PENGANTAR

Glukosa merupakan sumber energi utama untuk semua sel mamalia, dan itu adalah
sumber utama energi untuk otak. Sebuah pasokan konstan glukosa harus tersedia
dalam rangka untuk memastikan terhadap hipoglikemia dan efek berpotensi
bencana ini dapat memiliki pada sel-sel dari sistem saraf. terus-menerus konsumsi
diet kaya karbohidrat dapat memberikan glukosa, tapi lama

periode puasa, seperti dalam tidur atau olahraga berlarut-larut, bisa menempatkan
organisme di

risiko. Juga, menahan diri dari hiperglikemia, yang memiliki menetapkan sendiri
merusak konsekuensi, harus diberikan. Mekanisme yang rumit untuk menjaga
glukosa darah dalam kisaran yang relatif sempit telah berkembang untuk mencapai
tujuan ini. Ini melibatkan produksi glukosa oleh hati, dari

glikogenolisis dan glukoneogenesis, dan clearance perifer glukosa oleh jaringan

seperti otot rangka, jaringan adiposa, dan tempat tidur splanchnic, termasuk hati.
Bab ini berkaitan dengan peran homeostatis drama hati sebagai produsen /
konsumen, glukosa. metabolisme glukosa hepatik dimulai dan berakhir dengan
pergerakan glukosa ke dalam atau keluar dari hepatosit melalui satu

anggota keluarga transporter glukosa. transporter ini, GLUT2, adalah dibahas dalam
bab oleh Pessin & Bell (buku ini). hepatosit dapat juga menyimpan glukosa dalam
bentuk glikogen. Mekanisme hati

sintesis glikogen dan degradasi berada di luar lingkup bab ini. Kita membatasi
komentar kami dengan peraturan akut dan kronis dari gluconeogenesis atau
glikolisis hati , per se.

SIKLUS SUBSTRAT hati

Fakta bahwa hepatosit mengandung enzim mengendalikan laju khusus untuk

gluconeogenesis ([fosfoenolpiruvat carboxykinase (PEPCK), 1,6bisphosphatase
fruktosaFru-I, 6-P2ase), dan glukosa-6-fosfatase (Glu-6-Pase)] dan glikolisis [piruvat
kinase (PK), 6-phosphofructo I-kinase (6-PF-I-K), dan

glukokinase (GK)] membuat sistem kontrol sensitif mungkin. Bersepeda dari

substrat dan produk dari reaksi-reaksi yang berlawanan dapat diatur di tingkat dan
arah fluks bersih dengan perubahan efektor alosterik, oleh perubahan dalam
konsentrasi enzim yang terlibat dalam siklus, andlor oleh kovalen

modifikasi enzim ini (51, 99). Menurut pandangan ini, tiga sub siklus strategic, yang
masing-masing didorong oleh enzim bertindak direc tions berlawanan, menentukan
apakah hepatosit menghasilkan atau menggunakan glukosa (Gambar1).
Arah dan besarnya fluks jalur bersih melalui tiga ini siklus substrat tergantung pada
aktivitas relatif tujuh enzim Illustrated pada Gambar 1. Meskipun banyak enzim lain
yang terlibat dalam ini proses, mereka juga mengkatalisis reaksi kesetimbangan,
dan karena itu tidak mengendalikan laju, atau mereka mengkatalisis reaksi yang
tidak kuantitatif important.

Fluks melalui enzim siklus ini dimodulasi oleh jangka pendek (Detik ke menit) dan
jangka panjang (menit ke jam) mekanisme pengaturan (51, 99). Sebuah sumber
endogen glukosa diperlukan bila binatang

kelaparan atau makan diet rendah karbohidrat, atau mengalami latihan

berkepanjangan.

Kondisi ini mengakibatkan kadar plasma tinggi glukagon, glukokortikoid, dan

katekolamin yang, pada gilirannya, menyebabkan peningkatan aktivitas PEPCK,Fru-
l, 6-P2ase dan G-6-Pase dan penurunan koordinat PK, 6-PF-I-K dan GK (51, 99, 100).
Perubahan ini mendorong tiga siklus substrat di

arah glukoneogenesis. perubahan timbal balik dari kegiatan ini enzim juga terjadi
ketika hewan diberi makan diet kaya karbohidrat, particularly setelah cepat
berkepanjangan. Dalam situasi ini, konsentrasi insulin plasma meningkat, kadar
hormon kontra-regulasi menurun, dan glikolitik fluks dan sintesis glikogen
mendominasi. Efek jangka pendek dari glukagon, insulin, dan katekolamin pada
fluks substrat dimediasi melalui perubahan tingkat cAMP dengan perubahan seiring
dalam fosforilasi beberapa

enzim siklus substrat dan / atau oleh perubahan efektor alosterik (52, 99,100).
efektor ini bertindak atas sejumlah enzim, yaitu PK,6-PF- I-K, dan Fru-l, 6-P2ase. Efek
jangka panjang dari hormon pada ekspresi gen yang mengkode enzim siklus
substrat juga dimediasi oleh perubahan cAMP serta oleh mekanisme cAMP-
independen, termasuk tindakan insulin dan glukokortikoid (SO). Pada bagian berikut
kita

meringkas mekanisme molekuler dimana kegiatan terkoordinasi dari tujuh enzim

siklus substrat peraturan kunci, yang didirikan oleh interaksi ini beberapa hormon,
menentukan apakah hepatosit adalah konsumen atau produser glukosa.

PERATURAN JANGKA PENDEK DARI SUBSTRAT SIKLUS ENZIM KEGIATAN

Peraturan di Fru-6-PIFru-J, Siklus 6-P2

Meskipun tidak ada bukti untuk regulasi hormonal jangka pendek dari enzim Glu
siklus / Glu-6-P, ada regulasi jangka pendek yang kompleks dan penting dari yang
Fru-6-P / Fru-l, 6-P2 substrat siklus (l4, 51, 98-100). siklus terakhir ini adalah
perempatan penting untuk glikolitik / fluks gluconeogenic di hati. Fru-l, 6-P2, oleh
modulasi aktivitas kinase piruvat, mempengaruhi substrat bersepeda di pyruvatel
yang
siklus substrat PEP (13, 14, 98-100). Fru-l, tingkat 6-P2 dikendalikan oleh kegiatan
enzim gluconeogenic Fru-l, 6-P2ase dan oleh 6-PF-l-K, menentang enzim glikolitik.
Aktivitas enzim ini dan fluks bersih

melalui Fru-6-P / Fru siklus 1,6-P2 yang dipengaruhi oleh hormon dan diet Status
(11, 12, 62, 66, 133, 134). Misalnya, kelaparan dan glukagon baik menurunkan fluks
melalui 6-PF-I-K dengan menghambat enzim, sekaligus meningkatkan l fru, aktivitas
6-P2ase dan, ipso facto, laju glukoneogenesis. Kedua

enzim substrat untuk cAMP-dependent kinase protein, dan itu adalah pertama
berpikir bahwa ini adalah mekanisme dimana kegiatan ini diubah (7,15, 25, 26, 61,
101, 109, 116). Namun, in vitro fosforilasi oleh

cAMP-dependent protein kinase memiliki pengaruh yang kecil pada aktivitas ini
enzim (lihat Referensi 94 dan 98 untuk review). Selanjutnya, penghambatan 6-PF-I-K
aktivitas terlihat di ekstrak kasar hepatosit diinkubasi dengan glukagon menghilang
pada pemurnian parsial enzim (16). Dulu selanjutnya menunjukkan bahwa efektor
berat molekul rendah, Fru-2, 6-Pz, adalah terlibat dalam regulasi dari kedua 6-PF-I-K
dan fru l, 6-P2ase oleh cAMP (14,, 52, 92, 100).

Fru-2,6-P2 adalah aktivator alosterik ampuh 6-PF-I-K dan kompetitif inhibitor Fru-l, 6-
Pzase (14, 51, 52, 63, 92, 98-100). Pentingnya efek Fru-2,6-Pz pada dua enzim ini
vis-a-vis regulasi hati ..

glukoneogenesis ditegaskan oleh pengamatan bahwa efektor ini tunduk untuk

kedua regulasi gizi dan hormonal (14, 92, 93, 131). Ketika tingkat Fru-2,6-P2 rendah,
tingkat glukoneogenesis tinggi (kelaparan dan diabetes). Ketika tingkat Fru-2,6-P2
tinggi, tingkat glukoneogenesis adalah rendah (refeeding dan pemberian insulin).
Sintesis Fru-2,6-P2 melibatkan 6-PF-2-K reaksi (Fru-6-P + ATP -? 'Fru-2,6-P2 + ADP),
sedangkan yang degradasi dikatalisis oleh reaksi Fru-2,6-P2ase spesifik (Fru-2,6-P2 -
'?Fru-6-P + P). Sebuah enzim bifunctional unik, 6-PF-2-KlFru-2,6-P2ase,mengkatalisis
baik reaksi ini (14,28,32, 79, 95). Fosforilasi ini enzim dengan hasil protein kinase
cAMP-dependent penghambatan kinase yang dan aktivasi bisphosphatase,
sedangkan hasil defosforilasi di Perubahan berlawanan (99, 100). Perubahan ini
menjelaskan modulasi cepat Fru-2,6-P2 yang terjadi ketika l3-adrenergik agonis,
glukagon atau insulin, yang ditambahkan ke hepatosit terisolasi (14, 46, 93, 100).
Peningkatan Fru-2,6-P2 yang terjadi ketika a-adrenergik agonis ditambahkan ke
hepatosit diisolasi dari makan tikus bukan karena perubahan di negara bagian
fosforilasi enzim (14, 46), melainkan untuk glikogenolisis ditingkatkan dan
penyediaan lebih Fru-6-P untuk enzim 6-PF-2-K (55).Tikus hati 6-PF-2-KlFru-2,6-
P2ase adalah homodimer yang subunit (55 kd) adalah dibangun dari tiga domain:
(a) domain peraturan NHz-terminal (Resi iuran 1-32), yang berisi situs fosforilasi
cAMP-dependent (Ser32);(B) domain kinase (residu 33-249); dan (c) bisphosphatase
yang domain (residu 250--470) (4). Kinase dan bisphosphatase domain memiliki
telah diungkapkan secara terpisah dalam sistem ekspresi heterolog, dan mereka
domain katalitik independen (126, 128). Kinase dan bisphosphatase bagian dari
enzim bifunctional secara struktural mirip dengan glikolitik enzim 6-PF-I-K dan
fosfogliserat mutase, masing-masing (4). com

pemodelan puter-dibantu dari domain bisphosphatase C-terminal mengungkapkan

hidrofobik inti dan situs aktif residu konstelasi setara dengan yang ditemukan dalam
ragi phosphoglycerate mutase (4, 30, 100). Percobaan yang melibatkan situs
diarahkan mutagenesis dan analisis spesifisitas substrat mengkonfirmasi hypothesis
yang bahwa domain bifosfat secara struktural dan fungsional yang terkait dengan
phosphoglycerate keluarga mutase (125, 127). pola urutan berasal dari
penyelarasan struktural mutases dan bisphosphatases mengungkapkan signifi a
tidak bisa kesamaan dengan keluarga fosfatase asam (4, 100). Fru-2,6-P2ase dan
yang phosphoglycerate mutase / asam fosfatase semua mengkatalisis masing-
masing Reaksi melalui phosphohistidine a. intermediate (4, 100, 132). N-terminal
domain kinase, pada gilirannya, membentuk lipatan nukleotida-mengikat yang
analog dengan segmen 6-PF- 1-K, yang menunjukkan bahwa kedua 6-PF-I-K dan 6-
PF-2-K mengikat Fru-6-P dan ATP dengan geometri yang sama (4). Enzim
bifunctional adalah mungkin produk dari perpaduan gen yang melibatkan kinase
dan mutase yang / fosfatase unit katalitik (4, 100). Ada kemungkinan bahwa
wilayah regulasi, .dengan situs fosforilasi cAMP-dependent nya, ditambahkan
kemudian untuk memberikan mekanisme dimana enzim ini bertindak sebagai
sistem switching untuk memodulasi glikolitik / gluconeogenic fluks.

Siklik AMP-dependent kinase protein adalah satu-satunya protein kinase diketahui

mengkatalisis fosforilasi hati 6-PF-2-KlFru-2,6-P2ase, sementara defosforilasi enzim
dikatalisis terutama oleh fosfatase protein 2A (79, 89). Ini pada awalnya diyakini
bahwa modulasi fosforilasi yang keadaan enzim bifunctional dimediasi hanya
dengan perubahan sejauh fosforilasi cAMP-dependent, namun bukti terbaru
menunjukkan bahwa defosforilasi juga diatur. Insulin merangsang defosforilasi

6-PF-2-KlFru-2,6-P2ase dan PK dalam kondisi di mana kadar cAMP yang tidak

berubah (3). Postulation bahwa insulin mempromosikan aktivitas satu atau lebih
fosfatase konsisten dengan peningkatan kecil di fosfatase 2A

Kegiatan terlihat ketika insulin ditambahkan ke hepatosit terisolasi (40).

Peraturan di Piruvat / PEP Cycle Beberapa studi menunjukkan bahwa piruvat kinase
(PK) adalah situs penting Peraturan hormonal glukoneogenesis (51, 99). Beberapa
PEP didaur ulang untuk piruvat selama glukoneogenesis di hati perfusi dan
hepatosit terisolasi (42-44, 112), dan karbon fluks melalui PK dipengaruhi oleh
status gizi dan hormon (112-114). Glukagon dan cAMP sangat menghambat fluks
ini, sedangkan epinefrin hanya sedikit efektif (38, 96, 104, 113). Insulin mengurangi
penghambatan fluks dan aktivitas PK yang disebabkan oleh glukagon (6, 97,104).
Peraturan kompleks PK mungkin terkait dengan perannya sebagai glikolitik enzim.
Hati-jenis PK, enzim alosterik, menunjukkan kinetika sigmoidal berkenaan dengan
substrat, PEP. PK adalah allosterically diaktifkan oleh Fru-l, 6-P2 dan allosterically
dihambat oleh alanin dan A TP. Pada fisiologis con

centrations alanin, ATP, dan PEP, enzim akan benar-benar menghambat kecuali
yang diaktifkan oleh Fru-l, 6-P2 (41). Dengan demikian, peraturan Fru-6-PlFru-I, 6-P2
dan siklus piruvat / PEP dihubungkan oleh Fru-I, 6-P2 (14,98-100).

PK tikus hati dapat terfosforilasi in vitro oleh protein cAMP-dependent kinase (27,
36, 73). Fosforilasi meningkatkan jelas Km dari enzim untuk PEP, namun tidak
berpengaruh pada aktivitas di hadapan sebuah Concentration menjenuhkan
substrat atau Fru-l, 6-P2 (6, 27, 36, 73, 96, 110, 111). phosphory yang enzim lated
lebih mudah dihambat oleh alanin dan ATP daripada adalah enzim
nonphosphorylated, tetapi kurang mudah diaktifkan oleh Fru-l, 6-P2 dari adalah
enzim nonphosphorylated (27, 36, 73).

efektor alosterik dari PK mempengaruhi aktivitas dan juga memodulasi fosforilasi

enzim oleh cAMP-dependent protein kinase (29, 39, 73). Sebagai contoh, baik Fru-1,
-? P2 dan PEP menghambat laju fosforilasi oleh Camp- .protein kinase tergantung,
sedangkan alanin mengurangi penghambatan oleh physiological konsentrasi baik
Fru-1,6-P2 atau PEP. Jadi PK adalah substrat yang lebih baik untuk cAMP-dependent
protein kinase ketika enzim terhambat daripada ketika itu diaktifkan. Hati PK juga
dapat terfosforilasi in vitro oleh Ca2 + -calmodulin protein kinase tergantung pada
residu seryl sama dengan yang terfosforilasi oleh cAMP-dependent protein kinase.
Hal ini juga terfosforilasi pada threonyl sebuah

residu terletak lima residu COOH-terminal dari cAMP-dependent situs fosforilasi

(119, 123). Fosforilasi salah satu atau kedua situs hasil di afinitas menurun untuk
PEP dan penghambatan aktivitas enzim (119).

Efek dari fosforilasi cAMP-dependent pada PK juga telah diamati in vivo dan dalam
sistem sel hati yang terisolasi. Penambahan glucagon untuk hepatosit terisolasi
atau perfusi hati, atau administrasi in vivo, hasil peningkatan kadar fosfat dari PK
dan, bersamaan, penghambatan aktivitas enzim dan fluks
(6,13,38,42,45,57,72,110,111,124). Insulin menentang aksi glukagon pada PK
berdasarkan kemampuannya untuk menurunkan tingkat cAMP (13). Selain itu,
kemampuan glukagon untuk meningkatkan fosforilasi enzim dalam hepatosit
dimodulasi oleh Fru-1, 6-P2 atau alanine dengan cara yang konsisten dengan efek
mereka pada protein cAMP-dependent. fosforilasi kinase-dikatalisasi enzim in vitro
(13, 42). Caz + kalmodulin tergantung fosforilasi mungkin account untuk efek kecil
agonis a-adrenergik memiliki aktivitas PK dan fluks dalam hepatosit (8, 45,124).
Insulin juga menekan efek agonis a-adrenergik pada PK Kegiatan oleh mekanisme
cAMP-independent (13), mungkin dengan merangsang

defosforilasi enzim (3).

Mengkoordinasikan Peraturan di Fru 6-P / Fru 1,6-P2 dan Piruvat / Siklus PEP
Substrat Data substansial sekarang mendukung hipotesis bahwa efek jangka
pendek insulin, glukagon, dan adrenergik agen pada glikolisis dan glukoneogenesis
melibatkan modulasi PK oleh mekanisme fosforilasi dan dari enzim dari Fru-6-P
siklus / Fru-1,6-Pz melalui perubahan Fru-2,6-P2 (Gambar2). Dalam kondisi fisiologis,
namun, tingkat glukoneogenesis adalah dibatasi oleh reaksi di piruvat / siklus PEP
dan bukan oleh reaksi di Fru-6-P / Fru siklus 1,6-P2 karena tingkat sintesis glukosa
jauh lebih besar untuk substrat yang masuk jalur di tingkat triose fosfat daripada
untuk substrat seperti laktat dan alanin (37). Pentingnya modulasi tingkat Fru-2,6-
P2 untuk regulasi glukoneogenesis adalah bahwa ia menyediakan mekanisme
kontrol fru l, 6-P2 Sebagai contoh, glukagon menurunkan hati l fru, 6-P2, dan ini
menguatkan penghambatan PK oleh fosforilasi dan memberikan kontribusi untuk
peningkatan glukoneogenesis (99, 100). Sebaliknya, Fru-2,6-P2 juga bertindak
sebagai molekul sinyal penting untuk glikolisis di hati sejak glycoly-

fluks tic terjadi hanya ketika Fru-2,6-P2 ditinggikan (l00). Oleh karena itu, regulasi di
Fru-6-P / Fru-l, 6 -P2 dan piruvat / siklus substrat PEP dapat dianggap sebagai
dikoordinasikan oleh protein cAMP-dependent kinase-dikatalisasi fosforilasi PK dan
6-PF-2-KlFru-2,6-P2ase, dan dengan perubahan dari Fru l, 6-P2 dibawa oleh
perubahan di negara fosforilasi enzim bifunctional (Gambar 2).

PERATURAN Jangka PANJANG DARI substrat SIKLUS Enzim

KEGIATAN PADA Bagian berikut kitd Beroperasi Singkat merangkum Pengetahuan

sebelumnya Saat ini

MEKANISME (s) Dimana hormon mengendalikan Ekspresi gen Yang mengkode enzim
Peraturan kunci hearts glikolitik / Jalur gluconeogenic.

The GluIGlu-6-Pase Cycle

Glukokinase Penghasilan kena pajak memasuki hepatosit through transpor GLUT2

ter, Glukosa dikonversi Menjadi Glu-6-P Oleh glukokinase enzim (GK). GK Adalah
ANGGOTA Yang TIDAK biasa Dari heksokinase (HK) Keluarga. Its Km untuk review
Glukosa Adalah> 5 mM, sedangkan Km untuk review HK I-III (GK Adalah HK IV)
Bervariasi ANTARA 20 Dan 120/ -tM (LIHAT Referensi 75 Dan 139, untuk review
diperiksa). Di hepatosit, Glukosa pengerjaannya efisien diubah Menjadi Glu-6-P
KARENA GK, TIDAK seperti HK I-III, TIDAK tunduk penghambatan SAR Pembuatan
balik DENGAN Produk, Glu-6-P (139). Sejak GLUT2 beroperasi Oleh Difusi difasilitasi,
ITU Adalah activities GK, Yang MEMBUAT intraseluler

konsentrasi Glukosa Yang Sangat randah, Yang menentukan Glukosa izin Oleh
hepatosit.
Kegiatan GK TIDAK diubah Oleh modifikasi kovalen sehingga perubahan AKTIVITAS
Yang sepenuhnya KARENA perubahan protein Jangka Waktu. Transkripsi gen, Tingkat
mRNA GK, Dan AKTIVITAS GK menurun ketika glukagon plasmatinggi dan plasma
insulin rendah (mis puasa atau diabetes) (59, 76, 81, 91, 120,139). Refeeding diet
tinggi karbohidrat meningkatkan insulin plasma dan menurun glukagon plasma, dan
perubahan ini memiliki mendalam dan cepat efek pada transkripsi gen GK.
Peningkatan 20--30 kali lipat dalam transkripsi terjadi dalam 30-60 menit setelah
injeksi insulin ke dalam tikus diabetes, atau setelah penambahan untuk budaya
utama heptocytes (2, 58, 59, 76, 122). GK meningkat mRNA sesuai (58, 59), dan
peningkatan yang signifikan dari GK aktivitas dan fluks petugas dari glukosa ke Glu-
6-P berikut (9, 58, 59, 81,139). Efek penghambatan glukagon (atau cAMP, utusan
intraselular) pada gen GK transkripsi dominan atas efek stimulasi insulin karena
dalam sistem sel berbudaya, cAMP blok efek insulin sama sekali konsentrasi insulin
(58, 59). Efek hormon ini tidak tergantung pada kehadiran glukosa dalam medium
(58, 59). Gen GK di hati dan pankreas (3 sel menggunakan ekson pertama yang
berbeda

(75, 76). ekson yang berbeda, IH dan 1,8, dipisahkan oleh 12 kb pada tikus gen. Ini
berarti bahwa situs inisiasi transkripsi yang berbeda, promotor, dan elemen regulasi
fungsional dalam sel-sel dan bahwa alternative Hasil splicing di transkrip primer
yang berbeda (75). Meskipun beberapa keberhasilan

telah dicapai dalam pemetaan elemen promotor basal dari GK hati gen (83),
mencoba untuk mengidentifikasi elemen respon hormon telah unsukses, sebagian
karena kurangnya garis sel kultur jaringan di mana gen endogen (dan transgen gen)
diatur.

GLUKOSA-6-fosfatase Glu-6-Pase, multi-subunit mikrosomal enzyme, telah terbukti

tahan api untuk pemurnian dan cDNA kloning, oleh karena itu tidak ada yang
diketahui tentang regulasi mRNA atau gen, juga tidak ada bukti untuk modifikasi
kovalen dari enzim. glukosa hepatik

Kegiatan 6-fosfatase meningkat dengan kelaparan dan pada tikus diabetes (84,
85).Kondisi ini mendukung glikogenolisis yang, ketika digabungkan dengan
peningkatan Glu-6-Pase tingkat dan penurunan aktivitas GK (dan penurunan
glikolisis),Hasil di fluks karbon bersih terhadap glukosa dan ekspor dari hepatosit.Ini
tidak akan mengejutkan jika insulin mengurangi, dan cAMP meningkat, Glu-6-Pase
transkripsi gen, seperti terjadi dengan PEPCK dan fru l, 6-P2ase, yang lain enzim
gluconeogenic.

The Fru-6-PIFru- J, 6-P2 Cycle

6-PHOSPHOFRUCTO-I-kinase Seperti GK, hati aktivitas 6-PF-I-K adalah berkurang

puasa dan diabetes dan dikembalikan ke tingkat normal dengan refeeding dan
pemberian insulin, masing-masing (24). Hati 6-PF-I-K mRNA meningkat ketika hewan
berpuasa yang refed diet tinggi karbohidrat (47). Dibutyryl cAMP menumpulkan
induksi ini, sehingga efek penghambatan cAMP mungkin dominan dalam Peraturan
6-PF-I-K, seperti dalam kasus GK. MRNA juga meningkatkan di.

PERATURAN non SUBSTRAT ENZIM SIKLUS

hati hewan diabetes diobati dengan insulin (47), yang menunjukkan bahwa 6-PF-I-K
gen transkripsi, seperti yang PEPCK, GK, dan 6-PF-2-KlFru-2,6-P2ase, berada di
bawah kontrol timbal balik oleh insulin dan cAMP (50). Sebuah laporan baru-baru
menegaskan hipotesis ini (115).

jaringan manusia mengandung tiga isozim 6-PF-I-K, masing-masing dikodekan oleh

Sepa suatu gen tingkat (138). Gen otot manusia mengandung setidaknya dua
alternative promotor dan menghasilkan tiga mRNA yang berbeda (80). Mouse hati
6-PF-l gen K-baru ini telah diisolasi (115), tetapi ekspresinya belum belajar di sistem
sel berbudaya, akibatnya tidak ada yang diketahui tentang elemen respon hormon.
Struktur gen manusia belum dilaporkan.

Fruktosa 1,6-BISPHOSPHATASE fru l, 6-P2ase, yang mengkatalisis hy paradrolysis

Fru-l, 6 -P2 untuk Fru-6-P, yang disebabkan oleh diabetes dan kelaparan, seperti
pendamping enzim gluconeogenic nya. Sepuluh kali lipat peningkatan fru hati 1,6-
P2ase mRNA yang terjadi pada tikus diabetes berkurang ke tingkat basal oleh
insulin (34). Penambahan cAMP meningkatkan Fur-l, 6-P2ase mRNA di culter struktur
hepatosit (33), dan insulin menurun itu. Ada tiga consensus elemen cAMP regulasi
(CRE) di 5 '-flanking wilayah gen. Ekspresi dari Fru-l, 6-P2ase promotor-driven gen
luciferase pada sel ginjal diaktifkan oleh cAMP, yang konsisten dengan fungsi dari
satu atau lebih elemen ini (33). Hal ini menunjukkan bahwa cAMP sebagian
bertindak dengan meningkatkan laju transkripsi gen. Insulin menentang aksi cAMP
pada aktivitas gen reporter, yang menunjukkan bahwa insulin juga memodulasi gen
transkripsi (35). Meskipun regulasi gen ini belum pernah dipelajari secara ekstensif,
adalah wajar untuk memprediksi bahwa itu erat akan menyerupai
didokumentasikan untuk gen PEPCK.

6-PHOSPHOFRUCTO-2-kinase / fruktosa 2, 6-BISPHOSPHATASE The syntesis dan

degradasi Fru-2,6-P2 merupakan suatu subcycle penting dalam yang Fru-6-P / Fru
siklus 1,6-P2. Mengingat bahwa Fru-2,6-P2 berfungsi sebagai saklar antara
glukoneogenesis dan glikolisis, tidak mengherankan bahwa bifunc yang

enzim nasional tunduk pada pola yang kompleks regulasi. Jumlah enzim bifunctional
ini menurun selama kelaparan dan diabetes dan dipulihkan oleh refeeding diet
tinggi karbohidrat atau dengan pemberian insulin,masing-masing (19, 20, 102).
Peningkatan mRNA yang terjadi dengan refeeding atau pemberian insulin
berkorelasi dengan peningkatan jumlah enzim protein. Sebuah situasi yang lebih
kompleks terjadi pada kelaparan atau diabetes mana jumlah protein menurun tanpa
penurunan sesuai mRNA.
Hal ini mungkin mengindikasikan penurunan terjemahan mRNA dan / atau protein
ditingkatkan degradasi (19, 20, 102). Jumlah 6-PF-2-K / Fru-2, P2ase dan mRNA
serumpun yang berkurang di tikus adrenalectomized (77, 102). Administrasi
glukokortikoid untuk hewan seperti meningkatkan 6-PF-2-KlFru-2, 6-P2ase mRNA
dengan meningkatkan tingkat transkripsi gen. Olucocorticoids juga mencegah
hilangnya bifuncnasional enzim mRNA yang terjadi ketika hepatosit ditempatkan
menjadi primer budaya, yang menghasilkan Loa kali lipat induksi mRNA ini (67, 69).
Insulin atau deksametason menghasilkan peningkatan l0-20 kali lipat dari enzim
bifunctional mRNA di hepatoma tikus (FFO-2B) sel, dan efek ini benar-benar diblokir
dengan penambahan cAMP (10). Insulin dan deksametason peningkatan transkripsi
gen sebanding dengan efek mereka pada mRNA, sehingga perubahan dari mRNA
stabilitas yang tampaknya tidak terlibat. Efek insulin membutuhkan Kehadiran
glukosa, yang menunjukkan bahwa glukosa, atau metabolit glukosa, memodulasi
ekspresi gen, seperti halnya dengan piruvat kinase (lihat di bawah).

Sehingga ada kontrol yang kompleks dari 6-PF-2-KlFru-2, 6-P2ase ekspresi gen, yang
sangat jelas dalam fakta bahwa kedua insulin dan glukokortikoid,yang biasanya
antagonis metabolik, menginduksi enzim.

Setidaknya dua gen mengkodekan isozim dari tikus enzim bifunctional (70).

Salah satu gen ini, dinyatakan hanya dalam jaringan jantung, mengkodekan isozim
dengan NHR dan COOH-terminal daerah yang berbeda dari enzim hati (31, 65, 108,
117). Gen enzim bifunctional lainnya mengkodekan setidaknya dua isozim dalam
jaringan secara spesifik. splicing alternatif dari dua promotor

bertanggung jawab untuk dua isozim (19, 21, 22, 69). Otot-spesifik transkrip dimulai
pada promotor hulu dan diproses untuk mRNA oleh menggabungkan ekson la dan
splicing keluar ekson Ib (21). Sebuah tran hati-spesifik naskah dimulai pada
promotor lima kb hilir yang menggabungkan lb ekson Ekson 2-14 adalah umum
untuk kedua mRNA. Pola ini mengingatkan pada kasus dengan glukokinase (lihat di
atas). Karena ekspresi dari 6-PF-2-KlFru2,6-P2ase gen diatur oleh insulin,
glukokortikoid, dan cAMP, yang 5 'wilayah -flanking gen mungkin mengandung
hormon masing elemen respon. Baru-baru ini, elemen respon glukokortikoid
kompleks memiliki telah diterjemahkan ke intron pertama / gen otot rangka hati
(71).

The Piruvat / PEP Cycle

L-TYPE piruvat kinase Peraturan kronis PK hati (PK-L) oleh hormon dan faktor
makanan sangat kompleks. Kegiatan PK-L dan mRNA penurunan kelaparan dan
diabetes, dan mereka dikembalikan ke normal

refeeding diet tinggi karbohidrat atau dengan pemberian insulin (78, 105).
Sedangkan efek dari insulin adalah langsung dalam kasus OK dan PEPCK, yang
Situasi tampaknya jauh lebih kompleks dengan PK. Efek stimulasi insulin lambat di
awal, dan itu membutuhkan sintesis protein berlangsung, yang menunjukkan bahwa
induksi produk gen lain mungkin menjadi prasyarat (82). ekspresi gen PK-L
dirangsang oleh kombinasi glukosa dan insulin dalam budaya utama hepatosit tikus
dewasa, tersedia hormon tiroid dan

glukokortikoid yang hadir (23). Baik glukosa atau insulin bekerja dengan mereka
diri. Glukagon, bertindak melalui cAMP, menghambat sintesis PK-L mRNA oleh
penurunan transkripsi gen dalam hepatosit berbudaya (23) dan in vivo (136).

Glukagon meningkatkan tingkat degradasi PK mRNA (82, 135). Carbohydrates juga

merangsang akumulasi PK-L mRNA (23). Efek ini tampaknya melibatkan transkripsi
dan stabilisasi mRNA, mungkin dalam hubungannya dengan insulin, dan tindakan
permisif hormon tiroid dan glukokortikoid mungkin diperlukan (23). DNA urutan
yang diperlukan untuk glukosa-dirangsang ekspresi gen PK-L terlokalisasi ke daerah
antara -197 dan -96 Pasang basa dari situs transkripsi start (128A).

urutan konsensus CRE yang hadir dalam gen PK-L, tetapi terletak jauh hulu (-2. 3
kb) dan hilir (+ 5,8 kb) dari situs inisiasi (17).

Urutan menyerupai elemen glukokortikoid-responsif juga mengidentifikasified (17).

urutan homologi ini belum didukung oleh penelitian di lokalisasi elemen respon
hormon fungsional dalam hati L-jenis PK promotor. Pekerjaan telah berpusat pada
mendefinisikan elemen DNA dan diasosiasikan diciptakan mengikat protein yang
terlibat dalam ekspresi basal dan jaringan-spesifik (48,130, 135-137, 140).

gen fosfoenolpiruvat CARBOXYKINASE The PEPCK adalah isolated sebelum salah

satu gen lain yang dibahas di sini dan yang paling extensively dipelajari (5).
Berbeda dengan PK, rekan glikolitik yang, hati Kegiatan PEPCK adalah nyata
meningkat pada hewan berpuasa atau diabetes dan berkurang pada hewan
karbohidrat-makan (129). peningkatan insulin plasma yang berikut hasil karbohidrat
makan di tingkat penurunan sintesis PEPCK(1, 49). Ini adalah akibat langsung dari
penurunan PEPCK mRNA yang, ditum, adalah karena fakta bahwa insulin cepat
menghambat transkripsi PEPCK yang gen (49, 118). Efek ini, belajar yang paling
luas di H4IIE hepatomasel, terjadi dalam hitungan menit, dimediasi melalui reseptor
insulin, adalah segera terbalik setelah penghapusan insulin dari media kultur, dan
tidak membutuhkan sintesis protein berlangsung (86). Ditinggikan glukagon plasma
(atau intraseluler cAMP) karakteristik kondisi puasa menginduksi PEPCK perpaduan.
Hal ini juga terkait dengan transkripsi ditingkatkan dari gen PEPCK (49, 68, 118),
meskipun cAMP juga menstabilkan mRNA PEPCK terhadap degradation (54).
Glucocortieoids juga meningkatkan PEPCK dengan merangsang transkripsi gen dan
dengan menstabilkan PEPCK mRNA (90). glukokortikoid dan stabilisasi cAMP
diinduksi PEPCK mRNA dimediasi oleh nukleotida domain yang ada di wilayah 3
'mRNA (53, 90). Efek dari glukokortikoid dan cAMP pada transkripsi yang aditif, dan
insulin memberikan suatu efek penghambatan dominan pada transkripsi, apakah ini
efektor positif ditambahkan secara individual atau dalam kombinasi (118).

Basal promoter gen PEPCK terdiri dari tiga unsur utama, CAAT sebuah box,
gabungan basal penambah unsur dan cAMP respon elemen (CRE), dan kotak TATA
(107). Unsur-unsur lain, terutama orang-orang yang mengikat transkripsi faktor
ClEBP, HNF-1 dan HNF-4, mungkin terlibat dalam basal transkripsi dan dapat
memodulasi efek hormonal (88). Gen PEPCK CRE, digunakan untuk merumuskan
urutan konsensus pertama untuk CRE, menengahi sebagian besar, tapi tidak
semua, dari efek cAMP telah di PEPCK transkripsi gen (88,106, 107, 121).

hormon glukokortikoid merangsang PEPCK transkripsi gen melalui Unit unik

kompleks respon glukokortikoid (GRU) (56). bentang GRU ini 110 pasangan basa
(dari -465 ke - 355), dan terdiri dari array tandem dua aksesori situs faktor-binding
(AF1 dan AF2) dan dua glukokortikoid reseptor-situs mengikat (GR1 dan GR2) (56).
Seluruh kompleks diperlukan untuk respon maksimal untuk glukokortikoid.
Mekanisme aksi ini situs faktor aksesori tidak jelas, tetapi menarik bahwa gabungan
genetic dan analisis fungsional menunjukkan bahwa AF1 juga berfungsi sebagai
respon asam retinoat elemen (asam retinoat menginduksi transkripsi gen PEPCK)
(74) dan merupakan situs mengikat untuk HNF-4. Analisis serupa menempatkan
satu insulin-responsif elemen dalam urutan AF2 di -416 ke -402 (87). bertepatan
dengan lokasi elemen yang bertindak sebagai bagian dari GRU dan sebagai insulin

Urutan responsif dapat menjelaskan dominan penghambatan efek insulin memiliki

pada respon glukokortikoid. Penjelasan untuk efek dominan insulin pada respon
cAMP belum disajikan.

MOLEKULER FISIOLOGI

Glukoneogenesis DAN GL YCOL ysis Fisiologi molekul glukoneogenesis dan glikolisis

melibatkan interaksi kompleks nutrisi dan hormon untuk mengatur fosforilasi yang
negara dan ekspresi gen dari siklus substrat enzim via jangka pendek dan efek
jangka panjang, masing-masing (Tabel 1).

Pada hewan makan, aktivitas tinggi GK, 6-PF-1-K dan PK nikmat fluks bersih menuju
piruvat. Kegiatan PEPCK rendah, seperti yang dari lainnya enzim gluconeogeneic,
sehingga fluks terhadap glukosa rendah. Sebagai binatang memulai cepat, kadar
insulin plasma mulai jatuh. Hal ini mengurangi dominan penghambatan insulin
memiliki pada sintesis enzim PEPCK gluconeogenic dan memungkinkan hormon
seperti glukagon dan f3-adrenergik agonis untuk merangsang adenilat siklase dan
meningkatkan kadar cAMP. Peningkatan cAMP juga hasil dalam inaktivasi fosforilasi
diinduksi 6-PF-2-K dan aktivasi Fru-2,6-P2ase, dengan penurunan resultan Fru-2,6-
P2. Hal ini menyebabkan penurunan aktivitas dari 6-PF-I-K dan aktivasi Fru-l, 6-Pase.
cAMP dimediasi fosforilasi menghambat aktivitas PK, seperti halnya tingkat
penurunan Fru-l, 6-P2, yang hasil dari aktivasi Fru-l, 6-Pase. Ditinggikan cAMP
mengaktifkan PEPCK transkripsi gen, yang mengarah ke dua sampai tiga kali lipat
peningkatan aktivitas PEPCK. Semua ini menyebabkan bersepeda penurunan PEP
untuk piruvat dan Fru-6-P untuk fru l, 6-P2, dan hasil akhirnya adalah tingkat
meningkat glukoneogenesis.

Setelah 24 jam dari kelaparan, tingkat cAMP hati dan tingkat gluconeogenesis yang
ditinggikan, sedangkan tingkat Fru-2,6-Pz dikurangi menjadi 10% itu di hati dari
hewan yang diberi. Substrat bersepeda berkurang karena peningkatan fluks melalui
Fru-l, 6-Pzase dan PEPCK dan fluks berkurang melalui 6-PF-I-K dan PK. regulasi
jangka pendek oleh glukagon atau catechola tambang memberikan sedikit stimulasi
tambahan glukoneogenesis karena aktivitas enzim, akut responsif terhadap hormon
ini dalam hati dari makan hewan (PK, 6-PF-2-K, dan fru!, 6-P2ase), telah diubah oleh
mekanisme fosforilasi.

Tingkat glukoneogenesis setelah lama kelaparan, atau diabetes, adalah lanjut

ditinggikan oleh peningkatan pasokan substrat, dan yang paling penting, oleh
perubahan konsentrasi berbagai enzim. Kombinasi dari ditinggikan cAMP
intraseluler dan penurunan insulin plasma mengaktifkan transkripsi

tion dari gen yang mengkodekan aktivitas enzim gluconeogenic PEPCK, Fru-l, 6-
Pzase dan mungkin G-6-Pase. Sebaliknya, transkripsi gen yang mengkodekan enzim
glikolitik GK, 6-PF- I-K, dan PK adalah

berkurang, seperti yang dari enzim bifunctional. Selama kelaparan jangka panjang,
atau diabetes, enzim responsif terhadap glukagon dan katekolamin sudah
terfosforilasi, regulasi maka akut tion fluks gluconeogenic ditumpangkan pada
tingkat yang ada tidak diamati.

Pemulihan modulasi jangka pendek dari negara fosforilasi dan kegiatan PK dan 6-PF-
2-KlFru2,6-Pzase oleh refeeding atau Administration insulin tion, masing-masing,
membutuhkan banyak jam untuk mencapai. tingkat yang tinggi dari cAMP pertama
harus menurun dan tingkat Fru-2,6-P2 harus meningkat. restorasi penuh juga
mensyaratkan bahwa insulin menghambat ekspresi PEPCK dan Fru-l, 6-P2ase gen
dan menginduksi mRNA untuk OK, PK, dan 6-PF-2-K / Fru-2,6-P2ase. Ini jelas bahwa
tingkat fluks karbon dalam gluconeogeneic / jalur glikolitik tergantung pada
berbagai faktor kompleks yang kontribusinya bervariasi tergantung pada status gizi
dan hormon hewan.

RINGKASAN

Memahami pengaturan metabolisme glukosa hepatik memiliki berdirinya pada

penjelasan beberapa jalur, tetapi kemajuan terbaru telah dari aplikasi genetika
molekuler. Lima tahun lalu sedikit yang diketahui tentang struktur utama dari enzim
peraturan kunci. Sejak itu, Urutan utama OK hati, 6-PF-I-K, l fru, 6-P2ase, PK, PEPCK,
dan 6-PF-2-KlFru-2,6-Pzase telah diturunkan dari urutan cDNA dan / atau

ditentukan oleh sequencing protein langsung. Ini telah memberikan wawasan baru
ke dalam mekanisme molekuler dari katalisis dan regulasi enzim ini dengan kovalen
modifikasi. Isolasi cDNA untuk enzim ini juga memiliki diizinkan untuk kuantisasi
mRNA spesifik dan analisis diizinkan kontrol hormonal ekspresi gen tertentu. Gen
untuk enzim ini telah diisolasi dan sequencing, dan daerah promotor mereka
sedang

diidentifikasi dan ditandai. elemen respon hormon telah delineated di beberapa

promotor. Promotor wilayah untuk 6-PF-2-KlFru2,6-P2ase dan Fru-l, 6-P2ase juga
telah diidentifikasi, dan penelitian masa depan akan fokus pada penjelasan
mekanisme dimana hormon mengatur ekspresi gen ini.

Sejumlah generalisasi dapat dibuat tentang regulasi gen ekspresi glikolitik enzim /
gluconeogenic (Tabel 1). Pertama, ada mengkoordinasikan regulasi hormonal
ekspresi gen dan efek ini konsonan dengan tindakan fisiologis mereka. Insulin
menginduksi mRNA yang mengkodekan enzim glikolitik dan merepresi mRNA yang
mengkode gluconeo enzim genic; cAMP memiliki efek yang berlawanan. Keduanya
dapat meningkatkan atau menurunkan transkripsi. Sedangkan insulin dan cAMP
mempengaruhi semua mRNA ini, glucocorticoids tampaknya memiliki tindakan yang
lebih terbatas. Kedua, transkripsi dan posttranscriptional mekanisme pengaturan
yang terlibat. Sintesis semua mRNA dibahas diatur oleh hormon. Relatif sedikit yang
diketahui tentang bagaimana stabilitas mRNA diatur secara umum, tetapi jelas
bahwa PEPCK mRNA distabilkan oleh agen yang meningkatkan laju transkripsi gen.
Di bawah metabolik yang tepat sinyal kontrol ini ganda sintesis mRNA dan stabilitas
menyediakan untuk peningkatan jangka panjang dalam PEPCK mRNA dan protein.
Studi dengan PK mRNA yang kurang langsung, tapi menyarankan mekanisme ganda
yang sama. Ini akan menarik untuk melihat apakah peraturan multilevel dibatasi
untuk dua mRNA ini, yang keduanya terlibat dalam siklus substrat yang sama, atau
apakah stabilitas lainnya mRNA yang terlibat dalam metabolisme glukosa hepatik
juga terpengaruh. Ketiga, glukosa tampaknya menjadi penting dalam regulasi hati
ini gen. Glukosa diperlukan untuk efek insulin pada PK dan bifunctional gen enzim.
Sejak mRNA ini menyandikan enzim yang mengkatalisis di termediate atau reaksi
distal di jalur glikolisis, dan karena regulasi yang tion dari GK transkripsi gen oleh
insulin independen glukosa, itu adalah kemungkinan bahwa metabolit glukosa
adalah agen aktif dan bahwa itu dihasilkan sebagai konsekuensi dari stimulasi GK
transkripsi gen oleh insulin. Di katabolisme berkerut glukosa dapat menjelaskan
fakta bahwa insulin perlu, tetapi tidak cukup, untuk induksi PK dan bifunctional
enzim. Cis-acting urutan DNA diperlukan untuk regulasi glukosa telah telah
diidentifikasi untuk gen ragi enolase (18), yang hati S 14 gen (60), dan mungkin
untuk L-jenis gen piruvat kinase (128A). Trans-acting protein belum teridentifikasi
dalam contoh ini. Apakah regulasi gen ekspresi enzim gluconeogenic oleh insulin
tergantung pada glukosa pasti, meskipun ini tampaknya tidak menjadi kasus untuk
PEPCK (50). Keempat, tampak bahwa regulasi negatif dominan untuk banyak dari
gen. Dominasi, seperti yang digunakan di sini, menyiratkan bahwa satu agonis
menimpa efek

dari konsentrasi menjenuhkan dari agonis kedua. Studi dari gen PEPCK
menunjukkan bahwa penghambatan transkripsi oleh insulin adalah dominan atas
efek stimulasi dari cAMP dan glukokortikoid. Dominasi tidak Univer sebuah Fitur sal
aksi insulin, namun, karena stimulasi transkripsi gen enzim glikolitik oleh insulin
diganti oleh efek penghambatan kamp. Ini menahan diri dari glukoneogenesis dan
glikolisis oleh aksi mana hormon diberikannya efek negatif mungkin penting pusat,
namun mekanisme molekuler untuk dominasi tersebut tidak diketahui. Kelima,
analisis organisasi dari sejumlah gen mengungkapkan bahwa Penggunaan ekson
alternatif memungkinkan untuk jenis khusus dari peraturan. regulasi sel-spesifik
tion ekspresi dicapai, sebagian, dengan fakta bahwa alternatif pertama ekson
memberikan mRNA unik untuk PK, GK, dan enzim bifunctional dijaringan yang
berbeda. Oleh karena itu, daerah promotor yang berbeda dan elemen control
dipekerjakan, dan enzim yang mengkatalisis reaksi tertentu dapat melayani Tujuan
fisiologis yang berbeda dalam dua jaringan yang berbeda (mis 6-PF-2-K / Fru-
2,6P2ase di hepatosit dan sel otot; GK di hepatosit dan pankreas sel f3).
Penggunaan ekson alternatif tampaknya dipekerjakan oleh hati yang enzim gen
glikolitik (GK, 6-PF-I-K, 6-PF-2-KlFru 2,6-P2ase, PK), namun bukan oleh
gluconeogenic gen enzim PEPCK dan Fru-l, 6-P2ase. Itu pentingnya perbedaan ini
menanti analisis lebih lanjut dari fungsi ini promotor.

ARAH MASA DEPAN

Tantangan saat ini adalah untuk menentukan mekanisme molekuler dimana

mengkoordinasikan regulasi transkripsi, stabilitas mRNA, glukosa-dependent
regulasi hormonal ekspresi gen, dominasi, dan penggunaan ekson alternative
terjadi. regulasi hormon ekspresi gen mungkin dicapai oleh faktor protein trans-
acting yang mengikat elemen DNA cis-acting. Satu pertama harus mengisolasi dan
mengidentifikasi faktor-faktor trans-acting ini, kemudian menentukan berapa
mereka diatur (misal dengan modifikasi kovalen, efektor alosterik, perubahan dalam
ekspresi gen). Beberapa tantangan berat yang terlihat. Sedikit adalah dikenal
tentang bagaimana hormon diberikannya efek positif dan negatif terhadap terpisah
gen, dan fakta bahwa ini bisa terjadi secara bersamaan dalam sel adalah rumit
masalah. Cis / model trans regulasi gen telah successfully diterapkan analisis
promotor gen enzim gluconeogenic seperti PEPCK dan fru I, 6-P2ase, tetapi dengan
sedikit keberhasilan untuk glikolitik

gen enzim seperti PK, GK, dan enzim bifunctional. Pembaur masalah ini adalah fakta
bahwa banyak dari gen ini tidak diungkapkan atau diatur dalam baris sel kultur
jaringan standar. Bahkan ketika baris sel yang cocok yang tersedia,ada kasus di
mana fusi gen pendekatan / transfeksi belum bekerja. Jika ini terus menjadi
kenyataan, terutama karena lebih dari promotor ini dianalisis, kemungkinan bahwa
ada sesuatu yang berbeda tentang hormone regulasi gen enzim glikolitik ini harus
dipertimbangkan. Glu-6-Pase merupakan daerah yang subur lain penelitian di masa
depan. Ini adalah satu-satunya enzim regulator kunci dalam jalur yang belum
kloning. banyak yang baru Informasi akan datang sekali cDNA yang diperoleh untuk
katalitik subunit dan subunit peraturan diduga. Misalnya, catalytic yang subunit dari
mamalia Glu-6-Pase mengkatalisis reaksi yang melalui phosphohisti aDine enzim
menengah (Lisa). Penjelasan dari struktur subunit ini mungkin akan
mengungkapkan bahwa itu adalah anggota dari Fru-2,6-P2ase / phosphoglycer
makan mutase / asam fosfatase enzim keluarga. Peraturan glu yang cose-6 gen
fosfatase tetap belum terpecahkan, tetapi kemungkinan untuk menyerupai gen
enzim gluconeogenic lainnya. Meskipun kemajuan besar dalam pengetahuan
tentang struktur dan fungsi enzim regulasi hati, dan kontrol metabolisme melalui
phosphoryla mekanisme tion defosforilasi, telah terjadi penurunan minat regulasi
metabolisme dalam beberapa tahun terakhir. Ini mungkin memiliki 'terjadi karena
kurangnya pendekatan untuk menganalisis kontrol fluks jalur, tetapi baru-baru ini
kemajuan dalam DNA / RNA teknologi rekombinan telah dibuka baru yang menarik
jalan. Por contoh, adalah mungkin untuk transfect sel yang berasal dari hati dengan
gen yang mengkode bentuk modifikasi dari enzim, misalnya, 6-PF-2-K / Fru-2, 6-
P2ase, yang tidak memiliki situs fosforilasi. Ketika menyatakan, seseorang dapat,
Mengetahui pengaruh modifikasi ini terhadap fluks metabolik. Ini akan melibatkan
rekayasa gen chimeric dengan promotor regulatable ampuh sehingga dalam jumlah
berkerut enzim ini dapat diproduksi di akan di sel transfected. Metabolisme
rekayasa jalur harus memungkinkan peneliti untuk memilah interaksi kompleks
yang terjadi antara jangka pendek, regulasi akut enzim Kegiatan melalui modifikasi
kovalen dan / atau efektor alosterik, dan panjang efek jangka pada ekspresi gen.
Selain itu, penggunaan hewan transgenik memiliki potensi besar untuk analisis jalur
metabolisme dalam berbagai physikondisi ological. rekombinasi homolog adalah
kuat lain alat alytical. Pendekatan ini dapat digunakan untuk menonaktifkan gen
seperti yang pengkodean enzim siklus substrat kunci regulasi. Dalam struktur in situ
/analisis fungsi dapat dilakukan oleh gen menggantikan yang mengekspresikan
enzim diubah oleh mutagenesis situs-diarahkan. Jadi baris sel stabil dapat dibuat
dengan mutasi yang ditargetkan dan efek dari perubahan tersebut pada
metabolism bersepeda dapat dinilai.

Pertanyaan tentang bagaimana hati mengatur pemanfaatan dan sintesis glukosa

telah dipelajari secara intensif oleh ahli fisiologi dan biokimia untuk dekade. Telah
banyak belajar, namun banyak pertanyaan yang belum terjawab. Alat untuk
mendekati masalah ini berhasil tumbuh dalam jumlah dan ketajaman, dan
penggunaannya di masa depan harus menghasilkan manfaat yang kaya.