Bahan dan metode

Sebanyak 30 isolat Salmonella Enteritidis, termasuk 15 isolat dari manusia dan 15 dari makanan,
digunakan selama penelitian ini. Isolat manusia dikumpulkan dari tahun 1950 pasien diare yang
dirawat di Rumah Sakit Pusat Anak di Teheran, dari bulan April sampai November 2014. Semua isolat
manusia ditemukan dari bangku pasien yang menderita diare, kecuali satu isolat yang diperoleh dari
darah Seorang pasien diare. Pasien ini dirawat di rumah sakit dengan gastroenteritis akut dan
Salmonella serogroup D didapat dari darah setelah 3 minggu isolasi awal dari tinja. Kasus diare
didefinisikan sebagai pasien dengan lebih dari tiga episode diare non-berdarah per hari. Isolat
makanan diambil dari sumber makanan yang berbeda, termasuk daging ayam, domba, daging sapi
dan itik diperoleh dari Departemen Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Teheran
selama periode waktu yang sama. Metode mikrobiologi standar digunakan untuk identifikasi isolat
Salmonella. Karakterisasi serogroup isolat dilakukan melalui uji aglutinasi geser dengan antisera
polivalen dan monospesifik terhadap antigen somatik dan flagella pada Tahap I dan II sesuai dengan
petunjuk pabrik pembuatnya (Difco, Franklin Lakes, NJ, USA). Identitas isolat Salmonella Enteritidis
dikonfirmasi oleh multipleks-PCR seperti yang dijelaskan sebelumnya [10].

Uji kepekaan antimikroba

Metode difusi disk digunakan untuk menentukan kerentanan strain seperti yang diinstruksikan oleh
pedoman CLSI [11]. Agen antimikroba adalah sebagai berikut: amoksisilin (20 g), gentamisin (10
g), kloramfenikol (30 g), kotrimoksazol (25 g), asam nalidiks (30 g), ciprofloxacin (5 g),
sefotaksim (30 g) Ceftazidime (30 g), ceftazaxone (30 g), sefaleksin (30 g), streptomisin (10 g),
tetrasiklin (30 g), imipenem (10 g), meropenem (10 g), nitrofurantoin (30 g), kolistin sulfat (25
g) (Mast Diagnostics, Mast Group Ltd, Merseyside, Inggris). Organisme regangan yang digunakan
untuk pengendalian kualitas adalah Escherichia coli ATCC 25922.

Profil plasmid

Plasmid diekstraksi menggunakan Kit Plasmid Mini Qiagen (Qiagen Mississauga, Ont, Kanada). Gel
agarose 0,8% digunakan untuk elektroforesis horisontal plasmid; Selain itu, strain standar E. coli
AC11 dengan plasmid 68 kb, 7,2 kb dan 1,9 kb digunakan sebagai kontrol. Berat molekul plasmid
ditentukan oleh perangkat lunak SEQAID U (versi 3.5, Kansas State University, Manhattan, KS, AS).

ERIC-PCR dan (GTG) 5 amplifikasi

Satu koloni dari setiap strain bakteri dimurnikan menggunakan kit komersial (Bioneer, Seoul, Korea)
dan digunakan sebagai template DNA. Pasangan Primer untuk amplifikasi ERIC-PCR adalah sebagai
berikut: ERIC- 1R (5'-ATGTAAGCTCCTGGGGATTCAC-3 ') dan ERIC-2 (5'
AAGTAAGTGACTGGGGTGAGCG-3 '). Amplifikasi (GTG) 5 dilakukan dengan menggunakan primer
yang telah dijelaskan sebelumnya [12]. Amplifikasi dilakukan dalam campuran reaksi yang
mengandung Taqplus Master Mix 12,5 L yang panas, 20 pmol masing-masing primer, 3 L DNA, 2.5
L buffer PCR dan 5 L air ultra murni (volume akhir 25 L). Amplifikasi ERIC-PCR dilakukan dengan
menggunakan program yang terdiri dari satu langkah denaturasi pada suhu 95 C selama 5 menit;
Empat siklus 94 C selama 4 menit, 53 C selama 4 menit, 72 C selama 4 menit; 30 siklus 94 C
selama 30 detik, 53 C selama 1 menit, 72 C selama 1 menit; Dan satu siklus pada suhu 72 C
selama 7 menit.

Amplifikasi (GTG) 5 mencakup satu langkah denaturasi pada 95 C selama 5 menit; Empat siklus 94
C selama 4 menit, 50 C selama 4 menit, 72 C selama 4 menit; 29 siklus 94 C selama 30 detik, 50
C selama 1 menit, 72 C selama 1 menit; Dan satu siklus pada suhu 72 C selama 7 menit. Citra gel
dianalisis menggunakan GEL COMPAR II versi 4.0 (Applied Maths, Sint-Martens-Latem, Belgia).
Dendrogram dihasilkan sesuai dengan metode kelompok pasangan tanpa bobot dengan aritmatika

KESIMPULAN
Secara umum, 26 serigala Salmonella yang berbeda ditemukan dari anak-anak (14 laki-laki dan 12
perempuan). Distribusi Salmonella serovars pada sampel tinja adalah 14 (54%) serogroup D, 6 (23%)
Salmonella paratyphi C, 2 (8%) S. paratyphi B, 3 (11%) Salmonella arizonae dan 1 (4%) S Masing
paratyphi. Semua isolat serogroup D diidentifikasi sebagai Salmonella Enteritidis oleh Multiplex PCR.

Resistensi antibiotik

Dalam evaluasi 16 antibiotik, tujuh pola resistensi antibiotik diamati di antara isolat klinis dan
makanan. Anti-biotipe yang paling umum adalah AB1 (43,2%), yang merupakan indikasi resistensi
terhadap nitrofurantoin. Antibiotipe kedua adalah AB2 (40,5%) yang mengandung fenotipe resistensi
asam anitrofurantoin-nalidiksat. Kami tidak mengamati adanya resistensi terhadap cephalexin,
ceftriaxone, ceftazidime dan sefotaksim, siprofloksasin, imipenem atau meropenem, kloramfenikol
dan gentamisin (Tabel 1).

Ucapan Terima Kasih

Karya ini didukung oleh hibah (No. 29218) yang diberikan oleh Wakil Rektor untuk Riset Universitas
Ilmu Kesehatan Teheran (Teheran, IR Iran).