Proteomic Analysis Of The Effects Of Gibberellin On Increased Fruit Sink

Strength In Asian Pear (Pyrus Pyrifolia)

A. Pendahuluan

Ukuran buah adalah kepentingan ekonomi bagi banyak tanaman

hortikultura, termasuk pir Asia (Pyrus Pyrifolia) (Zhang et al., 2007). Banyak
pendekatan hortikultura telah dikembangkan untuk menghasilkan buah yang lebih
besar dalam produksi pir, khususnya, regulator pertumbuhan tanaman telah
banyak diterapkan (Zhang et al., 2007). Hal ini juga diketahui bahwa
phytohormones memiliki efek signifikan pada pear set buah, ngunan bangan dan
kualitas (Jung et al., 2014). GA telah diakui sebagai pemicu untuk pertumbuhan
buah yang cepat dan pembangunan setelah penyerbukan (Zhang et al., 2008).
Oleh karena itu, GA diterapkan secara luas untuk produksi buah-buahan di ceri
manis (Prunus avium) (Zhang dan Whiting, 2013), pear (Zhang et al., 2007,
2009), apel (Malus domestica Borkh.) (Curry, 2012) dan selentingan (Vitis
vinifera) (Wang et al., 2012). GA-diinduksi ekspansi buah pir dan proses
pematangan sangat kompleks kompleks perubahan fisiologis, biokimia dan
morfologi (Zhang et al., 2008). Buah pir, disebut sebagai docarp pseudoefedrin,
terdiri dari dua bagian yang berbeda: korteks buah dan ovarium diperluas yang
mewakili inti (Zhang et al, 2005a.). Pola aktivitas metabolik berbeda antara inti
dan mesocarp dan tergantung pada tahap buah ngunan bangan (Zhang et al.,
2007). Selanjutnya, Asia pir perkembangan buah mengikuti kurva pertumbuhan
sigmoid tunggal. Dalam tanaman ini, pertumbuhan buah berlangsung dalam dua
tahap berturut-turut; sel fase diakomodir dalam pembagian aktif diikuti oleh fase
ekspansi sel (Zhang et al., 2006). Zhang et al. (2008) melaporkan bahwa
peningkatan permintaan wastafel terkait erat dengan aktivasi invertase sel
dinding-terikat dalam inti, dan invertase netral dan NAD tergantung sorbitol
dehidrogenase dalam mesocarp selama ekspansi buah. Namun, mekanisme yang
GA meningkatkan kekuatan buah wastafel tetap sulit dipahami. Unravel- ing
mekanisme molekuler dasar pembangunan buah setelah penerapan GA memiliki
implikasi signifikan bagi produksi buah dan keamanan pangan.
B. Tujuan Penelitian

Tujuan peneliti dalam penelitian ini adalah untuk mengidentifikasi protein

diatur oleh GA dan untuk memperjelas peran GA dalam meningkatkan kekuatan
buah sink dan mengatur ukuran buah pear.

C. Bahan Dan Metode

1. Bahan tanaman dan aplikasi GA

Percobaan dilakukan dengan menggunakan buah 20-4 11- tahun pohon pir
Asia. Pir kultivar 'Cuiguan' (P. pyrifolia Nakai) telah dicangkokkan ke P.
betulaefolia batang bawah Bunge dan tumbuh dalam sistem pelatihan pergola
datar berkanopi seperti yang dijelaskan oleh Zhang et al. (2005a). Kedua
perlakuan dan kelompok kontrol terdiri dari tiga ulangan biologi; masing-masing
ulangan berisi empat pohon pir. Bunga yang tangan-penyerbukan dengan serbuk
sari dari kultivar pear 'Qingxiang' di bunga mekar. Bagian pedicel terdekat saat ini
tunas memacu dirawat dengan 30 mg L-1 dari GA (Kyowa Hakko Kimia, Co Ltd,
Tokyo, Jepang) lanolin pasta per buah di 30 DAA. Buah dipanen di awal (14 hari
setelah pengobatan (DAT)) dan tahap menengah (28 DAT) ekspansi buah dan
pematangan Tahap (90 DAT) (Gambar. 1). Buah diperlakukan dengan pasta
lanolin murni yang digunakan sebagai kontrol. Untuk penelitian proteomik, 20
buah pear dipanen dari masing-masing ulangan biologi pada tahap awal dan
menengah ekspansi buah dan tahap pematangan. Buah dibagi dalam mesocarp dan
inti jaringan dan ditimbang sebelum pembekuan cepat dalam cairan N2. Sampel
disimpan pada -80 C sampai digunakan lebih lanjut.

2. Analisis Kualitas Buah

Bobot segar, diameter longitudinal dan diameter melintang buah diukur

segera setelah panen. Kering bobot ditentukan setelah sampel beku-kering. Larut
analisis gula dilakukan seperti yang dijelaskan oleh Zhang et al. (2007). t-test
siswa (P> 0,05) digunakan untuk mendeteksi perbedaan yang signifikan.
3. Pengamatan sel morfologi

Menurut protokol dijelaskan oleh Du et al. (2013), pear sampel mesocarp

direndam dalam FAA fiksasi penyangga (10% formaldehid, 5% asam asetat dan
etanol 50%) selama 24 jam. Tissue tions detik- (15 m tebal) dipotong dengan
mikrotom Leica Ultracut UC6 (Leica EM UC6, Stockach, Jerman) dan dipasang
pada kaca. Slide diwarnai dengan Safranin O dan Cepat Hijau sebelum
pemeriksaan dengan 300 kV resolusi tinggi transmisi analisis mikroskop elektron
(TEM) (JEOL Ltd, Tokyo, Jepang).

4. Ekstraksi protein, diferensial dalam gel elektroforesis (DIGE) pelabelan dan 2-

Delektroforesis

Proteindiekstraksi menurut metode yang dijelaskan oleh Liu et al. (2014).

Secara singkat, satu gram materi beku sus- pended di 5.0 mL buffer ekstraksi
dingin (100 mM KCl, 50 mM Tris-HCl pada pH 8,5, 5 mM EDTA, 1% b / v
dithiothreitol (DTT) dan 30% w / v sukrosa) dan benar-benar vortexed selama 30
s. Protein yang diukur menggunakan 2D-Quant Kit (GE Healthcare Biosciences
Little Chalfont, UK). Ekstrak protein dimurnikan menggunakan 2D Clean-Up Kit
(GE Healthcare). Pelabelan protein dilakukan dengan menggunakan CyDye DIGE
Fluor pewarna minimal sesuai dengan protokol pabrik (GE Healthcare). Standar
internal, yang dibuat dengan menggabungkan jumlah yang sama dari semua
ekstrak protein, itu kovalen label dengan Cy2 Dye menggunakan metode yang
sama. Protein difokuskan pada 13 cm, 3-10 bergerak pH gradien (IPG) strip (GE
Healthcare) menggunakan sistem fokus Ettan IPGphor isoelektrik (GE
Healthcare). Teins pro diselesaikan dalam dimensi kedua di 12,5% akrilamida gel
menggunakan Ettan Dalt Dua Belas (GE Healthcare) sebesar 1,5 W per gel. Tiga
gel DIGE mereplikasi dijalankan untuk setiap sampel.