Anda di halaman 1dari 9

Abstrak

Isolasi dan pemurnian bioassay dari Ekstrak etil asetat Aspergillus terreus MC751 menyebabkan
Karakterisasi butirolakton I sebagai antidiabetes dan antioksidan. Aktivitas antidiabetes dari
butirolaktonase I dievaluasi dengan inhibitor α-Glucosidase dan α-amilase. Butyrolactone I
Menunjukkan konsentrasi-ketergantungan yang signifikan, tipe campuran Aktivitas
penghambatan terhadap ragi α-glukosidase dengan IC50 dari 54μM. Namun, senyawa tersebut
menunjukkan aktivitas yang kurang terhadap usus tikus Α-glukosidase dan α-amilase. Ini adalah
laporan pertama tentang α-glukosidase Aktivitas penghambatan butyrolactone I. Aktivitas
antioksidan dari Butyrolactone I dievaluasi berdasarkan efek pemulungan pada 1,1-Diphenyl-2-
picrylhydrazyl (DPPH) (IC50 = 51 μM) dan hydrogen Peroksida (IC50 = 141 μM) radikal serta
uji kekuatan reduksi. Hasilnya menunjukkan bahwa butyrolactone I merupakan antidiabetes yang
menjanjikan Juga antioksidan dan harus dipertimbangkan untuk uji klinis.

Kata kunci-Aspergillus terreus MC751, antidiabetes, antioksidan, Butyrolactone I.

N-Yang mengandung maltooligosakarida GIB-638 diisolasi dari Filtrat kultur Streptomyces fradiae PWH638 [8].[5]. Oleh karena itu. dan Aspergillusol A diisolasi dari jamur Aspergillus aculeatus yang berasal dari laut [9]. faktor risiko klasik pada Perkembangan diabetes. tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengisolasi Dan mengidentifikasi senyawa . kami Menemukan bahwa ekstrak etil asetat A. Beberapa strategi manajemen telah diusulkan untuk Tahap awal disglycemia dengan tujuan mencegah pengembangan lebih lanjut. yang merupakan inhibitor α-Glucosidase dan telah digunakan untuk pengobatan DM tipe-2 [7]. Penelitian sebelumnya. tidak Hanya untuk menjaga kadar antioksidan dalam tubuh tapi juga untuk mengobati Komplikasi jangka panjang yang dapat timbul [3]. Peningkatan produksi radikal bebas dan pengurangan pertahanan antioksidan Sebagian dapat memediasi inisiasi dan berkembangnya Komplikasi terkait diabetes [2]. akhirnya menyebabkan peningkatan Stres oksidatif dalam berbagai jaringan [1]. Sebagai Contohnya yaitu validamycin A yang diisolasi dari kaldu Streptomyces Hygroscopicus var. berakibat pada generasi Spesies oksigen reaktif (ROS). Oleh sebab itu suplementasi Dengan antioksidan bisa bermanfaat bagi penderita diabetes. terreus menunjukkan aktivitas penghambatan potensial terhadap α-Glukosidase [10] dan menghasilkan antioksidan [11]. Bacillus subtilis B2 juga Memiliki aktivitas α-glukosidase yang kuat [7]. kombinasi Inhibitor α-glukosidase dan antioksidan akan efektif mencegah Perkembangan diabetes mellitus (DM) tipe 2 lebih lanjut [6]. kami melaporkan bahwa ekstrak etil asetat Dari A. dengan memperlambat Pencernaan oligosakarida dan disakarida. PENDAHULUAN Hiperglikemia merupakan. Baru-baru ini. Karena itu. I. Limoneus. Inhibitor α-glukosidase dan α-amilase yaitu Enzim kunci dalam pencernaan karbohidrat merupakan salah satu cara untuk Menekan hyperglycemia pasca-prandial. Acarbose yaitu pseudo-tetrasacharide yang diisolasi dari fermentasi Kaldu dari Actinoplanes spp. Minat dalam mengisolasi inhibitor α-glukosidase dari beberapa mikroorganisme telah meningkat. dan penundaan Penyerapan glukosa serta mengurangi kadar glukosa di Plasma [4] . terreus MC751 Menunjukkan Efek penghambatan α-glukosidase dan antioksidan. ada Beberapa penelitian yang relative tentang inhibitor α-glukosidase dan antioksidan dari Spesies Aspergillus. Namun.

Aktivitas antioksidan dievaluasi Berdasarkan efek pemulungan radikal pada DPPH dan Radikal hydrogen peroksida serta mengurangi daya uji. Aktivitas antidiabetes diidentifikasi Menggunakan yeast dan α-glukosidase pada usus tikus (Rat Intestinal).antidiabetes dan antioksidan Dari ekstrak tersebut. dan α-amilase pada Pankreas babi (procine pancreate). .

Louis. diperoleh dari Sigma Chemical Co. Stoknya Kultur A. Semua pelarut yang digunakan dalam penelitian ini dibeli Dari Wako Pure Chemicals dan suling sebelum digunakan. dan 3. p-nitrophenyl α-D-glukopiranosida (p-NPG). Hidrogen peroksida.20)] Tipe I: dari Sacharomyces Cereviceae. α-Amilase dari pankreas babi (Tipe VI-B). Bahan kimia Α-Glucosidase [(EC 3. HMQC dan HMBC Teknik digunakan untuk menetapkan korelasi antara 1 H dan 13 Sinyal C Nilai pergeseran kimia (δ) diberikan pada beberapa bagian Per juta (ppm). MO).1. dan konstanta kopling (J) di Hz. Prosedur percobaan umum Nilai rotasi optik diukur dengan Jasco P-2100 Polarimeter Spektrum penyerapan UV-Vis yang aktif.1% . pati larut.terreus MC751 diperoleh dari Pusat Penelitian Kimia-Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia.5-dinitro Asam salisilat. terreus ditanam di PDA. 1.2% Natrium nitrat. quercetin dehidrasi. BAHAN DAN METODE A. dan gel silika (60-200 mesh Wako gel) Dibeli dari Wako Pure Chemical Industries. Senyawa dalam metanol dicatat pada Hitachi U-1600 Spektrofotometer. 0. kalium ferricyanide [K3Fe (CN) 6]. DMSO. (St. klorida besi (FeCl3). Mikroorganisme dan kondisi kultur A. Nuklir Spektra resonansi magnetik (NMR) tercatat sebesar 500 MHz untuk1 H dan 125 MHz untuk 13 C pada JEOL JNM-ECA 500 Dengan TMS sebagai standar internal. Ltd (Osaka. diinkubasi pada suhu 25 ° C Selama tujuh hari.II. B. Metode 1.2. 0. asam trikloroasetat. Jepang). TLC itu Berjalan pada pelat pra-dilapisi silika gel 60 F254 (Merck 5554) dan Bintik-bintik dideteksi dengan sinar UV. Spektrum massa dari senyawa tersebut adalah Diukur dengan resolusi tinggi FAB-MS.1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH). 2. Dua cakram (8mm) jamur miselia digunakan Untuk menginokulasi 50 mL kalap Czapek-dox (3% sukrosa. Α-Glukosidase Tipe II: aseton intestinal tikus Bubuk (sebagai sumber α-glukosidase usus kasar).

K2HPO4. Fisik dan spektral (satu dan dua Dimensi NMR.02 (C-4). d. 132. 6.12 (C-2). 28.4).36 (C-2").76 (OCH3). HRFABMS: [M + H] + M / z 425. J = 14.76 (3H. Inhibitor α-Glukosidase dan Uji pemulungan DPPH radikal bebas.51 (1H.01 dan 45. 130. 17.48 (C-9 "). 3.27 μg / mL. J = 7.05 (C-5 ").(p-hydroxyphenyl) - .d) menggunakan gradien bertahap dari heksana (90%) dalam EtOAc.97 (C- 5).82 (C- 11"). d.95 (C. 124. s).mendapatkan butyrolactone I (200 Mg). 6. 154. 3.8). 6.60 (C-6 "). sebagai padatan lengket kekuningan.27 (C-3 ").001% ferrous sulfat).3 dalam MeOH). 13C NMR (Aseton-d6) δ 170.95 (C-3).0).95 (2H.8 g) dikromatografi pada silica Gel (35 x 30 mm i.49 (1H.93 (C-4 ').2 untuk memisahkan filtrat dan miselium.85 (C-1 ').10 "). Ekstraksi dan isolasi Ekstrak EtOAc (1.3). 53.menunjukkan bahwa fraksi 6 (900 mg) adalah Paling aktif dengan IC50 Masing-masing 30.64 (3H. 139. 39.56 (3H. d.62 (C-7 "). 168. Ekstraknya disaring Dan dipekatkan dengan evaporator berputar di bawah vakum pada suhu 400C untuk mendapatkan padatan coklat (2 g). 86. 129.05% kalium klorida. dan FABMS) karakteristik dari Senyawa terisolasi bertepatan dengan butyrolactone I (Α-oxo-β. Fraksi 6 selanjutnya dipisahkan secara berulang pada Kromatografi kolom dengan silika gel menggunakan elusi bertahap dengan Heksana: EtOAc dan kromatografi lapis preparatif (PLC) Dengan CHCl3: Aseton (3: 1) untuk .53 (1H. 7. 6.5 D + 68. J = 9. 158.52 (1H.0). [Α] 22. Spektrum UV (MeOH) λmax 307 (log ε 4. J = 3. 1H NMR (Aseton-d6) δ 1. Setelah 10 hari inkubasi dalam kondisi statis (250C).10 (2H.20 (C-6 'dan C-3'). 5. d.S).67 (C-5 'dan C-2'). 116. Filtrat (16 L) dikocok dengan etil asetat (EtOAc) pada 250 Rpm selama 20 menit pada suhu kamar. 128. J = 9. 3.32 (C-6).8). dan 0. 0.94 (C-1"). 0. J = 8.72 (C-1). dd. calcd untuk C24H25O7] 13 Derajat tak jenuh. 115. 1. 122. s). J = 6. 0.333 (c. br.43 (C-8 ").3).81 (C-4 ").0).43 (2H. 25. 127. ke EtOAc (100%) dan kemudian EtOAc (30%) dalam Metanol (MeOH) untuk mendapatkan delapan fraksi (F1-F8) berdasarkan TLC.05% magnesium sulfat. 123. Kaldu kultur disaring melalui kertas saring ADVANTEC No.1607. 3. 132. d. J = 8.61 (2H.0). d.

Semua uji dilakukan dengan tiga replikasi. Supernatan digunakan untuk pengujian. Setelah sentrifugasi (1000 g. Individu Kosong untuk sampel uji disiapkan untuk memperbaiki latar belakang Absorbansi dimana enzim diganti dengan 250 μL Buffer fosfat.5 gram Bubuk aseton intestinal tikus disuspensikan dalam 10 mL garam 0.0) ditambahkan ke tabung Mengandung 5 μL sampel yang dilarutkan dalam DMSO pada berbagai Konsentrasi (5 sampai 100 μg / mL). Dan suspensinya disahkan dua belas kali selama 30 detik pada suhu 40C (tepat).0) 0.0) 0. II. 30 menit.1 M.3-Dimethylallylbenzy l) -γ-methoxycarbonyl-γ-butyrlactone I) Dilaporkan dalam literatur [12] . Pembacaan absorbansi dicatat pada λ 400 nm. Campuran reaksi Diinkubasi selama 5 menit pada suhu 370C. ditambahkan 150 μL Larutan α-glukosidase usus tikus. Larutan blanko untuk sampel uji disiapkan untuk mengoreksi Absorbansi.065units / mL) dan Inkubasi dilanjutkan selama 15 menit.9% (100: 1 b / v). dimana enzim diganti dengan 150 μL Buffer fosfat. 4. Penghambat Efek pada aktivitas α- glukosidase ditentukan dengan pengukuran Jumlah p-nitrophenol dilepaskan pada λ 400 nm. 40C). dan 250 μL dari 5 mM Larutan p-NPG dalam buffer fosfat (pH 7. Yeast inhibitor α-glukosidase Dinilai Sebagai Aktivitas penghambatan untuk α-glukosidase yang Dilaporkan oleh Kim et al. Reaksi itu kemudian Diakhiri dengan penambahan 1mL 0. Uji antidiabetes I. Yaitu Campuran reaksi mengandung 250 μL dari 3mM p-NPG dan 495 μL buffer fosfat 100 mM (pH 7. [17] dengan Sedikit modifikasi: 0.2 M Na2CO3.[15]. Uji penghambat α-glukosidase tikus Aktivitas penghambatan terhadap α-glukosidase tikus Diuji seperti yang dijelaskan oleh Sancheti dkk. . Semua uji dilakukan dengan 3 kali replikasi.1 M.(p-hydroxy-m-3. [16] Dengan sedikit modifikasi.2 M Na2CO3. reaksi dimulai dengan Menambahkan 250 μl α-glukosidase (0. Lima microlitres Larutan sampel (50-200 μg / mL) diinkubasi dengan 595 μL buffer fosfat (pH 7. Reaksi itu Dihentikan dengan menambahkan 1mL 0. Setelah pra-Inkubasi pada 370C selama 5 menit. γ.

dkk.9) mengandung natrium Klorida 6. Nilai IC50 dihitung dari Nilai mean hambat dengan menerapkan analisis regresi logaritmik. 500 μL campuran reaksi diencerkan Dengan 1750 μL air suling. di mana A0 adalah absorbansi control Reaksi dan As absorbansi dengan adanya sampel. Tepat 3 menit kemudian. Semua uji dilakukan dengan tiga replikasi. 400 μL reagen warna DNS ditambahkan. Penghambatan persentase α-glukosidase dan α-amilase Dinilai dengan menggunakan rumus berikut:% Inhibition = [1-(As / A0)] x 100. dan didinginkan pada suhu kamar. Campuran reaksi kemudian diinkubasi dalam bak air (85-900C) selama 10 menit untuk mengembangkan warna. Penentuan pola penghambatan pada α-glukosidase Untuk mengevaluasi jenis penghambatan terhadap konsentrasi ragi α- Glukosidase. . IV. Larutan blanko untuk sampel uji disiapkan untuk mengoreksi Absorbansi. Uji inhibitor α-amilase pankreas Pengujian dilakukan menurut Gowri.5% b / v dalam buffer 20 mM). 40 μL sampel uji (50-200 μg / mL) dan 160 μL dari 20 mM Buffer fosfat (pH 6. dan absorbansi Diukur pada λ 540 nm. Reaksi dimulai dengan menambahkan 400 μL Larutan pati kentang terlarut (0.III. Jenis penghambatan ditentukan dari Lineweaver-Burke plot. Selanjutnya. p-NPG yang semakin tinggi Digunakan substrat sebagai ada atau tidaknya Butyrolactone I.7 mM diinkubasi dengan 200 μL α-Amilase pankreas (0. [18] dengan Singkat.5 mg / mL disiapkan dalam air suling dingin) untuk 5 menit.

butyrolactone I. Uji antidiabetes Dalam penelitian ini. Namun. 2. dan quercetin Semua ditampilkan secara signifikan kurang efek pada α-Glukosidase usus dibanding α-glukosidase ragi seperti pada Gambar. III.01 dan 22. terreus MC751. quercetin menunjukkan Penghambatan terkuat dengan IC50 14. Butyrolactone I memiliki efek yang jauh lebih besar dari pada Ekstrak. kehadiran α-butyrolakton juga berperan. terreus dan butirolakton I menunjukkan Aktivitas penghambatan α.86 µg / mL (atau 54μM). Untuk pengujian umum inhibitor α-Glucosidase.[24] apalagi. enzim ragi dari S. 37. HASIL DAN PEMBAHASAN B. oleh karena itu dapat diasumsikan bahwa itu adalah senyawa Bertanggung jawab atas aktivitas ekstrak A. karena aktivitas γ-Lactone menghambat sintesis asam lemak dan mengurangi jaringan adipose [25]. aktivitas antidiabetes ekstrak Dan butyrolactone I dievaluasi menggunakan α-glukosidase dari Dua sumber yang berbeda (ragi dan usus tikus) dan α- Amylase inhibition assay. Kebanyakan Melaporkan bahwa penghambat α-glukosidase ragi tidak Menunjukkan aktivitas melawan α-glukosidase mamalia akibat Perbedaan dalam pengakuan molekuler dari target-binding Situs enzim [21]. Namun. ekstrak. . cereviceae Dikategorikan sebagai α-glukosidase tipe I [18] Dipilih Itu Ekstrak A.6 μM pada Tabel I. [22] . Adanya Kelompok hidroksil fenolik diasumsikan berkontribusi terhadap efek penghambatan Butyrolactone I [4].glukosidase kuat dengan IC50 masing-masing.

penghambatan α- Glukosidase tampaknya menjadi cara yang lebih efektif untuk mengendalikan Pelepasan glukosa dari disakarida di usus dari pada α-Amilase [18]. .glukosidase dengan kuat. mungkin mengganggu tindakan Keduanya [3]. Penghambat alami. yang memiliki Telah ditunjukkan untuk menghambat aktivitas α-amilase secara lemah dan Aktivitas α. diperkirakan menggunakan plot Lineweaver-Burke dan dengan penghambatan Konsisten tipe campuran pada Gambar. Α-amilase pankreas adalah enzim utama dalam sistem pencernaan. [23]. [21]. Mengkatalisis langkah awal hidrolisis pati menjadi Campuran oligosakarida yang lebih kecil. Pada uji pankreas pankreas α-amilase. dapat menawarkan terapi yang lebih baik Pilihan untuk mengendalikan hiperglikemia postprandial dengan Efek samping sedikit [18]. yang selanjutnya Terdegradasi oleh α-glukosidase menjadi glukosa yang pada penyerapan Memasuki aliran darah [18]. 2. nilai Ki (Konstanta penghambatan) butirolaktonasa I adalah 55 μM. Ditentukan dari plot Dixon. Oleh karena itu. Campuran tipe campuran itu Ditandai dengan kombinasi yang kompetitif dan Hambatan non kompetitif [22] yang menunjukkan bahwa Butyrolactone I mengikat ke situs selain situs aktif dari Enzim dan menggabungkan dengan baik enzim bebas atau enzim Kompleks substrat. kedua Sampel (ekstrak dan butirolakton I) dan kuersetin sebagai Referensi menunjukkan aktivitas penghambatan rendah pada Gambar. 3. Mekanisme penghambatan butyrolactone I adalah Mirip dengan kuersetin [5]. Pola efek butirolakton pada α-Glukosidase ragi.