HALAMAN PENGESAHAN

Laporan resmi berjudul ISOLASI ENZIM yang disusun oleh :

Kelompok : 6 / Senin
Nama / NIM : Alfin Adi Pratama 21030115120105
Dwi Kinasih 21030115120059
Permadi Wisnu Aji W 21030115130175
Woro Indriani Setyo T.A 21030115140201

Semarang, 9 Mei 2017

Mengetahui,
Asisten Pembimbing

Ryan Primaldi
NIM. 21030114120098

2
 RINGKASAN

Penggunaan mikroorganisme sebagai mesin hayati penghasil enzim sangat

menguntungan, karena selain mudah dibiakkan, mikroorganisme mempunyai kecepatan
tumbuh yang tinggi dan mudah dikontrol pertumbuhannya. Ampas tebu dapat
dimanfaatkan menjadi sumber energi alternatif dan sumber enzim selulase. Tujuan dari
praktikum ini adalah mengisolasi enzim selulase dari ampas tebu, menghitung aktivitas
enzim, membandingkan aktivitas enzim selulase berdasarkan rasio sampel : air dan pH
dan menguji kadar glukosa setelah inkubasi
Enzim merupakan sejenis protein kompleks yang unik dan merupakan bahan
antara yang penting untuk metabolisme dan berbagai perubahan kimia dalam tubuh.
Untuk mengisolasi enzim dari tanaman dilakukan 3 proses pemisahan yaitu ekstraksi
padat cair, sentrifugasi dan presipitasi. Faktor-faktor yang mempengaruhi aktivitas
enzim diantaranya adalah konsentrasi substrat, konsentrasi enzim, suhu, serta pH.
Bahan yang digunakan adalah serbuk gergaji kayu, etanol, aspergillus niger,
MG2SO4, NaCl, Aquadest KH2PO4, CaCl2 dan Aquadest. Sedangkan alat yang
digunakan antara lain beakerglass, centrifuge, cuvet, kertas saring, magnetic
stirrer, tabung reaksi, Erlenmeyer penghisap, gelas ukur, pengaduk, stopwatch,
timbangan, kompor listrik dan thermometer.
Berdasarkan hasil praktikum, lamanya waktu inkubasi berbanding terbalik
dengan aktivitas enzim.Hal ini disebabkan karena enzim mempunyai waktu inkubasi
optimum.Aktivitas enzim dipengaruhi oleh proses delignifikasi, karena aktivitas enzim
akan semakin meningkat jika selulosa yang tehidrolisis banyak. Dalam praktikum ini,
adanya perbedaan pH berpengaruh terhadap aktivitas enzim. Hal ini disebakan karena
enzim selulase dapat bekerja optimum pada pH cenderung asam.Konsentrasi susbstrat
juga akan mempengaruhi aktivitas enzim, semakin banyak konsentrasi substrat maka
aktivitas enzim akan meningkat.
Kesimpulan dalam praktikum ini adalah besarnya aktivitas enzim berbanding
terbalik dengan lamanya waktu inkubasi. Proses delignifikasi menyebabkan proses
hidrolisis selulosa dari ampas kelapa semakin optimal, sehingga aktivitas enzim
selulase semakin besar.Enzim selulase dapat bekerja optimum pada pH yang cenderung
asam. Maka jika pH larutan semakin tinggi (basa) maka enzim akan mengalami
denaturasi yang menyebabkan aktivitas enzimnya menurun. Semakin tinggi konsentrasi
substrat maka semakin tinggi aktivitas enzim yang dihasilkan.Enzim merupakan salah
satu jenis protein, yang sensitif terhadap suhu tinggi. Maka dari itu pada waktu
pemanasan, seharusnya dilakukan pada suhu optimum, agar tidak terjadi denaturasi
protein.

3
 PRAKATA

Puji syukur dipanjatkan atas kehadirat Tuhan Yang Maha Esa atas segala
limpahan rahmat, kenikmatan dan hidayah-Nya sehingga Laporan Praktikum Bioproses
dengan materi Asam Sitrat dapat terselesaikan.
Dalam laporan ini tidaklah mungkin dapat terselesaikan tanpa doa, bantuan dan
dukungan baik secara langsung maupun tidak langsung. Pada kesempatan ini ingin
disampaikan rasa terima kasih kepada :
1. Ibu Dr.Ing. Silviana, S.T., M.T. selaku penanggung jawab Laboratorium
Mikrobiologi Industri Universitas Diponegoro.
2. Ibu Jufriyah, S.T. selaku laboran Laboratorium Mikrobiologi Industri Universitas
Diponegoro.
3. Asisten Laboratorium Mikrobiologi Industri Universitas Diponegoro.
4. Ryan Primaldi selaku asisten pengampu materi isolasi enzim Laboratorium
Mikrobiologi Industri Universitas Diponegoro.
Dalam penulisan laporan ini tentunya masih banyak kesalahan dan jauh dari
kesempurnaan.Diharapkan kritik dan saran yang membangun dari semua pihak yang
berkaitan dengan laporan ini. Akhir kata, semoga laporan ini dapat bermanfaat bagi
semua pihak dan dapat berguna sebagai bahan penambah ilmu pengetahuan.

Semarang, 9 Mei 2017

Penyusun

4
 DAFTAR ISI

HALAMAN PENGESAHAN...............................................................................................
RINGKASAN......................................................................................................................iii
PRAKATA ...........................................................................................................................iv
DAFTAR ISI.........................................................................................................................
DAFTAR TABEL................................................................................................................vii
DAFTAR GAMBAR.........................................................................................................viii
BAB I PENDAHULUAN.....................................................................................................
1.1. Latar Belakang............................................................................................................
1.2. Rumusan Masalah.......................................................................................................
1.3. Tujuan Percobaan........................................................................................................
1.4. Manfaat Percobaan......................................................................................................
BAB II TINJAUAN PUSTAKA...........................................................................................
2.1 Pengertian Enzim.........................................................................................................
2.2 Sifat-Sifat Enzim..........................................................................................................
2.3 Penggolongan Enzim...................................................................................................
2.4 Metode Isolasi Enzim...................................................................................................
2.5 Kandungan Ampas Tebu..............................................................................................
2.6 Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Aktivitas Enzim..................................................
2.7 Kinetika Reaksi Enzimatik...........................................................................................
2.8 Proses Delignifikasi....................................................................................................
2.9 Solid Fermentation.....................................................................................................10
2.10 Submerged Fermentation.........................................................................................10
2.11 Fungsi Reagen..........................................................................................................11
BAB III METODE PERCOBAAN.....................................................................................12
3.1 Rancangan Praktikum................................................................................................12
3.1.1 Skema Rancangan Praktikum...........................................................................12
3.1.2 Variabel Operasi................................................................................................13
3.2 Bahan dan Alat...........................................................................................................13
3.3 Gambar Alat...............................................................................................................14
3.4 Prosedur Praktikum....................................................................................................15
3.4.1 Persiapan Bahan Baku......................................................................................15
3.4.2 Pembuatan Starter.............................................................................................15
3.4.3 Fermentasi.........................................................................................................15
3.4.4 Analisa Hasil....................................................................................................15
3.4.5 Uji Kadar Glukosa............................................................................................15
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN.............................................................................17
4.1 Pengaruh Waktu Inkubasi Terhadap Aktivitas Enzim................................................17
4.2 Pengaruh Perendaman Bahan Baku terhadap Aktivitas Enzim.................................18
4.3 Pengaruh pH terhadap Aktivitas Enzim.....................................................................20
4.4 Pengaruh Rasio Air terhadap Aktivitas Enzim...........................................................21
BAB V PENUTUP..............................................................................................................23
5.1 Kesimpulan................................................................................................................23
5.2 Saran...........................................................................................................................23

5
DAFTAR PUSTAKA..........................................................................................................24
LEMBAR PERHITUNGAN...............................................................................................25
LAMPIRAN-LAMPIRAN..................................................................................................33

6
 DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Penggolongan enzim................................................................................................

Tabel 2.2 Hasil analisis serat bagasse 7
Tabel 4.1 Pengaruh waktu inkubasi terhadap aktivitas enzim.................................................
Tabel 4.2 Pengaruh proses delignifikasi terhadap aktivitas enzim 7
Tabel 4.3 Pengaruh pH terhadap aktivitas enzim....................................................................
Tabel 4.4 Pengaruh rasio sampel dengan air terhadap aktivitas enzim 7

7
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Pengaruh konsentrasi terhadap kecapatan awal reaksi enzimatik8

Gambar 2.2 Grafik pemetaan kebalikan ganda (Lineweaver-Burk)9
Gambar 3.1 Skema rancangan praktikum2
Gambar 3.2 Beaker glass4
Gambar 3.3 Centrifuge4
Gambar 3.4 Kertas saring4
Gambar 3.5 Magnetic stirer4
Gambar 3.6 Erlenmeyer penghisap4
Gambar 3.7 Termometer4
Gambar 3.8 Gelas ukur4
Gambar 3.9 Stopwatch4
Gambar 3.10 Timbangan4
Gambar 3.11 Kompor listrik4
Gambar 4.1 Grafik hubungan waktu inkubasi terhadap aktivitas enzim 4
Gambar 4.2 Grafik hubungan proses delignifikasi terhadap aktivitas enzim 4
Gambar 4.3 Grafik hubungan pH terhadap aktivitas enzim 4
Gambar 4.4 Grafik hubungan rasio sampel dengan air terhadap aktivitas enzim 4

8
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Enzim adalah katalis, yang berarti bahwa mereka membuat reaksi kimia berjalan
lebih cepat, tetapi tidak diubah oleh reaksi (Sridianti, 2016). Enzim berperan dalam
meningkatkan kecepatan reaksi yang dijadikan sebagai tolak ukur keaktifan enzim.
Enzim hanya dapat bereaksi pada kondisi lingkungan tertentu seperti pH dan
temperatur. Ciri khas enzim ditandai oleh adanya spesifikasi untuk substrat
yang mirip secara biologis. Enzim dapat dihasilkan oleh hewan ,sel atau jaringan
tumbuhan, dan sel mikroba.
Penggunaan mikroorganisme sebagai mesin hayati penghasil enzim sangat
menguntungan, karena selain mudah dibiakkan, mikroorganisme mempunyai
kecepatan tumbuh yang tinggi dan mudah dikontrol pertumbuhannya. Sampai saat
ini produksi enzim dengan miroorgasnime masih merupakan cara yang paling
murah, walaupun nilai ekonomi enzim yang dihasilkannya masih relative mahal.
Ampas tebu (bagasse) merupakan limbah utama yang dihasilkan dalam industry
pembuatan gula tebu, Saat ini perkebunan tebu rakyat mendominasi luas areal
perkebunan tebu di Indonesia. Ampas tebu termasuk biomassa yang mengandung
lignoselulosa sangat dimungkinkan untuk dimanfaatkan menjadi sumber energi
alternatif seperti bioethanol atau biogas dan sumber enzim selulase. Ampas tebu
memiliki kandungan selulosa 40,59%, hemiselulosa 15,91%,dan lignin 17,50% (Ida,
2011).
1.2. Rumusan Masalah
Sebagai salah satu topik dalam bioteknologi, teknologi pemanfaatan enzim
mendapat prioritas untuk dikembangkan di Indonesia. Mengingat potensi tenaga
ahli dan modal lain telah tersedia di bumi Indonesia, maka sudah sewajarnya
pengembangan teknologi pemanfaatan enzim dalam bidang pangan, kedokteran dan
bidang-bidang lain di Indonesia tidak tertinggal oleh negara-negara maju. Untuk
mewujudkan harapan itu, sebagai mahasiswa teknik kimia perlu mengadakan

1
 penelitian penelitian yang berkaitan dengan produksi enzim dengan biaya murah
namun dengan nilai jual yang tinggi. Salah satu bahan yang bisa digunakan sebagai
sumber enzim adalah ampas tebu. Ampas tebu merupakan limbah buangan pabrik
gula yang bisa dijadikan sebagai sumber enzim selulase.

1.3. Tujuan Percobaan

1. Mengisolasi enzim selulase dari ampas tebu.
2. Menghitung aktivitas enzim
3. Membandingkan aktivitas enzim selulase berdasarkan rasio sampel : air dan pH

1.4. Manfaat Percobaan

1. Meningkatkan nilai ekonomis dari ampas tebu yang sebelumnya bernilai
ekonomis rendah.
2. Mendapatkan sumber alernatif dari limbah ampas tebu untuk mendapatkan enzim
selulase.
3. Mengurangi limbah ampas tebu yang dapat mencemari lingkungan

2
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Pengertian Enzim
Enzim adalah golongan protein yang paling banyak terdapat dalam sel hidup dan
mempunyai fungsi penting sebagai katalisator reaksi biokimia yang secara kolektif
membentuk metabolisme-perantara dari sel (Wirahadikusumah, 2001). Dengan adanya
enzim, molekul awal yang disebut substrat akan dipercepat perubahannya menjadi molekul
lain yang disebut produk. Enzim tersusun atas asam-asam amino yang melipat-lipat
membentuk globular, dimana substrat yang dikatalisis bisa masuk dan bersifat
komplementer (Martoharsono, 2006).
Suatu enzim dapat mempercepat reaksi 108 sampai 1011 kali lebih cepat dibandingkan
dengan reaksi yang dilakukan tanpa katalis. Enzim bersifat efisien dan spesifik dalam kerja
katalitiknya, sehingga enzim dikatakan mempunyai sifat sangat khas karena hanya bekerja
pada substrat tertentu dan bentuk reaksi tertentu. Kespesifikannya disebabkan oleh
bentuknya yang unik dan adanya gugus-gugus polar (atau nonpolar) yang terdapat dalam
struktur enzim (Fessenden, 1994).
2.2 Sifat-Sifat Enzim
a. Dalam jumlah kecil dapat mengkatalis substrat dalam jumlah besar
0
b. Enzim bereaksi optimum pada 40 C dan tekanan normal
c. Raksi enzimatis berlangsung pada pH optimumnya
d. Enzim bekerja secara spesifik
e. Mirip seperti protein, pada suhu tinggi akan terdenaturasi
f. Enzim biasanya merusak zat yang dapat mengurangi keaktifannya
g. Biasanya diperlukan energi aktifitas
2.3 Penggolongan Enzim
Klasifikasi enzim dapat dibedakan sebagai berikut :
a. Berdasarkan tipe reaksi yang diketahui, enzim dibagi menjadi enam kelompok seperti
yang disajikan pada tabel 2.1 :

3
 Tabel 2.1 Penggolongan enzim
No Kelas Jenis Reaksi yang dikatalisis

1 Oksidoreduktase Pemindahan elektron

2 Transferase Reaksi Pemindahan gugus fungsional

Reaksi hidrolisis ( Pemindahan gugus fungsional ke

3 Hidrolase
air)

4 Liase Pemindahan gugus ke ikatan ganda atau sebaliknya

Pemindahan gugus didalam molekul menghasilkan

5 Isomerase
bentuk isomer

Pembentukan Ikatan C-C,C-S,C-O dan C-N oleh

6 Ligase reaksi kondensasi yang berkaitan dengan penguraian
ATP

1. Oksidureduktase
Enzim oksidureduktase adalah enzim yang dapat mengkatalisis reaksi oksidasi atau
reduksi suatu bahan. Dalam golongan enzim ini terdapat 2 macam enzim yang paling
utama yaitu oksidase dan dehidrogenase. Oksidase adalah enzim yang mengkatalisis
reaksi antara substrat dengan molekul oksigen. Dehidrogenase adalah enzim yang aktif
dalam pengambilan atom hidrogen dari substrat.
2. Transferase
Enzim transferase adalah enzim yang ikut serta dalam reaksi pemindahan (transfer)
suatu gugus.
3. Hidrolase
Enzim hidrolase merupakan kelompok enzim yang sangat penting dalam pengolahan
pangan, yaitu enzim yang mengkatalisis reaksi hidrolisis suatu substrat atau
pemecahan substrat dengan pertolongan molekul air. Enzim-enzim yang termasuk
dalam golongan ini diantaranya adalah amilase, invertase, selulase dan sebagainya.
4. Liase
Enzim liase adalah enzim yang aktif dalam pemecahan ikatan C-C dan C-O dengan
tidak menggunakan molekul air.

4
 5. Isomerase
Enzim isomerase adalah enzim yang mengkatalisis reaksi perubahan konfigurasi
molekul dengan cara pengaturan kembali atom-atom substrat, sehingga dihasilkan
molekul baru yang merupakan isomer dari substrat atau dengan perubahan isomer
posisi misalnya mengubah aldosa menjadi ketosa.
6. Ligase
Enzim ligase adalah enzim yang mengkatalisis pembentukan ikatan-ikatan tertentu,
misalnya pembentukan ikatan C-C, C-O dan C-S dalam biosintesis koenzim A serta
pembentukan ikatan C-N dalam sintesis glutamin (Winarno, 2002).
b. Berdasarkan tempat bekerjanya enzim dibedakan menjadi dua, yaitu :
1. Endoenzim, disebut juga enzim intraseluler, yaitu enzim yang bekerja di dalam sel.
2. Eksoenzim, disebut juga enzim ekstraseluler, yaitu enzim yang bekerja di luar sel.
c. Berdasarkan cara terbentuknya dibedakan menjadi dua, yaitu :
1. Enzim konstitutif, yaitu enzim yang jumlahnya dipengaruhi kadar substratnya, misalnya
enzim amilase.
2. Enzim adaptif, yaitu enzim yang pembentukannya dirangsang oleh adanya substrat,
contohnya enzim -galaktosidase yang dihasilkan oleh bakteri E. Coli yang
ditumbuhkan di dalam medium yang mengandung laktosa
(Lehninger, 2005).
2.4 Metode Isolasi Enzim
Untuk mengisolasi enzim dari tanaman dilakukan3 proses pemisahan yaitu :
a. Ekstraksi padat cair(leaching)
Merupakan salah satu metode pemisahan cair - padatan. Pada proses ini, komponen
yang tidak larut dipisahkan dari bahan padatan dengan bantuan solvent. Ketika solvent
dicampur dengan sampel, maka solvent akan melarutkan ekstrak dengan difusi sampai
terjadi keseimbangan konsentrasi.
b. Sentrifugasi
Merupakan cara memisahkan bagian seperti partikel dalam medan gaya sentrifugasi
partikel. Faktor utama yang mengontrol proses sentrifugasi untuk separasi biologis
adalah ukuran partikel, perbedaaan densitas serta viskositas pelarut. Karena perbedaan
densitas dan ukuran partiel, enzim akan mengendap searah sentrifugal. Untuk
memisahkan partikel kecil seperti enzim, mesin sentrifugasi harus di setting antara
14000 dan 15000 g (K. Cliffe dalam Down Stream Processing hal 307).

5
 c. Presipitasi
Presipitasi adalah metode yang paling baik digunakan untuk mendapatkan protein
dan telah banyak digunakan dalam skala kecil maupun besar. Enzim adalah salah
satu bentuk protein yang memiliki sejumlah kelompok ion yang dapat terionisasi dan
kompone yang bersifat hidrofobik. Kombinasi muatan dan area hidrofobik ini dapat
dimanipulasi kelarutan molekulnya dalam pelarutnya. Banyak agen pemisah yang
digunakan untuk mengendapkan protein seperti garam proteolitik, pol imer , panas,
pH, dan solvent organik. (K. Cliffe dalam Down Stream Processing hal 314)
2.5 Kandungan Ampas Tebu
Tebu (Saccharum officinarum) adalah tanaman yang ditanam untuk
bahan baku gula. Tanaman ini termasuk jenis rumput-rumputan. Umur
tanaman sejak ditanam sampai bisa dipanen mencapai kurang lebih 1
tahun. Di Indonesia tebu banyak dibudidayakan di pulau Jawa dan
Sumatra. Ampas tebu atau lazimnya disebut bagasse, adalah hasil
samping dari proses ekstraksi (pemerahan) cairan tebu. Dari satu pabrik
dihasilkan ampas tebu sekitar 3 40% dari berat tebu yang digiling
(Indriani dan Sumiarsih, 1992). Husin (2007) menambahkan, berdasarkan
data dari Pusat Penelitian Perkebunan Gula Indonesia (P3GI) ampas tebu
yang dihasilkan sebanyak 32% dari berat tebu giling. Ampas tebu
sebagian besar mengandung ligno-cellulose. Panjang seratnya antara 1,7
sampai 2 mm dengan diameter sekitar 20 mikro, sehingga ampas tebu
ini dapat memenuhi persyaratan untuk diolah menjadi papan-papan
buatan. Bagase mengandung air 48 - 52%, gula rata-rata 3,3% dan serat
rata-rata 47,7%. Serat bagase tidak dapat larut dalam air dan sebagian
besar terdiri dari selulosa, pentosane dan lignin (Husin, 2007).
Tabel 2.2. Hasil analisis serat bagasse
Kandungan Kadar (%)
Abu 3,82
Lignin 22,09
Selulosa 37,65
Sari 1,81
Pentosan 27,97
SiO2 3,01

6
 Selulosa merupakan karbohidrat utama yang disintesis oleh tanaman
dan menempati hamper 60% komponen penyusun struktur tumbuhan.
Jumlah selulosa di alam sangat berlimpah sebagai sisa tanaman atau
dalam bentuk sisa pertanian seperti jerami padi, kulit jagung, gandum,
kulit tebu dan tumbuhan lainya. Proses penguraian selulosa secara alami
memerlukan bantuan mikroorganisme yang mengeluarkan enzim
selulase. Selulosa dihidrolisis oleh enzim selulase dengan memotong
ikatan 1,4 -glukosida pada rantai panjang selulosa. Selulosa, pada
lingkungan aerobik akan terurai menjadi glukosa dan karbondioksida
yang akan bergabung ke dalam sel yang sedang tumbuh, sedangkan
selulosa pada lingkungan anaerobik akan terurai menjadi alkohol dan
asam organik (Prihatiningrum, 2002). Bakteri pendegradasi selulosa
seperti Aspergilus niger merupakan salah satu mikroorganisme yang
dapat membantu proses pemecahan selulosa menjadi senyawa yang
lebih sederhana seperti yang terdapat pada sisa pelapukan kayu dan
tanaman.

2.6 Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Aktivitas Enzim

a. Konsentrasi substrat
Aktivitas enzim akan meningkat seiring dengan meningkatnya konsentrasi tertentu
sampai dengan titik dimana enzim mengalami akivitas tertinggi kemudian akan
mengalami penurunan aktivitas dengan bertambahnya substrat atau titik dimana
enzim sudah secara keseluruhan membentuk kompleks enzim-substrat.
b. Pengaruh pH
Pada umumnya enzim menunjukkan aktivitas maksimum pada suatu kisaran pH yang
disebut pH optimum, yang umumnya antara pH 4,5-8,0 (Kurnia, 2010).
c. Konsentrasi Enzim
Semakin tinggi konsentrasi enzim maka kecepatan reaksi akan meningkat hingga batas
konsentrasi tertentu. Namun, hasil hidrolisis substrat akan konstan dengan naiknya
konsentrasi enzim. Hal ini disebabkan penambahan enzim sudah tidak efektif lagi (Reed,
1975).
d. Temperature
Enzim dapat mempercepat terjadinya reaksi kimia pada suatu sel hidup. Dalam batas-
batas suhu tertentu, kecepatan reaksi yang dikatalisis enzim akan meningkat seiring

7
 dengan naiknya suhu. Reaksi yang paling cepat terjadi pada suhu optimum (Rodwell,
1987). Suhu yang terlalu tinggi akan menyebabkan enzim terdenaturasi (Poedjiadi,
1994). Pada suhu 0oC, enzim menjadi tidak aktif dan dapat kembali aktif pada suhu
normal.

2.7 Kinetika Reaksi Enzimatik

Konsentrasi substrat mempengaruhi kecepatan reaksi yang dikatalisis oleh enzim.
Pengaruh berbagai konsentrasi substrat terhadap kecepatan reaksi awal jika enzim dijaga
konstan dapat dilihat pada gambar berikut:

Gambar 2.1 Pengaruh konsentrasi terhadap kecapatan awal reaksi enzimatik

Pada konsentrasi substrat yang amat rendah, kecepatan reaksi pun amat rendah, tetapi
kecepatan ini akan meningkat dengan meningkatnya konsentrasi substrat. Jika kita menguji
pengaruh konsentrasi substrat yang terus meningkat setiap saat kita mengukur kecepatan
awal reaksi yang dikatalisis ini, kita akan menemukan bahwa kecepatan ini meningkat
dengan nilai yang semakin kecil.
Pada akhirnya, akan tercapai titik batas, dan setelah melampaui titik ini, kecepatan reaksi
hanya akan meningkat sedemikian kecil dengan bertambahnya konsentrasi substrat.
Bagaimanapun tingginya konsentrasi substrat setelah titik ini tercapai kecepatan reaksi akan
mendekati tetapi tidak akan pernah mencapai garis maksimum. Pada batas ini, yang disebut

kecepatan maksimum (Vmaks), enzim menjadi jenuh substratnya dan tidak dapat berfungsi
dengan cepat.
Pada gambar 2.1 akan terlihat sukarnya menyatakan konsentrasi substrat yang diperlukan
untuk mencapai Vmaks. Namun demikian,karena kurva yang menyatakan hubungan ini
memiliki bentuk umum yang sama bagi semua enzim (kurva ini berbentuk hiperbola).

8
 Michaels Menten mendefinisikan suatu tetapan yan dinyatakan sebagai UM (konsentrasi
substrat tertentu pada saat enzim mencapai kecepatan maksimumnya). Persamaan Michaels
Menten secara matematika dapat dinyatakan dalam persamaan :
Vmakx [S]
V0 = Km+[S ]

(I.W. Marison dalam Enzyme Kinetics hal 108)

dengan :
Vo = kecepatan awal pada konsentrasi substrat [S]
Vmaks = kecepatan maksimum
Km = tetapan Michaelis-Menten enzim bagi substrat tertentu Persamaan Michaelis-
Menten dapat ditransformasi secara aljabar menjadi bentuk lain yang lebih umum
digunakan untuk memetakan data percobaan.

Gambar 2.2 Grafik Pemetaan Kebalikan Ganda (Lineweaver-Burk)

2.8 Proses Delignifikasi
Delignifikasi adalah suatu proses pendahuluan penghilangan lignin pada material
berlignoselulosa sehingga hasil dari proses ini sudah berupa selulosa dengan kemurnian
yang cukup besar. Delignifikasi selulosa dapat dilakukan dengan beberapa cara, diantaranya
yaitu:
1. Ozonolysis Pretreatment, yaitu delignifikasi menggunakan ozon dilakukan pada
suhu ruangan dan tekanan atmosfer serta dapat menghancurkan sekitar lignin yang
terkandung dalam lignoselulosa.
2. Delignifikasi Pulp menggunakan Hidrogen Peroksida (dalam media asam asetat).
3. Delignifikasi Oksigen, yaitu proses untuk mengurangi kandungan lignin dari pulp
coklat (yang belum mengalami proses pemutihan). Bahan kimia yang dipakai
adalahdan alkali.

9
 4. Delignifikasi dengan larutan NaOH.
5. Delignifikasi menggunakan cairan ionik, yaitu delignifikasi menggunakan garam
yang berwujud cair di bawah suhu 100 C. Contoh cairan ionik kolin klorida
(Trimethyl(2- hydroxyethyl) ammonium chloride).

Tujuan dari proses delignifikasi yaitu untuk menghilangkan lignin, juga dapat
mengurangi kristalinitas selulosa, dan meningkatkan porositas bahan. Selain lignin terdapat
juga zat non selulosa lain seperti zat ekstraktif, tanin dan resin yang melekat kuat pada
selulosa. Lignin merupakan salah satu bagian yang mengayu dari tanaman seperti janggel,
kulit keras, biji, bagian serabut kasar, akar, batang dan daun. Lignin mengandung substansi
yang kompleks dan merupakan suatu gabungan beberapa senyawa yaitu karbon, hidrogen
dan oksigen. Selain lignin, bagian yang lain dari ampas tebu adalah selulosa. Selulosa
merupakan polisakarida yang didalamnya mengandung zat-zat gula. Dalam pembuatan
etanol dari ampas tebu yang digunakan adalah selulosanya sehingga lignin dalam kayu harus
dihilangkan. Proses pemisahan atau penghilangan lignin dari serat-serat selulosa disebut
delignifikasi atau pulping (Maulida, 2016).
2.9 Solid Fermentation
Solid State Fermentation (SSF) merupakan salah satu metode fermentasi, dimana
mikroorganisme yang tumbuh pada substrat padat dengan kadar air yang rendah. Metode ini
cocok untuk golongan jamur berfilamen.Substrat yang digunakan umumnya terdiri dari
produk sampingan nabati atau berasal dari limbah pertanian seperti beet pulp, dedak
gandum, bagase tebu, sekam padi dan limbah kulit nanas. Substrat yang digunakan dalam
SSF biasanya merupakan senyawa yang tidak larut dalam air, dan mengandung komponen
penting seperti C dan N. Komponen tersebut digunakan sebagai sumber nutrisi untuk
menghasilkan metabolit yang diinginkan. Dalam SSF substrat padat tidak hanya
menyediakan nutrient bagi kultur tetapi juga sebagai tempat penyimpanan air untuk sel
mikroba.Faktor utama yang mempengaruhi sintesis mikroba dalam sistem SSF meliputi;
pemilihan substrat yang cocok, jenis mikroorganisme, ruang antar partikel dan luas
permukaan substrat, kadar air substrat, kontrol suhu fermentasi, kebutuhan O2 dan lama
fermentasi (Dwi, 2015).

10
2.10 Submerged Fermentation
Submerged Fermentation (SmF) merupakan salah satu metode fermentasi dengan
menggunakan substrat cair. Penambahan maupun penggantian nutrisi dalam media
Submerged Fermentation (SmF) berjalan kontinyu. Teknik fermentasi ini paling cocok untuk
mikroorganisme seperti bakteri yang membutuhkan kadar air yang tinggi (Dwi, 2015).
2.11 Fungsi Reagen
1. NaOH
Memisahkan hemiselulosa dan lignin dari selulosa dan melunakkan Kristal selulosa.
2. Glukosa, NaCl, KH2PO4, CaCL2, urea dan MgSO4
Sebagai sumber nutrient dan mineral Aspergillus niger pada saat fermentasi

11
tebu yang dipotong kecil

BAB III
METODOLOGI PERCOBAAN
3.1 Rancangan Praktikum
3.1.1 Skema Rancangan Praktikum
Perendaman dalam larutan NaOH

Gambar 3.1.Skema rancangan praktikum

3.1.2 Variabel Operasi
a. Variabel tetap
Konsentrasi NaOH: 0,7 M
a.Sumber : Ampas tebu
T = 90C
b.Jenis garam : NaCl
t = 1 jam
c.Waktu Sentrifugasi : 20 menit
d.Kecepatan sentrifugasi : 2500 rpm
e.Konsentrasi substrat : 1% CMC w/v basis 100 ml
b. Variabel berubah
a. Rasio sampel : air : 3%w/v variable 1, 2 dan 4
8%w/v variable 3
b. pH : 7 ( variable 1, 3 dan 4)
9 (variable 2)

3.2 Bahan dan Alat

Bahan
T =a.110C
Ampa tebu 50 gr
t = 1 malam
b. glukosa 10 gr/l
c. NaCl 1gr/l
d. KH2PO4 2 gr/l
e. MgSO4 1,7 gr/l
f. CaCl2 0,2 gr/l
g. NaOH 0,7 M(variabel 1,2,3)
Pengeringan
h. Aquadest secukupnya
i. Urea 0,5 gr
Alat
a. Beaker Glass f. Termometer
b. Centrifuge g. Gelas Ukur
c. Kertas Saring h. Stopwatch

12
 Rasio sampel-air: 3 % b/v, 3% b/v, 8% b/v, 3% b/v
pH: 7, 9d., 7,
Magnetic
7 Stirer i. Timbangan
Larutane.starter: 20%Penghisap
Erlenmeyer v j. Kompor Listrik
Urea: 0,5 gr; 0,5 gr; 0,5 gr; 0,5 gr
t = 1 malam

3.3 Gambar Alat

Gambar 3.3 Centrifuge Gambar 3.4 Kertas saring t =Beaker

Gambar 3.2 20 menit
Glass
= 2500 rpm

Gambar 3.6 Erlenmeyer

Gambar 3.5 penghisap
Stirer
3.7 Thermometer

Gambar 3.8 Gelas Ukur Gambar 3.9 Stopwatch Gambar 3.10 Timbangan

Glukosa 10 gr
NaCl 1 gr/L, KH2PO4 2 gr/L, CaCl2 0,2 gr/L, M
t inkubasi = 1 ma

Gambar 3.11 Kompor Listrik

13
 Pemisahan dengan sentrifug

3.4 Prosedur Praktikum

3.4.1 Persiapan Bahan Baku
a. Potong ampas tebu sampai ukurannya kecil menggunakan gunting, lalu 50 gram
masukkan dalam beaker glass Fe
b. Variabel 1, 2, 3 direndam kedalam larutan NaOH 0,7 M, kemudian dipanaskan pada
suhu 90C selama 1 jam sedangkan variabel 4 tidak direndam NaOH.
c. Setelah itu keringkan menggunakan oven pada suhu 110C dan didiamkan selama
1malam.

3.4.2 Pembuatan Starter

a. Media inokulum dibuat dengan cara menyiapkan 200 ml larutan media dalam
erlenmeyer. Media terdiri dari 10 gr/L glukosa, 1 gr/L NaCl, 2 gr/L KH 2PO4, 0,2 gr/L
CaCl2, 1,7 gr/L MgSO4 dan Aspergillus Niger ditambahkan kedalam campuran lalu
tutup dengan menggunakan alumunium foil.
b. Starter diinkubasi menggunakan shaker pada temperaturnya ruangan selama 1 malam.

3.4.3 Fermentasi
a. Sampel dicampur menggunakan air dengan rasio sampel-air 3%w/v untuk variable 1,
2 dan 4 serta 8%w/v untuk variable 3 kemudian diaduk.
b. Atur pH larutan menjadi 7 untuk variabel 1, 3 dan 4 serta 9 untuk variabel 2.
c. Tambahkan starter sebanyak 20 ml kedalam larutan dan urea sebanyak 0,5 gr untuk
tiap sampel lalu ditutup menggunakan kapas.
d. Fermentasi dilakukan secara aerob selama 1 malam pada shaker.

3.4.4 Analisa Hasil

a. Hasil dari fermentasi di sentrifugasi pada kecepatan 2500 rpm sealam 20 menit.
b. Kemudian disaring menggunakan pompa vakum dan diperoleh filtratnya (Crude
enzim)
c. Filtrat yang diperoleh sebaanyak 16 ml dicampur dengan CMC sebanyak 16 ml.
d. Kemudian campuran tersebut diinkubasi selama (10, 20, 30, 40) menit
e. Sebelum dan setelah inkubasi lakukan uji kadar glukosa pada sampel

3.4.5 Uji Kadar Glukosa

a. Membuat larutan glukosa standar dengan melarutkan 1.25 gram glukosa dalam 500 ml
aquadest. Standardisasi glukosan standar dengan mencampur 5 ml glukosa standar
dengan 5 ml fehling A dan 5 ml fehling B. Campuran ini kemudian dipanaskan 60C-
70C dan dititrasi dengan larutan glukosa standar sampai warna biru hampir hilang.

14
 Kemudian ditambah 2 tetes MB (methylen blue) dan dilanjutkan titrasinya sampai warna
merah bata. Mencatat kebutuhan titran (F).
b. Sebanyak 5 ml sampel diencerkan menjadi 25 ml, kemudian diambil 5 ml sampel yang
telah diencerkan, ditambahkan 5 ml fehling A, 5 ml fehling B,
dan 5 ml glukosa standar. Campuran ini kemudian dipanaskan pada suhu 60C- 70 oC dan
dititrasi dengan larutan glukosa standar sampai warna biru hampir hilang. Kemudian
ditambah 2 tetes MB dan dilanjutkan titrasinya sampai warna merah bata. Mencatat
kebutuhan titran (M) dan kadar glukosa dihitung dengan persamaan berikut :
V V
( FM ) x total x pengenceran
V titrasi V diambil
C= x 2,5
V total
C 1unit
Aktivitas Enzim= x
T 1 mol
dimana:
C = Konsentrasi glukosa per mL ekstrak enzim
T = Waktu inkubasi (menit)
1 unit enzim = besarnya aktivitas enzim yang dibutuhkan untuk membebaskan 1 mol
glukosa per menit per mL enzim

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Pengaruh Waktu Inkubasi Terhadap Aktivitas Enzim

Berdasarkan hasil praktikum, didapatkan data percobaan pada tiap variabel seperti yang
disajikan pada tabel 4.1 dan grafik 4.1 sebagai berikut.

15
Tabel 4.1 Data aktivitas enzim dan kadar glukosa pada tiap variabel diberbagai waktu
Waktu Kadar Glukosa Aktivitas Enzim
Variabel
(menit) (mg/ml) (Unit/ml.menit)
10 6,50 3,61

20 7,00 1,94
1
30 7,25 1,34

40 7,50 1,04

10 2.25 1,25
20 3,00 0,83
2
30 3,00 0,56
40 3,75 0,52
10 6,00 3,33

20 6,50 1,81
3
30 7,25 1,34

40 7,50 1,04

10 5,75 3,19

20 5,75 1,60
4
30 6,25 1,16
40 6,50 0,90
6.00
5.00
4.00
Variabel 1
Aktivitas Enzim (Unit/ml.menit) 3.00
Variabel 2
2.00
Variabel 3
1.00 Variabel 4
0.00
0 10 20 30 40
Waktu (Menit)

16
 Gambar 4.1 Grafik pengaruh waktu inkubasi terhadap aktivitas enzim
Berdasarkan gambar 4.1, dapat dilihat bahwa aktivitas enzim semakin menurun seiring
lamanya waktu inkubasi. Pada variabel 1 aktivitas enzim pada waktu inkubasi 10 menit
adalah sebesar 3,61 unit/ml.menit. Kemudian menurun pada waktu inkubasi 20 menit (1,94
unit/ml.menit), 30 menit (1,34 unit/ml.menit) dan 40 menit (1,04 unit/ml.menit). Hal ini juga
terjadi pada variabel 2, pada waktu inkubasi 10 menit aktivitas enzim adalah sebesar (5,42
unit/ml.menit), 20 menit (2,92 unit/ml.menit), 30 menit (1,94 unit/ml.menit) dan 40 menit
(1,56 unit/ml.menit). Pada variabel 3, saat waktu inkubasi 10 menit aktivitas enzim sebesar
3,33 unit/ml.menit kemudian menurun saat 20 menit (1,81 unit/ml.menit), 30 menit (1,34
unit/ml.menit) dan 40 menit (1,04 unit/ml.menit). Pada variabel 4, pada waktu inkubasi 10
menit aktivitas enzim adalah sebesar 3,19 unit/ml.menit kemudian menurun saat waktu
inkubasi 20 menit (1,60 unit/ml.menit), 30 menit (1,16 unit/ml.menit) dan 40 menit (0,90
unit/ml.menit).
Berdasarkan paparan data diatas, fenomena yang terjadi pada variabel 1 adalah aktivitas
enzim yang menurun seiring dengan lamanya waktu inkubasi. Begitu pula dengan fenomena
yang terjadi pada variabel 2, 3 dan 4. Dapat disimpulkan bahwa lamanya waktu inkubasi
berbanding terbalik dengan aktivitas enzim. Hal ini dapat terjadi karena enzim merupakan
protein yang sensitif terhadap kerusakan akibat paparan lingkungannya. Paparan tersebut
antara lain suhu, cahaya, dan bahan kimia yang berinteraksi dengan enzim. Faktor tersebut
akan memberikan efek kerusakan yang berbanding lurus dengan lamanya interaksi dengan
enzim. Semakin lama terkena paparan tersebut maka struktur enzim yang terdapat pada
lingkungan tersebut akan semakin banyak yang rusak, sehingga nilai aktivitasnya menurun
(Adam, 2013).
Fenomena pada praktikum kali ini sesuai dengan jurnal yang menyatakan bahwa aktivitas
enzim berbanding terbalik dengan lamanya waktu inkubasi sampel. Jadi aktivitas enzim
maksimal terjadi ketika waktu inkubasi berlangsung selama 10 menit.
4.2 Pengaruh Perendaman Bahan Baku (Proses Delignifikasi) terhadap Aktivitas Enzim
Tabel 4.2 Pengaruh proses delignifikasi terhadap aktivitas enzim
Waktu Kadar Glukosa Aktivitas Enzim
Variabel
(menit) (mg/ml) (Unit/ml.menit)
1 10 6,50 3,61
20 7,00 1,94

17
 30 7,25 1,34

40 7,50 1,04

10 5,75 3,19

20 5,75 1,60
4
30 6,25 1,16

40 6,50 0,90

4.00
3.50
3.00
2.50
Aktivitas Enzim (Unit/ml.menit) 2.00

Variabel 1 1.50 Variabel 4

1.00
0.50
0.00
5 10 15 20 25 30 35 40 45

Waktu (Menit)

Gambar 4.2 Grafik pengaruh proses delignifikasi terhadap aktivitas enzim

Berdasarkan gambar 4.2, pada variabel 1 aktivitas enzim ketika 10 menit waktu inkubasi
adalah sebesar 3,61 unit/ml.menit kemudian menurun ketika waktu inkubasi 20 menit (1,94
unit/ml.menit), 30 menit (1,34 unit/ml.menit) dan 40 menit (1,04 unit/ml.menit). Pada
variabel 4, aktivitas enzim ketika 10 menit waktu inkubasi adalah sebesar 3,19unit/ml.menit
kemuadian juga menurun ketika waktu inkubasi 20 menit (1,60 unit/ml.menit), 30 menit
(1,16 unit/ml.menit) dan 40 menit (0,90 unit/ml.menit).
Variabel 1 adalah variabel yang diberi perlakuan delignifikasi (perendaman ampas tebu
menggunakan NaOH) sedangkan variabel 4 tidak diberi perlakuan tersebut. Aktivitas enzim
pada variabel 1 selalu lebih tinggi dibanding variabel 4 tiap waktu inkubasi. Hal ini
disebabkan karena pada variabel 4 tidak dilakukan proses delignifikasi. Delignifikasi adalah
proses mengubah struktur kimia biomasa berlignoselulosa dengan tujuan mendegradasi
lignin secara selektif sehingga menguraikan ikatan kimianya pada bahan berlignoselulosa.
Adanya lignin di sekeliling selulosa merupakan hambatan utama dalam menghidrolisis
selulosa. Selulosa terproteksi dari degradasi dengan adanya lignin. Selulosa tidak dapat
dihidrolisis kecuali lignin dilarutkan dan dihilangkan. Dengan adanya proses delignifikasi,

18
 maka enzim selulase yang terisolasi semakin banyak, sehingga aktivitas enzim yang
dihasilkan semakin besar (Luciasih, 2013).
Berdasarkan hasil praktikum didapatkan hasil yang sesuai dengan referensi (jurnal) yang
menyatakan bahwa proses delignifikasi meningkatkan aktivitas enzim selulose. Hal tersebut
dikarenakan karena lignin yang terdapat pada ampas tebu menghambat hidrolisis selulosa.

4.3 Pengaruh pH terhadap Aktivitas Enzim

Tabel 4.3 Pengaruh pH terhadap aktivitas enzim
Waktu Kadar Glukosa Aktivitas Enzim
Variabel
(menit) (mg/ml) (Unit/ml.menit)
10 6,50 3,61

20 7,00 1,94
1
30 7,25 1,34

40 7,50 1,04

10 2.25 1,25
20 3,00 0,83
2
30 3,00 0,56
40 3,75 0,52

4.00
3.50
3.00
2.50
Aktivitas Enzim (Unit/ml.menit) 2.00
1.50 Variabel 1
1.00 Variabel 2
0.50
0.00
0 10 20 30 40

Waktu (Menit)

Gambar 4.3 Grafik hubungan pH terhadap aktivitas enzim

Berdasarkan data hasil praktikum yang disajikan pada gambar 4.3 dan table 4.3, aktivitas
enzim variabel 1 pada waktu inkubasi 10 menit adalah sebesar 3,61 unit/ml.menit, 20 menit
sebesar 1,94 unit/ml.menit, 30 menit sebesar 1,34 unit/ml.menit dan ketika 40 menit adalah
sebesar 1,04 unit/ml.menit. Pada variabel 2 didapatkan data aktivitas enzim saat waktu
inkubasi 10 menit adalah sebesar 1,25 unit/ml.menit, 20 menit sebesar 0,83 unit/ml.menit, 30
menit sebesar 0,56 unit/ml.menit dan saat 40 menit adalah sebesar 0,52 unit/ml.menit.

19
 Variabel 1 adalah variabel yang pH larutannya diatur sebesaar 7, sedangkan variabel 2 pH
larutannya diatur sebesar 9. Fenomena yang terjadi adalah aktivitas enzim variabel 1 lebih
besar dari variabel 2 tiap lamanya waktu inkubasi seperti yang terlihat pada grafik gambar
4.3. Enzim selulase diperoleh dari hasil fermentasi ampas tebu menggunakan bantuan bakteri
Apergillus niger. Aspergillus niger menghasilkan enzim selulosa secara maksimal pada
kondisi pH sebesar 4,5-5,5. Pengaruh pH pada aktivitas enzim disebabkan oleh terjadinya
perubahan tingkat ionisasi pada enzim atau substrat akibat perubahan pH. Aktivitas selulase
cenderung lebih aktif pada suasana asam sedang karena pada asam yang terlalu tinggi atau
terlalu rendah selulase mengalami penurunan afinitasnya.(Irawadi dalam Surhaini, 2012).
Berdasarkan hasil praktikum diperoleh hasil yang sesuai dengan referensi yang
menyatakan bahwa aktivitas enzim selulose dapat berjala optimum pada pH asam. Ketika pH
dari larutan adalah basa maka akan menurunkan aktivitas enzim karena enzim mengalami
denaturasi.

4.4 Pengaruh Rasio Air terhadap Aktivitas Enzim

Tabel 4.4 Pengaruh rasio air terhadap aktivitas enzim

Waktu Kadar Glukosa Aktivitas Enzim
Variabel
(menit) (mg/ml) (Unit/ml.menit)
10 6,50 3,61

20 7,00 1,94
1
30 7,25 1,34

40 7,50 1,04

10 6,00 3,33

20 6,50 1,81
3
30 7,25 1,34

40 7,50 1,04

20
 4.00
3.50
3.00
2.50
Aktivitas Enzim (Unit/ml.menit) 2.00
Variabel 1
1.50
Variabel 2
1.00
0.50
0.00
0 10 20 30 40 50

Waktu (Menit)

Gambar 4.4 Grafik hubungan waktu inkubasi terhadap aktivitas enzim

Pada variabel 1, rasio sampel dengan air yang digunakan sebesar 3% w/v. Sedangkan
pada variabel 3, rasio sampel dengan air yang digunakan sebesar 8%v. Perbedaan konsentrasi
sampel yang digunakan tentu berpengaruh pada aktivitas enzim. Berdasarkan hasil praktikum,
pada t=10 menit, aktivitas enzim variabel 1 sebesar 3,61 unit/mL.menit, sedangkan variabel 3
sebesar 3,33 unit/mL.menit. Pada t=20 menit, aktivitas enzim variabel 1 sebesar 1,94
unit/mL.menit, sedangkan variabel 3 sebesar 1,81 unit/mL.menit. Pada t=30 menit, aktivitas
enzim variabel 1 dan variable 3 adalah sama yaitu sebesar 1,34 unit/mL.menit.Pada t=40
menit, aktivitas enzim variabel 1 dan variable 3 juga sama yaitu sebesar 1,04 unit/mL.menit.
Berdasarkan hasil praktikum, aktivitas enzim variabel 1 lebih tinggi dibandingkan
variabel 3 saat lama waktu inkubasi 10 dan 20 menit. Sedangkan saat waktu inkubasi 30 dan
40 menit aktivitas enzim variabel 1 dan variabel 3 sama. Hal ini disebabkan karena sifat
enzim yang sensitive terhadap lingkungan sekitar. Jika lingkungan saat enzim bekerja tidak
mendukung, maka enzim akan mengalami denaturasi sehingga menyebabkan penurunan
aktivitas enzim .
Menurut Susanti (2011), konsentrasi substrat sebanding dengan aktivitas ekstrak kasar
enzim. Pada konsentrasi tendah, aktivitas juga rendah karena sisi aktif enzim hanya sedikit
mengikat substrat sehingga gula pereduksi yang dihasilkan sedikit. Demikian pula dengan
konsentrasi substrat yang semakin tinggi, maka sisi aktif enzim akan banyak mengikat
substrat dan produksi gula pereduksi yang dihasilkan juga makin banyak. Jadi dapat

21
 disimpulkan bahwa pada praktikum kali ini, hasil yang didapatkan tidak sesuai dengan
referensi.

BAB V
PENUTUP

5.1 Kesimpulan
1. Besarnya aktivitas enzim berbanding terbalik dengan lamanya waktu inkubasi. Semakin
lama waktu inkubasi, maka aktivitas enzim semakin menurun.
2. Dengan adanya proses delignifikasi, maka proses hidrolisis selulosa dari ampas kelapa
semakin optimal, sehingga aktivitas enzim selulase semakin besar.
3. Enzim selulase dapat bekerja optimum pada pH yang cenderung asam. Maka jika pH
larutan semakin tinggi (basa) maka enzim akan mengalami denaturasi yang menyebabkan
aktivitas enzimnya menurun.
4. Semakin tinggi konsentrasi substrat maka semakin tinggi aktivitas enzim yang dihasilkan.
Sebaliknya, jika semakin tinggi konsentrasi air maka aktivitas enzim akan semakin
menurun.
5.2 Saran
Enzim merupakan salah satu jenis protein, yang sensitif terhadap suhu tinggi. Maka dari itu
pada waktu pemanasan, seharusnya dilakukan pada suhu optimum, agar tidak terjadi
denaturasi protein.

22
 DAFTAR PUSTAKA

Dwi. 2015. Invertase dari Aspergillus niger dengan Metode Solid State Fermentation Dan
Aplikasi Di Industri: Kajian Pustaka. Jurnal Pangan dan Agroindustri Vol. 3 No 4
p.1405-1411
Fessenden, R.J. and J.S. Fessenden. 1994. Kimia Organik. Jilid 2. Edisi 3. Alih bahasa oleh
Aloysios H.P. Erlangga. Jakarta.
Husin. 2007. Pemanfaatan Limbah Untuk Bahan Bangunan .Diakses dari
http://www.kimpraswil.go.id/balitbang/puskim/Homepage%20Modul
%202003/modulc1/MAKALAH%20C1_3.pdf pada tanggal 11 Maret 2017.
Ida. 2011. Delignifikasi Ampas Tebu Dengan Larutan Natrium Hidroksida Sebelum Proses
Sakaraifikasi Secara Enzimatis Menggunakan Enzim Selulase Kasar Dari Aspergillus
Niger Fnu 6018. Lipi press 2011 volume 34.
Indriyani, Y. H. dan E. Sumiarsih. 1992. Pembudidayaan Tebu di Lahan Sawah dan Tegalan.
Penebar Swadaya. Jakarta
Irawati, D., Azwar, N.R. Syafii, W. & Artika, I.M.(2009). Pemanfaatan Serbuk Kayu untuk
Produksi Etanol dengan Perlakuan Pendahuluan Delignifikasi Menggunakan Jamur .
Phanerochaete chrysosporium Jurnal Ilmu Kehutanan, III (1), 13 - 22.
Jobsheet.2012. Petunjuk Praktikum Satuan Operasi 1.Palembang : Jurusan Teknik Kimia
Politeknik Negeri Sriwijaya
Lehninger, A.L. 2005. Dasar-Dasar Biokimia. Erlangga. Jakarta.
Lucas, 1949.Principles And Practice In Organic Chemistry. New York : Jhon Willey And Sons,
Inc.
Marison, I.W. 1988.Biotechnology for Engineers: Biological Systems in Technological
Processes.halaman 94-119. John Wiley & Sons.
Martoharsono and Soeharsono. 2006. Biokimia Jilid I. UGM Press. Yogyakarta.
Poedjiadi.1994. Dasar-dasar Biokimia. UI Press: Jakarta.
Prihatiningrum. AE. 2002. Pengaruh Pengaturan Suhudan Macam Bakteri Terhadap Hidrolisis
Limbah Padat Pabrik Gula, Berkala Penelitian Hayati.PBI:Jawa Timur.

23
 Roni. 2013. Makalah Tentang Enzim. Diakses dari http://www.mentari-
dunia.com/2013/02/makalah-tentang-enzim.html pada tanggal 11 Mei 2017.
Sadikin, Mohamad. 2002. Biokimia Enzim. Jakarta : Widya Medika
Satria.2016. Proses Delignifikasi dan Hidrolisis Lignoselulosa Ampas Tebu Menggunakan
Sistem Cairan Ionik Kolin Klorida. Diakses dari http://
http://repository.usu.ac.id/handle/123456789/62324 pada tanggal 11 Mei 2017.
Soedigdo, P., L.S.Nio, A. Soekeni,R.C.Barnett, (1970), Cellulasefrom The Snail Achatinafulica
(Fer), Physial Zoology,43,2,139-144
Sridianti, 2016. Ciri-ciri Enzim. Diakses pada tanggal 1 Mei 2016 dari
http://www.sridianti.com/pengertian-karakteristik-enzim.html.
Suhara.2010. Pengantar Tentang Enzim. Diakses dari http://file.upi.edu/Direktori pada tanggal
11 Mei 2017
Winarno, F.G. 2002. Kimia Pangan dan Gizi. PT. Gramedia Pustaka Utama. Jakarta.
Wirahadikusumah, M. 2001. Biokimia: Protein, Enzim dan Asam Nukleat. ITB Press.
Bandung.Zely.2014.
Yanti. 2010. Pertumbuhan Dan Pengendalian Mikroorganisme II. Diakses dari
http://file.upi.edu/Direktori/FPMIPA/JUR._PEND._BIOLOGI/196611031991012-
YANTI_HAMDIYATI/Pertumbuhan_pada_mikroorganisme_II.pdf pada tanggal 11 Mei
2017

LEMBAR PERHITUNGAN

A. LEMBAR PERHITUNGAN REAGEN

1. Kebutuhan NaOH 0,7 M (bahan baku (gr) : larutan NaOH = 1 : 15)

24
 Bahan baku = 50 gram larutan NaOH = 750 ml
1 gram/ Mr
M=
L
massa( gram)/ Mr massa/40
0,5= =
volume ( Liter) 0,75
massa=0,5 x 0,75 x 40=15 gram

2. Kebutuhan nutrien (basis volume starter 200 ml)

10 gram
Glukosa = x 0,2 L=2 gram
L
1 gram
NaCl = x 0,2 L=0,2 gram
L
2 gram
KH2PO4 = x 0,2 L=0,4 gram
L
0,2 gram
CaCl2 = x 0,2 L=0,04 gram
L
1,7 gram
MgSO4 = x 0,2 L=0,34 gram
L
Larutan CMC (basis 100 ml)
gr
1 % b/v 0,01 x 100 ml = 1 gram
ml

3. Kebutuhan bahan baku yang dicampur ke air (basis 100 ml)

Variabel 1
gr
3% b/v 0,03 x 100 ml = 3 gram
ml
Variabel 2
gr
3 % b/v 0,03 x 100 ml = 3 gram
ml
Variabel 3
gr
8 % b/v 0,08 x 100 ml = 8 gram
ml
Variabel 4
gr
3 % b/v 0,03 x 100 ml = 3 gram
ml
4. Volume starter yang ditambahkan
Variabel 1, 2, 3 dan 4
20 % v 0,2 x 100 ml = 20 ml @variabel

B. LEMBAR PERHITUNGAN HASIL PERCOBAAN

25
 1
Mencari nilai C sebelum inkubasi
.
Variabel 1 Variabel 3
V total V pengenceran V total V pengenceran
( FM ) x x ( FM ) x x
V titrasi V diambil V titrasi V diambil
C' = x 2,5 C' = x 2,5
V total V total

100 25 100 25
( 25,120 ) x x ( 25,121 ) x x
' 5 5 ' 5 5
C= x 2,5 C= x 2,5
100 100
' '
C = 12,75 C =10,25

Variabel 2 Variabel 4
V total V pengenceran V total V pengenceran
( FM ) x x ( FM ) x x
' V titrasi V diambil ' V titrasi V diambil
C= x 2,5 C= x 2,5
V total V total

100 25 100 25
( 25,122 ) x x ( 25,121.5 ) x x
' 5 5 ' 5 5
C= x 2,5 C= x 2,5
100 100
C' =7,75 C' =9

2
Mencari nilai C setelah inkubasi
.
Pada t = 10 menit
Variabel 1 Variabel 3
V V V total V pengenceran
( FM ) x total x pengenceran ( FM ) x x
V titrasi V diambil V titrasi V diambil
C' = x 2,5 C' = x 2,5
V total V total

100 25 100 25
( 2825,5) x x ( 2826,3 ) x x
5 5 5 5
C' = x 2,5 C' = x 2,5
100 100
C' =6,25 C' =4,25

Variabel 2 Variabel 4
V V V total V pengenceran
( FM ) x total x pengenceran ( FM ) x x
V titrasi V diambil V titrasi V diambil
C' = x 2,5 C' = x 2,5
V total V total

100 25 100 25
( 2825,8 ) x x ( 2826,7 ) x x
' 5 5 ' 5 5
C= x 2,5 C= x 2,5
100 100
' '
C =5,5 C =3,25
26
LAMPIRAN-LAMPIRAN

27