2.4.

Studi permeasi kulit secara in vitro pada tambalan GA pada tikus

2.4.1. Persiapan kulit tikus

Tikus Sprague-Dawley jantan (220-250 g), diperoleh dari Pusat Penelitian Hewan
Laboratorium Dae-Han (Taejon,Korea), di eustanasi dengan asfiksasi CO2. Bagian dorsal
Rambut dicukur dengan gunting dan ketebalan Kulit penuh tikus diangkat dengan bedah.
Spesimen kulitnya dibersihkan Hati-hati dengan garam biasa, lalu potong menjadi 4 cm
potongan persegi untuk percobaan permeasi.

2.4.2. Permeasi in vitro studi GA

Penelitian permeasi kulit tikus in vitro dilakukan Menggunakan sel difusi Keshary-Chien
pada suhu 37-8C. Secara fresh,Kulit tikus yang dipotong dipasang di antara donor dan Sel
reseptor Setiap patch GA ditutupi lapisan Bagian korneum kulit, sel sel reseptornya Diisi
dengan 12 ml PG 40% (b / v) di PBS ke Menjaga kondisi wastafel Pada setiap waktu yang
telah ditentukan Interval, 400 l larutan sampel diambil dari Sel reseptor untuk menentukan
jumlah GA yang terserap, Dan diisi dengan volume yang sama dari larutan reseptor yang
segar . Sampel disimpan di freezer sampai dianalisis Oleh HPLC

2.4.3. Penentuan deposisi kulit GA secara keseluruhan Kulit

Setelah 12 jam studi permeasi, konsentrasi GA di Seluruh kulit ditentukan, seperti dilansir
dalam literatur (Arima et al., 1998). Secara ringkas, tambalan itu dikupas Dari kulit, dan kulit
yang bersentuhan dengan Patch (2,14 cm) diambil dan dicuci dengan hati-hati lima Kali
dengan air suling untuk menghilangkan sisa GA pada permukaan. Kulit dipotong kecil-kecil,
dan homogenisasi Dengan 2 ml metanol selama 2 menit pada 10.000 rpm (Polytron, PT 3100,
Swiss). Lalu, suspensinya Disentrifugasi selama 20 menit pada 31003g. Supernatan Disaring
melalui filter mikropori (0,45 mm, Sar Torius, Jerman). Konsentrasi GA dalam sampel
Ditentukan oleh HPLC.