Abstrak

Carob telah banyak ditanam di wilayah Mediterania untuk waktu yang lama. Itu
hanya dianggap sebagai Pohon hutan dan telah terbengkalai untuk keuntungan
ekonomis lainnya. Namun, dalam beberapa tahun terakhir, buah ini memiliki
Mendapat perhatian untuk beberapa aplikasi. Karena minyak bumi telah habis,
produksi energi terbarukan Telah mulai mendapat perhatian di seluruh dunia;
Termasuk produksi etanol dari kurang dimanfaatkan Produk pertanian seperti carob.
Dalam proyek ini, kondisi ekstraksi optimum adalah .Ditentukan untuk buah carob
dengan menggunakan metode surface design response. Ekstrak yang diperoleh
adalah Digunakan untuk produksi etanol dengan menggunakan fermentasi
Saccharomyces cerevisiae yang ditangguhkan. Efeknya Berbagai parameter
fermentasi seperti pH, kandungan media dan ukuran inokulum dievaluasi untuk
etanol
Fermentasi dalam ekstrak carob. Juga, untuk menentukan nitrogen yang sesuai
secara ekonomi
Sumber, empat sumber nitrogen yang berbeda dievaluasi. Kondisi ekstraksi optimal
untuk carob
Ekstrak ditentukan menjadi 80 C, 2 jam dalam tingkat pengenceran 1: 4 (buah:
rasio air) sesuai hasilnya
Analisis permukaan respons (115,3 g / L). Bila fermentasi dengan pH 5,5
diaplikasikan, etanol akhir
Konsentrasi dan tingkat produksi masing-masing 42,6 g / L dan 3,37 g / L / jam,
yang lebih tinggi
Daripada menggunakan pH yang tidak terkontrol. Di antara ukuran inokulum 1%,
3%, dan 5%, 3% ditentukan sebagai yang terbaik. Ukuran inokulum Tingkat produksi
maksimum dan konsentrasi etanol akhir adalah 3,48 g / L / jam dan
44,51%, masing-masing, dengan sumber nitrogen alternatif dari makanan daging-
tulang. Secara keseluruhan, penelitian ini menyarankan
Ekstrak carob yang bisa dimanfaatkan untuk produksi etanol guna memenuhi
kebutuhan
energi terbarukan.

pengantar
Carob, yang telah banyak ditanam di wilayah Mediterania, Milik subfamili
Caesalpinaceae dari keluarga Leguminoseae (Battle and Tous, 1997; Yousif dan
Alghzawi, 2000). Saya tTidak bisa dimanfaatkan lebih dari sekedar pohon, misal,
sudah terbengkalai Untuk pemanfaatan alternatif Namun, dalam beberapa tahun
terakhir, memang sudah Telah digunakan di industri makanan dan dengan demikian
menarik perhatian Produsen karena kenaikan nilai pasar. Dibandingkan dengan
Buah lainnya, produksinya (terbatas pada negara-negara Mediterania Seperti Turki,
Spanyol, Italia, Portugal, Maroko, dan Yunani)
Membawa kesulitan untuk memenuhi permintaan nasional dan internasional (Battle
dan Tous, 1997). Beberapa produk dihasilkan dari Biji dan polong carob, dan
kepentingan ekonomi hasil panen
Dari penggunaan, oleh industri, getah kacang polong yang diperoleh Dari biji Jambu
carob telah lama digunakan sebagai pakan Konsumsi ternak dan manusia, termasuk
permen, biskuit, dan Pati, gula, atau selulosa dengan mikroorganisme seperti
Saccharomyces Cerevisiae dan Zymomonas mobilis. Jagung secara tradisional
Menjadi tanaman utama yang digunakan untuk produksi etanol. Namun,
Tanaman potensial lainnya perlu dievaluasi untuk lingkungan, sosial, Dan produksi
etanol secara ekonomis. Yang paling umum Biomassa yang digunakan untuk
produksi etanol adalah jagung, tebu,
Atau gandum Lain termasuk biji-bijian, whey keju, dan limbah dari Minuman,
brewery, dan industri anggur (NESEA, 2002). Di seluruh dunia, Sekitar 12 miliar
galon etanol diproduksi pada tahun 2005. Keduanya Produsen etanol utama adalah
Brasil dan Amerika Serikat, masing-masing Terhitung sekitar 35 persen dari produksi
global (USDA, 2006). Ada beberapa penelitian tentang produksi etanol Dari ekstrak
carob pod. Roukas (1993a) menyelidiki produksi Etanol dari ekstrak polong carob
oleh S. cerevisiae secara statis Dan goyang termal fermentasi dan melaporkan
konsentrasi maksimal Etanol (75 g / L), bila fermentasi goyang goyang itu
Digunakan dengan konsentrasi gula awal 200 g / L. Roukas (1995) meneliti produksi
etanol dari polong carob Ekstrak dengan sel S. cerevisiae yang tidak bergerak pada
mineral kissiris. Itu Kondisi optimum untuk fermentasi ekstrak carob adalah pH 3,5-
6,5, suhu 30 C, dan konsentrasi gula awal 250 g / L Konsentrasi etanol maksimum
(64,5 g / L), etanol Hasil (28,3%), dan pemanfaatan gula (94%) ditemukan di carob
Ekstrak polong Namun, dalam literatur belum ada Studi yang mengoptimalkan
kondisi bioreaktor untuk produksi Etanol dari ekstrak carob. Oleh karena itu,
penelitian ini dilakukan Untuk mengevaluasi kondisi ekstraksi dan parameter
fermentasi,
Seperti pH, ukuran inokulum, dan sumber nitrogen.

Metode

1). Mikroorganisme dan media

Saccharomyces cerevisiae (ATCC 36858) diperoleh dari
Koleksi Budaya Tipe Amerika (Monnos, VA). Kebudayaan itu
Tumbuh pada suhu 30 C selama 48 jam dalam media yang mengandung 50 g
glukosa,
6 g ekstrak ragi, 0,3 g CaCl2? 2H2O, 4 g (NH4) 2SO4, 1 g dari
MgSO4? 7H2O, dan 1,5 g KH2PO4 per liter air deionisasi.
Budaya disimpan pada suhu 4 C dan disubkultur dua mingguan
Untuk menjaga viabilitas. Untuk penyimpanan jangka panjang, budaya stok pun
Dipertahankan dalam gliserol 20% pada? 80 C

2). 2.2. Ekstraksi dan analisis permukaan respon

Polong carob diperoleh dari pabrik di Antalya, Turki, dan
Cincang menjadi partikel kecil (1-3 cm). Untuk mengekstrak gula
Dari polong carob, kondisi ekstraksi ditentukan oleh
Metode permukaan respon Box-Behnken (Box and Behnken, 1960)
Untuk memeriksa hubungan antara satu atau lebih variabel respon.
Kelebihan metode ini adalah berkurangnya jumlah sampel
Dan mereplikasi (12 tepi untuk tiga faktor dengan tiga tingkat;
Total 12 titik data) dan pusat ruang faktor (tengah
Titik direplikasi tiga kali; Total 12 + 3 = 15 titik data),
Sedangkan desain faktorial penuh memiliki 27 titik data (3 faktor? 3
Tingkat? 3 ulangan). Minitab (Versi 13.3; Minitab Inc., Negara Bagian
College, PA) perangkat lunak statistik digunakan untuk merancang ekstraksi terbaik
Kondisi untuk polong carob dengan memberikan minimum dan maksimal
Nilai parameter yang ditentukan (Tabel 1).

2056/5000
2.3. Media fermentasi etanol
Media fermentasi dasar (glukosa / ragi ekstrak)
Terdiri dari 50 g glukosa, 6 g ekstrak ragi, 0,3 g
CaCl2? 2H2O, 4 g (NH4) 2SO4, 1 g MgSO4? 7H2O, dan 1,5 g
KH2PO4 per liter air deionisasi. Untuk studi ekstrak carob, konsentrat carob carob tradisional,
yang disebut '' pekmez ', (Karkacier et al.,
1995). Bila buah sudah matang cukup untuk dipanen, memang sudah
91-92% total bahan kering dan 62-67% padatan terlarut total, yang
Terdiri dari sukrosa 34-42%, fruktosa 10-12% dan glukosa 7-10%
(Karkacier dan Artik, 1995).
Dalam bentuknya yang alami, konsentrat carob tidak bisa diekstraksi
Metode pers, yang biasanya digunakan dalam industri jus buah.
Oleh karena itu, polong carob kering perlu diekstraksi dengan air panas.
Setelah proses ekstraksi, masih ada 10-15% padatan terlarut,
Terutama gula, tertinggal di pomace. Karena itu, dari carob '' pekmez '
Produksi sendiri, 20.000-25.000 ton pomace tertinggal
setiap tahun. Meski carro pomace kaya dengan
Karbohidrat, protein, pektin dan mineral, jumlahnya terbatas
Digunakan sebagai pakan ternak karena aromanya yang berat. Disebabkan oleh
Kandungan mineral dan karbohidrat tinggi dari carob pomace, ekstrak,
Dan buahnya, sudah dimanfaatkan untuk produksi nilai
Menambahkan produk, terutama dengan fermentasi (Roukas, 1994).
Baru-baru ini, telah terjadi peningkatan perhatian di bidang bioenergi
Sebagai konsumsi energi dunia telah meningkat. Etanol adalah a
Energi terbarukan dengan efisiensi tinggi dan dampak lingkungan yang rendah.
Etanol adalah sumber energi terbarukan karena diproduksi
Via fermentasi mikroba dengan menggunakan karbohidrat seperti
Carob Parameter ekstraksi metode pengambilan contoh Box-Behnken.
Ekstrak digunakan sebagai medium dasar ditambah dengan semua
Bahan lainnya kecuali glukosa. Untuk mengevaluasi yang lebih irit
Sumber nitrogen, empat sumber nitrogen alternatifDigunakan sebagai pengganti ekstrak ragi
dengan konsentrasi yang sama.
2.4. Fermentasi etanol
Fermentasi etanol dilakukan di Biostat Sartitud
B Plus Bioreaktor (Allentown, PA) dengan kapal 2.5 L (volume kerja
Dari 1,5 L). Suhu dipelihara pada suhu 30 C dan agitasi
Kecepatannya 150 rpm tanpa aerasi. PH dijaga pada 5,5 dengan menggunakan
Penambahan otomatis NaOH 4 N. Semua inokulum fermentasi itu
Tumbuh selama 24 jam pada usia 30 C. Setelah inokulasi, fermentasi etanol
Dilakukan selama 48 jam sambil mengambil sampel setiap 1
Atau 2 h.

2.5. Desain eksperimental

Empat profil produksi berbeda digambarkan sebagai berikut
Dievaluasi:
1. Fermentasi etanol dilakukan dalam fermentasi garis dasar
Medium dengan inokulum 1% pada pH 5.5, 150 rpm, dan 30 C.
2. Pengaruh pH: Fermentasi etanol dilakukan di carob
Ekstrak medium dengan inokulum 1% dengan pH 5.5 atau pH
Tidak terkendali
3. Ukuran inokulum: Tiga ukuran inokulum (1%, 3%, dan 5%) digunakan untuk
Tentukan pengaruh ukuran inokulum pada produksi etanol
Dalam media ekstrak yang diberi carob.
4. Pengaruh sumber nitrogen: Untuk mengetahui pengaruh
Sumber nitrogen, empat jenis sumber nitrogen (makanan unggas
(PM), campuran lambung dan denda (HM), tepung bulu (FM) dan daging
Dan tepung tulang (MB)) digunakan sebagai pengganti ekstrak ragi di
Ukuran inokulum terbaik (inuculum 3%). Semua nitrogen alternatif
Sumbernya diperoleh dari Griffin Industries, Inc (Butler,
KY).
5. Kontrol: Ekstrak carob murni digunakan untuk produksi etanol
Dengan ukuran inokulum 3% sebagai kontrol

2.6. Analisis
Sampel diperoleh setiap 1 atau 2 jam untuk 8 jam pertama dan setiap
6 jam untuk sisa fermentasi dan dianalisis untuk residu
Gula, konsentrasi etanol serta kepadatan sel optik
Penentuan biomassa
2.7. Biomassa
Kepadatan sel optik diukur dengan menggunakan spektrofotometer
DU series 500 (Beckman, Fullerton, CA) pada 620 nm. Tidak diinokulasi
Media fermentasi digunakan sebagai blank. Penyerapan
Nilai diubah menjadi konsentrasi biomassa dengan menggunakan standar
Kurva (Y = 0,666019 * X + 0,10634, di mana Y adalah biomassa (g-kering
Biomassa / L) dan X adalah absorbansi pada 620 nm).

2.8. Etanol
Konsentrasi etanol ditentukan dengan menggunakan Waters High
Kromatografi Cair Tekanan (Millipore Corp., Milford, MA)
Dilengkapi dengan Waters Model 401 refractive index detector, kolom
Pemanas, autosampler, dan pengontrol komputer. Bio-Rad
Kolom Aminex HPX-87H (300? 7,8 mm) (Divisi Kimia Bio-Rad,
Richmond, CA) digunakan untuk memisahkan etanol dari sampel dengan
Menggunakan asam sulfat 0,012 N sebagai fase gerak pada laju aliran
0,8 ml min? 1 dengan volume injeksi 20 lL dan pada kolom 65? C
suhu. Sebelum disuntikkan, sampel disentrifugasi
(4000? G, 4? C) selama 5 menit dan disaring melalui filter 0,22 lm
(Filter cakram berdiameter 13 mm, Millipore, Bedford, MA) untuk dilepas
Partikel padat (Demirci et al., 1997).

2.9. Sisa gula

Kaldu fermentasi dianalisis dengan 3,5-dinitrosalisiklik
Asam (DNS) untuk menentukan kadar gula sisa
Seperti yang disarankan oleh Miller (1959). Secara singkat, 0,1 ml sampel dan
3,9 ml air DI dicampur dalam tabung reaksi. Setelah hidrolisis
Gula dalam 0,08 ml HCl 12 N selama 15 menit pada 90 C dan netralisasi
Dengan 0,2 ml 5 N KOH, 3 ml larutan DNSA (3,5-dinitrosalisiklik
Larutan asam) ditambahkan ke 3 ml larutan sampel dan dicampur
Baik selama 25 menit di 90 C. Perubahan warna diamati berdasarkan
Konsentrasi gula Setelah pemanasan, 1 ml kalium-natrium tartrat
Ditambahkan ke setiap tabung reaksi untuk menghasilkan stabilisasi warna
larutan. Sampel dan blank dicampur dan didinginkan ke kamar
Suhu dalam bak air. Pengukuran absorbansi pada
575 nm tercatat Kurva kalibrasi untuk spektrofotometri
Pengukuran diperoleh dengan menggunakan standar glukosa.
Keseimbangan optik larutan glukosa diukur pada
575 nm menggunakan air suling sebagai kontrol.

2.10. Analisis statistik

Semua fermentasi dan ekstraksi carob direplikasi dua
waktu. Untuk mengevaluasi perbedaan hasil yang signifikan,
Model Linear Generalized (GLM; dengan p <0,05) dan Tukey's
Perbedaan yang benar-benar signifikan (HSD) beberapa modul perbandingan
Dalam paket perangkat lunak statistik Minitab (Release 13.3, State
College, PA) digunakan.
3. Hasil dan Pembahasan
Penelitian ini dirancang tidak hanya untuk mengevaluasi potensi
Ekstrak carob untuk produksi etanol tapi juga untuk mengoptimalkan kondisi
Ekstraksi carob dan menentukan efek alternatif
Sumber nitrogen pada produksi etanol. Data yang diperoleh terungkap
Kondisi terbaik untuk ekstrak carob menggunakannya sebagai fermentasi
Media dan pengaruh sumber nitrogen, pH, dan inokulum
Ukuran pada produksi etanol.

3.1. Pengoptimalan ekstrak Carob

Optimalisasi dilakukan dengan menggunakan Box-Behnken response
Metode permukaan dalam hal suhu, waktu ekstraksi, dan pengenceran
Tingkat (rasio carob terhadap air).
3.1.1. Efek suhu pada ekstraksi
Saat suhu sistem ekstraksi meningkat, gula
Konsentrasi dalam ekstrak meningkat secara signifikan selama
Waktu 3-ekstraksi (Gambar 1). Misalnya bila dibandingkan dengan 70
Dan 90 C suhu ekstraksi untuk ekstraksi polong carob
Pada tingkat pengenceran 1: 6, dan waktu yang sama (1 jam), konsentrasi gula lebih banyak
Pada ekstrak diperoleh suhu ekstraksi 90 C
(83 g / L) dari 70 C (46 g / L). Karena itu, efek suhu
Juga tergantung pada tingkat pengenceran (Tabel 2). Ekstrak yang didapat
(103 g / L) dari tingkat pengenceran 90? C 1: 4 dan waktu yang sama (2 jam)
Table 2
Table 3

Sedikit berbeda dari 70 C (101 g / L) dalam kondisi yang sama.

Oleh karena itu, suhu ekstraksi * adalah interaksi waktu ekstraksi
Ditemukan secara statistik signifikan (p <0,05). Bisa
Terlihat dari Gambar. 1, gula residu meningkat dengan bertambah
suhu. Berdasarkan hasil tersebut, disimpulkan bahwa suhu
Memainkan peran penting dalam ekstraksi sisa gula dari
buah.

3.1.2. Efek waktu ekstraksi

Ekstraksi adalah proses kesetimbangan kontak. Bila larut
Padatan dalam ekstrak mencapai ekuilibrium, tidak ada difusi yang larut
Padatan dari bahan baku ke dalam ekstrak. Ara. Aku menunjukkan
Waktu ekstraksi itu tidak efektif dengan sendirinya, tapi juga tergantung
Pada tingkat pengenceran dan suhu secara langsung. Sedangkan ekstraksi
Waktu di tingkat rendah, efek suhu pada respon
Tidak signifikan Bila tingkat pengenceran tetap rendah, maka
Jumlah padatan terlarut dalam ekstrak lebih tinggi independen
Dari waktu. Konsentrasi ekstrak yang lebih tinggi dicapai dengan kadar yang lebih
tinggi
Suhu. Saat suhu proses meningkat,
Waktu ekstraksi menurun (Karkacier et al., 1995). Karena
Difusi padatan terlarut dari bahan baku dipengaruhi oleh suhu
(Turhan et al., 2006), waktu ekstraksi menurun dengan suhu.
Seiring waktu ekstraksi meningkat tergantung pada
Suhu, diperoleh konsentrasi gula pada ekstrak tersebut
Umumnya yang tertinggi (110 g / L). Pada Gambar. 1, dapat dilihat bahwa
Konsentrasi gula residu dipengaruhi secara berbeda oleh
waktu. Menurut hasil, waktu ekstraksi itu signifikan
(P <0,05), yang dipengaruhi oleh waktu pengenceran * tingkat pengenceran
(Tabel 2).

3.1.3. Pengaruh laju pengenceran pada ekstraksi

Menurut semua parameter ekstraksi, suhu waktu
Interaksi untuk ekstraksi signifikan (p <0,05). Konsentrasi gula Mencapai tingkat
kesetimbangan tergantung suhu
dan waktu. Itu bisa dilihat dari Gambar. 1 bahwa gula sisa
Konsentrasi menurun secara bertahap dengan meningkatnya pengenceran
menilai. Dengan kata lain, ketika tingkat pengenceran rendah digunakan untuk
Ekstraksi, konsentrasi gula dalam ekstrak mencapai ekuilibrium
Dalam waktu yang lebih singkat (Tabel 2). Konsentrasi gula terendah
(42 g / L) diperoleh dari tingkat pengenceran 1: 9 pada suhu 80 C dan 1 jam.
Sebaliknya, konsentrasi gula tertinggi diperoleh dari
Tingkat pengenceran 1: 4 pada suhu 80 C dan 1 jam. Oleh karena itu, data ini menunjukkan
Tingkat pengenceran adalah salah satu parameter penting untuk ekstraksi.
Seperti ditunjukkan oleh grafik model pada Gambar. 1, konsentrasi
Gula residu dalam ekstrak memiliki maksimum pada tingkat pengenceran 1: 4
(115,3 g / L).

3.1.4. Pemodelan permukaan respon

Sebuah model permukaan respon kuadrat penuh dikembangkan. Variabel
Yang digunakan dalam model adalah suhu (? C), waktu (h) dan pengenceran
Rate (w / v). Model permukaan respon dihasilkan dengan menggunakan
Minitab dengan unit uncoded dan persamaan regresi berikut
Diperoleh.
Konsentrasi gula sisa dalam ekstrak carob: b0 + b1T + b2t +
B3D + b22t2 + b12Tt + b13TD + b23tD + e.
Dimana, e = Error dan b0, b1, b2, b3, b22, b12, b13, dan b23 adalah koefisien
(Tabel 3).
Istilah T2, t2 dan D2 dikeluarkan dari model, karena mereka
Tidak signifikan (p <0,05).
Nilai R2 (koefisien determinasi) model penelitian ini
Dari 0,95 diperoleh, yang menunjukkan bahwa 95% variasi sampel
Diperhitungkan dengan model. Ini menunjukkan bahwa ekstraksi
Waktu (t) dan suhu * interaksi waktu sangat signifikan
(P <0,05) (Tabel 3).
Model tersebut memperkirakan bahwa kondisi ekstraksi terbaik adalah
80 C, 2 jam, dan tingkat pengenceran 1: 4. Bila hasil ini dibandingkan
Dengan studi ekstraksi polong carob, hasil yang diperoleh dari
Model ini serupa dengan pendekatan umum pada polong carob
Ekstraksi kecuali untuk tingkat pengenceran (Turhan et al., 2006). Kapan
Tingkat pengenceran meningkat dalam kondisi yang ditentukan, ekuilibrium
Titik untuk ekstrak juga meningkat, yang jelas menunjukkan
Waktu ekstraksi itu panjang. Sebelumnya juga dilaporkan
Konsentrasi gula carob akhir diproduksi di
Sistem batch yang juga langsung naik ke suhu dan waktu
(Karkacier et al., 1995). Penelitian saat ini menunjukkan bahwa konsentrasi gula
Mencapai 100 g / L atau lebih dalam 2 jam pada 80 C. Aplikasi
Dari suhu yang lebih tinggi menunjukkan tingkat padatan terlarut yang lebih tinggi
di
Ekstrak yang memiliki lebih banyak gula. Ini menunjukkan bahwa operasional
Suhu seperti 80-90 C dapat diaplikasikan untuk mendapatkan gula yang lebih
tinggi
Konsentrasi (Turhan et al., 2006). Berdasarkan hasil ini
Studi, dapat disimpulkan bahwa tidak perlu menggunakan yang lebih tinggi
Suhu, waktu lebih lama, dan tingkat pengenceran yang lebih besar, yang berarti
Kurang buang waktu, energi, dan bahan.