Latar Belakang: Faktor XIII adalah tetramer 320 kDa, terdiri dari dua subunit A

enzimatik dan dua sub unit pembawa B (FXIII A2B2). Activated FXIII (FXIIIa)
mengkatalisis pembentukan ikatan kovalid lisil e-c-glutamilil antara c-c, c-a dan
a-rantai molekul fibrin yang berdekatan dan juga menghubungkan silang
inhibitor plasmin utama, a2-antiplasmin, ke fibrin. Tujuan: Kami menyelidiki
peran cross-linking FXIII fibrin secara langsung pada morfologi gumpalan dan
efek fungsionalnya pada pembentukan gumpalan dan lisis, dengan tidak adanya
antiplasmin a2. Hasil dan Kesimpulan: Data kami menunjukkan bahwa kehadiran
FXIII selama pembekuan bekuan menghasilkan gumpalan fibrin yang memiliki
pengurangan ukuran 2,1 kali lipat yang signifikan dalam ukuran pori, seperti
yang ditentukan oleh konstanta Darcy, Ks, dan serat tipis yang terbentuk (74,7
1,5 nm) dan kerapatan serat yang lebih tinggi dibandingkan dengan yang tidak
memiliki FXIII (86,0 1,7 nm, P <0,001), seperti yang ditentukan dengan
pemindaian mikroskop elektron. Selain itu, fibrinolisis menunjukkan
peningkatan yang signifikan dalam waktu lisis untuk penggumpalan darah yang
terbentuk di hadapan FXIII baik dalam sistem aliran statis maupun arus. Data ini
menunjukkan bahwa terlepasnya a2-antiplasmin, aktivitas FXIII berperan dalam
meningkatkan stabilitas gumpalan fibrin dengan mengubah struktur dan
meningkatkan ketahanan terhadap fibrinolisis.
pengantar
Fibrinogen terdiri dari sekumpulan duplikat dari tiga rantai polipeptida; Aa, Bb
dan c [1]. Pada tahap akhir koagulasi darah, trombin memotong fibrinopeptida
A dan B dari fibrinogen, memulai polimerisasi monomer fibrin menjadi serat [1].
Faktor (F) XIII terdiri dari dua subunit A enzimatik dan dua sub unit carrier B (FXIII
A2B2) [2,3]. Trombrin memotong peptida aktivasi dari masing-masing subunit A,
dan dengan adanya kalsium, subunit B-memisahkan dan perubahan konformasi
dalam subunit A menghasilkan pemaparan pada lokasi aktif FXIIIa [4,5]. FXIIIa ini
mengkatalisis pembentukan ikatan kovalen antara c-c, c-a dan a-a molekul fibrin
yang berdekatan, menstabilkan protofibril [6]. FXIIIa juga cross-link a2-
antiplasmin (a2-AP) menjadi fibrin, membuat serat berkembang lebih tahan
terhadap fibrinolisis [7]. Struktur gumpalan fibrin ditentukan oleh ketebalan
serat dan distribusi serat dan titik cabang, dan merupakan faktor penentu risiko
vaskular yang penting [8]. Efek langsung dari cross-linking FXIII pada struktur
fibrin dan fibrinolisis saat ini tidak diketahui.
Bahan dan metode
Bahan
Fibrinogen manusia, antibodi glu-plasminogen manusia, antibodi lobak
peroksidase terkonjugasi (HRP) terhadap faktor (F) XIII-A (SAF-13 HRP) dan a2-
antiplasmin (A2AP HRP). Tisu aktivator plasminogen (tPA). Alexa fluor 488
fibrinogen manusia terkonjugasi. Antibodi monoklonal IF-1. Fibrogammin P
berasal dari. Trombin manusia. Penghambat FXIII (T101; Tetramethyl-2 - [(2-
oxopropyl) thio] imidazolium klorida), Ibidi l-Slide, Pipa vinyl yang digunakan
dalam eksperimen loop Chandler (diameter dalam = 3 mm, diameter luar = 4,2
mm, panjang = 33 cm). Semua reagen lainnya.
Penipisan FXIII dari fibrinogen
Untuk menghasilkan fibrinogen yang bebas dari aktivitas FXIII, digunakan
modifikasi metode presipitasi amonium. Fibrinogen juga kekurangan FXIII
dengan menggunakan metode kromatografi afinitas dengan antibodi
monoklonal IF-1 yang tergantung kalsium [11]. Untuk metode yang dijelaskan
berikut, sumber fibrinogen yang digunakan bergantung pada persyaratan untuk
setiap pengujian. Pemurnian IF-1 menghasilkan jumlah fibrinogen dalam jumlah
yang relatif sedikit yang menghabiskan FXIII dibandingkan dengan presipitasi
amonium sulfat; Oleh karena itu, metode presipitasi amonium sulfat lebih
disukai digunakan dalam pengujian yang membutuhkan volume lebih besar
(misalnya lingkaran Chandler). Kemurnian kedua olahan diperiksa dengan
analisis SDS-PAGE dan western blot untuk a2-antiplasmin. Penipisan aktivitas
FXIII dikonfirmasi dengan menggunakan uji penggabungan pentylamine [10,12].
Penipisan albumin fibrogammin
FXIII dimurnikan dari Fibrogammin P menggunakan kolom filtrasi gel
Tempharose 6B pada sistem kromatografi otomatis Biocad sprint untuk
menghilangkan albumin dan glukosa yang mencemari [13].
Kekeruhan
Polimerisasi fibrin dipantau dengan adanya dan tidak adanya FXIII dalam uji
kekeruhan piring mikrotiter, seperti yang telah dijelaskan sebelumnya [14].
Bekuan dibentuk dalam rangkap tiga dengan konsentrasi akhir 1,5 mL 1 IF-1 yang
dimurnikan fibrinogen, 0.125 U mL 1 trombin manusia dan 5 mM CaCl2 dengan
adanya atau tidak adanya 11 lg mL 1 FXIII. Peningkatan kekeruhan dipantau
setiap 12 s pada 340 nm pada pembaca pelat multiwell (ELx808; Bio-tek,
Winooski, VT, USA) selama 60 menit pada suhu 37 C. Untuk studi inhibitor
dimetil sulfoksida (DMSO) dan T101, 0%, 1,0%, 2,5% dan 5% DMSO dan kisaran
konsentrasi T101 dengan 1% DMSO (konsentrasi akhir) ditambahkan ke 1,5 mg
mL 1 IF-1 dimurnikan fibrinogen sebelum aktivasi dengan trombin dan kalsium.
Perembesan
Clot dibentuk dalam rangkap tiga dengan 1,5 mg mL 1 amonium sulfat
dimurnikan fibrinogen, 1 U mL 1 trombin manusia dan 5 mM CaCl2 di TBS,
dengan adanya atau tidak adanya 11 lg mL 1 FXIII, seperti yang telah dijelaskan
sebelumnya [15,16].
Chandler loop
Lisis laju gumpalan fibrin terbentuk dengan adanya dan tidak adanya FXIII diukur
dengan menggunakan modifikasi metode yang telah dijelaskan sebelumnya
menggunakan sistem loop Chandler. Clot dibentuk dalam rangkap tiga
menggunakan konsentrasi akhir 1,5 mL-1 ammonium sulfat yang dimurnikan
fibrinogen (mengandung 5% Alexa Fluor 488 fibrinogen manusia terkonjugasi),
0.125 U mL? 1 trombin manusia, 33 lg mL-1 plasminogen manusia, 100 ng mL-1
aktivator plasminogen jaringan (tPA) dan 5 mM CaCl2, dengan adanya atau tidak
adanya 11 lg mL-1 FXIII. Setiap campuran reaksi ditempatkan dalam tabung vinil
dan ujung terbuka digabungkan dengan menggunakan lengan pendek tabung
yang lebih besar untuk membentuk lingkaran Chandler dengan diameter 10,5
cm. Loop dipasang pada poros horizontal dan diputar pada 30 r.p.m. selama 80
menit pada suhu kamar, sampel supernatan 5-lL diambil setiap 10 menit. Setiap
sampel dicampur dengan 95 lL TBS dan fluoresensi yang dilepaskan diukur dalam
pembaca piring fluoresensi Varioskan Flash (Thermo Fisher Scientific, Waltham,
MA, AS) dengan eksitasi 494 nm dan emisi 519 nm.
Mikroskop konfokal
Tingkat fibrinolisis gumpalan fibrin dengan adanya atau tidak adanya FXIII diukur
dengan menggunakan mikroskop confocal seperti yang telah dijelaskan
sebelumnya [18]. Clot dibentuk dalam rangkap tiga menggunakan konsentrasi
akhir 1 mg mL? 1 ammonium sulfat yang dimurnikan fibrinogen, 0,1 U mL? 1
trombin manusia dan 5 mM CaCl2, 5% Alexa Fluor? 488 fibrinogen jika ada atau
tidaknya 11 lg mL? 1 FXIII, dalam lonceng Ibti l-Slide yang tidak dilapisi selama 2
jam pada suhu kamar di ruang kelembaban. Lisis diawali dengan penambahan
280 lg mL? 1 plasminogen dan 1 lg mL? 1 tPA. Bekuan tersebut divisualisasikan
dengan perbesaran rendah setiap 20 detik menggunakan mikroskop confocal
Leica TCS SP-2 laser scanning 1072 confocal (Leica Microsystems, Heidelberg,
Jerman) dan waktu yang dibutuhkan untuk lisis depan untuk bermigrasi dari titik
tetap diukur. Lisis kecepatan depan ditentukan dan digunakan untuk
menghitung rata-rata keseluruhan laju fibrinolisis pada mikrometer per detik.
Untuk studi DMSO, pelarut dan inhibitor ditambahkan ke kolam normal dan
plasma defenisi FXIII pada konsentrasi yang ditunjukkan sebelum pengaktifasi
pembentukan gumpalan dengan trombin 0.5 U mL? 1 dan kalsium 10 mM.
Pemindaian medan pemindaian mikroskop elektron
Gumpalan dibentuk dengan 1 mg mL? 1 IF-1 dimurnikan fibrinogen, 0.1 U mL? 1
trombin, 2,5 mM CaCl2, dengan adanya atau tidak adanya 6,7 lg mL? 1 FXIII.
Bekuan dibiarkan terbentuk di dalam bejana plastik berlubang kecil di ruang
lembab selama 2 jam, dicuci dengan buffer sodium cacodylate dan kemudian
diperbaiki semalam dengan larutan glutaraldehida 2%. Bekuan dipulihkan,
dicuci dengan buffer sodium cacodylate dan diproses lebih lanjut dengan
dehidrasi dengan menggunakan gradien aseton stepwise dan pengeringan titik
kritis, dan sputter dilapisi dengan paladium emas [11,15,19]. Gumpalan difoto
di 10 daerah yang berbeda menggunakan FEI Quanta 200 FEGSEM scanning
electron microscope (FEI, Hillsboro, OR, USA). Diameter serat diukur dengan
paket perangkat lunak analisis citra komputer ImageJ (National Institutes of
Health, Bethesda, MD, USA). Kepadatan serat ditentukan dengan menghitung
jumlah serat yang melintasi garis acak panjang tetap yang ditarik melalui satu
bagian optik. Tiga garis ditarik per gambar dan ini diulang dalam empat
mikrograf berbeda per sampel.
Analisis statistik
Semua analisis statistik dilakukan dengan menggunakan PASW 18.0, Release
Version 18.0.0 (SPSS Inc, Chicago, IL, USA). Data dinyatakan sebagai mean dan
standard error mean (SEM). Uji t sampel independen digunakan dan nilai P <0,05
dianggap signifikan secara statistik.
Hasil
FXIII mempengaruhi struktur gumpalan fibrin
Dua metode telah digunakan untuk menghasilkan fibrinogen yang terkuras dari
FXIII. Kedua metode ini telah ditandai sebagai tidak menunjukkan aktivitas FXIII
yang mencemari [10] dan terbukti terkuras dari a2-antiplasmin (Gambar 1).
Tingkat polimerisasi fibrin sedikit meningkat dengan adanya FXIII (Gambar 2A).
Namun, kehadiran FXIII menurunkan absorbansi maksimum dibandingkan
dengan kontrol (? FXIII 0,68? 0,01 OD; + FXIII 0,54? 0,01 OD). Konstanta Darcy
(Ks) mewakili ukuran pori gumpalan fibrin dan diukur dengan menggunakan
teknik permeasi. Gumpalan fibrin yang terbentuk di hadapan FXIII menunjukkan
pengurangan ukuran pori 2.1 yang signifikan dibandingkan dengan gumpalan
yang terbentuk tanpa adanya FXIII, yang menunjukkan efek langsung FXIII pada
struktur jaringan fibrin (Gambar 2B, n = 5) . Analisis struktur gumpalan yang
terbentuk dengan adanya dan tidak adanya FXIII dengan pemindaian mikroskop
elektron (SEM) menunjukkan perbedaan yang signifikan dalam ketebalan serat.
Dengan adanya FXIII, gumpalan membentuk serat tipis yang lebih tipis (74,7? 1,5
nm), dibandingkan dengan yang tanpa FXIII (86,0? 1,7 nm, 20 pengukuran dari
empat gambar, P <0,001). Selain itu, gumpalan yang terbentuk di hadapan FXIII
memiliki kerapatan serat yang lebih tinggi (6,06? 0,9 serat per lm) dibandingkan
dengan serat tanpa FXIII (5,40 0,1 serat per lm, tiga pengukuran dari empat
gambar P <0.001; Gambar 3) . Data dinyatakan sebagai mean? SEM.
Clot lysis tertunda di hadapan FXIII
Clot lysis diteliti dengan menggunakan metode mikroskop confocal statis dan di
bawah arus di loop Chandler. Gambar konfokalif mendukung gambar SEM yang
menunjukkan gumpalan lebih kencang di hadapan FXIII dibandingkan dengan
gumpalan yang terbentuk tanpa adanya FXIII (Gambar 4A). Setelah penambahan
tPA dan plasminogen ke gumpalan depan, kami mengamati peningkatan yang
signifikan dalam waktu fibrinolisis untuk penggumpalan darah yang terbentuk di
hadapan FXIII, seperti yang diharapkan untuk stabilisasi protofibril oleh aktivitas
FXIII (n = 10, P <0,05 ; Gambar 4B).
Efek FXIII pada fibrinolisis pada sistem aliran juga menunjukkan fibrinolisis yang
lebih lambat dan berkurang dengan adanya FXIII selama periode waktu 80 menit
(Gambar 4C, n = 15). Sebagai kontrol untuk memastikan bahwa jumlah FITC
berlabel fibrinogen konsisten di antara percobaan, bekuan diinkubasi selama
1200 menit untuk memastikan lisis gumpalan utuh. Jumlah pelepasan FITC fibrin
yang diukur dengan kehadiran dan tidak adanya FXIII menunjukkan tingkat yang
sebanding, seperti yang diharapkan.
DMSO dan inhibitor FXIII, T101, secara independen memodifikasi struktur
gumpalan fibrin
Pelarut senyawa (kendaraan) yang umum digunakan, DMSO, ditambahkan ke
bekuan fibrin pada konsentrasi yang meningkat untuk menyelidiki efek
langsungnya pada morfologi gumpalan. Analisis kekeruhan menunjukkan
penurunan absorbansi 4,6 kali lipat dengan DMSO 5% (v / v) (Gambar 5A, n = 3).
Data kekeruhan dikuatkan dengan mikroskop confocal menggunakan plasma
kolam normal, yang menunjukkan peningkatan kepadatan klumpalan
dosedependent dengan peningkatan konsentrasi DMSO (Gambar 5B).
Senyawa T101 telah digunakan dalam banyak penelitian untuk menghambat
aktivitas FXIII namun, sejauh diketahui oleh penulis, belum diteliti efek
langsungnya pada penggumpalan fibrin. Untuk mengetahui efeknya pada
struktur bekuan secara independen terhadap inhibisi FXIII, pembentukan
bekuan diikuti analisis kekeruhan. Analisis kekeruhan menunjukkan tren
peningkatan ketergantungan dosis yang tidak signifikan terhadap peningkatan
absorbansi maksimum dengan meningkatnya konsentrasi T101 tanpa adanya
FXIII (Gambar 6; P = 0,06). Namun, seperti yang diharapkan, dengan adanya tren
serupa FXIII diamati secara statistik (Gambar 6; P <0,05).
Diskusi
Ada bukti yang berkembang untuk menunjukkan bahwa morfologi galur fibrin
memainkan peran penting dalam trombosis arteri dan vena [8]. Beberapa
penelitian selama beberapa tahun terakhir telah menunjukkan bahwa pasien
dengan trombosis menunjukkan kecenderungan membentuk gumpalan yang
lebih padat, dan memiliki pori-pori yang lebih kecil dan meningkatkan ketahanan
terhadap fibrinolisis [18,20-23]. Secara keseluruhan, data ini menunjukkan
bahwa struktur gumpalan fibrin dengan percabangan serat meningkat dan
resistensi terhadap fibrinolisis merupakan faktor risiko trombosis, walaupun
bukti kuat dari studi longitudinal kurang.
Pembentukan gumpalan fibrin adalah proses dinamis, dan penataan ulang serat
fibrin telah terbukti terjadi beberapa menit setelah gel terlihat terbentuk [24].
Studi sebelumnya tentang varian genetik FXIII yang mengubah tingkat aktivasi
FXIII dengan trombin (Val34-Leu) mengindikasikan bahwa cross-linking oleh
FXIIIa tidak hanya menstabilkan struktur jaringan fibrin yang ada, namun FXIIIa
mampu mempengaruhi dinamika fibrin. pembentukan dan oleh karena itu
struktur gumpalan [15,25]. Namun, efek spesifik FXIII pada struktur bekuan telah
memukulnya agar tidak diselidiki secara komprehensif. Oleh karena itu kami
menjawab pertanyaan ini dengan mempelajari formasi fibrin dalam sistem yang
dimurnikan dengan tidak adanya dan adanya FXIII, dan menunjukkan bahwa
FXIII memiliki efek langsung baik pada struktur bekuan dan fibrinolisis, dengan
tidak adanya antiplasmin a2. Data ini penting untuk pemahaman kita tentang
peran FXIII dalam pembentukan bekuan fibrin dan stabilitas dan perannya dalam
hemostasis dan trombosis.
Studi kami menunjukkan bahwa cross-linking oleh FXIIIa mengurangi diameter
serat fibrin rata-rata, meningkatkan kerapatan serat pada bekuan dan
meningkatkan resistansi fibrin terhadap fibrinolisis. Efek FXIII terhadap
kerapatan serat dan kerapatan serat dipelajari dengan menggunakan mikroskop
elektron scanning fibrin yang terbuat dari fibrinogen yang habis dari FXIII dengan
adanya dan tidak adanya FXIII manusia yang dimurnikan. Sesuai dengan data
EM, studi polimerisasi fibrin dengan menggunakan analisis kekeruhan
menunjukkan absorbansi maksimum yang lebih rendah yang menunjukkan serat
yang lebih tipis. Kami juga mempelajari poros struktur fibrin dengan permeasi,
yang menunjukkan penurunan ukuran pori pada gumpalan yang dihubungkan
silang oleh FXIIIa. Mikroskopi confocal scanning laser menunjukkan bahwa pada
keadaan terhidrasi sepenuhnya, gumpalan silang menunjukkan struktur yang
lebih padat, dan kami menunjukkan bahwa cross-linking oleh FXIIIa
berkepanjangan fibrinolisis pada kondisi statis dan aliran. Sebuah studi
sebelumnya oleh Ryan et al. [26] memeriksa struktur gumpalan fibrin dengan
adanya dan tidak adanya penghambat FXIII T101, yang mengindikasikan bahwa
cross-linking transglutaminase-dependent menurunkan diameter serat dan
meningkatkan panjang serat yang dianalisis dengan pemindaian mikroskop
elektron, sebagian besar sesuai dengan temuan kami. Namun, penelitian oleh
Ryan dkk. seluruhnya didasarkan pada penggunaan inhibitor terhadap FXIIIa
(T101) yang juga menargetkan transglutaminase lainnya. Selanjutnya, data kami
menunjukkan bahwa senyawa T101 itu sendiri dapat memodulasi struktur
gumpalan fibrin, menyebabkan peningkatan absorbansi absorbansi maksimal,
dengan tidak adanya FXIII. Kami juga menemukan efek dari DMSO pelarut, yang
sering digunakan untuk melarutkan senyawa molekul kecil (termasuk T101),
pada struktur gumpalan fibrin. Oleh karena itu, kehati-hatian harus dilakukan
untuk menggunakan kontrol yang sesuai dengan adanya DMSO saat mengamati
efek molekul kecil pada struktur gumpalan.
Kami telah menyelidiki efek FXIII pada struktur gumpalan fibrin menggunakan
sediaan fibrinogen yang bebas dari aktivitas FXIII [10] dengan dan tanpa
penambahan FXIII yang dimurnikan, dengan menggunakan beragam metode
pelengkap. Studi ini secara tegas dan konsisten menunjukkan efek signifikan dari
FXIIIa pada bekuan fibrin, membuat strukturnya lebih protrombotik dan resisten
terhadap fibrinolisis.
FXIII menghubungkan beberapa protein dengan bekuan fibrin, termasuk a2-
antiplasmin [7,27]. Dengan menggunakan sistem yang dimurnikan, kami
menemukan bahwa FXIIIa secara langsung mempengaruhi struktur gumpalan
fibrin, terlepas dari protein lainnya. Sementara protein ini dapat berkontribusi
pada modulasi struktur dan fungsi gumpalan fibrin, data kami memberikan bukti
bahwa cross-linking fibrin itu sendiri oleh FXIIIa mempengaruhi struktur dan
fungsi gumpalan dan mengurangi tingkat fibrinolisis. Sebuah studi baru-baru ini
oleh Fraser et al. [9] menunjukkan bahwa resistensi gumpalan fibrin cross-linked
terhadap fibrinolisis secara eksklusif disebabkan oleh penggabungan a2-
antiplasmin ke dalam rantai fibrin oleh FXIIIa; Namun, data kami menunjukkan
bahwa cross-linking FXIII dari fibrin juga berperan dalam memperpanjang
fibrinolisis. Perbedaan antara penelitian ini dapat dijelaskan dengan metodologi
yang berbeda: (i) pengujian kami dilakukan dalam sistem yang dimurnikan yang
bebas dari aktivitas FXIII endogen, sedangkan Fraser et al. Menggunakan plasma
FXIII-habis atau penambahan inhibitor transglutaminase; (ii) dalam penelitian
kami, kami memodifikasi protokol loop Chandler dari pembentukan
postthrombi fibrinolisis dalam sistem statis ke penambahan agen fibrinolitik
yang lebih sesuai secara fisiologis sebelum pembentukan bekuan dan fibrinolisis
terukur pada kondisi aliran. Kami mendalilkan bahwa pendekatan eksperimental
kami memungkinkan kepekaan yang lebih besar terhadap fibrinolisis; Oleh
karena itu, kami menyimpulkan bahwa cross-linking FXIII tanpa adanya a2-
antiplasmin memperpanjang fibrinolisis dengan mengubah struktur gumpalan.
Kesimpulan ini lebih lanjut dibuktikan karena penelitian sebelumnya telah
menunjukkan bahwa gumpalan dengan serat tipis dan pori-pori yang lebih kecil
lebih tahan terhadap fibrinolisis daripada bekuan yang terdiri dari pori-pori yang
lebih besar dan serat yang lebih tebal [28]. Ini juga telah disarankan bahwa hal
ini mungkin disebabkan oleh penurunan akses protein fibrinolitik untuk
membeku dengan permeabilitas lebih rendah [29]. Selain itu, penelitian lain
menunjukkan bahwa gumpalan yang terdiri dari serat tipis yang lebih padat
menunjukkan pengikatan tPA dan plasminogen yang dikurangi, yang
menyebabkan laju konversi plasminogen menjadi plasmin berkurang [18,30,31].
Sebuah tinjauan elegan oleh Muszbek dkk. [32] membahas pentingnya skala
waktu dari dua peristiwa: penggabungan a2-antiplasmin terjadi pada tahap awal
pembentukan gumpalan sementara penautan silang dari rantai a adalah proses
yang jauh lebih lambat. Namun, hubungan silang c-c cenderung terjadi
bersamaan dengan penggabungan a2-antiplasmin dan oleh karena itu peran
rantai silang c-c sehubungan dengan fibrinolisis masih harus ditetapkan. Oleh
karena itu, sementara kita sepakat bahwa cross-linking a2-antiplasmin
memainkan peran paling penting sehubungan dengan resistensi terhadap
fibrinolisis dalam setting fisiologis, data kami menunjukkan bahwa ikatan silang
FXIII fibrin tidak memodulasi struktur bekuan dan tingkat fibrinolisis. Studi lebih
lanjut mengenai efek ini dalam plasma, seluruh darah dan sistem in vivo akan
membantu menggambarkan peran cross-linking a2-antiplasmin dibandingkan
dengan modulasi langsung struktur fibrin oleh FXIII.
Sebuah studi baru-baru ini oleh Carlisle dkk. [33] menunjukkan bahwa ikatan
silang secara khusus memperkuat struktur cabang-cabang pada fibrin,
menunjukkan peran potensial FXIIIa dalam pembentukan cabang-titik. Penautan
silang kovalen dari daerah fibrin aC-regional oleh FXIIIa dapat membantu
meningkatkan struktur tertata yang mendasari interaksi aC-aC [34], sehingga
mengurangi ruang antara protofibril agregat lateral dan mengurangi diameter
serat rata-rata. Selain itu, serat fibrin berputar satu sama lain dan ikatan silang
kovalen rantai c dapat mengurangi jumlah protofibril luar yang dapat dilakukan,
membatasi pertumbuhan serat ke diameter yang lebih kecil di mana energi
termodinamika terlibat dalam peregangan putaran. protofibril
menyeimbangkan kekuatan interaksi molekuler [35]. Diperlukan penelitian lebih
lanjut untuk menjelaskan mekanisme molekuler yang terlibat dalam modulasi
struktur bekuan fibrin oleh FXIIIa.
Temuan kami bahwa cross-linking oleh FXIIIa mempengaruhi struktur bekuan
fibrin memiliki implikasi besar untuk pemahaman kita tentang tahap akhir
pembentukan bekuan darah. Data kami menunjukkan bahwa daripada
menstabilkan struktur bekuan fibrin yang sudah ada, FXIIIa mampu
mempengaruhi pembentukan fibrin, yang menyebabkan pembentukan
gumpalan dengan serat fibrin yang lebih tipis dan peningkatan kepadatan serat.
Selanjutnya, data kami menunjukkan bahwa cross-linking oleh FXIIIa secara
langsung memperlambat fibrinolisis gumpalan, melalui perubahan struktur
fibrin, terlepas dari protein plasma lainnya. Oleh karena itu, data ini
menghadirkan proses fisiologis baru yang mengatur struktur gumpalan dan
stabilitas fibrin. Studi masa depan yang menjelaskan mekanisme molekuler yang
mendasari efek ini dapat memberi target baru terapi untuk mengobati gangguan
hemostasis dan trombosis.