Pada pemeriksaan NGAL menggunakan kit ELISA, metode yang digunakan adalah

metode ELISA sandwich. Pada metode ini, antibody yg spesifik terhadap NGAL, telah di coating
pada permukaan well-plate-96.

1. Standar/Sampel yang mengandung antigen dimasukkan ke dalam well plate yg sudah di

coating dengan antibody spesifik terhadap antigen yang akan diperiksa, sehingga terjadi
ikatan antigen-antibody (kompleks antigen-antibody).
2. Selanjutnya ditambahkan Biotinylated Detection Ab
Biotinylated detection Ab merupakan antibody detektor yang spesifik terhadap antigen yg
akan diperiksa (NGAL), yang sudah dilabel dengan biotin. Biotin ini berfungsi sebagai
penanda yang akan dikenali oleh HRP conjugate.
3. Selanjutnya pencusian dengan wash buffer, bertujuan untuk menghilangkan sisa
biotinylated detection Ab yg tidak berikatan dengan antigen dalam sampel.
4. Penambahan HRP conjugate
HRP conjugate merupakan enzim peroksidase (enzim Horseradish peroksidase),
penambahan enzim ini bertujuan untuk memberikan signal yang menandakan bahwa
terdapat antigen. Enzim HRP conjugate akan bereaksi dengan substrat dan menimbulkan
signal yang dapat dideteksi melalui perubahan warna.
5. Stop solution digunakan untuk mengakhiri reaksi enzim-substrat setelah mencapai
intensitas warna yang diinginkan.