MUNTAHAN

Ini kadang-kadang digunakan dalam balap greyhound, dan diinduksi dengan natrium karbonat.

Pendekatan Analitik
Obat bius umumnya diberikan pada atau dekat dengan dosis terapeutik, dan hasil ini
dalam konsentrasi relatif rendah dalam cairan biologis. Biasanya tidak ada bukti mengenai ada
atau tidaknya obat telah diberikan atau apa jenis obat yang mungkin. Berbagai obat dipergunakan
dalam perlakuan pada manusia atau pada hewan juga ditemukan. Selanjutnya, kelas-kelas
tertentu dari obat individu yang biasanya tidak terhubung dengan keracunan akut pada manusia
sering disalahgunakan pada olahraga manusia dan hewan. Dengan demikian, prosedur skrining
harus sensitif serta memiliki cakupan yang luas dan mereka berbeda secara rinci dari skema
analitik lainnya. Namun, keuntungan kimiawan olahraga dari yang memeriksa bahan yang relatif
konstan, biasanya dalam kondisi cukup segar. Dia memiliki gambaran jelas dari sampel yang
normal dibandingkan kimiawan forensik atau rumah sakit yang mungkin memeriksa varietas
yang luas dari material pada berbagai tingkatan dekomposisi.
Metabolit
Umumnya prosedur skrining mengandalkan deteksi obat dalam keadaan tidak berubah
daripada metabolit, meskipun faktanya banyak konsentrasi obat lebih rendah daripada
metabolitnya. Alasannya adalah bahwa sebagian besar selalu lipofilik dan segera diekstrak dari
cairan tubuh. Solubilisasi air dari obat adalah proses penting dalam detoksifikasi mereka, yang
paling penting reaksi tunggal menjadi konjugasi metabolik. Dalam kasus-kasus di mana
metabolit tidak terkonjugasi diidentifikasi, metabolit itu sendiri yang aktif secara farmakologi
dan juga diesktrak seperti theophylline dan theobromin dari kafein serta oxyphenbutazone dari
phenylbutazone. Identifikasi dari metabolit yang sesuai seringkali berguna sebagai bukti
tambahan untuk mendukung identifikasi obat induk.
Sebagai tambahan, kehadiran metabolit dalam konsentrasi yang relatif tepat terhadap obat
induk mendukung kesimpulan bahwa obat telah diberikan. Sebaliknya, tidak adanya metabolit
yang diharapkan mungkin menjadi bukti kuat bahwa sampel telah terkontaminasi.

Kadang, obat induk tidak diekskresikan pada urin dalam konsentrasi yang terdeteksi, dan
pengetahuan dari jalur metabolisme dalam spesi khusus yang penting. Contoh dari ini adalah
identifikasi 5-estrane-3, 17-diol dalam urin kuda, atau 19-norandrosterone dan 19nortetiocholanolone dalam urine manusia, untuk membuktikan dari steroid anabolic nandrolone
telah diberikan. Beberapa obat terkenal diekskresikan pada urin hampir seluruhnya dalam
bentuk terkonjugasi sebagai, misalnya, apomorphine, fentanyl, nefopam, dan pentazocine pada
kuda. Ketika kehadiran obat ini diduga, hidrolisis sebelum ekstraksi pelarut sebagai penting.
Metabolisme obat pada kuda telah ditinjau (M. S. Moss, 1977).
Obat dapat digunakan baik untuk meningkatkan atau mengganggu kinerja atletik,
meskipun dalam olahraga manusia kategori obat yang terakhir tidak mungkin digunakan. Dalam
olahraga seperti balap greyhound dan balap kuda, walaupun menurunkan kecepatan hewan dapat
menjadi latihan yang menguntungkan. Oleh karena itu, obat penenang yang tidak biasa dalam
acara ini dan dapat terjadi pada ekstrak kelompok asam, netral, dan dasar. Dengan demikian,
pada sampel kuda dan anjing, adalah penting bahwa semua kelompok tertutup, dan ini akan
mencakup steroid barbiturat, non-steroid anti-inflamasi, diuretik, dan xanthines.
Hal ini jelas bahwa tidak ada skema analitis tunggal akan cukup untuk menutupi begitu
banyak jenis senyawa. Untuk alasan ini, dua jenis analisis telah datang untuk diakui: pertama,
skema umum yang mencakup sebagian besar obat asam dan dasar dan kedua, target analisis
untuk obat khusus atau kelompok. Analisis target relatif mahal karena mereka menutupi sejumlah
kecil senyawa. Analisis tersebut, oleh karena itu, umumnya dilakukan untuk memenuhi
permintaan khusus, atau untuk menutupi kasus-kasus di mana penyalahgunaan diyakini ada.
PELARUT UNTUK EKSTRAKSI
Pilihan pelarut dibatasi oleh berbagai obat yang akan dibahas, dan pelarut yang relatif
berpolar harus digunakan. Pilihannya, oleh karena itu, terletak di antara hidrokarbon eter dan
diklorinasi. Karena pentingnya methylxanthines pada kuda dan doping greyhound, salah satu
ekstraksi sebaiknya menggunakan kloroform. Jika kloroform digunakan untuk kedua ekstrak
kelompok dasar dan asam, ekstraksi kelompok dasar harus dilakukan terlebih dahulu untuk
menghindari hilangnya garam kloroform-larut (misalnya metadon hidroklorida) dalam kloroform
digunakan untuk mengekstrak asam. Ketika sampel adalah urin, metabolit barbiturat

hydroxylated tidak akan diekstraksi dengan proses ini. Namun, barbiturat orangtua harus hadir
dalam konsentrasi yang cukup untuk dideteksi dengan kromatografi gas.
Pertimbangan di atas tercermin dalam desain prosedur skrining. Teknik skrining ekstraksi
dan obat pelarut umum yang rinci di bawah Toksikologi Rumah Sakit dan Skrining
Penyalahgunaan Narkoba (h.3) tapi penuh detail prosedur yang sesuai yang dijelaskan di sini
untuk mempertimbangkan persyaratan khusus tertentu yang khas untuk skrining untuk agen
doping. Metode yang digunakan untuk gas skrining kromatorafik untuk obat dasar berlaku untuk
semua spesies. Meskipun prosedur ekstraksi yang berbeda digunakan untuk sampel manusia.
Prosedur tambahan yang diperlukan untuk sampel non-manusia dijelaskan secara terpisah.
KROMATOGRAFI GAS
Prosedur kromatografi gas disebut di bawah ini akan mendeteksi berbagai senyawa dalam
sampel urin, pada konsentrasi urutan 1 g/ml. Mereka bergantung pada fakta bahwa semua
senyawa dari bunga berisi minimal satu atom nitrogen dan akan menghasilkan sinyal di detektor
ionisasi nyala alkali. Metode ekstraksi dan selektivitas detektor memastikan gangguan minimal
dari senyawa lain yang tidak mengandung nitrogen, meskipun peliat tertentu yang mengandung
fosfor, seperti tributhylphosphate, dapat menghasilkan sinyal. Selain itu, senyawa yang
mengandung nitrogen lainnya yang tidak dilarang dalam olahraga manusia (misalnya
antihistamin) akan menghasilkan puncak yang mengganggu.
Identifikasi didasarkan pada indeks retensi; waktu retensi alternatif (relatif terhadap standar)
dapat digunakan. Rincian dari indeks retensi atau waktu retensi relatif senyawa dalam sistem
dijelaskan di bawah diberikan dalam indeks ke kromatografi gas data di Bagian 3.
Data diperoleh dengan menggunakan lebih dari satu fase diam jelas akan memberikan
identifikasi lebih pasti; penggunaan fase diam non-polar, semi-polar, dan polar yang dianjurkan.
Identitas suatu zat dapat dikonfirmasi menggunakan pembentukan turunan dan kromatografi gas
spektrometri massa, sebaiknya membandingkan data yang diperoleh dengan bahan referensi
otentik.

METODE

SKRINING

UNTUK

STlMULAN

DAN

ANALGESIK

NARKOTIKA

Pemeriksaan Urine Manusia

LAYAR A
Metode. Untuk 5 ml sampel dalam tabung sentrifugasi 10 ml ditambahkan 0,5 ml kalium
hidroksida, 3 gram natrium klorida, dan 2 ml eter yang baru disuling yang mengandung 10g/ml
diphenylamine seperti referensi standar. Campur secara menyeluruh selama 10 menit dalam
rotary mixer. Sentrifugasi, hilangkan sekitar 1 ml dari lapisan eter dan keringkan dengan 0,1
gram natriul sulfat anhidrat. Periksa 3L dari ekstrak dengan kromatografi gas menggunakan
10% Apiezon L dan 2% KOH pada 80 100 mesh Chromosorb W HP (Sistem GB, h. 193).
Sistem GA juga dapat digunakan.
Penggunaan natrium klorida untuk meningkatkan kekuatan ionic dari fase larutan, meningkatkan
ekstraksi ke dalam eter dari berbagai senyawa, meniadakan kebutuhan untuk penguapan pelarut.
Meskipun beberapa senyawa polar seperti ephedrine dapat segera diekstrak dalam prosedur ini,
yang terbaik adalah cocok untuk senyawa yang kurang polar.
LAYAR B
Ini mendeteksi obat yang lebih polar dan obat yang kurang mudah menguap serta metabolitnya,
misalnya morfin dan kodein glukoronida. Konjugat yang dipecah oleh hidrolisis asam klorida
sebelum ekstraksi. Sebuah antoxidant, seperti asam mercaptoacetic atau sistein, harus
ditambahkan asam untuk meminimalkan oksidasi senyawa sensitif selama hidrolisis.
Penambahan isopropil alkohol untuk mengekstrak pelarut, dan penyangga urin pada pH 9,2,
memungkinkan senyawa yang paling amfoterik untuk diekstrak.
Metode. Untuk 5 ml sampel dalam tabung sentrifugasi 10 ml tambahkan 0,5 ml campuran asam
klorida dan asam mercaptoacetic (9:1), sumbat tabung, panaskan pada 100o selama 30 menit,
dinginkan, dan tambahkan 0,85 ml 12M natrium hidroksida untuk menetralkan kelebihan asam;
tambahkan 2 gram dari campuran natrium bikarbonat dan kalium karbonat (3:2) untuk
menyesuaikan pH menjadi 9.2, dan ekstrak campuran dihidrolisis dengan 2 ml campuran eter
dan isopropil alkohol (9:1), keduanya baru suling dan mengandung 2,5 g/ml phenazine sebagai
standar acuan. Penyangga lebih lanjut 5 ml urin untuk pH 9,2 dan ekstrak dengan cara yang sama
seperti di atas tetapi hidrolisis dihilangkan. Menggabungkan dua ekstrak dan menguapkan

pelarut pada 35 di bawah vakum menggunakan rotary film evaporator. Untuk ekstrak obat
tambahkan 50 l etil asetat dan 50 l trifluoroasetat anhidrida, panaskan pada 65 selama 20
menit, dan lagi diuapkan di bawah vakum seperti di atas. Untuk residu tambahkan 0,5 ml
anhidrat etil asetat dan periksa 3 ml dengan kromatografi gas menggunakan 3% OV-17 pada 80100 jala Chromosorb W HP (Sistem GC, h. 193). Sistem GA (p. 192) juga dapat digunakan.
Pembentukan turunan trifluoroacetyl fenolik atau kelompok beralkohol meningkatkan volatilitas
senyawa tersebut. Pembentukan amida dari amina primer atau sekunder akan sering memberikan
informasi tambahan untuk membantu mengidentifikasi kehadiran senyawa.
Pemeriksaan Urine Kuda
Dua metode yang dijelaskan, satu menggunakan ekstraksi pelarut langsung, dan yang lainnya
ekstraksi padat-cair.
EKSTRAKSI PELARUT
Prosedur digambarkan di bawah ini.
Sesuaikan 100 ml urin untuk pH 9,5 dengan 2M natrium hidroksida, dan ekstrak dengan
kloroform pada volume yang sama oleh rotasi dalam corong pisah di sekitar 1 putaran per detik,
untuk menghindari pembentukan emulsi: pisahkan lapisan pelarut dengan menyaring melalui
kertas fase pemisahan, tambahkan satu tetes asam klorida dan manik-manik kaca sinter, dan
diuapkan sampai kering. Larutkan kembali residu dalam 10 ml 0,1 M asam klorida, pemanasan
pada air mendidih selama sekitar 1 menit, dan kemudian ekstrak dengan 25 ml eter untuk
menghasilkan Fraksi Netral.
Sesuaikan fasa larutan ke pH 9,5 dengan menambahkan 3 gram dari campuran boraks dan
sodium karbonat (20:1). Ekstrak dengan 20 ml kloroform, saring lapisan kloroform melalui
sebuah sumbat kapas, tambahkan 1 tetes asam klorida dan manik-manik kaca sinter untuk filtrat,
dan diuapkan sampai kering untuk menghasilkan Fraksi Dasar.
Sesuaikan 100 ml urin ke pH 4.0 dengan asam sulfat encer, ekstrak dengan 100 ml
kloroform, cuci lapisan pelarut dengan larutan natrium bikarbonat 5%, saring pelarut melalui
kertas fase pemisahan, dan diuapkan untuk menghasilkan Fraksi Asam. Jika salah satu furosemid
atau asam salisilat meragukan, atur pH lapisan natrium bikarbonat menjadi 4,0 dengan asam
sulfat encer, ekstrak dengan 25 ml eter, dan simpan ekstrak eter untuk analisis.

Skema untuk ekstraksi pelarut urin kuda

Sampel

Sesuaikan pada pH 9.5

Sesuaikan pada pH 4.0

Ekstrak dengan kloroform

Ekstrak dengan kloroform

kloroform

kloroform

Larutkan residu kedalam

0.1M asam hidroklorik

Ekstrak dengan bikarbonat

Ekstrak dengan eter

Lapisan aqueous
(pH 9.5)

Ekstrak dengan
kloroform
Fraksi dasar

Eter
Fraksi Netral

Kloroform Fraksi
Asam

Lapisan aqueous
(pH 4.0)

Ekstrak dengan eter

Eter
(Frusemide dan asam salisisilat)

EKSTRAKSI PADAT-CAIR
Prosedur alternatif menggunakan resin non-ionik Amberlite XAD-2 (lihat Lampiran
Reagen). Sesuaikan sampel urine ke pH 9,5 dengan 2M natrium hidroksida, tambahkan 6 gram
XAD-2 untuk setiap 100 ml urin, aduk campuran selama 10 sampai 15 menit, dan bersihkan urin.
Resin disuspensi kembali dalam 20 ml penyangga amonia (pH 9,5), transfer ke kolom, dan
pompa resin di bawah vakum untuk menghilangkan buffer dan untuk menarik udara melalui
resin; pengeringan parsial dari resin pada tahap ini mengurangi elusi berikutnya dari bahan yang
justru menutupi kehadiran obat. Cuci resin dengan lima porsi 5-ml dari campuran etil asetat dan
metilen klorida (1:1). Saring pelarut melalui kertas fase pemisahan, tambahkan setetes asam
klorida, dan uapkan sampai kering untuk menghasilkan Fraksi Dasar.
Tambahkan ke kolom sekitar 15 ml larutan asam asetat 10%, diamkan selama sekitar 5 menit.
pompa kering di bawah vakum, dan elusi dengan pelarut seperti dijelaskan di atas. Uapkan
pelarut pada air mendidih untuk menghasilkan Fraksi Asam.