LAPORAN RESMI

PRAKTIKUM BIOPROSES

Materi:
ALKOHOL

Oleh:
Nama: NIM :
1. Timotius Adrian Cristantyo Darmaji 21030116140195
2. Vania Frimasgita Giraldi 21030116120066
3. William Aditya Ayodyasena 21030115120007

Laboratorium Mikrobiologi Industri

Departemen Teknik Kimia Fakultas Teknik
Universitas Diponegoro
Semarang
2017
ALKOHOL

HALAMAN PENGESAHAN

Laporan resmi praktikum Bioproses yang berjudul Alkohol yang disusun oleh:
Kelompok : 4 / Rabu
Anggota :
1. Timothius Adrian Cristantyo Darmaji 21030116140195
2. Vania Frimasgita Giraldi 21030116120066
3. William Aditya Ayodyasena 21030115120007

Telah disahkan pada,

Hari : Senin
Tanggal : 20 November 2017

Semarang, 20 November 2017

Mengetahui,
Dosen Pengampu Pranata Laboratorium Asisten Pengampu
Pendidikan

Prof. Dr. Widayat, S.T, M.T. Jufriyah, ST. Ernisa Ismirani K.

NIP.197206091998031001 NIP.197001091997032001 NIM.21030114130202

Laboratorium Mikrobiologi Industri ii

ALKOHOL

PRAKATA

Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT atas segala limpahan rahmat,
karunia dan hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan Laporan Resmi
Praktikum Bioproses dengan materi Alkohol.
Dalam laporan ini penulis meyakini sepenuhnya bahwa tidaklah mungkin
menyelesaikan makalah ini tanpa doa, bantuan dan dukungan baik secara langsung
maupun tidak langsung. Pada kesempatan ini penulis ingin memberikan rasa terima
kasih kepada :
1. Ibu Dr. Ing. Silviana, ST, MT selaku penanggung jawab Laboratorium
Mikrobiologi Industri Universitas Diponegoro.
2. Bapak Porf. Dr. Widayat, ST, MT dosen pengampu materi alkohol Laboratorium
Mikrobiologi Industri Universitas Diponegoro.
3. Ibu Jufriyah, ST selaku Pranata Laboratorium Pendidikan Laboratorium
Mikrobiologi Industri Departemen Teknik Kimia Fakultas Teknik Universitas
Diponegoro Semarang.
4. Iqbal Ryan R, selaku Koordinator Asisten Laboratorium Mikrobiologi Industri
Departemen Teknik Kimia Fakultas Teknik Universitas Diponegoro Semarang
tahun 2017.
5. Ernisa Ismirani K, Asisten Laboratorium Mikrobiologi Industri selaku asisten
pengampu penyusunan laporan resmi materi Alkohol.
6. Segenap asisten Laboratorium Mikrobiologi Industri Departemen Teknik Kimia
Fakultas Teknik Universitas Diponegoro Semarang.
Penyusun menyakini bahwa laporan ini jauh dari kesempurnaan. Mohon maaf
apabila terdapat kekurangan bahkan kesalahan. Penulis mengharapkan kritik dan saran
yang membangun dari semua pihak berkaitan dengan laporan ini. Akhir kata, semoga
laporan ini dapat bermanfaat bagi semua pihak dan dapat berguna sebagai bahan
penambah ilmu pengetahuan.
Semarang, 20 November 2017

Penyusun

Laboratorium Mikrobiologi Industri iii

ALKOHOL

RINGKASAN

Alkohol adalah senyawa dengan gugus hydroxyl yang berikatan dengan gugus
alkil. Alkohol dapat dibuat dengan metode fermentasi dan bahan yang mengandung
glukosa, seperti belimbing. Tujuan dari praktikum mikrobiologi ini adalah membuat
alkohol dari sari belimbing, mempelajari pengaruh penambahan ragi terhadap
jumlah koloni dan densitas pada pertumbuhan starter, dan mempelajari pengaruh
kadar glukosa substrat terhadap konversi pembuatan alkohol.
Belimbing memiliki banyak kandungan gizi yang terkandung di dalamnya.
Bioetanol adalah cairan biokimia hasil fermentasi gula dari karbohidrat dengan
bantuan mikroorganisme. Fermentasi adalah proses produksi energi dalam sel dalam
keadaan anaerobik. Starter pada fermentasi alkohol ialah Saccharomyces cerevisiae.
Praktikum ini menggunakan alat-alat yakni erlenmeyer, buret, statif, klem, gelas
ukur, pengaduk, beakerglass, autoclave, kompor listrik, dan pipet tetes. Dan bahan-
bahan sebagai berikut: sari belimbing, glukosa, KH2PO4, MgSO4, urea, NaOH,
H2SO4, indikator MB, aquadest, ragi roti (fermipan), fehling A dan B. Praktikum ini
melalui 2 tahap, yakni pembuatan starter dan fermentasi. Pembuatan starter
dilakukan dengan menggunakan sari buah belimbing, KH2PO4, MgSO4, urea, dan
ragi. Fermentasi dilakukan 5 hari dengan mencatat kadar glukosa sisa dan densitas
masing-masing variabel.
Berdasarkan percobaan, jumlah koloni yang terlihat dan nilai densitas semakin
tinggi seiring dengan semakin banyaknya ragi yang ditambahkan. Konversi alkohol
yang dihasilkan juga semakin tinggi seiring dengan semakin tingginya kadar glukosa
substrat.
Berdasarkan percobaan, dapat disimpulkan mengenai pengaruh penambahan
ragi terhadap jumlah koloni dan densitas pada pertumbuhan starter, dan pengaruh
kadar glukosa substrat terhadap konversi pembuatan alkohol. Saran untuk praktikum
kali ini ialah sterilkan alat yang akan digunakan, teliti dan cermat dalam mengatur
pH, menghitung jumlah koloni, menutup rapat erlenmeyer dengan alumunium foil, dan
teliti dalam mengamati perubahan warna titrasi.

Laboratorium Mikrobiologi Industri iv

ALKOHOL

SUMMARY

Alcohol is a compound with hydroxyl group attached to an alkyl group. Alcohol

can be made by fermentation methods and materials containing glucose, such as
starfruit. The purpose of this microbiological practice is to make alcohol from star
fruit juice, to study the effect of yeast addition to the amount of colony and density to
starter growth, and to study the effect of substrate glucose on conversion of alcohol
manufacture.
Star fruit has many nutrients contained in it. Bioethanol is a biochemical liquid
of fermented sugar from carbohydrates with the help of microorganisms. Fermentation
is the process of energy production in cells in an anaerobic state. The starter on
alcohol fermentation is Saccharomyces cerevisiae.
This experiment uses tools such as erlenmeyer, burette, stative, clamp,
measuring cylinder, stirrer, beakerglass, autoclave, electric stove, and pipette. And
the following ingredients: star fruit, glucose, KH 2PO4, MgSO4, urea, NaOH, H2SO4,
MB indicator, aquadest, bread yeast (fermipan), fehling A and B. This practice
dwthrough 2 stages, namely starter and fermentation. Starter making is done by using
star fruit juice, KH2PO4, MgSO4, urea, and yeast. Fermentation was performed 5 days
by recording residual glucose and density of each variable.
Based on the experiment, the number of visible colonies and density values is
higher as more yeasts are added. The resulting alcohol conversion is also higher along
with higher levels of substrate glucose.
Based on the experiment, it can be concluded about the effect of yeast addition
to the amount of colony and density on starter growth, and the effect of substrate
glucose level on conversion of alcohol manufacture. Suggestions for this practice are
sterilizing the tools to be used, thorough and careful in adjusting the pH, counting the
number of colonies, closing tightly erlenmeyer with aluminum foil, and meticulously
observing the color change of titration.

Laboratorium Mikrobiologi Industri v

ALKOHOL

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL.......................................................................................... i
HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................ ii
PRAKATA ......................................................................................................... iii
RINGKASAN .................................................................................................... iv
SUMMARY ....................................................................................................... v
DAFTAR ISI ...................................................................................................... vi
DAFTAR TABEL .............................................................................................. viii
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... ix
DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... x
BAB I PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang ...................................................................................... 1
1.2. Perumusan Masalah .............................................................................. 1
1.3. Tujuan Percobaan .................................................................................. 2
1.4. Manfaat Percobaan ................................................................................ 2
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Belimbing .............................................................................................. 3
2.2. Bioetanol ............................................................................................... 4
2.2.1. Pengertian.................................................................................... 4
2.2.2. Mekanisme .................................................................................. 4
2.2.3. Siklus Metabolisme ..................................................................... 6
2.3 Starter ..................................................................................................... 7
2.4 Pengaruh Variabel terhadap Proses Fermentasi Etanol ......................... 7
BAB III METODE PRAKTIKUM
3.1. Rancangan Praktikum ........................................................................... 8
3.1.1. Skema Rancangan Praktikum .................................................... 8
3.1.2. Variabel Operasi ........................................................................ 9
3.2. Bahan dan Alat yang Digunakan........................................................... 9
3.2.1. Bahan........................................................................................... 9
3.2.2. Alat .............................................................................................. 10
3.2.3. Gambar Alat ................................................................................ 10

Laboratorium Mikrobiologi Industri vi

ALKOHOL

3.3. Prosedur Praktikum ............................................................................... 10

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1. Pengaruh Penambahan Ragi terhadap Jumlah Koloni pada Starter ...... 15
4.2. Pengaruh Penambahan Ragi terhadap Densitas pada Starter ................ 16
4.3. Hubungan antara Jumlah Koloni dan Densitas pada Starter ................. 17
4.4. Pengaruh Kadar Glukosa Substrat terhadap Konversi Alkohol pada
Fermentasi ............................................................................................. 18
4.5. Pengaruh Waktu terhadap Densitas pada Fermentasi ........................... 21
BAB V PENUTUP
5.1. Kesimpulan ........................................................................................... 23
5.2. Saran...................................................................................................... 23
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 24

Laboratorium Mikrobiologi Industri vii

ALKOHOL

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Kandungan nutrisi 100 gram belimbing manis .................................. 3

Tabel 4.1 Pengaruh penambahan ragi terhadap jumlah koloni pada starter ...... 15
Tabel 4.2 Pengaruh penambahan ragi terhadap densitas pada starter ................ 16
Tabel 4.3 Hubungan antara jumlah koloni dan densitas pada starter................. 17
Tabel 4.4 Pengaruh kadar glukosa substrat terhadap konversi alkohol pada
fermentasi starter A ........................................................................ 18
Tabel 4.5 Pengaruh kadar glukosa substrat terhadap konversi alkohol pada
fermentasi starter B ........................................................................ 19
Tabel 4.6 Pengaruh kadar glukosa substrat terhadap konversi alkohol pada
fermentasi starter C ........................................................................ 19
Tabel 4.7 Pengaruh waktu terhadap densitas pada fermentasi ........................... 21

Laboratorium Mikrobiologi Industri viii

ALKOHOL

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Siklus metabolisme ........................................................................ 6

Gambar 3.1 Proses pembuatan starter ................................................................ 8
Gambar 3.2 Proses fermentasi alkohol............................................................... 8
Gambar 3.3 Erlenmeyer ..................................................................................... 10
Gambar 3.4 Buret, Statif, Klem ......................................................................... 10
Gambar 3.5 Gelas ukur ...................................................................................... 10
Gambar 3.6 Pengaduk ........................................................................................ 10
Gambar 3.7 Beakerglass..................................................................................... 10
Gambar 3.8 Autoclave ....................................................................................... 10
Gambar 3.9 Kompor listrik ................................................................................ 10
Gambar 3.10 Pipet tetes ..................................................................................... 10
Gambar 3.11 Tampilan hemositometer menggunakan mikroskop .................... 11
Gambar 4.1 Pengaruh penambahan ragi terhadap jumlah koloni pada starter... 15
Gambar 4.2 Pengaruh penambahan ragi terhadap densitas pada starter ............ 16
Gambar 4.3 Hubungan antara jumlah koloni dan densitas pada starter ............. 17
Gambar 4.4 Pengaruh kadar glukosa substrat terhadap konversi alkohol pada
fermentasi starter A ........................................................................ 18
Gambar 4.5 Pengaruh kadar glukosa substrat terhadap konversi alkohol pada
fermentasi starter B ........................................................................ 19
Gambar 4.6 Pengaruh kadar glukosa substrat terhadap konversi alkohol pada
fermentasi starter C ........................................................................ 20
Gambar 4.7 Pengaruh waktu terhadap densitas pada fermentasi ....................... 21

Laboratorium Mikrobiologi Industri ix

ALKOHOL

DAFTAR LAMPIRAN

LAPORAN SEMENTARA ............................................................................... A-1

LEMBAR PERHITUNGAN .............................................................................. B-1
DATA PENDUKUNG ....................................................................................... C-1
PROSEDUR ANALISA .................................................................................... D-1
KUANTITAS REAGEN .................................................................................... E-1
REFERENSI ...................................................................................................... F-1
LEMBAR ASISTENSI

Laboratorium Mikrobiologi Industri x

ALKOHOL

BAB I
PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Alkohol adalah senyawa yang memiliki gugus hydroxyl yang berikatan
dengan gugus alkil. Alkohol merupakan senyawa yang sangat diperlukan bagi
kehidupan kita, dapat digunakan untuk kosmetik, obat-obatan dan yang lainnya.
Akohol dapat dibuat salah satunya dengan cara fermentasi menggunakan
mikroorganisme. Mikroorganisme yang paling sering digunakan adalah jamur
Saccharomyces sp.
Alkohol dapat dibuat dengan menggunakan metode fermentasi dan bahan
yang mengandung glukosa, salah satunya adalah belimbing. Belimbing
merupakan tanaman buah berupa pohon yang berasal dari kawasan Malaysia,
kemudian menyebar luas ke berbagai negara yang beriklim tropis. Manfaat
utama tanaman ini sebagai makan buah segar maupun makanan buah olahan
ataupun obat tadisional (Ducksha, 2017). Kandungan gula pada buah belimbing
adalah 3,98 gram dari 100 gram belimbing (Parandica, 2011).

1.2. Perumusan Masalah

Alkohol sangat penting bagi kehidupan kita diantaranya sebagai energi
yang dapat diperbarui, maka dari itu kami perlu melakukan praktikum
pembuatan alkohol. Alkohol dapat dibuat dengan menggunakan metode
fermentasi dan menggunakan bahan yang mengandung glukosa, salah satunya
adalah belimbing. Perumusan masalah yang didapatkan dalam praktikum ini
adalah mengenai bagaimana membuat alkohol dari sari buah belimbing,
bagaimana pengaruh penambahan ragi terhadap jumlah koloni dan densitas pada
pertumbuhan starter, dan bagaimana pengaruh kadar glukosa substrat terhadap
konversi pembuatan alkohol.

Laboratorium Mikrobiologi Industri 1

ALKOHOL

1.3. Tujuan Percobaan

1. Membuat alkohol dari sari buah belimbing.
2. Mempelajari pengaruh penambahan ragi terhadap jumlah koloni dan densitas
pada pertumbuhan starter.
3. Mempelajari pengaruh kadar glukosa substrat terhadap konversi pembuatan
alkohol.

1.4. Manfaat Percobaan

1. Mahasiswa mampu membuat alkohol dari sari buah belimbing.
2. Mahasiswa mampu mempelajari pengaruh penambahan ragi, terhadap jumlah
koloni dan densitas pada pertumbuhan starter
3. Mahasiswa mampu mempelajari pengaruh kadar glukosa substrat terhadap
konversi pembuatan alkohol.

Laboratorium Mikrobiologi Industri 2

ALKOHOL

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Belimbing ( Averrhoa carambola L.)

Belimbing merupakan tanaman buah berupa pohon yang berasal dari
kawasan Malaysia, kemudian menyebar luas ke berbagai negara yang beriklim
tropis. Manfaat utama tanaman ini sebagai makan buah segar maupun makanan
buah olahan ataupun obat tadisional. (Ducksha,2017)
Dalam taksonomi tumbuhan, belimbing diklasifikasikan sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatphyta
Sub-divisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledonae
Ordo : Oxalidales
Famili : Oxalidaceae
Genus : Averrhoa
Spesies : Averrhoa carambola L.
Adapun kandungan nutrisi yang terdapat pada 100 gram buah belimbing
(Parandica, 2011):
Tabel. 2.1 Kandungan nutrisi 100 gram belimbing manis
Komponen Kadar
Energi (kJ) 31.80
Karbohidrat (g) 6.73
Lemak (g) 0.33
Gula (g) 3.98
Diet serat (g) 2.80
Kalium (mg) 133.00
Fosfor (mg) 12.00
Seng (mg) 0.12
Vitamin C (mg) 34.40
Folat (mg) 12.00
Protein (g) 1.04

Laboratorium Mikrobiologi Industri 3

ALKOHOL

Asam pantotenat (mg) 0.39

Vitamin B1 (mg) 0.03
Vitamin B2 (mg) 0.02
Serat (mg) 0.90
Kalsium (mg) 8.00
Besi (mg) 0.80
Sumber: USDA Nutrient Database (2010)

2.2. Bioetanol
2.2.1. Pengertian
Bietanol merupakan etanol yang dapat dibuat dari fermentasi
substrat yang mengandung karbohidrat baik itu turunan gula, pati ataupun
selulosa. Etanol atau etyl alkohol (C2H5OH) berupa cairan bening tak
berwarna, beraroma khas, berfase cair pada suhu kamar, mudah terbakar,
dapat terurai secara biologis (biodegredable), memiliki toksisitas rendah.
Jika etanol terbakar dapat menghasilkan gas karbon dioksida dan air.
Etanol dapat dimanfaatkan sebagai bahan untuk keperluan medis, sebagai
pelarut, dan juga sebagai bagan bakar alternatif (Mustofa, 2012).
Sebagai bahan bakar alternatif, bioetanol dapat diaplikasikan dalam
bentuk campuran dengan minyak bensin, misalnya 10 % etanol dicampur
dengan 90% bensin (gasohol E10) sebagai bahan bakar. Etanol absolut
memiliki angka oktan 117, premium memiliki 87- 88, sedangkan gasohol
E10 memiliki angka oktan 92 yang setara dengan pertamax (Setiasih,
2011).
2.2.2. Mekanisme
Menurut Retno dkk (2009), proses pembuatan bioetanol terjadi
dalam tiga tahap. Tahap pertama adalah persiapan bahan baku, yang
berupa proses hidrolisa pati menjadi glukosa. Tahap kedua berupa proses
fermentasi, merubah glukosa menjadi etanol dan CO2. Sedangkan tahap
ketiga yaitu pemurnian hasil dengan cara distilasi.

Laboratorium Mikrobiologi Industri 4

ALKOHOL

Hidrolisa adalah suatu proses antara reaktan dengan air agar suatu
senyawa pecah terurai. Faktor factor yang berpengaruh pada reaksi
hidrolisa pati adalah ; suhu reaksi, waktu reaksi, pencampuran pereaksi,
konsentrasi katalisator, dan kadar suspensi.
Proses fermentasi merupakan proses biokimia dimana terjadi
perubahan-perubahan atau reaksi-reksi kimia dengan pertolongan jasad
renik, penyebab fermentasi tersebut bersentuhan dengan zat makanan
yang sesuai dengan pertumbuhannya. Akibat terjadinya fermentasi
sebagian atau seluruhnya akan berubah menjadi alkohol setelah
beberapa waktu lamanya. Fermentasi oleh yeast, misalnya
Sacharomyces cereviseae dapat menghasilkan etil alkohol (etanol) dan
CO2 melalui reaksi sebagai berikut:
C6H12O6 + yeast C2H5OH + 2 CO2
Pada proses ini glukosa difermentasikan dengan enzim zimase invertase
yang dihasilkan oleh Sacharomyces cereviseae. Fungsi enzim zimase
adalah untuk memecah polisakarida (pati) yang masih terdapat dalam
proses hidrolisis untuk diubah menjadi monosakarida (glukosa).
Sedangkan enzim invertase selanjutnya mengubah monosakarida
menjadi alkohol dengan proses fermentasi. Pada awal fermentasi masih
diperlukan oksigen untuk pertumbuhan dan perkembangan
Sacharomyces cereviseae, tetapi kemudian tidak dibutuhkan lagi
karena kondisi proses yang diperlukan adalah anaerob. Sebelum
dilakukan proses fermentasi dilakukan proses sterilisasi dan proses
penyiapan inokulum. Sterilisasi dilakukan terhadap bahan dan alat
sehingga terbebas dari kontaminasi mikroorganisme lain. Tujuan
dibiakkannya ragi dalam starter adalah mengadaptasikan sel terhadap
media fermentasi. Inokulasi Sacharomyces cereviseae dilakukan secara
aseptis untuk menjaga kemurnian biakan.
Distilasi merupakan metode operasi yang digunakan pada proses
pemisahan suatu komponen dari campurannya dengan menggunakan
panas sebagai tenaga pemisah berdasarkan titik didih masing-masing
komponen.
Laboratorium Mikrobiologi Industri 5
ALKOHOL

2.2.3. Siklus Metabolisme

Gambar 2.1 Siklus metabolisme

Di dalam sel organisme, gula dapat difermentasi dan diubah menjadi
senyawa antara (intermediet) umum dan piruvat melalui tiga siklus utama
yaitu Emden- Meyerhoff-Parnas (EMP), Entner- Doudoroff (ED), dan
siklus pentosa fosfat. Dari ketiga siklus tersebut yang paling umum
digunakan oleh mikroorganisme untuk memecah gula adalah siklus EMP
(sering dikenal dengan glikolisis). Siklus glikolisis dapat terjadi pada
keadaan aerobik ataupun anaerob, dan menghasilkan energi dalam bentuk
Adenosin Trifosfat (ATP). Siklus ED sama seperti siklus EMP namun
pada siklus EMP dihasiklan 2 mol ATP/ mol glukosa sedangkan pada ED
dihasilkan 1 mol ATP per mol glukosa (Riyanti, 2009).

Pada pembuatan alkohol, gula yang terkandung didalam substrat

akan dihidrolisa menjadi alkohol dan menghasilkan energi berupa ATP
(Adenosin Tri Phosphat). Reaksinya adalah sebagai berikut :
C6H12O6 2C2H5OH + 2CO2 (Eka dan Amran, 2009)

Proses pemecahan glukosa dengan bantuan yeast termasuk salah satu

proses enzimatik karena yeast ini menghasilkan enzyme dan secara
sederhana dapat dirumuskan sebagai berikut :
C6H12O6 2C2H5OH + 2CO2 + 2ATP + 57kCal (Eka dan Amran, 2009)

Laboratorium Mikrobiologi Industri 6

ALKOHOL

2.3. Starter
Mikroorganisme yang sering digunakan dalam produksi bioetanol salah
satunya ialah Saccharomyces cerevisiae. Hal ini dikarenakan Saccharomyces
cerevisiae memiliki beberapa kelebihan dibandingkan dengan mikroorganisme
lainnya. Adapun kelebihan dari Saccharomyces cerevisiae antara lain mudah
beradaptasi dengan lingkungan, lebih tahan terhadap kadar alkohol tinggi, dan
lebih mudah didapat (Azizah, dkk.,2012).
Menurut Eka dan Amran (2009), syarat yeast yang baik untuk dibiakkan
dan dapat digunakan dalam fermentasi alkohol yaitu:
1. Mempunyai kemampuan tumbuh dan berkembang biak dengan cepat dalam
substrat yang sesuai
2. Dapat menghasilkan enzim dengan cepat untuk mengubah glukosa menjadi
alkohol
3. Mempunyai daya fermentasi yang tinggi terhadap glukosa, fruktosa,
galaktosa, dan maltose
4. Mempunyai daya tahan dalam lingkungan di kadar alkohol yang relatif tinggi
5. Tahan terhadap mikroba lain

2.4. Pengaruh Variabel terhadap Proses Fermentasi Etanol

Dalam percobaan ini, variabel berubah yang digunakan dalam proses
fermentasi etanol adalah kadar glukosa substrat yaitu 20%, 10%, dan 3%. Kadar
glukosa substrat berpengaruh terhadap konversi pembuatan etanol. Semakin
tinggi kadar glukosa substrat, maka semakin tinggi pula konversi alkohol yang
dihasilkan. Hal ini terjadi karena semakin besar rasio glukosa substrat
menyebabkan tumbukan antar molekul-molekul reaktan dengan mikroba
meningkat, sehingga penyusupan molekul mikroba ke dalam substrat lebih
sering terjadi dan fermentasi dapat lebih cepat (Ariyanto dkk., 2013).

Laboratorium Mikrobiologi Industri 7

ALKOHOL

BAB III
METODOLOGI PERCOBAAN

3.1. Rancangan Praktikum

3.1.1. Skema Rancangan Percobaan
a) Proses Pembuatan Starter
Sari buah belimbing (200 ml) disterilkan dengan pemanasan

Dicampur dengan nutrien (KH2PO4, MgSO4, urea)

Diatur pH 4

Ditambah ragi, tutup dengan alumunium foil, lalu

diberi lubang

Diinokulasi selama 2 hari

Dihitung jumlah densitas dan jumlah koloni di setiap variabel

Gambar 3.1 Proses pembuatan starter
b) Proses Fermentasi Alkohol

Sari buah belimbing (200 ml) disterilkan dengan pemanasan

Diatur pH 4

Pengaturan kadar glukosa substrat sebesar

20%, 10%, 3%

Ditambahkan starter

Difermentasikan selama 5 hari

Dihitung jumlah densitas dan kadar glukosa di setiap variabel

Gambar 3.2 Proses fermentasi alkohol

Laboratorium Mikrobiologi Industri 8

ALKOHOL

3.1.2. Variabel operasi

Variabel tetap
Starter : KH2PO4(5 gr/L) ,MgSO4(5 gr/L) , urea(5 gr/L), pH (4)
dan waktu (2 hari)
Fermentasi : pH(4), waktu (5 hari)
Variabel berubah
Starter
Starter A : ragi 10 gr/liter
Starter B : ragi 5 gr/liter
Starter C : ragi 2 gr/liter
Fermentasi
Variabel 1 : 20% glukosa substrat Starter A
Variabel 2 : 20% glukosa substrat Starter B
Variabel 3 : 20% glukosa substrat Starter C
Variabel 4 : 10% glukosa substrat Starter A
Variabel 5 : 10% glukosa substrat Starter B
Variabel 6 : 10% glukosa substrat Starter C
Variabel 7 : 3% glukosa substrat Starter A
Variabel 8 : 3% glukosa substrat Starter B
Variabel 9 : 3% glukosa substrat Starter C
Variabel respon
Starter : jumlah koloni dan densitas
Fermentasi : densitas dan kadar glukosa

3.2. Bahan dan Alat Yang Digunakan

3.2.1. Bahan
1. Sari buah belimbing 7. H2 SO4
2. Glukosa 8. Indicator MB
3. KH2PO4 9. Aquadest
4. MgSO4 10. Ragi roti (fermipan)
5. Urea 11. Fehling A dan B
6. NaOH

Laboratorium Mikrobiologi Industri 9

ALKOHOL

3.2.2. Alat
1. Erlenmeyer 5. Beakerglass
2. Buret, statif, klem 6. Autoclave
3. Gelas ukur 7. Kompor listrik
4. Pengaduk 8. Pipet tetes
3.2.3. Gambar Alat

Gambar 3.3 Gambar 3.4 Gambar 3.5

Erlenmeyer Buret, Statif, Klem Gelas ukur

Gambar 3.6 Gambar 3.7 Gambar 3.8

Pengaduk Beakerglass Autoclave

Gambar 3.9 Gambar 3.10

Kompor listrik Pipet tetes

3.3. Prosedur Praktkum

A. Pembuatan Starter
a. Mula-mula persiapkan sari buah belimbing untuk bahan starter. Dengan
mempersiapkan sari buah belimbing. Sari buah belimbing yang telah bebas
dari ampas.

Laboratorium Mikrobiologi Industri 10

ALKOHOL

b. Sari buah belimbing disterilkan dengan cara dididihkan. Adonan

didinginkan sampai dengan suhu kamar.

c. Sari buah belimbing sebanyak 200 ml ditambahkan 5 gr/l KH2PO4, 5 gr/l

MgSO4, dan urea sebanyak 5 gr/l sebagai nutrient.
d. pH diatur hingga 4.
e. Ragi/fermipan sebanyak 10, 5, 2 gram/liter ditambahkan ke dalam larutan
tersebut
f. Jumlah yeast dan densitas dalam larutan dihitung setiap hari selama 2 hari
sampai dengan konstan.
B. Pengukuran Variabel Respon
1. Metode perhitungan yeast
Cara Perhitungan Jumlah Mikroorganisme dengan Hemositometer
a. Sampel sebanyak 1 mL diencerkan 100x.
b. Sampel diteteskan pada meja hemositometer .
c. Hemositometer diletakkan pada mikroskop.
d. Gambar/ preparat dicari dengan mengatur perbesaran.
e. Jumlah yeast dihitung pada ruang hemositometer.
f. Jumlah yeast/ mikroorganisme dihitung dengan mengalikan faktor
pengenceran.

Gambar 3.11 Tampilan hemositometer menggunakan mikroskop

Laboratorium Mikrobiologi Industri 11

ALKOHOL

Jumlah mikroorganisme per sampel:

1

80 25. 105 103

2. Analisis densitas
a. Timbang berat piknometer kosong.
b. Tuangkan sampel ke dalam piknometer sampai penuh.
c. Timbang piknometer berisi sampel.

Densitas=

C. Fermentasi
1. Persiapan sari buah
a. Mula-mula persiapkan sari buah belimbing untuk bahan starter. Dengan
mempersiapkan sari buah belimbing. Sari buah belimbing yang telah
bebas dari ampas.
b. Sari buah belimbing disterilkan dengan cara dididihkan.
c. Adonan didinginkan sampai suhu kamar, lalu diatur pH=4
d. Penentuan kadar glukosa substrat (lakukan Metode analisis gula)
Kadar glukosa substrat sebelum fermentasi disesuaikan.
Bila %SB > 14%, perlu diencerkan:
%
14% = ( ) +( ) 100%

Bila %SB < 14%, perlu dtambah sukrosa:

180(% )
14% = 100%
342 +( )

Berat sukrosa = X mol . 342 gr/mol = Y gram

Y gram dilarutkan ke dalam substrat tersebut
2. Fermentasi media sari buah
a. Substrat yang telah diatur kadar glukosanya diambil.
b. Substrat ditambahkan starter sesuai variable.
c. Fermentasi anaerob selama 5 hari (ke-0, ke-1, ke-2, ke-3, ke-4).
d. Lakukan analisa glukosa dan pengukuran densitas sebelum dan sesudah
fermentasi.

Laboratorium Mikrobiologi Industri 12

ALKOHOL

D. Metode Analisis Gula

a. Analisis Glukosa Standar
1. Pembuatan glukosa standar.
2. 1,25 gram glukosa anhidrit dilarutkan dengan aquadest pada labu takar
500 ml
3. Standarisasi kadar glukosa
a. 5 mL glukosa standar, diencerkan sampai 100 mL, diambil 5 mL,
dinetralkan pHnya.
b. Larutan ditambahkan 5 mL fehling A dan 5 mL fehling B.
c. Larutan dipanaskan hingga 60C s.d. 70C.
d. Larutan dititrasi dengan glukosa standar sambil dipanaskan 60C-
70C sampai warna biru hampir hilang, ditambahkan 2 tetes MB.
e. Larutan dititrasi lagi dengan glukosa standar sambil dipanaskan
60C s.d. 70C sampai warna biru menjadi merah bata.
f. Kebutuhan titran dicatat volumenya.
F = V titran
b. Mengukur kadar glukosa sari buah
1. Ukur densitas sari buah
2. Cari M
a. 5 ml sari buah, diencerkan hingga 100 ml, diambil 5 ml dan
dinetralkan pHnya.
b. Larutan ditambahkan 5 ml fehling A dan 5 ml fehling B,
ditambahkan 5 mlglukosa standar yang telah diencerkan.
c. Larutan dipanaskan hinga 60C s.d. 70C.
d. Larutan dititrasi dengan glukosa standart sambil dipanaskan 60C
s.d. 70C, sampaiwarna biru hampir hilang, lalu ditambahkan 2 tetes
MB.
e. Larutan dititrasi lagi dengan glukosa standart sambil dipanaskan
60C s.d. 70Csampai warna biru menjadi merah bata.
f. Kebutuhan titran dicatat volumenya.
M = V titran

Laboratorium Mikrobiologi Industri 13

ALKOHOL

g. Kadar glukosa sari buah diukur dengan rumus berikut:

() ( ) ( )

%SB = 100% 0,025

c. Analisis Densitas
a. Timbang berat piknometer kosong.
b. Tuangkan sampel ke dalam piknometer sampai penuh.
c. Timbang piknometer berisi sampel.

Densitas=

Laboratorium Mikrobiologi Industri 14

ALKOHOL

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Pengaruh Penambahan Ragi terhadap Jumlah Koloni pada Starter

Tabel 4.1 Pengaruh penambahan ragi terhadap jumlah koloni pada starter
Hari ke- Starter A Starter B Starter C
0 8,1 1010 5,4 1010 2,9 1010
1 2,56 1011 1,96 1011 6,3 1010
2 2,75 1011 2,06 1011 6,8 1010

3100
2600
Jumlah Koloni
(x 100000000)

2100
Starter A (10 gr/ L Ragi)
1600
Starter B (5 gr/L Ragi)
1100
Starter C (2 gr/ L Ragi)
600
100
0 1 2
Waktu (Hari)

Gambar 4.1 Pengaruh penambahan ragi terhadap jumlah koloni pada starter

Dari gambar 4.1 dapat dilihat adanya pengaruh penambahan ragi terhadap
jumlah koloni. Pada hari ke-0, jumlah koloni pada starter A (10 gr/L ragi), starter
B (5 gr/L ragi), dan starter C (2 gr/L ragi) yaitu 8,1 x 10 10, 5,4 x 1010, dan 2,9 x
1010. Pada hari ke-1, jumlah koloni pada starter A (10 gr/L ragi), starter B (5 gr/L
ragi), dan starter C (2 gr/L ragi) yaitu 25,6 x 1010, 19,6 x 1010, dan 6,3 x 1010.
Pada hari ke-2, jumlah koloni pada starter A (10 gr/L ragi), starter B (5 gr/L
ragi), dan starter C (2 gr/L ragi) yaitu 27,5 x 1010, 20,6 x 1010, dan 6,8 x 1010.
Sehingga, dari grafik dapat dilihat bahwa jumlah koloni paling banyak pada
setiap harinya adalah pada starter A (10 gr/L ragi) dan paling sedikit pada starter
C (2 gr/L ragi).
Pada starter A dengan penambahan 10 gr/L ragi memperlihatkan jumlah
koloni terbanyak setiap harinya, sedangkan pada starter C dengan penambahan

Laboratorium Mikrobiologi Industri 15

ALKOHOL

2 gr/L ragi memperlihatkan jumlah koloni tersedikit setiap harinya. Semakin

banyak ragi yang ditambahkan, maka semakin banyak pula mikroba yang
membelah, sehingga semakin banyak juga jumlah koloni yang terlihat (Dutta,
2008). Hal ini disebabkan karena mikroba mengalami fase log (eksponensial)
yaitu fase dimana mikroba memperbanyak sel sehingga terjadi pertumbuhan
yang meningkat. Akibatnya, jumlah koloni yang terlihat semakin banyak
(Oktarina, 2008).

4.2. Pengaruh Penambahan Ragi terhadap Densitas pada Starter

Tabel 4.2 Pengaruh penambahan ragi terhadap densitas pada starter
Hari ke- Starter A Starter B Starter C
0 1,0652 1,0632 1,0548
1 1,062 1,058 1,054
2 1,19 1,1872 1,1852

1.2000
1.1750
Densitas (gr/ml)

1.1500 Starter A (10 gr/L Ragi)

1.1250
Starter B (5 gr/ L Ragi
1.1000
Starter C (2 gr/ L Ragi
1.0750
1.0500
0 1 2
Waktu (Hari)

Gambar 4.2 Pengaruh penambahan ragi terhadap densitas pada starter

Dari gambar 4.2 dapat dilihat adanya pengaruh penambahan ragi terhadap
densitas. Pada hari ke-0, densitas pada starter A (10 gr/L ragi), starter B (5 gr/L
ragi), dan starter C (2 gr/L ragi) yaitu 1.0652 gr/ml, 1,0632 gr/ml, dan 1,0548
gr/ml. Pada hari ke-1, densitas pada starter A (10 gr/L ragi), starter B (5 gr/L
ragi), dan starter C (2 gr/L ragi) yaitu 1.062 gr/ml, 1,058 gr/ml, dan 1,054 gr/ml.
Pada hari ke-2, densitas pada starter A (10 gr/L ragi), starter B (5 gr/L ragi), dan
starter C (2 gr/L ragi) yaitu 1.19 gr/ml, 1,1872 gr/ml, dan 1,1852 gr/ml.

Laboratorium Mikrobiologi Industri 16

ALKOHOL

Sehingga, dari grafik dapat dilihat bahwa densitas tertinggi pada setiap harinya
adalah pada starter A (10 gr/L ragi) dan paling rendah pada starter C (2 gr/L
ragi).
Pada starter A dengan penambahan 10 gr/L ragi memperlihatkan nilai
densitas tertinggi setiap harinya, sedangkan pada starter C dengan penambahan
2 gr/L ragi memperlihatkan nilai densitas terendah setiap harinya. Semakin
banyak jumlah ragi yang ditambahkan, maka semakin banyak pula
mikroorganisme yang bertumbuh sehingga densitas pun akan semakin tinggi
seiring bertambahnya jumlah ragi yang ditambahkan (Dutta, 2008).

4.3. Hubungan antara Jumlah Koloni dan Densitas pada Starter

Tabel 4.3 Hubungan antara jumlah koloni dan densitas pada Starter
Starter A Starter B Starter C
Hari ke Jumlah Jumlah Jumlah
(gr/ml) Koloni (gr/ml) Koloni (gr/ml) Koloni
0 1,0652 8,1x1010 1.0632 5.4x1010 1.0548 2.9x1010
1 1,0620 2,56x 1011 1.0580 1.96x1011 1.0540 6,3x1010
2 1,1900 2,75x1011 1.1872 2.06x1011 1.1852 2.9x1010

1.2000
1.1800
Densitas (gr/ml)

1.1600
1.1400 Stater A (10 gr/L Ragi)
1.1200
Starter B (5 gr/L Ragi)
1.1000
1.0800 Starter C (2gr/L Ragi)
1.0600
1.0400
0 1000 2000 3000
Jumlah Koloni (x 100000000)

Gambar 4.3 Hubungan antara jumlah koloni dan densitas pada starter

Dari gambar 4.3 dapat dilihat bahwa terjadi kenaikan densitas seiring
dengan kenaikan jumlah koloni dan penyimpangan penurunan densitas seiring
dengan kenaikan jumlah koloni. Kenaikan densitas seiring dengan jumlah koloni
yang mengalami peningkatan disebabkan karena mikroba sudah memasuki fase

Laboratorium Mikrobiologi Industri 17

ALKOHOL

eksponensial. Pada fase ini, mikroba membelah dengan cepat dan konstan
mengikuti kurva logaritmik (Hamdiyati, 2010). Jumlah mikroba dalam starter
mempengaruhi densitasnya, sehingga jika jumlah mikroba semakin banyak,
densitas starter pun semakin besar.
Penyimpangan penurunan densitas seiring jumlah koloni yang bertambah
disebabkan karena adanya kandungan oksigen yang masuk kedalam mikroba
sehingga mengakibatkan mikroba cepat membelah dan semakin banyak
jumlahnya, oksigen juga dapat berpengaruh pada densitas, jika oksigen dapat
memberi nutrisi pada mikroba, namun tidak dengan densitasnya. Densitas akan
berkurang jumlahnya seiring dengan kandungan oksigen yang masuk ke dalam
mikroba (Hamdiyati,2010).

4.4. Pengaruh Kadar Glukosa Substrat terhadap Konversi Alkohol pada

Fermentasi
Tabel 4.4 Pengaruh kadar glukosa substrat terhadap konversi alkohol pada
fermentasi starter A
Hari ke- Variabel 1 20%SB Variabel 4 10%SB Variabel 7 3%SB
0 0% 0% 0%
1 94,815% 73,11% 31,33%
2 97,40% 83,8% 64,33%
3 83,135% 74,27% 60,1%

120
Konversi Alkohol (%)

100
80
60 Variabel 1 20%SB

40 Variabel 4 10%SB
Variabel 7 3%SB
20
0
0 1 2 3
Waktu (Hari)

Gambar 4.4 Pengaruh kadar glukosa substrat terhadap konversi alkohol pada
fermentasi starter A

Laboratorium Mikrobiologi Industri 18

ALKOHOL

Tabel 4.5 Pengaruh kadar glukosa substrat terhadap konversi alkohol pada
fermentasi starter B
Hari ke- Variabel 2 20%SB Variabel 5 10%SB Variabel 8 3%SB
0 0% 0% 0%
1 93,71% 75,26% 29,17%
2 93,2% 78,2% 72%
3 83,885% 76,83% 60,043%

100
Konversi Alkohol (%)

80

60 Variabel 2 20%SB
Variabel 5 10%SB
40
Variabel 8 3%SB
20

0
0 1 2 3
Waktu (Hari)

Gambar 4.5 Pengaruh kadar glukosa substrat terhadap konversi alkohol pada
fermentasi starter B

Tabel 4.6 Pengaruh kadar glukosa substrat terhadap konversi alkohol pada
fermentasi starter C
Hari ke- Variabel 3 20%SB Variabel 6 10%SB Variabel 9 3%SB
0 0% 0% 0%
1 90,39% 72,97% 20,27%
2 92,05% 73,65% 88%
3 84,415% 77,22% 68,11%

Laboratorium Mikrobiologi Industri 19

ALKOHOL

100

Konversi Alkohol (%)

80

60
Variabel 3 20%SB
40
Variabel 6 10%SB
20 Variabel 9 3%SB
0
0 1 2 3
Waktu (Hari)

Gambar 4.6 Pengaruh kadar glukosa substrat terhadap konversi alkohol pada
fermentasi starter C
Dari ketiga gambar diatas, terlihat adanya pengaruh kadar glukosa substrat
terhadap konversi alkohol. Dimana starter dengan kadar 20% glukosa substrat
dapat menghasilkan konversi alkohol tertinggi dibandingkan kadar 10% dan 3%
glukosa substrat. Semakin tinggi kadar glukosa substrat, maka semakin tinggi
pula konversi alkohol yang dihasilkan. Namun, pada starter C hari ke-4 terjadi
penyimpangan, dimana konversi alkohol dengan kadar 3% glukosa substrat lebih
tinggi daripada konversi alkohol dengan kadar 10% glukosa substrat.
Semakin tinggi kadar glukosa substrat, maka semakin tinggi pula konversi
alkohol yang dihasilkan. Hal ini terjadi karena semakin besar rasio glukosa
substrat menyebabkan tumbukan antar molekul-molekul reaktan dengan
mikroba meningkat, sehingga penyusupan molekul mikroba ke dalam substrat
lebih serng terjadi dan fermentasi dapat lebih cepat (Ariyanto dkk., 2013).
Sedangkan penyimpangan yang terjadi pada starter C hari ke-2 yaitu
konversi alkohol dengan kadar 3% glukosa substrat lebih tinggi daripada
konversi alkohol dengan kadar 10% glukosa substrat disebabkan karena adanya
galat titrasi yang membuat perubahan warna pada titik akhir titrasi tidak tajam.
Galat dicerminkan melalui kurang presisinya dalam memutuskan secara tepat
kapan titik akhir titrasi terjadi (Underwood, 1998).

Laboratorium Mikrobiologi Industri 20

ALKOHOL

4.5. Pengaruh Waktu terhadap Densitas pada Fermentasi

Tabel 4.7 Pengaruh waktu terhadap densitas pada fermentasi
1 2 3
Variabel 1 1,206 gr/ml 1,1986 gr/ml 1,1858 gr/ml
Variabel 2 1,192 gr/ml 1,1938 gr/ml 1,2002 gr/ml
Variabel 3 1,1708 gr/ml 1,178 gr/ml 1,196 gr/ml
Variabel 4 1,1158 gr/ml 1,0828 gr/ml 1,0688 gr/ml
Variabel 5 1,1114 gr/ml 1,079 gr/ml 1,0788 gr/ml
Variabel 6 1,11 gr/ml 1,0626 gr/ml 1,0974 gr/ml
Variabel 7 1,0922 gr/ml 1,0488 gr/ml 1,0442 gr/ml
Variabel 8 1,058 gr/ml 1,044 gr/ml 1,0428 gr/ml
Variabel 9 1,0428 gr/ml 1,0408 gr/ml 1,0454 gr/ml

1.22
1.2
Variabel 1 Starter A 20% glukosa
1.18
Variabel 2 Starter B 20% glukosa
1.16
Densitas (g/ml)

Variabel 3 Starter C 20% glukosa

1.14
1.12 Variabel 4 Starter A 10% glukosa

1.1 Variabel 5 Starter B 10% glukosa

1.08 Variabel 6 Starter C 10% glukosa

1.06 Variabel 8 Starter B 3% glukosa

1.04 Variabel 9 Starter C 3% glukosa
1.02 Variabel 7 Starter A 3% glukosa
1
1 2 3
Waktu (Hari)

Gambar 4.7 Pengaruh waktu terhadap densitas pada fermentasi

Dari gambar 4.7 dapat dilihat adanya pengaruh waktu terhadap densitas
pada fermentasi. Penurunan densitas terjadi pada variable 1, 4, 5, 7, dan 8.
Kenaikan densitas terjadi pada variable 2 dan 3. Sedangkan nilai densitas yang
fluktuatif terjadi pada variable 6 dan 9.
Penurunan densitas terjadi karena ragi Saccharomyces cerevisiae merubah
glukosa menjadi etanol, dimana jika ragi yang diberikan banyak maka etanol

Laboratorium Mikrobiologi Industri 21

ALKOHOL

yang dihasilkan juga akan semakin banyak dan begitu juga sebaliknya, sehingga
densitasnya akan semakin rendah. Selain itu, dengan meningkatnya jumlah
alkohol ini maka densitas daripada campuran alkohol-air akan semakin rendah
(Siti dan Ahmad, 2015). Kenaikan densitas pada fermentasi seiring dengan
semakin bertambahnya waktu fermentasi disebabkan karena masih terjadi fase
log (eksponensial) yaitu fase dimana mikroba memperbanyak sel sehingga
terjadi pertumbuhan yang meningkat.dan menyebabkan naiknya densitas
(Oktarina, 2008). Nilai densitas yang fluktuatif dengan terjadinya penurunan
kemudian kenaikan berhubungan dengan fase pertumbuhan mikroorganisme,
dimana terdapat fase lag (adaptasi) dan fase log (eksponensial). Menurut Setyati
dkk (2015) mikroba jika dipindahkan ke dalam suatu media, maka mula-mula
mikroorganisme tersebut akan mengalami fase lag (adaptasi) untuk
menyesuaikan diri dengan kondisi lingkungan di sekitarnya. Hal tersebut
menyebabkan densitas turun. Kemudian bakteri mulai memasuki fase
eksponensial dimana mikroba membelah dengan cepat dan konstan. Sehingga
menyebabkan massa dan jumlah bakteri bertambah maka densitas naik
(Hamdiyati, 2010).

Laboratorium Mikrobiologi Industri 22

ALKOHOL

BAB V
PENUTUP

5.1. Kesimpulan
1. Semakin banyak ragi yang ditambahkan, maka semakin banyak pula mikroba
yang membelah, sehingga semakin banyak juga jumlah koloni yang terlihat
2. Semakin banyak jumlah ragi yang ditambahkan, maka semakin banyak pula
mikroorganisme yang bertumbuh sehingga densitas pun akan semakin tinggi
3. Jumlah mikroba dalam starter mempengaruhi densitasnya, sehingga jika
jumlah mikroba semakin banyak, densitas starter pun semakin besar.
4. Semakin tinggi kadar glukosa substrat, maka semakin tinggi pula konversi
alkohol yang dihasilkan.
5. Nilai densitas akan semakin turun seiring dengan bertambahnya waktu
fermentasi

5.2. Saran
1. Sterilkan alat yang akan digunakan.
2. Teliti dalam mengatur pH agar sesuai dengan prosedur.
3. Cermat dalam menghitung jumlah koloni.
4. Menutup rapat erlenmeyer dengan alumunium foil.
5. Teliti dalam mengamati perubahan warna titrasi.

Laboratorium Mikrobiologi Industri 23

ALKOHOL

DAFTAR PUSTAKA

Ariyanto, Hermawan Dwi, Furqon Hidayatulloh, dan Joko Murwono. 2013. Pengaruh
Penambahan Gula terhadap Prokduktivitas Alkohol dalam Pembuatan Wine
Berbahan Apel Buang (Reject) dengan Menggunakan Nopkor MZ.11.
Universitas Diponegoro.
Azizah, Baarri, dan Mulyani. 2012. Pengaruh Lama Fermentasi terhadap Kadar
Alkohol, pH, dan Produksi Gas pada Proses Fermentasi Bioetanol dari Whey
dengan Substitusi Kulit Nanas. Jurnal Aplikasi Teknologi Pangan.
Dutta, Rajiv. 2008. Fundamentals of Biochemical Engineering. Springer. New York.
Eka, Agustinus dan Amran Halim. 2009. Pembuatan Bioethanol dari Nira Siwalan
secara Fermentasi Fese Cair menggunakan Fermipan. Universitas Diponegoro
Hamdiyati, Yanti. 2010. Pertumbuhan Dan Pengendalian Mikroorganisme.
Mustofa, Alwi. 2012. Pemanfaatan Pati Garut (Maranta Arundinaceae) sebagai
Bahan Baku Pembuatan Bioetanol dengan Fermentasi oleh Sacharomyces
Cereviceae. Universitas Diponegoro.
Oktarina, Eva. 2008. Penapisan dan Uji Aktivitas Bakteri Alkalo Termofilik Penghasil
Xilanase. Universitas Indonesia.
Parandica, Adi Nuryadi. 2011. Kajian Pengaruh Jenis Kemasan Polietilen dan
Polipropilen terhadap Umur Simpan Buah Belimbing Manis (Averrhoa
carambola L.). Institut Pertanian Bogor.
Retno, Endah, Enny Kriswiyanti A dan Adrian Nur. 2009. Bioetanol Fuel Grade Dari
Talas (Colocasia Esculenta).Universitas Sebelas Maret.
Riyanti, Eny Ida. 2009. Biomassa sebagai Bahan Baku Bioetanol. Balai Besar
Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian.
Setiasih, Ani. 2011. Pemanfaatan Talas (Calocasia Esculenta L. Schott) sebagai
Bahan Baku Pembuatan Bioetanol. Universitas Diponegoro.
Setyati, Wilis Ari, Erni Martani, Triyanto, Subagiyo, dan Muhammad Zainuddin.
2015. Kinetika Pertumbuhan dan Aktivitas Isolat Protease 36k dari Sedimen
Ekosistem Mangrove, Karimunjawa, Jepara. Semarang. Universitas
Diponegoro.

Laboratorium Mikrobiologi Industri 24

ALKOHOL

Siti Khodijah dan Ahmad Abtokhi. 2015. Analisis Pengaruh Variasi Persentase Ragi
(Saccharomyces cerevisiae) dan Waktu pada Proses Fermentasi dalam
Pemanfaatan Duckweed (Lemna minor) sebagai Bioetanol.
Underwood, Day R.A. 1998. Analisa Kimia Kuantitatif. Penerbit Erlangga: Jakarta.

Laboratorium Mikrobiologi Industri 25

 LAPORAN SEMENTARA
PRAKTIKUM BIOPROSES

Materi :
ALKOHOL

OLEH :

KELOMPOK : 4 / RABU
NAMA : NIM:
1. Timothius Adrian Cristantyo Darmaji 21030116140195
2. Vania Frimasgita Giraldi 21030116120066
3. William Aditya Ayodyasena 21030115120007

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI INDUSTRI

DEPARTEMEN TEKNIK KIMIA FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS DIPONEGORO
SEMARANG
2017
I. Tujuan Percobaan
1. Membuat alkohol dari sari buah belimbing.
2. Mempelajari pengaruh penambahan ragi terhadap jumlah koloni dan densitas
pada pertumbuhan starter.
3. Mempelajari pengaruh kadar glukosa substrat terhadap konversi pembuatan
alkohol.
II. Percobaan
2.1 Bahan Yang Digunakan
1. Sari buah belimbing
2. Glukosa
3. KH2PO4 dan MgSO4
4. NaOH
5. H2SO4
6. Indikator MB
7. Aquadest
8. Ragi roti (fermipan)
9. Fehling A dan Fehling B
2.2 Alat yang dipakai
1. Erlenmeyer
2. Buret, statif, klem
3. Gelas ukur
4. Beaker glass
5. Pengaduk
6. Autoclave
7. Kompor listrik
8. Pipet tetes
2.3 Cara Kerja
A. Pembuatan Starter
a. Mula-mula persiapkan sari buah belimbing untuk bahan starter. Dengan
mempersiapkan sari buah belimbing. Sari buah belimbing yang telah
bebas dari ampas.
b. Sari buah belimbing disterilkan dengan cara dididihkan. Adonan
didinginkan sampai dengan suhu kamar.

A-1
 c. Sari buah belimbing sebanyak 200 ml ditambahkan 5 gr/l KH2PO4, 5
gr/l MgSO4, dan urea sebanyak 5 gr/l sebagai nutrient.
d. pH diatur hingga 4.
e. Ragi/fermipan sebanyak 10,5,2 gram/liter ditambahkan ke dalam
larutan tersebut
f. Jumlah yeast dan densitas dalam larutan dihitung setiap hari selama 2
hari sampai dengan konstan.
B. Pengukuran Variabel Respon
1. Metode perhitungan yeast
Cara Perhitungan Jumlah Mikroorganisme dengan Hemositometer
a. Sampel sebanyak 1 mL diencerkan 100x.
b. Sampel diteteskan pada meja hemositometer .
c. Hemositometer diletakkan pada mikroskop.
d. Gambar/ preparat dicari dengan mengatur perbesaran.
e. Jumlah yeast dihitung pada ruang hemositometer.
f. Jumlah yeast/ mikroorganisme dihitung dengan mengalikan faktor
pengenceran.

Tampilan hemositometer menggunakan mikroskop

Jumlah mikroorganisme per sampel:
1

80 25. 105 103

A-2
 2. Analisis densitas
a. Timbang berat piknometer kosong.
b. Tuangkan sampel ke dalam piknometer sampai penuh.
c. Timbang piknometer berisi sampel.

Densitas=

C. Fermentasi
1. Persiapan sari buah
a. Mula-mula persiapkan sari buah belimbing untuk bahan starter.
Dengan mempersiapkan sari buah belimbing. Sari buah belimbing
yang telah bebas dari ampas.
b. Sari buah belimbing disterilkan dengan cara dididihkan.
c. Adonan didinginkan sampai suhu kamar, lalu diatur pH=4
d. Penentuan kadar glukosa substrat (lakukan Metode analisis gula)
Kadar glukosa substrat sebelum fermentasi disesuaikan.
Bila %SB > 14%, perlu diencerkan:
%
14% = ( ) +( ) 100%

Bila %SB < 14%, perlu dtambah sukrosa:

180(% )
14% = 100%
342 +( )

Berat sukrosa = X mol . 342 gr/mol = Y gram

Y gram dilarutkan ke dalam substrat tersebut
2. Fermentasi media sari buah
a. Substrat yang telah diatur kadar glukosanya diambil.
b. Substrat ditambahkan starter sesuai variable.
c. Fermentasi anaerob selama 5 hari (ke-0, ke-1, ke-2, ke-3, ke-4).
d. Lakukan analisa glukosa dan pengukuran densitas sebelum dan
sesudah fermentasi.
D. Metode Analisis Gula
a. Analisis Glukosa Standar
1. Pembuatan glukosa standar.
2. 1,25 gram glukosa anhidrit dilarutkan dengan aquadest pada labu
takar 500 ml
3. Standarisasi kadar glukosa

A-3
 a. 5 mL glukosa standar, diencerkan sampai 100 mL, diambil 5 mL,
dinetralkan pHnya.
b. Larutan ditambahkan 5 mL fehling A dan 5 mL fehling B.
c. Larutan dipanaskan hingga 60C s.d. 70C.
d. Larutan dititrasi dengan glukosa standar sambil dipanaskan 60C-
70C sampai warna biru hampir hilang, ditambahkan 2 tetes MB.
e. Larutan dititrasi lagi dengan glukosa standar sambil dipanaskan
60C s.d. 70C sampai warna biru menjadi merah bata.
f. Kebutuhan titran dicatat volumenya.
F = V titran
b. Mengukur kadar glukosa sari buah
1. Ukur densitas sari buah
2. Cari M
h. 5 ml sari buah, diencerkan hingga 100 ml, diambil 5 ml dan
dinetralkan pHnya.
i. Larutan ditambahkan 5 ml fehling A dan 5 ml fehling B,
ditambahkan 5 mlglukosa standar yang telah diencerkan.
j. Larutan dipanaskan hinga 60C s.d. 70C.
k. Larutan dititrasi dengan glukosa standart sambil dipanaskan 60C
s.d. 70C, sampaiwarna biru hampir hilang, lalu ditambahkan 2
tetes MB.
l. Larutan dititrasi lagi dengan glukosa standart sambil dipanaskan
60C s.d. 70Csampai warna biru menjadi merah bata.
m. Kebutuhan titran dicatat volumenya.
M = V titran
n. Kadar glukosa sari buah diukur dengan rumus berikut:

() ( ) ( )

%SB = 100% 0,025

c. Analisis Densitas
a. Timbang berat piknometer kosong.
b. Tuangkan sampel ke dalam piknometer sampai penuh.
c. Timbang piknometer berisi sampel.

Densitas=

A-4
2.4 Hasil Percobaan
Data Awal
Variabel Sari buah belimbing
F 39 ml
M 30 ml
Sari Buah 1,2172 gr/ml
V Sari Buah 200 ml
%SB 1,85 %

Pengaturan Glukosa Substrat

Kadar sari buah
20 % 10% 3%
yang diinginkan
V aquadest - - -
Berat Sukrosa 135,4 gram 46,54 gram 5,64 gram

Data Starter
Starter A Starter B Starter C
Tanggal Jumlah Jumlah Jumlah
(gr/ml) koloni (gr/ml) koloni (gr/ml) koloni
06-09-
1,0652 8,1x1010 1,0632 5,4x1010 1,0548 2,9x1010
2017
07-09-
1,062 25,6x1010 1,058 19,6x1010 1,054 6,3x1010
2017
08-09-
1,19 27,5x1010 1,1872 20,6x1010 1,01852 6,8x1010
2017

Analisa Hasil Fermentasi

Variabel Hari Ke-1 Hari Ke-2 Hari Ke-3
F 31 ml 25,5 ml 31 ml
Variabel 1 M 26 ml 23 ml 14 ml
Starter A %SB 1,037% 0,52% 3,373%
20% %Alkohol 94,815% 97,40% 83,135%
1,206 gr/ml 1,1986 gr/ml 1,1858 gr/ml

A-5
 F 31 ml 25,5 ml 31 ml
Variabel 2 M 25 ml 19 ml 15,5 ml
Starter B %h 1,258% 1,36 % 3,223%
20% %Alkohol 93,71% 93,20% 83,885%
1,192 gr/ml 1,1938 gr/ml 1,2002 gr/ml
F 31 ml 25,5 ml 31 ml
Variabel 3 M 22 ml 18 ml 17 ml
Starter C %h 1,922% 1,59% 2,717%
20% %Alkohol 90,39% 92,05% 86,415%
1,1708 gr/ml 1,178 gr/ml 1,196 gr/ml

F 31 ml 25,5 ml 31 ml
Variabel 4 M 19 ml 18,5 ml 19 ml
Starter A %h 2,689% 1,62 % 2,573%
10% %Alkohol 73,11% 83,80% 74,27%
1,1158 gr/ml 1,0828 gr/ml 1,0688 gr/ml

F 31 ml 25,5 ml 31 ml
Variabel 5 M 20 ml 16,1 ml 20 ml
Starter B %h 2,474% 2,18 % 2,317%
10% %Alkohol 75,26% 78,20% 76,83%
1,1114 gr/ml 1,079 gr/ml 1,0788 gr/ml

F 31 ml 25,5 ml 31 ml
Variabel 6 M 19 ml 14,3 ml 21 ml
Starter C %h 2,703% 2,635 % 2,278%
10% %Alkohol 72,97% 73,65% 77,22%
1,11 gr/ml 1,0626 gr/ml 1,0974 gr/ml

F 31 ml 25,5 ml 31 ml
M 22 ml 21 ml 26 ml
Variabel 7
%h 2,06% 1,07 % 1,197%
Starter A
%Alkohol 31,33% 64,33% 60,1 %
3%
1,0922 gr/ml 1,0488 gr/ml 1,0442 gr/ml

Variabel 8 F 31 ml 25,5 ml 31 ml
Starter B M 22 ml 22 ml 26 ml

A-6
 3% %h 2,13% 0,838 % 1,1987%
%Alkohol 29,17% 72% 60,043%
1,0588 gr/ml 1,044 gr/ml 1,0428 gr/ml

F 31 ml 25,5 ml 31 ml
Variabel 9 M 21 ml 24 ml 27 ml
Starter C %h 2,397% 0,36 % 0,9566%
3% %Alkohol 20,27% 88% 68,11%
1,0428 gr/ml 1,0408 gr/ml 1,0454 gr/ml

Semarang, 12 September 2017

MENGETAHUI,
PRAKTIKAN ASISTEN

Timothius A.C.D. Vania F.G. William A.A. Ernisa Ismirani K.

21030114130202

A-7
ALKOHOL

LEMBAR PERHITUNGAN

I. Starter
a. Hari Ke-0 (6 September 2017)
Massa picnometer kosong =24,72 gram
Volume picnometer =25ml
- Starter A (10 gr/l Ragi)
Massa picno + sari buah = 51,35gram
sel = 81
massa sari belimbing 51,3524,72
= = = 1,0652 gr/ml
V picnometer 25
1
Jumlah Koloni = 80 x 25 x 105 x103 x fp x total volume starter x sel
1
Jumlah Koloni = 80 x 25 x 105 x103 x 100 x 200 x 81 = 8,1 x 1010

- Starter B (5 gr/l Ragi)

Massa picno + sari buah = 51,3 gram
sel = 54
massa sari belimbing 51,324,72
= = = 1,0632 gr/ml
V picnometer 25
1
Jumlah Koloni = 80 x 25 x 105 x103 x fp x total volume starter x sel
1
Jumlah Koloni = 80 x 25 x 105 x103 x 100 x 200 x 54 = 5,4 x 1010

- Starter C (2 gr/l Ragi)

Massa picno + sari buah = 51,09 gram
sel = 29
massa sari belimbing 51,0924,72
= V picnometer
= 25
= 1,0548 gr/ml
1
Jumlah Koloni = 80 x 25 x 105 x103 x fp x total volume starter x sel
1
Jumlah Koloni = 80 x 25 x 105 x103 x 100 x 200 x 29 = 2,9 x 1010

b. Hari Ke-1 (7 September 2017)

Massa picnometer kosong=28,58 gram
Volume picnometer=50ml
- Starter A (10 gr/l Ragi)
Massa picno + sari buah = 81,68 gram
sel = 256

Laboratorium Mikrobiologi Industri B-1

ALKOHOL

massa sari belimbing 81,6828,58

= = = 1,062 gr/ml
V picnometer 50
1
Jumlah Koloni = 80 x 25 x 105 x103 x fp x total volume starter x sel
1
Jumlah Koloni = 80 x 25 x 105 x103 x 100 x 200 x 256 = 25,6 x 1010

- Starter B (5 gr/l Ragi)

Massa picno + sari buah = 81,5 gram
sel = 196
massa sari belimbing 81,528,58
= = = 1,058 gr/ml
V picnometer 50
1
Jumlah Koloni = x fp x total volume starter x sel
80 x 25 x 105 x103
1
Jumlah Koloni = 80 x 25 x 105 x103 x 100 x 200 x 196 = 19,6 x 1010

- Starter C (2 gr/l Ragi)

Massa picno + sari buah = 81,28 gram
sel = 63
massa sari belimbing 81,2828,58
= = = 1,054 gr/ml
V picnometer 50
1
Jumlah Koloni = 80 x 25 x 105 x103 x fp x total volume starter x sel
1
Jumlah Koloni = 80 x 25 x 105 x103 x 100 x 200 x 29 = 2,9 x 1010

c. Hari Ke-2 (8 September 2017)

Massa picnometer kosong=26 gram
Volume picnometer=25ml
- Starter A (10 gr/l Ragi)
Massa picno + sari buah = 55,75 gram
sel = 275
massa sari belimbing 55,7526
= = = 1,19 gr/ml
V picnometer 25
1
Jumlah Koloni = 80 x 25 x 105 x103 x fp x total volume starter x sel
1
Jumlah Koloni = 80 x 25 x 105 x103 x 100 x 200 x 275 = 27,5 x 1010

- Starter B (5 gr/l Ragi)

Massa picno + sari buah = 55,68 gram
sel = 206
massa sari belimbing 55,6826
= = = 1,1872 gr/ml
V picnometer 25

Laboratorium Mikrobiologi Industri B-2

ALKOHOL

1
Jumlah Koloni = 80 x 25 x 105 x103 x fp x total volume starter x sel
1
Jumlah Koloni = 80 x 25 x 105 x103 x 100 x 200 x 206 = 20,6 x 1010

- Starter C (2 gr/l Ragi)

Massa picno + sari buah = 55,63 gram
sel = 68
massa sari belimbing 55,6326
= = = 1,1852 gr/ml
V picnometer 25
1
Jumlah Koloni = 80 x 25 x 105 x103 x fp x total volume starter x sel
1
Jumlah Koloni = 80 x 25 x 105 x103 x 100 x 200 x 68 = 6,8 x 1010

II. Fermentasi
Massa picnometer kosong=25,92gram
Volume piknometer = 25 ml
Massa picnometer + sampel sari belimbing = 56,35 gram
56,3525,92
sampel = = = 1,2172 gr/ml
25

( )

%SB = x 100% x 0,0025
sari melon
200 100
(3930)
20 5
%SB = x 100% x 0,0025
200 1,2172

%SB = 1,85%
- 20%SB
180 +(% )
20% = 342 +( )
x 100%
180 +(0,0185 200 1,2172)
20% = x 100%
342 +(200 1,2172)

X = 0,3959 mol
Berat Sukrosa = 0,3959 mol x 342 gr/mol = 135,4 gram
- 10%SB
180 +(% )
10% = x 100%
342 +( )
180 +(0,0185 200 1,2172)
10% = x 100%
342 +(200 1,2172)

X = 0,136 mol
Berat Sukrosa = 0,136mol x 342 gr/mol = 46,54 gram

Laboratorium Mikrobiologi Industri B-3

ALKOHOL

- 3%SB
180x +(%SB x VSB x SB )
3% = x 100%
342x +(VSB x SB )

180 +(0,0185 200 1,2172)

3% = x 100%
342 +(200 1,2172)

X = 0,0165 mol
Berat Sukrosa = 0,0165mol x 342 gr/mol = 5,64 gram

a. Hari Ke-0 (8 September 2017)

- Variabel 1 (Starter A 20%)
55,7526
= = 1,19 gr/ml
25

%h = 20%
2020
Konversi Alkohol = x 100% = 0%
20

- Variabel 2 (Starter B 20%)

55,6826
= = 1,1872 gr/ml
25

%h = 20%
2020
Konversi Alkohol = 100% = 0%
20
- Variabel 3 (Starter C 20%)
55,6326
= = 1,1852 gr/ml
25

%h = 20%
2020
Konversi Alkohol = 20 x 100% = 0%
- Variabel 4 (Starter A 10%)
55,7526
= = 1,19 gr/ml
25

%h = 10%
1010
Konversi Alkohol =
10
100% = 0%
- Variabel 5 (Starter B 10%)
55,6826
= = 1,1872 gr/ml
25

%h = 10%
102,474
Konversi Alkohol = 10 x 100% = 75,26%
- Variabel 6 (Starter C 10%)
55,6326
= = 1,1852 gr/ml
25

Laboratorium Mikrobiologi Industri B-4

ALKOHOL

%h = 10%
1010
Konversi Alkohol = x 100% = 0%
10

- Variabel 7 (Starter A 3%)

55,7526
= = 1,19 gr/ml
25

%h = 3%
33
Konversi Alkohol = = 0%
3
- Variabel 8 (Starter B 3%)
55,6826
= = 1,1872 gr/ml
25

%h = 3 %
33
Konversi Alkohol = x 100% = 0%
3
- Variabel 9 (Starter C 3%)
55,6326
= = 1,1852 gr/ml
25

%h = 3%
33
Konversi Alkohol = 3 x 100%= 0%
b. Hari Ke-1 (11 September 2017)
- Variabel 1 (Starter A 20%)
91,830,88
= = 1,206 gr/ml
50
200 100
(3126) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 1,037%
200 x 1,206
201,037
Konversi Alkohol = x 100% = 94,815
20

- Variabel 2 (Starter B 20%)

90,4530,88
= = 1,192 gr/ml
50
200 100
(3125) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 1,258%
200 x 1,192
201,258
Konversi Alkohol = 100% = 93,71%
20
- Variabel 3 (Starter C 20%)
89,4230,88
= = 1,1708 gr/ml
50
200 100
(3122) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 1,922%
200 x 1,1708

Laboratorium Mikrobiologi Industri B-5

ALKOHOL

201,922
Konversi Alkohol = x 100% = 90,39%
20
- Variabel 4 (Starter A 10%)
86,6730,88
= = 1,1158 gr/ml
50
200 100
(3119) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 2,689%
200 x 1,1158
102,689
Konversi Alkohol = 100% = 73,11%
10
- Variabel 5 (Starter B 10%)
86,4530,88
= = 1,1114 gr/ml
50
200 100
(3120) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 2,474%
200 x 1,1114
102,474
Konversi Alkohol = x 100% = 75,26%
10
- Variabel 6 (Starter C 10%)
86,3830,88
= = 1,11 gr/ml
50
200 100
(3119) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 2,703 %
200 x 1,11
102,703
Konversi Alkohol = x 100% =72,97%
10

- Variabel 7 (Starter A 3%)

85,4930,88
= = 1,0922 gr/ml
50
200 100
(3122) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 2,06%
200 x 1,0922
32,06
Konversi Alkohol = = 31,3%
3
- Variabel 8 (Starter B 3%)
83,8230,88
= = 1,0588 gr/ml
50
200 100
(3122) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 2,13 %
200 x 1,0588
32,125
Konversi Alkohol = x 100% = 29,17%
3
- Variabel 9 (Starter C 3%)
83,0230,88
= = 1,0428 gr/ml
50
200 100
(3121) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 =2,397 %
200 x 1,0428

Laboratorium Mikrobiologi Industri B-6

ALKOHOL

32,397
Konversi Alkohol = 3
x 100%= 20,27%

c. Hari Ke-2 (12 September 2017)

- Variabel 1 (Starter A 20%)
90,9230,99
= = 1,1986 gr/ml
50
200 100
(25,523) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 0,52 %
200 x 1,1986
200,52
Konversi Alkohol = x 100% = 97,4%
20

- Variabel 2 (Starter B 20%)

90,6830,99
= = 1,1938 gr/ml
50
200 100
(25,519) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 1,36%
200 x 1,1938
201,36
Konversi Alkohol = 100% = 93,2%
20
- Variabel 3 (Starter C 20%)
89,8930,99
= = 1,178 gr/ml
50
200 100
(25,518) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 1,59%
200 x 1,178
201,59
Konversi Alkohol = 100% = 92,05%
20

- Variabel 4 (Starter A 10%)

85,1330,99
= = 1,0828 gr/ml
50
200 100
(25,518,5) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 1,62%
200 x 1,0828
101,62
Konversi Alkohol = 100%= 83,80%
10
- Variabel 5 (Starter B 10%)
84,9430,99
= = 1,079 gr/ml
50
200 100
(25,516,1) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 2,18%
200 x 1,079
102,18
Konversi Alkohol = x 100% = 78,20%
10
- Variabel 6 (Starter C 10%)

Laboratorium Mikrobiologi Industri B-7

ALKOHOL

84,1230,99
= = 1,0626 gr/ml
50
200 100
(25,514,3) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 2,635 %
200 x 1,0626
102,635
Konversi Alkohol = x 100% = 73,65 %
10
- Variabel 7 (Starter A 3%)
83,4330,99
= = 1,0488 gr/ml
50
200 100
(25,521) x x 5
20
%h = x 100% x 0,0025 = 1,07 %
200 x 1,0488
31,07
Konversi Alkohol = x 100% = 64,33%
3

- Variabel 8 (Starter B 3%)

83,1930,99
= = 1,044 gr/ml
50
200 100
(25,522) x x 5
20
%h = x 100% x 0,0025 = 0,838 %
200 x 1,044
30,86
Konversi Alkohol = 3 x 100% = 72%
- Variabel 9 (Starter C 3%)
83,0330,99
= = 1,0408 gr/ml
50
200 100
(25,524) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 0,36 %
200 x 1,0408
30,36
Konversi Alkohol = x100% = 88%
3
d. Hari Ke-3 (13 September 2017)
- Variabel 1
90,1930,9
= = 1,1858 gr/ml
50
200 100
(3114) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 3,373%
200 x 1,1858
203,373
Konversi Alkohol = x 100% = 83,135%
20

- Variabel 2
91,0130,9
= = 1,2022 gr/ml
50
200 100
(3115,5) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 3,223%
200 x 1,2022
203,223
Konversi Alkohol = x 100% = 83,885%
20

Laboratorium Mikrobiologi Industri B-8

ALKOHOL

- Variabel 3
90,730,9
= = 1,196 gr/ml
50
200 100
(3117) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 2,717 %
200 x 1,196
202,717
Konversi Alkohol = x 100% = 86,415%
20

- Variabel 4
84,3430,9
= = 1,0688 gr/ml
50
200 100
(3119) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 2,573%
200 x 1,0688
102,573
Konversi Alkohol = x 100% = 74,27%
10

- Variabel 5
84,8430,9
= = 1,0788 gr/ml
50
200 100
(3120) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 2,317 %
200 x 1,0788
102,317
Konversi Alkohol = x 100% = 76,83%
10

- Variabel 6
85,7730,9
= = 1,0974 gr/ml
50
200 100
(3121) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 2,278 %
200 x 1,0974
102,278
Konversi Alkohol = x100% = 77,22%
10

- Variabel 7
83,1130,9
= = 1,0442 gr/ml
50
200 100
(3126) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 1,197 %
200 x 1,0442
31,197
Konversi Alkohol = x100% = 60,1%
3

- Variabel 8
83,0430,9
= = 1,0428 gr/ml
50
200 100
(3126) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 1,1987 %
200 x 1,0428

Laboratorium Mikrobiologi Industri B-9

ALKOHOL

31,1987
Konversi Alkohol = x 100% = 60,043%
3

- Variabel 9
83,1730,9
= = 1,0454 gr/ml
50
200 100
(3127) x x
20 5
%h = x 100% x 0,0025 = 0,9566 %
200 x 1,0454
30,9566
Konversi Alkohol = x 100% = 68,11%
3

Laboratorium Mikrobiologi Industri B-10

ALKOHOL

DATA PENDUKUNG

4.1. Pengaruh Penambahan Ragi terhadap Jumlah Koloni pada Starter

Hari ke- Starter A Starter B Starter C
0 8,1 1010 5,4 1010 2,9 1010
1 2,56 1011 1,96 1011 6,3 1010
2 2,75 1011 2,06 1011 6,8 1010

4.2. Pengaruh Penambahan Ragi terhadap Densitas pada Starter

Hari ke- Starter A Starter B Starter C
0 1,0652 1,0632 1,0548
1 1,062 1,058 1,054
2 1,19 1,1872 1,1852

4.3. Hubungan antara Jumlah Koloni dan Densitas pada Starter

Starter A Starter B Starter C
Hari ke Jumlah Jumlah Jumlah
(gr/ml) Koloni (gr/ml) Koloni (gr/ml) Koloni
0 1,0652 8,1x1010 1.0632 5.4x1010 1.0548 2.9x1010
1 1,0620 2,56x 1011 1.0580 1.96x1011 1.0540 6,3x1010
2 1,1900 2,75x1011 1.1872 2.06x1011 1.1852 2.9x1010

4.4. Pengaruh Kadar Glukosa Substrat terhadap Konversi Alkohol pada

Fermentasi
Variabel 1 Variabel 4 Variabel 7
Hari ke-
20%SB 10%SB 3%SB
Starter 0 0% 0% 0%
A 1 94,815% 73,11% 31,33%
2 97,40% 83,8% 64,33%
3 83,135% 74,27% 60,1%

Laboratorium Mikrobiologi Industri C-1

ALKOHOL

Variabel 2 Variabel 5 Variabel 8

Hari ke-
20%SB 10%SB 3%SB
0 0% 0% 0%
Starter
1 93,71% 75,26% 29,17%
B
2 93,2% 78,2% 72%
3 83,885% 76,83% 60,043%

Variabel 3 Variabel 6 Variabel 9

Hari ke-
20%SB 10%SB 3%SB
Starter 0 0% 0% 0%
C 1 90,39% 72,97% 20,27%
2 92,05% 73,65% 88%
3 84,415% 77,22% 68,11%

4.5. Pengaruh Waktu terhadap Densitas pada Fermentasi

1 2 3
Variabel 1 1,206 gr/ml 1,1986 gr/ml 1,1858 gr/ml
Variabel 2 1,192 gr/ml 1,1938 gr/ml 1,2002 gr/ml
Variabel 3 1,1708 gr/ml 1,178 gr/ml 1,196 gr/ml
Variabel 4 1,1158 gr/ml 1,0828 gr/ml 1,0688 gr/ml
Variabel 5 1,1114 gr/ml 1,079 gr/ml 1,0788 gr/ml
Variabel 6 1,11 gr/ml 1,0626 gr/ml 1,0974 gr/ml
Variabel 7 1,0922 gr/ml 1,0488 gr/ml 1,0442 gr/ml
Variabel 8 1,058 gr/ml 1,044 gr/ml 1,0428 gr/ml
Variabel 9 1,0428 gr/ml 1,0408 gr/ml 1,0454 gr/ml

Laboratorium Mikrobiologi Industri C-2

ALKOHOL

PROSEDUR ANALISA

A. Tahap Sterilisasi Alat

Tahap sterilisasi alat menggunakan alkohol.
B. Pengukuran Densitas Sampel
1. Timbang piknometer kosong, lalu catat beratnya (A).
2. Lalu kalibrasi piknometer dengan cara piknometer terkait diisi dengan aquades.
Lalu kembali ditimbang. Catat beratnya (B).
3. Kemudian berat (B) berat (A) maka akan didapat berat aquades.
4. Cari volume kalibrasi dengan rumus :
m
=
V
merupakan massa jenis air pada suhu 250C
5. Isi piknometer dengan sampel, lalu timbang beratnya. Catat beratnya (C)
6. Kemudian berat (C) berat (A) maka akan didapat berat sampel
7. Lalu hitung sampel dengan menggunakan rumus:
m
=
V

Laboratorium Mikrobiologi Industri D-1

 LEMBAR KUANTITAS REAGEN
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI INDUSTRI
TEKNIK KIMIA UNIVERSITAS DIPONEGORO

PRAKTIKUM KE :2
MATERI : Alkohol
HARI : Rabu
TANGGAL : 6 September 2017
KELOMPOK : 4 Rabu
NAMA : Timothius Adrian Christantyo Darmaji
Vania Frimasgita Giraldi
William Aditya Ayodyasena
ASISTEN : Ernisa Ismirani K.

KUANTITAS REAGEN
Starter
A. 200 ml sari tomat + 5 gr/L KH2PO4 + 5 gr/L MgSO4 + 5 gr/L urea + 10 gr/L yeast
B. 200 ml sari tomat + 5 gr/L KH2PO4 + 5 gr/L MgSO4 + 5 gr/L urea + 5 gr/L yeast
C. 200 ml sari tomat + 5 gr/L KH2PO4 + 5 gr/L MgSO4 + 5 gr/L urea + 2 gr/L yeast

Data = Densitas pH = 4 tutup: al-foil

Jml Reagen Waktu = 2 hari (0,1,2)

Fermentasi
20%SB a,b,c
10%SB a,b,c
200 ml sari belimbing data = densitas, kadar glukosa
3%SB
a,b,c

pH =4
Waktu = 5 hari (0,1,2,3,4,5)
Tutup = alumunium foil
%V = 14,3%V
TUGAS TAMBAHAN
1. Resume jurnal internasional tentang mikroba penghasil alkohol selain
Saccharomyces, tulis tangan di folio masing-masing 1, bawa saat ACC data
(bawa jurnal asli).
2. Bawa milimeterblok
3. Buat n+1 lapsem di folio (datanya saja)!

Semarang, 30 Agustus 2017

ASISTEN

(Ernisa Ismirani K.)

21030114130202

E-1
REFERENSI

F-1
F-2
F-3
F-4
F-5
F-6
F-7
F-8
F-9
F-10
F-11
F-12
F-13
F-14
F-15
F-16
F-17
F-18
F-19
F-20
F-21
F-22
F-23
F-24
F-25
F-26
F-27
F-28
F-29
F-30
F-31
F-32
F-33
 DIPERIKSA TANDA
NO TANGGAL KETERANGAN TANGAN

1 14/11/2017 Cek semua BAB

2 19/11/2017 - Cek semua BAB

- Tanggal di lembar pengesahan nanti
sesuaikan dg tanggal ACC, tgl lapsem
dan kuantitas sesuaikan dg laporan
aslinya

3 20/11/2017 ACC