrum sinar monokromatis dan spektrum sinar inilah yang
digunakan untuk analisis zat tertentu dari sinar tampak dan meneruskan
warna komplementernya. Warna komplementer ini dapat diukur
absorbansinya dengan spektrofotometri sinar tampak.
Tabel 1. Spektrum sinar tampak dan warna komplementer
Panjang gelombang (nm) Warna
Warna komplementer
400 435
Violet (ungu)
Hijau kekuningan
435 480
Biru
Kuning
480 490
Biru kehijauan
jingga
490 500
Hijau kebiruan
Merah
500 560
Hijau
Ungu kemerahan
560 595
Hijau kekuningan
Ungu
595 610
Jingga
Biru kehijauan
610 680
Merah
Hijau kebiruan
680 - 700
Ungu kemerahan
Hijau
Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

Serapan molekul di dalam sinar daerah ultraungu dan tampak bergantung pada
struktur elektronik dari molekul. Penyerapan sejumlah energi, menghasilkan
percepatan dari elektron dalam orbital yang berenergi lebih tinggi didalam keadaan
tereksitasi, secara matematis dapat dirumuskan sebagai berikut:

E h h

dimana :
E = energi yang diserap didalam suatu transisi elektronikb dalam satu molekul (energi
foton)
h = tetapan Plank (6,624 x 10-34 J.det)
c = kecepatan cahaya (3 x 108 m.det-1)
v = frekuensi (det-1)
= panjang gelombang (nm)
C. Alat dan Bahan
Alat yang digunakan:
1. Seperangkat instrument UV-Vis single beam merk Hitachi
2. Labu takar 25 mL dan 50 mL
3. Pipet ukur 1 mL dan 10 mL
Bahan yang dibutuhkan:
1. Larutan KMnO4 1.10-2 M
2. Larutan K2Cr2O7 1.10-2 M
3. Larutan H2SO4 10-2 M
4. Akuades
D. Cara Kerja
1. Penentuan panjang gelombang maksimum larutan K2Cr2O7 dan KMnO4
a. Mengencerkan 0,25 mL K2Cr2O7 1.10-2 M dalam labu takar 25 mL dan 0,5 mL
KMnO4 1.10-2 M + H2SO4 10-2 M dalam labu takar 25 mL
b. Masing-masing sejumlah larutan dimasukkan dalam kuvet dan diukur serapan
panjang gelombang maksimum, dengan menggunakan akuades sebagai blanko
c. Pemilihan panjang gelombang maksimum K2Cr2O7 pada daerah 300 600 nm
d. Pemilihan panjang gelombang maksimum KMnO4 pada daerah 400 600 nm,
setelah terlebih dahulu menggunakan larutan blanko H2SO4 10-2 M

2. Penentuan absorptivitas molar larutan K2Cr2O7

a. Dibuat larutan standar dengan konsentrasi 0,25.10-4; 0,5.10-4; 1,0.10-4; 2,0.104-;
3,0.10-4 M dengan cara mengambil larutan K2Cr2O7 1.10-2 M sebanyak 0,125; 0,25;
0,5; 1,0; dan 1,5 mL, diencerkan dalam labu takar 50 mL.
b. Masing-masing larutan diukur absorbansinya pada panjang gelombang
maksimum K2Cr2O7 dan KMnO4
c. Dibuat grafik absorbansi versus konsetrasi pada panjang gelombang
Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

3. Penentuan absorptivitas molar larutan KMnO4

a. Dibuat larutan standar dengan konsentrasi 0,5.10-4; 1,0.10-4; 2,0.104-; 3,0.10-4 dan
4,0.10-4 M dengan cara mengambil larutan KMnO4 1.10-2 M sebanyak 0,25; 0,5;
1,0; 1,5 mL dan 2,0 mL, diencerkan dengan 0,01 M H2SO4 dalam labu takar 50 mL
b. Masing-masing larutan diukur absorbansinya pada panjang gelombang
maksimum K2Cr2O7 dan KMnO4
c. Dibuat grafik absorbansi versus konsetrasi pada panjang gelombang maksimum
4. Penentuan konsentrasi campuran larutan K2Cr2O7 dan KMnO4
a. Diasiapkan campuran larutan K2Cr2O7 dan KMnO4 dengan perbandingan 2 : 3,
dengan cara mengambil 4 mL K2Cr2O7 10-4 M dan 6 mL KMnO4 2.10-4 kemudian
dicampurkan.
b. Larutan diukur absorbansinga pada panjang gelombang maksimum K2Cr2O7 dan
KMnO4
E. Daftar Pustaka
Day and Underwood., 1992, Kimia Analisis Kuantitatif, edisi kelima, Penerbit
Erlangga, Jakarta, hal: 189-191.
Khopkar. S.M., 1990, Konsep Dasar Kimia Analitik, cet 1., UI-Press, Jakarta, hal: 36-47.

Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

PERCOBAAN 3
Penentuan Kadar
Timbal (Pb) dengan
Spektroskopi Serapan Atom
A. Tujuan Percobaan
Untuk menentukan kadar logam timbal (Pb) dalam air sungai dengan
spektroskopi serapan atom
B. Dasar Teori
Logam Pb dapat dengan mudah dan cepat ditentukan dengan
metode Spektroskopi Serapan Atom (AAS). AAS adalah metode analisis
yang didasarkan pada proses absorbsi energi radiasi/sinar oleh atom dari
unsur yang dianalisis. Proses absorbsi energi oleh atom dapat dituliskan
sebagai berikut: jika atom dalam keadaan dasar menyerap energi cahaya
dengan panjang gelombang () yang sesuai melintasi atom tersebut, maka
atom akan tereksitasi.
Jika jumlah atom yang menyerap semakin banyak, maka jumlah
energi yang diserap juga akan meningkat. Dengan mengukur jumlah sinar
yang diserap maka jumlah analit dapat ditentukan secara kuantitatif.
Secara matematik hubungan antara jumlah atom dengan jumlah sinar
yang diserap dapat dituliskan sesuai Hukum Bouguer-Lambert-Beer:
A = bC
dimana:
A = absorbansi = log

1
T

I1
I0

T=
,
I1 = intensitas sinar dating,
I0 = intensitas sinar yang diteruskan
C = konsentrasi unsur analit
Interferensi dalam AAS
AAS adalah teknik analisis yang spesifik dengan sedikit
interferensi atau gangguan. Interferensi yang sering ditemukan adalah
interferensi kimia, ionisasi, matriks, emisi, spektral, dan absorbsi
background. Tiga jenis interferensi pertama adalah berkaitan dengan
sample yang dianalisis, sementara 3 yang lain berhubungan dengan alat.
Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

C. Alat dan Bahan

1. Alat
a. Spektrofotometer Serapan Atom
b. Gelas 50 mL
c. Pipet tetes
d. Labu takar 5 mL dan 10 mL
e. Pipet volum 1 mL
f. Neraca analitis
g. Bola hisap
h. Pipet ukur 1 mL
2. Bahan
a. Larutan standar Pb (II)
b. Akuades
c. Larutan sampel air sungai
D. Cara Kerja
1. Pengukuran dengan AAS
Pengukuran Absorbansi dengan AAS dilakukan pada kondisi optimum (panjang
gelombang, arus lampu katoda Berongga, kecepatan alir gas pembakar, kecepatan alir
gas pembawa, tinggi burner, lebar celah/slit, dan lain-lain) untuk sampel di atas. Untuk
mengatasi kesulitan dalam membuat kurva standar, akibat komposisi matriks sampel
yang sangat kompleks, maka metode analisis dapat menggunakan metode adisi standar.
Dengan metode standar, analisis dapat berlangsung lebih cepat dan lebih akurat.
2. Pembuatan Kurva Standar (kalibrasi) metode adisi standar
a. Disiapkan 5 labu takar 25 mL, kemudian masing-masing labu dimasukkan sampel
(Vx) sebanyak 1 mL
b. Ke dalam masing-masing labu dimasukkan larutan standar (Cs) Pb 25 ppm
sebanyak 0 ml; 5 ml; 10; 15 dan 20 mL
c. Larutan campuran selanjutnya diencerkan dengan akuades sampai tanda batas,
dan di ukur abdorbansinya menggunakan AAS
d. Data absorbansi di plot dalam grafik sebagai fungsi Volume Standar (Vs) versus
Absorbansi

10

3. Penentuan kadar Pb dari kurva adisi standar

Data absorbansi yang diperolah dari AAS dibuat persamaan garis lurus Y = AVs + B
Substitusi harga A dan B, maka:
Cx (ppm) = B . Cs
A . Vx
Berdasarkan substitusi dari persamaan di atas, maka dapat ditentukan kadar sampe Pb
(Cx) dalam sampel air sungai

Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

E. Daftar Pustaka
Day and Underwood., 1992, Kimia Analisis Kuantitatif, edisi kelima, Penerbit Erlangga,
Jakarta, hal: 189-191.
Khopkar. S.M., 1990, Konsep Dasar Kimia Analitik, cet 1., UI-Press, Jakarta, hal: 36-47.

11

Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

12

Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

PERCOBAAN 4
Penentuan Asam Amino
dengan HPLC
A. Tujuan Percobaan
Untuk menentukan asam amino penyusun protein bahan dengan HPLC
B. Dasar Teori
High Performance Liquid Chromatography (HPLC) atau yang lebih
dikenal dengan Kromatografi Gas Kinerja Tinggi (KCKT) adalah salah satu
jenis kromatografi partisi cair-cair. Dibandingkan dengan kromatografi
adsorbi, maka HPLC mempunyai daya ulang yang lebih baik, koefisien
distribusinya konstan dalam jangka konsentrasi yang agak luas, sehingga
dapat menghasilkan puncak yang simetris dan lebih tajam.
Kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) merupakan metode
pemisahan berdasarkan partisi analit dalam fasa diam cair dan fasa gerak
cair bertekanan tinggi yang dihubungkan dengan sistem pendeteksi analit
(Kartasasmita, 1997). KCKT mempunyai keunggulan dibandingkan
kromatografi gas yaitu bahwa KCKT dapat digunakan untuk menganalisis
senyawa non volatil atau senyawa termolabil, karena itu KCKT
dikembangkan sebagai metode untuk analisis asam amino.
C. Tugas
Tentukan dan hitung parameter dalam GC di bawah ini:
1. Daya Pisah, Rs (Resolusi) dari 2 senyawa
2. Faktor kapasitas, k`
3. Faktor selektivitas,
4. Efisiensi kolom, H
D. Daftar Pustaka
Day and Underwood., 1992, Kimia Analisis Kuantitatif, edisi kelima,
Penerbit Erlangga, Jakarta, hal: 189-191.
Khopkar. S.M., 1990, Konsep Dasar Kimia Analitik, cet 1., UI-Press, Jakarta,
hal: 36-47
13

Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

14

Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

PERCOBAAN 5
Penentuan Anion dan Kation
dalam Air Laut dengan Elektroda
Ion Selektif
A. Tujuan Percobaan
Untuk menentukan ion Na+ dan Cl- dalam air laut dengan elektroda ion
selektif
B. Dasar Teori
Sebelum digunakan dalam pengukuran suatu sample, elektroda
ion selektif harus dikalibrasi dahulu dengan menggunakan larutan
standar ion primer. Rentang konsentrasi yang digunakanbiasanya dari
10-5 10-1 M.
Secara teoritis, response elektroda akan mengikuti persamaan
Nernst berikut:
2,303RT
E = Eio +
log ai
ziF
Dari persamaan ini terlihat bahwa response elektroda (E)
merupakan fungsi linear dari log aktivitas ion primer dengan slope 2,303
RT/ zi F, yang pada 25 oC besarnya slope = 59,16/ zi sedangkan Eio adalah
intersep kurva yang harga potensial standar.
Dalam percobaan ini akan dilakukan kalibrasi terhadap 2
elektroda ion komersial untuk Na+ dan Cl-, sebelum diguanakan untuk
pengukuran konsentrasi ion Na+ dan Cl- dalam sampel air laut.
Pengkalibrasian ini bertujuan untuk mengetahui nilai slope dari kurva
kalibrasi untuk dibandingkan dengan nilai slope teoritis (menurut
persamaan Nernst) serta mengetahui daerah linear dari kurva kalibrasi.
Dua parameter ini penting untuk menguji kualitas suatu elektroda ion.
C. Alat dan Bahan
Alat:
a. pH meter atau ionmeter
b. Elektroda referens, elektroda ion Na+ dan elektroda Clc. Beberapa alat gelas
d. Stopwatch

Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

15

Bahan
a. Larutan NaCl 10-5, 10-4, 10-3, 10-2 dan 10-1 M
b. akuades
D. Cara Kerja
1. Pasang elektroda referens dan elektroda ion Na+ dalam pH meter dan pH meter pada
mode mV. Kemudian hidupkan alat 10 menit sebelum pemakaian.
2. Siapkan larutan standar NaCl 10-5, 10-4, 10-3, 10-2 dan 10-1 M
3. Ukur response dalam larutan yang akan diuji (dalam mV) sambil diaduk dengan
pengaduk magnet. Tunggu pengukuran sampai stabil (kira-kira 2 menit). Untuk
setiap penggantian larutan uji, cuci elektroda dengan akuades dan kemudian
elektroda direndam dulu dalam air selama kira-kira 2 menit sambil diaduk dengan
pengaduk magnet.
4. Ulangi percobaan dengan elektroda ion Cl- menggunakan larutan uji dan prosedur
yang sama.
5. Buat grafik EMF (mV) vs log [Na+] dan EMF (mV) vs log [Cl-]. Tentukan daerah
linear dari kurva kalibrasi dan hitung slope dari kurva tersebut. Bandingkan dengan
slope teoritis.
6. Ukur response terhadap Na+ dan Cl- dalam air laut masing-masing dengan
menggunakan elektroda ion Na+ dan Cl-. Hitung konsentrasi Na+ dan Cl- berdasarkan
kurva kalibrasi yang diperoleh sebelumnya.
E. Daftar Pustaka
Day and Underwood., 1992, Kimia Analisis Kuantitatif, edisi kelima, Penerbit
Erlangga, Jakarta, hal: 189-191.
Khopkar. S.M., 1990, Konsep Dasar Kimia Analitik, cet 1., UI-Press, Jakarta, hal: 36-47.

16

Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

PERCOBAAN 6
Analisis Alkohol dengan
Kromatografi Gas
A. Tujuan
Untuk menentukan kandungan etanol dalam sampel minuman dengan
kromatografi gas menggunakan standar internal.
B. Dasar Teori
Alkohol memiliki dua arti, yang pertama yaitu minuman
beralkohol atau minuman keras sedangkan yang kedua adalah etanol
yaitu nama suatu bahan kimia yang dapat berfungsi sebagai pelarut
organik, memiliki gugus fungsional hidroksi OH dengan rumus R-OH.
Alkohol merupakan suatu zat kimia yang penggunaannya sangat
dekat dengan kehidupan sehari-hari, tidak hanya dalam bidang farmasi,
kosmetika, tetapi juga dalam hal makanan dan minuman. Informasi yang
banyak beredar, banyak yang secara lugas menyebutkan bahwa status
hukum alcohol adalah haram. Hal ini berawal dari banyaknya orang yang
menasosiasikan minuman beralkohol (khamr) dengan alcohol saja
sehingga yang diharamkan berkembang menjadi alcohol (etanol).
Mengenai khamr memang telah jelas haram hukumnya
sebagaimana ditetapkan secara berurutan yaitu dalam QS. Al-Maidah 90
yang artinya:
Hai orang-orang yang beriman, sesungguhnya (meminum)
khamr, berjudi, (berkorban untuk) berhala, mengundi nasib dengan
panah adalah perbuatan keji termasuk perbuatan syaitan. Maka
jauhilah perbuatan-perbuatan itu agar kamu mendapat
keberuntungan.
Sedangkan mengenai alcohol sendiri, pada kenyataannya tidak
ada yang sanggup meminum alcohol murni karena akan menyebabkan
kematian sehingga apabila alcohol dianggap sama dengan khamr maka
dampaknya akan sangat luas sekali.
Dalam analisis dengan kromatografi gas secara kuantitatif
didasarkan pada prinsip waktu retensi. Setiap senyawa akan memberikan
waktu retensi tertentu untuk masing-masing jenis kolom yang digunakan
dan pada kondisi kromatografi gas yang tertentu pula. Pada
kromatogram, akan terlihat puncak yang membesar dengan waktu retensi
yang sama antara zat standar dengan komponen yang diduga.
Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

17

Analisis kuantitatif berdasarkan pada perbandingan luas area atau tinggi

puncak komponen terhadap luas area total atau tinggi total semua komponen dalam
satu kromatogram. Perbandingan tersebut dinyatakan dengan persen yang berbanding
langsung dengan persen komponen di dalam cuplikan. Untuk perhitungan yang lebih
teliti digunakan zat standar yang telah diketahui beratnya. Persen komponen dihitung
berdasarkan ratio luas area komponen terhadap area zat standar. Salah satu sifat yang
terpenting dari zat standar adalah strukturnya harus mirip dengan komponen yang
diselidiki. Di dalam analisis etanol dalam bir/anggur.
C. Alat dan Bahan
1. Alat
a. Seperangkat instrumen GC-MS Agilent
b. Gelas kimia 100, 250, 50
c. Gelas arloji
d. Pipet tetes
e. Labu takar
f. Pipet volum
g. Neraca analitis
h. Bola hisap
i. Pipet ukur
2. Bahan
a. Alkohol absolut
b. Akuades
c. 1-propanol
d. sample : bir/anggur.
D. Cara Kerja
1. Pembuatan Kurva Standar (kalibrasi)
Digunakan alkohol absolut dan aquades untuk membuat 7 (tujuh) macam
konsentrasi (% volume) alkohol standar sebesar: 2, 4, 6, 8, dan 10 % (v/v). Dalam
masing-masing larutan ditambahkan1- propanol sehingga konsentrasi propanol dalam
larutan menjadi 10 % (1 ml 1- propanol dalam 10 ml campuran etanol-air).
Dari larutan ini diambil 1,0 uL dan diinjeksikan pada kromatografi gas. Dari
kromatogram yang diperoleh dibuat kurva standar antara rasio tinggi puncak etanol
terhadap 1-propanol lawan persen etanol.

18

2. Menentukan kadar etanol dalam bir/anggur.

Ke dalam cuplikan yang tersedia ditambahkan 1-propanol seperti pada cara 1.
(konsentrasi 10 % ). Diambil sebanyak 1,0 uL dengan syringe dan diinjeksikan pada
kromatografi gas. Dari kromatogram yang diperoleh, dientukan ratio luas puncak
etanol terhadap 1-propanol. Persen etanol dapat dihitung mengunakan kurva standar.

Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |

E. Daftar Pustaka
Day and Underwood., 1992, Kimia Analisis Kuantitatif, edisi kelima, Penerbit
Erlangga, Jakarta, hal: 189-191.
Khopkar. S.M., 1990, Konsep Dasar Kimia Analitik, cet 1., UI-Press, Jakarta,
hal:
36-47.

19

Petunjuk Praktikum Kimia Instrumen |