LPO, NP-SH, dan CAT diukur pada hati
Evaluation of the Effectiveness
of Piper cubeba Extract in the
Amelioration of CCl4-Induced
Liver Injuries and Oxidative
Damage in the Rodent Model
Mansour AlSaid,1 Ramzi
Mothana,1 Mohammad
Raish,2 Mohammed Al-
Sohaibani,3 Mohammed Al-Yahya,1 Ajaz
Ahmad,4 Mohammed Al-
Dosari,1 and Syed Rafatullah
Latar Belakang. Penyakit hati masih
merupakan beban kesehatan utama di
seluruh dunia. Apalagi, tanaman obat telah
mendapatkan popularitas dalam pengobatan
beberapa penyakit termasuk hati. Dengan
demikian, penelitian ini adalah untuk
mengevaluasi keefektifan buah Piper cubeba
dalam perbaikan luka hati yang diinduksi
CCl4 dan kerusakan oksidatif pada model
hewan pengerat. Metode. Aktivitas
Hepatoprotektif dinilai dengan
menggunakan berbagai parameter biokimia
seperti SGOT, SGPT, -GGT, ALP, total
bilirubin, LDH, dan protein total. Sementara
itu, aktivitas antioksidan in vivo sebagai
tikus serta ekspresi mRNA sitokin seperti
TNF, IL-6, dan IL-10 dan gen terkait stres
iNOS dan HO-1 ditentukan. dengan RT-
PCR Tingkat kerusakan hati juga dianalisis
melalui pengamatan histopatologis. Hasil.
Pengobatan dengan PCEE secara signifikan
dan dosis tergantung obat yang diinduksi
obat dalam peningkatan kadar serum enzim
hati. Selanjutnya, PCEE secara signifikan
mengurangi peroksidasi lipid di jaringan hati
dan memulihkan aktivitas enzim antioksidan
pertahanan NP-SH dan CAT ke tingkat
normal. Pemberian PCEE secara signifikan
menurunkan ekspresi sitokin sitokin TNF
dan IL-6 mRNA yang diobati dengan CCl4
dengan cara tergantung dosis, sementara itu
meningkatkan efek penghambatan
hepatotermis IL-10 dan menginduksi
ekspresi mRNA gen iNOS dan HO-1.
1. Perkenalan
Sejumlah besar fungsi penting yang
diperlukan untuk mengatur homeostasis
seperti detoksifikasi dan ekskresi dilakukan
oleh hati; Namun penyakit hati masih
merupakan masalah kesehatan utama meski
ada kemajuan di bidang ilmu kedokteran dan
farmasi. Banyak efek samping dikaitkan
dengan obat sintetis yang digunakan untuk
mengobati gangguan hati. Akibatnya, obat
herbal tradisional, rempah-rempah, buah-
buahan, sayuran, dan tanaman obat
mendapat popularitas selama beberapa
dekade terakhir karena keamanan dan
khasiatnya.
Buah Piper cubeba L. (Piperaceae)
umumnya dikenal sebagai cubeba dalam
bahasa Arab dan tailed piper dalam bahasa
Inggris. Mereka adalah rempah-rempah dan
memiliki berbagai khasiat obat [1]. Dalam
pengobatan tradisional mereka digunakan
sebagai stimulan, makanan pembuka, obat
sakit perut, dan ekspektoran. Buah cubeba
juga digunakan untuk menghidupkan
kembali sakit lambung, enteritis, diare, dan
agen anti-inflamasi. Selanjutnya, buah
cubeba diketahui memiliki rasa sakit dan
mengurangi peradangan pada hewan
percobaan [2], yang dikaitkan dengan
aktivitas antioksidan dari beberapa unsur
kimia yang terisolasi [3]. Buah juga
dilaporkan memiliki antibakteri, antijamur,
bakterisida (Helicobacter pylori), dan sifat
pelindung ginjal [4-6]. P. cubeba digunakan
oleh praktisi pengobatan tradisional dalam
mengobati penyakit kuning akut. Dalam
studi sebelumnya ekstrak etanol P. mareba
telah ditunjukkan untuk meningkatkan
aktivitas pioglitazone dan bertindak secara
sinergis dalam menurunkan kadar glukosa
darah pada tikus [7]. Ada beberapa baris
bukti yang melibatkan stres oksidatif dan
pembengkakan pada etiologi penyakit hati,
penyakit kardiovaskular, dan kanker [8, 9].
Akibatnya, karbon tetraklorida (CCl4), yang
menghasilkan radikal bebas reaktif saat
dimetabolisme, telah banyak digunakan
sebagai pelarut untuk menginduksi
kerusakan hati pada model hewan [10].
CCl4 meningkatkan peroksidasi lipid pada
sel hati dan menginduksi kerusakan hati dan
nekrosis [11]. Sepengetahuan kami, ada
kekurangan laporan ilmiah yang tersedia
untuk mendukung klaim tradisional potensi
hepatoprotektifnya. Sejauh ini, belum ada
penelitian yang melaporkan efek
hepatoprotektif terhadap kerusakan hati
akibat karbon tetraklorida pada tikus. Oleh
karena itu, penelitian ini bertujuan untuk
menyelidiki kemungkinan potensi efek
hepatoprotektif ekstrak etanol Piper cubeba
(PCEE) terhadap cedera hati yang diobati
CCl4 pada tikus Wistar jantan.
2. Bahan dan Metode
2.1. Binatang
Tikus jantan sehat Wistar albino (180-200 g)
digunakan untuk penelitian ini. Hewan
dikeluarkan dari Fasilitas Rumah Ternak
Pusat Universitas King Saud dan disimpan
di kandang hewan plastik standar dalam
kelompok yang terdiri dari 6 hewan masing-
masing dengan siklus terang dan gelap 12
jam pada C. Tikus diberi makan chow
tikus standar dan diberi airad libitum.
Hewan-hewan itu diaklimatisasi dengan
kondisi laboratorium selama seminggu
sebelum percobaan. 2.2. Bahan Tanam dan
Persiapan Ekstrak Buah dari Piper cubeba
dibeli dari pasar sayuran lokal di Riyadh dan
identitas mereka dikonfirmasi di
Departemen Farmakognosi, Fakultas
Farmasi, Universitas King Saud. Buah
kering (500 g) bubuk kasar dan dimaserasi
dalam etanol 3 L 70% selama 72 jam dengan
menggunakan metode perkolasi. Pelarut
kemudian dilepaskan pada suhu 40 C di
bawah tekanan rendah pada evaporator
berputar. Ekstrak etanol kasar Piper cubeba
(PCEE) kemudian ditangguhkan dalam air
suling sesaat sebelum pemberiannya pada
hewan. 2.3. Toksisitas akut Tikus jantan
Wistar albino dibagi menjadi kelompok uji
yang terdiri dari enam hewan di masing-
masing kelompok. Pengujian dilakukan
dengan menggunakan dosis oral ekstrak
herbal dari 100 sampai 1000 mg / kg berat
badan. Tikus-tikus tersebut diamati terus
menerus selama 1 jam dan kemudian
setengah jam selama 4 jam untuk perubahan
perilaku kotor dan aktivitas motorik umum
seperti menggeliat, diserang, diterapi ekor
mencubit, menggerogoti, ukuran pupil,
keluaran tinja, perilaku makan, dan
sebagainya dan selanjutnya sampai 72 jam
untuk setiap kematian. Ekstrak tidak
menyebabkan perubahan perilaku yang
signifikan dan tidak ada mortalitas yang
diamati.
2.4. Prosedur percobaan
Tikus dibagi secara acak menjadi lima
kelompok dari enam hewan. Kelompok I
menerima garam normal selama 7 hari dan
berfungsi sebagai kontrol normal. Kelompok
II menerima garam normal (1 mL / kg, hal)
selama 7 hari dan berfungsi sebagai kontrol
toksik. Kelompok III dan IV diujikan secara
profilaksis dengan ekstrak tumbuhan dengan
dosis 250 dan 500 mg / kg p.o. masing
masing. Kelompok V berfungsi sebagai
kontrol positif dan diobati secara profilaksis
dengan silymarin (10 mg / kg, halo) selama
7 hari. Pada hari ke 8, Kelompok II, III, dan
IV dan Kelompok V disuntikkan secara
intraperitoneal (i.p.) dengan 0,4 mL / kg
CCl4 sebagai larutan 20% dalam minyak
parafin, sementara dua kelompok lainnya
diberi minyak parafin yang sama. Setelah 24
jam hepatotoksisitas CCl4, darah
dikumpulkan dari pleksus retro-orbital di
bawah anestesi eter ringan pada tabung yang
mengandung disodium EDTA. Plasma
dipisahkan dengan sentrifugasi pada 2500
g selama 10 menit dan dipindahkan ke
tabung eppendrof prelabel untuk berbagai
parameter biokimia. Segera setelah
penarikan darah hewan-hewan dikorbankan
dan sampel hati dikumpulkan untuk estimasi
histopatologis dan biokimia. Sampel hati
dicuci dengan garam normal yang dingin,
dan homogenat hati 10% (w / v) disiapkan
dalam larutan Cold Ice 0.15 M KCl dengan
menggunakan alu Teflon yang digerakkan
motor. Hewan-hewan tersebut disetujui oleh
Komite Etika Hewan Institusional College
of Pharmacy, King Saud University, Riyadh,
Arab Saudi.
2.5. Estimasi Biokimia
arameter biokimia yang berbeda seperti
serum glutamic oxaloacetic transaminase
(SGOT) [12], serum glutamic pyruvic
transaminase (SGPT) [13], -glutamyl
transpeptidase (GGT) [14], alkaline
phosphatase [14], total bilirubin [15], dan
laktat asam dehidrogenase (LDH) [16],
masing-masing diperkirakan dalam serum.
2.6. Estimasi Malondialdehida (MDA) pada
Jaringan Hepatik
Metode yang dilaporkan oleh Utely dkk.
[17] diikuti. Hewan tersebut dibunuh 1 jam
setelah pemberian etanol. Jaringan hati
dikeluarkan dan dihomogenisasi dalam 0,15
mol / L KCl (pada suhu 4 C) dalam
homogenizer tipe Potter-Elvehjem untuk
memberi homogenasi homogenat 10% b / v.
Aliquot homogenate 1 mL dalam volume
diinkubasi pada suhu 37 C selama 3 jam
dalam shaker metabolik. Kemudian 1 mL
TCA berair 10% ditambahkan dan
dicampur. Campuran kemudian
disentrifugasi pada 800 x g selama 10 menit.
Satu mililiter supernatan dilepaskan dan
dicampur dengan 1 ml asam 0,67% 2-
tiobarbiturat dalam air dan ditempatkan
dalam bak air mendidih selama 10 menit.
Campuran didinginkan dan diencerkan
dengan 1 mL air suling. Absorbansi
kromogen yang dihasilkan ditentukan pada
panjang gelombang 532 nm pada suhu
kamar terhadap referensi kosong.
Konsentrasi MDA dibaca dari kurva
kalibrasi standar yang diplot menggunakan
1,1,3,3'-tetraethoxypropane (TEP). Tingkat
peroksidasi lipid dinyatakan sebagai nilai
MDA yang dinyatakan sebagai nanomoles
MDA per gram protein dengan
menggunakan koefisien kepunahan molar
untuk MDA M-1 cm-1 [18]. Kandungan
protein diperkirakan sesuai dengan metode
Lowry et al. (1951) [19].
2.7. Estimasi Nonprotein Sulfhydryl (NP-
SH) pada Jaringan Hepatik
Hepatik nonprotein sulfhydryls diukur
sesuai dengan metode Sedlak dan Lindsay
(1968) [20]. Jaringan hati dihomogenisasi
dengan garam normal es dingin yang
mengandung 0,02 mmol / L
ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA).
Aliquot dari 5 mL homogenat dicampur
dalam tabung uji 15 mL dengan 4 mL air
suling dan 1 mL asam trikloroasetat 50%
(TCA). Tabung digoyang sebentar-sebentar
selama 10 menit dan disentrifugasi pada
3000 rpm / menit. Dua mililiter supernatan
dicampur dengan 4 mL buffer 0,4 mol / L
Tris pada pH 8.9. 0,1 mL 5,5'-dithio-bis- (2-
nitrobenzoic acid) (DTNB) ditambahkan dan
sampelnya terguncang. Absorbansi diukur
dalam waktu 5 menit dari penambahan
DTNB pada 412 nm terhadap residu reagen.
2.8. Estimasi Aktivitas Katalase dan Total
Protein dalam Jaringan Hati
Aktivitas katalase diukur sesuai dengan
metode yang dijelaskan oleh Aebi (1974)
[21]. Supernatan (0,1 mL) ditambahkan ke
cuvette yang mengandung 1,9 mL buffer
fosfat 50 mM (pH 7.0). Reaksi dimulai
dengan penambahan 1,0 mL H2O2 30 mM
yang baru disiapkan.
Tingkat dekomposisi H2O2 diukur secara
spektrofotometri dari perubahan absorbansi
pada 240 nm. Aktivitas katalase dinyatakan
sebagai protein U / mg. Total protein
diperkirakan dalam homogenat hati dan
ditentukan secara spektrofotometri dengan
menggunakan pereaksi fenol Folin [19].
2.9. Isolasi Total RNA
Dua puluh empat jam setelah pemberian
CCl4, sampel hati diperoleh untuk
digunakan untuk isolasi RNA total sesuai
dengan petunjuk pabrik reagen Trizol (Life
Technologies, Inc., Grand Island, NY,
USA). Setelah isolasi RNA total, transkripsi
terbalik dari total RNA ke cDNA diproses
dengan kit transkripsi reverse cDNA
berkapasitas tinggi dari Biosystem Terapan
sesuai dengan petunjuk pabrik pembuat [22].
Ringkasnya, RNA diencerkan menjadi 2 RT
master mix buffer; 2 L dNTP (10 mM),
inhibitor 1 L RNase, dan primer hexamer 1
L ditambahkan ke 10 L RNA encer pada
es. Campuran dipanaskan pada suhu 65 C
selama 10 menit dan kemudian didinginkan
dengan dingin di atas es selama 2 menit,
sebelum penambahan 2 L reverse
transcriptase (200 unit L-1). Reaksi
dilakukan pada suhu 25 C selama 10 menit
kemudian 37 C selama 120 menit yang
didiamkan 72 C selama 4 menit. CDNA
disimpan pada suhu -80 C sampai
penggunaan lebih lanjut.
.10. Ekspresi mRNA TNF-, IL-10, HO-1,
dan iNOS-2 pada jaringan hepatik
Analisis kuantitatif ekspresi mRNA spesifik
dilakukan oleh RT-PCR dengan
menundukkan hasil cDNA ke PCR
amplifikasi menggunakan pelat reaksi optik
96-well di Sistem ABI Prism 7500
(Biosystem Terapan). Campuran 25 L
mengandung 0,1 L 10 M forward primer
dan 0,1 L 10 M primer terbalik
(konsentrasi akhir 40 nM masing-masing
primer), 12,5 L campuran Master
Universal SYBR, 11,05 L air bebas
nuklease, dan 1,25 L sampel cDNA. Gen
tikus TNF-, IL-10, HO-1, iNOS-2, dan -
ACTIN disintesis dan dibeli dari Integrated
DNA Technologies (IDT, Coralville, IA)
(Tabel 1). Perubahan lipatan pada tingkat
mRNA antara kelompok yang diobati dan
tidak diobati dikoreksi oleh tingkat -
ACTIN. Data RT-PCR dianalisis dengan
menggunakan ekspresi gen relatif, yaitu (DD
CT), seperti yang dijelaskan dan dijelaskan
sebelumnya [23, 24]. Secara singkat, data
tersebut disajikan sebagai perubahan lipatan
ekspresi gen yang dinormalisasi ke gen
referensi endogen --ACTIN dan relatif
terhadap kalibrator. Perubahan lipatan pada
tingkat gen target antara kelompok yang
diperlakukan dan tidak diobati, yang
dikoreksi dengan tingkat -ACTIN,
ditentukan dengan menggunakan persamaan
berikut:, di mana dan. Semua reaksi
dijalankan dalam rangkap dua. Polimerase
mulai panas diaktifkan dengan pemanasan
pada suhu 95 C selama 3 menit. Kondisi
bersepeda adalah 0,1 menit pada suhu 95 C
(meleleh) dan 0,45 menit pada suhu 60 C
(anil dan ekstensi). Nilai ambang batas ()
dihitung secara otomatis oleh perangkat
lunak. Data diolah sesuai dengan metode
yang dideskripsikan oleh Pfaffl secara
singkat [24]; Persamaan Pfaffl pertama kali
digunakan untuk menghitung rasio ekspresi
gen relatif, yaitu perubahan ekspresi gen
target dibagi dengan perubahan ekspresi gen
referensi.
.11. Studi Histopatologis
Jaringan hati diiris dalam potongan kecil dan
direndam dalam formalin 10% buffered
buffer selama 24 jam. Jaringan tetap diolah
secara rutin, disematkan pada parafin (untuk
mendapatkan bagian parafin 4-5 m),
dibagi, deparaffinized, dan rehidrasi dengan
menggunakan teknik standar (Bancroft and
Gamble). Bagian kemudian diwarnai dengan
pewarna Haematoxylin-Eosin dan dipelajari
untuk perubahan histopatologis [25].
3. Studi Aktivitas Antioksidan In Vitro
3.1. Aktivitas Scavenging DPPH Radikal
Kemampuan pemulungan radikal PCEE
terhadap DPPH dievaluasi seperti yang
dijelaskan sebelumnya [30]. Dengan adanya
antioksidan yang dapat menyumbangkan
elektron ke DPPH, warna ungu, khas untuk
peluruhan radikal bebas DPPH, dan
perubahan tingkat penyerapan pada nm
diukur. Tes ini memberikan informasi
tentang kemampuan senyawa untuk
menyumbangkan atom hidrogen, pada
jumlah elektron yang dapat disumbangkan
oleh molekul tertentu, dan pada mekanisme
tindakan antioksidan. PCEE dilarutkan
dalam metanol dan berbagai konsentrasi (10,
50, 100, 500, dan 1000 g / mL) dari
ekstrak; 125 L disiapkan DPPH (1 mM
dalam metanol) dan pelarut 375 L
(metanol) ditambahkan. Setelah inkubasi 30
menit pada suhu 25 C, penurunan
absorbansi diukur pada nm. Aktivitas
pemulungan radikal dihitung dari persamaan
berikut:
3.2. -Carotene-Linoleic Acid Assay
Aktivitas antioksidan ekstrak dievaluasi
dengan menggunakan metode pemutihan -
karoten yang dijelaskan dan dimodifikasi
oleh Mothana (2011) [31]. Satu
mL larutan 0,2 mg / mL -karoten dalam
kloroform ditambahkan ke dalam labu yang
mengandung 0,02 mL asam linoleat dan 0,2
mL Tween-20. Kloroform dipindahkan pada
suhu 40 C menggunakan evaporator putar.
Campuran yang dihasilkan segera
diencerkan dengan 100 mL air suling dan
dicampur selama 1-2 menit untuk
membentuk emulsi. Campuran dibuat
dengan cara yang sama namun tanpa -
karoten digunakan sebagai blanko. Kontrol
yang mengandung 0,2 mL 80% (v / v)
metanol dan bukan ekstrak juga disiapkan.
Sebuah alikuot 5 mL dari emulsi
ditambahkan ke dalam tabung yang
mengandung 0,2 mL ekstrak sampel pada 1
mg / mL. Rutin (1 mg / mL) digunakan
sebagai standar. Tabung ditempatkan di
pemandian air pada suhu 40 C selama 2
jam. Penyerapan dibaca pada 470 nm pada
interval 15 menit. Aktivitas antioksidan
dihitung dengan menggunakan persamaan
berikut: dimana dan adalah nilai absorbansi
yang diukur pada nol waktu inkubasi untuk
ekstrak dan kontrol sampel. dan nilai
absorbansi untuk ekstrak sampel dan
kontrol, masing-masing, pada menit. 3.3.
Penapisan fitokimia Skrining fitokimia awal
untuk terpenoid, alkaloid, flavonoid,
antrakuinon, saponin, karbohidrat, tanin, dan
koumarins dilakukan dengan ekstrak dengan
metode kimia dan kromatografi lapis tipis
(KLT) menurut metodologi yang dijelaskan
oleh Wagner dan Bladt (1996) 32]. 3.4.
Analisis Data Statistik Hasil dinyatakan
sebagai. Variasi total yang ada dalam satu
set data diperkirakan dengan analisis varians
satu arah (ANOVA) diikuti oleh uji t.
Dunnett. dianggap signifikan 4. Hasil 4.1.
Efek Protektif PCEE terhadap
Hepatotoksisitas Akibat CCl4 Studi
pendahuluan tentang ekstrak Piper cubeba
tidak memiliki toksisitas pada tikus bila
diberikan dalam dosis sampai 1000 mg / kg
melalui jalur oral. Oleh karena itu, untuk
studi lebih lanjut 250 dan 500 mg / kg dosis
ekstrak dipilih. Peningkatan signifikan
dalam biomarker serum seperti serum
SGOT, SGPT, GGT, ALP, total bilirubin,
dan LDH diamati pada hewan yang diobati
dengan CCl4, yang merupakan indikasi
kegagalan hati. PCEE dengan dosis 250 dan
500 mg / kg p.o. pretreatment selama 7 hari
menurunkan tingkat parameter yang
disebutkan di atas secara signifikan (,, dan)
pada kelompok III dan IV. Selain itu,
pretreatment silymarin (grup V)
menghasilkan penurunan yang sangat
signifikan () pada serum SGOT, SGPT,
GGT, ALP total bilirubin, dan LDH.
Perbaikan luka hati yang disebabkan CCl4
oleh PCEE sebanding dengan silymarin
(Tabel 2). Tabel 2: Pengaruh ekstrak etanol
Piper cubeba pada marker hati pada
hepatotoksisitas akibat CCl4.
4.2. Pengaruh PCEE terhadap Tingkat MDA
Tingkat peroksidasi lipid diukur dengan
pembentukan zat reaktif asam thiobarbiturat
(TBARS). Ada peningkatan tajam pada
(TBARS) tingkat pada tikus yang diobati
dengan CCl4 (kelompok II) yang
menunjukkan adanya stres oksidatif. Tikus
yang diobati dengan PCEE 250 dan 500 mg
/ kg + CCl4 (kelompok III dan IV)
menunjukkan penurunan dosis TBARS yang
sangat tinggi dibandingkan dengan tikus
perlakuan CCl4 (kelompok II). Ini jelas
menunjukkan pengurangan stres oksidatif
oleh PCEE. Gambar 1 (a) menunjukkan
perubahan signifikan yang signifikan pada
tingkat antioksidan TBARS pada tikus uji
CCl4 sebagai () dibandingkan kelompok
kontrol. Perubahan tingkat TBARS
sebanding dengan silymarin.
Gambar 1: Pengaruh ekstrak etanol Piper
cubeba pada (a) MDA, (b) NP-SH, (c) kadar
protein total, dan (d) kadar katalase pada
jaringan hati tikus yang diobati dengan
CCl4. Semua nilai mewakili. ; ; ; ; ANOVA,
diikuti oleh beberapa uji beda Dunnett.
Dibandingkan kelompok normal;
dibandingkan dengan kelompok CCl4 saja.
4.3. Pengaruh PCEE terhadap Tingkat NP-
SH
Tikus-tikus yang diintimidasi CCl4
(kelompok II) menunjukkan penurunan yang
signifikan dari kandungan NP-SH yang
menunjukkan adanya peningkatan
metabolisme protein sedangkan terjadi
peningkatan kadar NP-SH dalam kelompok
III dan IV (PCEE 250 dan 500 mg / kg +
CCl4). Perlakuan awal Silymarin (kelompok
V) menghasilkan peningkatan NP-SH ()
yang sangat signifikan. Ini jelas
menunjukkan bahwa PCEE memiliki
kemampuan untuk mengisi kembali
kandungan NP-SH ke tingkat normal
(Gambar 1 (b)).
4.4. Pengaruh PCEE terhadap Tingkat Total
Protein
Gambar 1 (c) menunjukkan penurunan yang
signifikan dari kandungan protein total pada
tikus sitrat CCl4 yang merupakan indikasi
luka hati yang disebabkan karena stres
oksidatif. Apalagi dosisnya Peningkatan
kadar protein total secara signifikan diamati
pada kelompok III dan IV (PCEE 250 dan
500 mg / kg + CCl4). Perlakuan awal
silymarin (kelompok V) menghasilkan
peningkatan protein total yang sangat
signifikan (). Ini jelas menunjukkan bahwa
PCEE dan silymarin memiliki kemampuan
untuk menginduksi proliferasi sel pada
jaringan hati (Gambar 1 (c)).
4.5. Pengaruh PCEE terhadap Tingkat
Katalase
Pengobatan CCl4 menyebabkan penurunan
kadar katalase dalam jaringan hati secara
signifikan (dibandingkan dengan kelompok
kontrol. Perlakuan awal dengan PCEE pada
kedua dosis menghasilkan peningkatan
tingkat katalase yang signifikan bila
dibandingkan dengan tikus yang diobati
dengan CCl4. Silymarin juga menunjukkan
peningkatan yang signifikan pada tingkat
enzim antioksidan dibandingkan dengan
tikus perlakuan CCl4 (Gambar 1 (d)).
4.6. Pengaruh PCEE terhadap Ekspresi
mRNA Gen Sitokin Seperti Tumor Necrotic
Factor- (TNF-), Interleukin-6 (IL-6), dan
Interleukin-10 (IL-10)
Tingkat hepatik faktor nekrotik tumor-
(TNF-) dan interleukin-6 (IL-6) pada
ekspresi mRNA pada tikus CCl4intoksidasi
kira-kira 4,5 dan 2,1 kali lipat lebih tinggi
daripada pada tikus kontrol, seperti yang
ditunjukkan pada Gambar 2 (a) dan 2 (b),
sedangkan tikus yang diobati dengan PCEE
+ CCl4 menunjukkan penghambatan
tergantung dosis ekspresi TNF- dan mRNA
dibandingkan dengan tikus uji CCl4. Selain
itu, pengobatan tikus dengan PCEE selama
satu minggu sebelum pemberian CCl4
meningkatkan ekspresi mRNA IL-10,
seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2 (c),
yang menambahkan lebih banyak bukti efek
anti-inflamasi PCEE pada respons fase akut.
ke CCl4. Upregulasi IL-10 oleh PCEE
menunjukkan kemampuannya untuk
menurunkan regulasi sitokin inflamasi.
Tingkat hati iNOS-2 pada ekspresi mRNA
pada tikus yang diobati dengan CCL4 kira-
kira 7,3 kali lipat lebih tinggi daripada tikus
kontrol. Ada downregulasi signifikan
tergantung dosis pada kelompok tikus yang
sebelumnya diobati dengan PCEE, silymarin
+ CCl4 (Gambar 2 (d)). Hal ini
mengindikasikan bahwa PCEE dan
silymarin memiliki aktivitas antiinflamasi.
Gambar 2: Pengaruh ekstrak etanol Piper
cubeba terhadap ekspresi mRNA gen
sitokin: (a) tumor necrotic factor- (TNF-),
(b) interleukin-6 (IL-6), (c) interleukin-10
(IL -10), (d) gen sintase nitrat oksida yang
dapat diinduksi (iNOS), dan (e) gen
heamoxygenase (HO-1) yang dapat
diinduksi. Semua nilai mewakili. ; ; ; ;
ANOVA, diikuti oleh beberapa uji beda
Dunnett. Dibandingkan kelompok normal;
dibandingkan dengan kelompok CCl4 saja.
Tingkat katabolisme heme, seperti
ditunjukkan pada Tabel 2, menggambarkan
tingkat bilirubin secara signifikan lebih
tinggi pada serum tikus yang diobati dengan
CCl4 dibandingkan dengan kelompok
kontrol. Kecenderungan yang sama diamati
pada ekspresi HO-1 indenible mRNA yang
meningkat secara signifikan 7,4 kali lipat ()
pada kelompok CCl4 dibandingkan dengan
kontrol .
Gambar 3: Histopatologi jaringan hati. (a)
Bagian hati tikus kontrol normal
menunjukkan vena sentral yang dikelilingi
oleh tali sel hati (arsitektur normal), (b)
bagian hati tikus yang diobati dengan CCl4
yang menunjukkan perubahan lemak besar,
kemacetan vena sentral utama (ditunjukkan
dengan panah), formasi balon , nekrosis
dengan pembengkakan, dan hilangnya batas
sel, (c) bagian hati tikus yang diobati dengan
CCl4 dan 250 mg / kg PCEE yang
menunjukkan kemacetan vena ringan
(ditunjukkan dengan panah),
pembengkakan, dan nekrosis dengan dilatasi
sinusoidal, (d) bagian hati tikus yang diobati
dengan CCl4 dan 500 mg / kg PCEE
menunjukkan tidak adanya balon, sel
inflamasi, dan regenerasi hepatosit di sekitar
vena sentral menuju arsitektur hati normal
dekat tapi sedikit kemacetan pada vena
sentral (ditunjukkan oleh panah), dan (e)
bagian hati tikus yang diobati dengan CCl4
dan 10 mg / kg silymarin yang menunjukkan
arsitektur hati normal.
4.8. Aktivitas Antioksidan In Vitro pada
PCEE
Aktivitas antioksidan potensial PCEE
diselidiki berdasarkan aktivitas pemulungan
radikal DPPH dan penghambatan oksidasi
asam linoleat. Seperti ditunjukkan pada
Tabel 3, PCEE mampu mengurangi DPPH
radikal bebas yang stabil ke DPPH berwarna
kuning pada konsentrasi tinggi (500 dan
1000 g / mL). Selain itu, dalam sistem
model asam -karoten / linoleat, PCEE juga
mampu menghambat perubahan warna -
karoten pada konsentrasi 1000 g / mL.
Nilai antioksidan total adalah 79% (Tabel
3). Aktivitas antioksidan yang diamati
sebanding dengan kontrol positif, rutin
5. Diskusi Perubahan dalam kebiasaan
makan dan kemoprevensi menunjukkan
strategi yang cukup efektif melawan stres
oksidatif dan merupakan fokus utama
bidang penelitian akhir-akhir ini [33].
Berbagai laporan telah menunjukkan bahwa
beberapa mutagen dan karsinogen
menyebabkan pembentukan radikal
peroksida, yang memainkan peran utama
dalam munculnya kanker dan gangguan
kesehatan lainnya [25, 34]. Investigasi saat
ini dilakukan untuk mengevaluasi
kemungkinan efek protektif PCEE terhadap
hepatotoksisitas akibat karbon tetraklorida
dan stres oksidatif pada tikus. CCl4 adalah
bahan kimia yang dikenal, dapat diandalkan,
dan umum digunakan untuk menginduksi
kerusakan hati. Studi saat ini
mengungkapkan bahwa CCl4induction pada
tikus meningkatkan tingkat SGPT, SGOT,
GGT, dan ALP. CCl4 menyebabkan luka
hepatosit akut dan integritas membran yang
berubah dan akibatnya enzim dalam
hepatosit bocor [35]. Namun, setelah
pretreatment dengan PCEE dan silymarin,
peningkatan patologis pada SGOT, SGPT,
-GGT, dan ALP dipulihkan secara
signifikan. Hasil ini menunjukkan bahwa
PCEE dan silymarin memiliki kemampuan
untuk melindungi terhadap cedera hepatosit
CCl4. Mekanisme kerusakan hati akibat
CCl4 diketahui dimediasi melalui reaksi
radikal bebas [10]. Metabolisme toksisitas
CCl4 terletak pada biotransformasinya oleh
sistem sitokrom P450 ke dua metabolit
reaktif seperti triklorometil () radikal bebas
dan triklorometilperoksida (CCl3) dalam
retikulum endoplasma [36, 37] hati dan
proses peroksidasi lipid yang diawali [38] .
CCl4 dilaporkan menginduksi kerusakan
hati akibat metabolism
konversi radikal melalui peroksidasi lipid
dan gangguan aktivitas enzim antioksidan
[39] dan menginduksi stres oksidatif dan
menyebabkan luka hati dengan
pembentukan radikal bebas [40]. Karbon
tetraklorida, di sisi lain, menyebabkan
toksisitas yang nyata dengan meningkatkan
peroksidasi lipid hati (LPO), seperti yang
ditemukan oleh peningkatan konsentrasi
malondialdehida hati (MDA) [41, 42].
Malondialdehida, produk akhir LPO, dalam
jaringan hati berfungsi sebagai indikator
LPO, yang diketahui terjadi pada toksisitas
hati karena pembentukan spesies oksigen
reaksi (ROS) [42]. Penurunan tingkat MDA
yang signifikan diamati pada tikus yang
diobati dengan PCEE dan silymarin. PCEE
mungkin melindungi hepatosit dengan
mengganggu peroksidasi lipid yang
dimediasi oleh CCl4 dan menghasilkan
pencegahan turunnya radikal bebas [43].
Keracunan hati yang dipicu oleh CCl4
menyebabkan penipisan kandungan
nonhotein sulfhydryl yang signifikan dari
jaringan hati yang merupakan indikator
penting untuk menunjukkan kerusakan
oksidatif hati. Deplesi pada tingkat NPSH
dalam organisme hidup menyebabkan
cedera jaringan dan disfungsi lebih lanjut
[44]. Namun, pretreatment dengan PCEE
secara signifikan mencegah penurunan
NPSH hepatik CCl4, yang menunjukkan
sifat antioksidan ekstrak dalam toksisitas
hati yang diobati CCl4. Temuan ini
menunjukkan bahwa ekstrak Piper cubeba
memiliki kemampuan untuk mengais radikal
bebas reaktif yang mengurangi stres
oksidatif atau kerusakan jaringan hati dan
memprovokasi aktivitas enzim antioksidan
hati. AS1-SH1 bertindak sebagai
antioksidan nonenzymatic, baik intra-
dan secara ekstraselular terlibat dalam
perlindungan integritas sel normal dan
fungsi oleh redoks dan detoksifikasi 15
reaksi [45]. Selanjutnya, penelitian saat ini
menunjukkan penurunan yang nyata pada
tingkat protein total protein hati (TP) di
CCl4 hanya tikus yang diobati, sedangkan
kadar TP di hati meningkat secara signifikan
setelah pemberian PCEE dan silymarin.
Tingkat protein total juga dapat digunakan
sebagai salah satu biomarker untuk
menentukan fungsi hati [46]. Hal ini
menunjukkan bahwa PCEE dan silymarin
menginduksi proliferasi sel hati yang
merupakan tanda untuk regenerasi hati.
Katalase (CAT) adalah antioksidan
enzimatik yang tersebar luas di semua
jaringan hewan, dan aktivitas tertinggi
ditemukan di sel darah merah dan hati.
Katalase serum (CAT) adalah indeks
enzimatik yang paling sensitif pada luka hati
yang disebabkan oleh spesies oksigen reaktif
(ROS) dan stres oksidatif [47, 48]. CAT
adalah hemoprotein yang melindungi sel
dari akumulasi H2O2 [49]. Oleh karena itu,
pengurangan aktivitas CAT dapat
menyebabkan sejumlah efek buruk karena
asimilasi radikal superoksida dan hidrogen
peroksida. Dosis yang lebih tinggi (500 mg /
kg) meningkatkan kadar CAT seperti yang
dihasilkan oleh silymarin. Untuk
menyelidiki mekanisme yang mendasari,
kami mengevaluasi efek PCEE terhadap
ekspresi mRNA dari sitokin proinflamasi
tertentu terkait peradangan dan proliferasi.
TNF-, IL-6, dan IL-10 sebagai gen fase
akut dianggap sebagai biomarker khusus
untuk peradangan [50]. ROS menata ulang
NF-B, yang selanjutnya menginduksi
sitokin proinflamasi, seperti IL-1, TNF-,
dan IL-6 [51]. TNF- dan IL-6 adalah
mediator utama respon inflamasi dan
mengendalikan ekspresi jaringan gen
inflamasi. Oleh karena itu, induksi TNF-
dan IL-6 berkontribusi secara signifikan
terhadap cedera hati, yang dikaitkan dengan
upregulasi ekspresi gen TNF- dan IL-6
yang diamati pada kelompok CCl4. Hasil ini
sesuai dengan penelitian sebelumnya [26].
Akibatnya, induksi TNF- dan IL-6
berkontribusi pada manifestasi respons
inflamasi sistemik dan pada akhirnya pada
perkembangan kegagalan organ. Atenuasi
pada tingkat sitokin inflamasi dapat
menjelaskan regenerasi hati yang dipercepat
seperti yang diamati pada PCEE dan tikus
yang diberi susu silymarin. Pelepasan TNF-
, sebagai mediator proinflamasi pada
apoptosis hati, juga terkait dengan
sitotoksisitas yang diinduksi oleh CCl4 [52,
53].
Interleukin-10 (IL-10) adalah sitokin anti-
inflamasi utama yang berpotensi
menghambat produksi mediator
proinflamasi seperti TNF- dan IL-12 [54].
Pengobatan tikus dengan PCEE dan
silymarin selama satu minggu sebelum
pemberian CCl4 meningkatkan ekspresi
mRNA IL-10 yang menambahkan lebih
banyak bukti efek anti-inflamasi PCEE dan
silymarin pada fase akut terhadap CCl4.
Upregulasi IL-10 oleh PCEE dan silymarin
menunjukkan kemampuannya untuk
menurunkan regulasi sitokin inflamasi. Hati
inflamasi yang melibatkan stres oksidatif
memulai upregulasi ekspresi HO-1 mRNA
dan peningkatan produk jalur degradasi
heme [55, 56]. Diantara produk ini, bilirubin
dan CO adalah mediator utama dari
sitoproteksi dimediasi HO-1 yang dapat
diinduksi dengan alasan bahwa mereka
membantu memulihkan keseimbangan
homeostatik intraselular di bawah kondisi
stres oksidatif dan membantu menekan
peradangan melalui perampingan mediator
proinflamasi [55, 57-60]. Hasil HO-1 pada
ekspresi mRNA menunjukkan bahwa
pengobatan CCl4, menunjukkan
kecenderungan peningkatan ekspresi RNA
HO-1 m, sementara PCEE dan tikus berpadu
dengan silymarin CCL4 menunjukkan
penurunan ekspresi HO-1 pada mRNA
dengan cara tergantung dosis. Ini jelas
menunjukkan bahwa PCEE dan silymarin
memiliki peran sitoprotektif
Ekspresi mRNA iNOS-2 meningkat secara
signifikan oleh CCl4, yang dapat dikaitkan
dengan produksi NO yang diinduksi CCl4
yang dilaporkan [61, 62]. Perlakuan awal
PCEE memiliki efek pengurangan yang
signifikan terhadap ekspresi mRNA iNOS-2 histopatologi juga menunjukkan bahwa
pada tikus yang diobati dengan CCl4. PCEE PCEE dan silymarin dapat mencegah
dan silymarin telah memediasi tindakan kerusakan hati akibat CCl4 di hati.
sitoprotektif dengan menekan ekspresi iNOS
dan HO-1 mRNA. Efek hepatoprotektif References
PCEE lebih jauh dicapai dengan
1. R. N. Chopra, S. L. Nayer, and I. C.
pemeriksaan histopatologis. PCEE pada
Chopra, Glossary of Indian Medicinal
tingkat dosis berbeda menawarkan
Plants, Council of Scientific & Industrial
hepatoproteksi. PCEE 500 mg / kg
Research (India), NISCAIR, New Delhi,
menunjukkan hasil yang serupa dengan
India, 1956.
silymarin. Analisis kualitatif awal
2. E.-M. Choi and J.-K. Hwang,
menunjukkan adanya minyak atsiri,
Investigations of anti-inflammatory and
terpenoid, dan flavonoid yang dikenal
antinociceptive activities of Piper
sebagai antioksidan dan zat anti-inflamasi
cubeba, Physalis angulata and Rosa
[63, 64]. 6. Kesimpulan Temuan penelitian
hybrida, Journal of Ethnopharmacology,
ini menunjukkan bahwa PCEE efektif dalam
vol. 89, no. 1, pp. 171175, 2003. View at
pencegahan kerusakan hati akibat CCl4 pada
Publisher View at Google Scholar View
tikus. Hasil penelitian kami menunjukkan
at Scopus
bahwa pengobatan dengan PCEE secara
3. G. Nahak and R. K. Sahu, Phytochemical
signifikan dan dosis obat yang diinduksi
evaluation and antioxidant activity of Piper
secara mencegah mencegah peningkatan
cubeba and Piper nigrum, Journal of
kadar serum enzim hati. Selanjutnya, PCEE
Applied Pharmaceutical Science, vol. 1, no.
secara signifikan mengurangi peroksidasi
8, pp. 153157, 2011. View at Google
lipid di jaringan hati dan memulihkan
Scholar View at Scopus
aktivitas enzim antioksidan pertahanan NP-
4. S. F. H. Zaidi, K. Yamada, M. Kadowaki, K.
SH dan CAT ke tingkat normal. Efek
Usmanghani, and T. Sugiyama,
hepatoprotektif PCEE disebabkan oleh
Bactericidal activity of medicinal plants,
downregulation sitokin proinflamasi,
employed for the treatment of
misalnya ekspresi mRNA TNF- dan IL-6
gastrointestinal ailments, against
serta ekspresi mRNA gen iNOS dan HO-1,
Helicobacter pylori, Journal of
dan pengaturan ulang IL-10. Studi
Ethnopharmacology, vol. 121, no. 2, pp.
 286291, 2009. View at Publisher View at
Google Scholar View at PubMed View at
Scopus
5. M. Khan and M. Siddiqui, Antimicrobial
activity of Piper fruits, Natural Product
Radiance, vol. 6, no. 2, pp. 111113,
2007. View at Google Scholar View at
Scopus
6. Q. Z. Ahmad, N. Jahan, and G. Ahmad,
Nephroprotective effect of Kabab chini
(Piper cubeba) in gentamycin-induced
nephrotoxicity, Saudi Journal of Kidney
Diseases and Transplantation, vol. 23, no. 4,
pp. 773781, 2012. View at
Publisher View at Google Scholar View
at PubMed View at Scopus
7. M. M. Gayasuddin, S. S. Shakil, and S.
Kavimani, Effect of ethanolic extract of
Piper cubeba Linn. fruits on activity of
pioglitazone, International Journal of
Pharmacy & Industrial Research, vol. 1, pp.
312314, 2011. View at Google Scholar
8. A. Cauwels and P. Brouckaert, Survival of
TNF toxicity: dependence on caspases and
NO, Archives of Biochemistry and
Biophysics, vol. 462, no. 2, pp. 132139,
2007. View at Publisher View at Google
Scholar View at PubMed View at Scopus
9. H. K. Seitz and F. Stickel, Risk factors and
mechanisms of hepatocarcinogenesis with
special emphasis on alcohol and oxidative
stress, Biological Chemistry, vol. 387, no.
4, pp. 349360, 2006. View at
Publisher View at Google Scholar View
at PubMed View at Scopus
10. R. O. Recknagel, E. A. Glende Jr., J. A.
Dolak, and R. L. Waller, Mechanisms of
carbon tetrachloride
toxicity, Pharmacology and Therapeutics,
vol. 43, no. 1, pp. 139154, 1989. View at
Publisher View at Google Scholar View
at Scopus
11. L. W. D. Weber, M. Boll, and A. Stampfl,
Hepatotoxicity and mechanism of action of
haloalkanes: carbon tetrachloride as a
toxicological model, Critical Reviews in
Toxicology, vol. 33, no. 2, pp. 105136,
2003. View at Publisher View at Google
Scholar View at PubMed View at Scopus
12. D. W. Bradley, J. E. Maynard, G. Emery,
and H. Webster, Transaminase activities in
serum of long-term hemodialysis
patients, Clinical Chemistry, vol. 18, no.
11, article 1442, 1972. View at Google
Scholar View at Scopus
13. S. Reitman and S. Frankel, A colorimetric
method for the determination of serum
glutamic oxalacetic and glutamic pyruvic
transaminases, The American Journal of
Clinical Pathology, vol. 28, no. 1, pp. 5663,
1957. View at Google Scholar View at
Scopus
14. J. P. Persijn and W. van der Slik, A new Publisher View at Google Scholar View
method for the determination at Scopus
of glutamyltransferase in serum, Journal 19. O. H. Lowry, N. J. Rosebrough, A. L. Farr,
of Clinical Chemistry and Clinical and R. J. Randall, Protein measurement
Biochemistry, vol. 14, no. 9, pp. 421427, with the Folin phenol reagent, The Journal
1976. View at Google Scholar View at of Biological Chemistry, vol. 193, no. 1, pp.
Scopus 265275, 1951. View at Google
15. L. Jendrassik and P. Groff, Simplified Scholar View at Scopus
photometric method for determination of 20. J. Sedlak and R. H. Lindsay, Estimation of
blood bilirubin, Biochemical Journal, vol. total, protein-bound, and nonprotein
297, pp. 8189, 1938. View at Google sulfhydryl groups in tissue with Ellman's
Scholar reagent, Analytical Biochemistry, vol. 25,
16. G. Lum and S. R. Gambino, A comparison pp. 192205, 1968. View at Publisher View
of serum versus heparinized plasma for at Google Scholar View at Scopus
routine chemistry tests, The American 21. H. Aebi, Catalase, Academic Press,
Journal of Clinical Pathology, vol. 61, no. 1, Weinheim, Germany, 1974.
pp. 108113, 1974. View at Google 22. P. Chomczynski and N. Sacchi, Single-step
Scholar View at Scopus method of RNA isolation by acid
17. H. G. Utley, F. Bernheim, and P. Hochstein, guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform
Effect of sulfhydryl reagents on lipid extraction, Analytical Biochemistry, vol.
peroxidation in microsome, Archives of 162, no. 1, pp. 156159, 1987. View at
Biochemistry and Biophysics, vol. 118, pp. Google Scholar View at Scopus
2932, 1967. View at Publisher View at 23. M. W. Pfaffl, G. W. Horgan, and L.
Google Scholar Dempfle, Relative expression software tool
18. D. Konukolu, T. Akay, Y. Diner, and H. (REST) for group-wise comparison and
Hatemi, The susceptibility of red blood statistical analysis of relative expression
cells to autoxidation in type 2 diabetic results in real-time PCR, Nucleic Acids
patients with angiopathy, Metabolism: Research, vol. 30, no. 9, article e36,
Clinical and Experimental, vol. 48, no. 12, 2002. View at Publisher View at Google
pp. 14811484, 1999. View at Scholar View at Scopus
24. M. W. Pfaffl, A new mathematical model
for relative quantification in real-time RT-
PCR, Nucleic Acids Research, vol. 29, no.
9, article e45, 2001. View at
Publisher View at Google Scholar View
at Scopus
25. Y. Sun, Free radicals, antioxidant enzymes,
and carcinogenesis, Free Radical Biology
and Medicine, vol. 8, no. 6, pp. 583599,
1990. View at Publisher View at Google
Scholar View at Scopus
26. Z. S. Ibrahim, M. Ishizuka, M. Soliman et
al., Protection by Nigella sativa against
carbon tetrachloride-induced
downregulation of hepatic cytochrome P450
isozymes in rats, Japanese Journal of
Veterinary Research, vol. 56, no. 3, pp. 119
128, 2008. View at Google Scholar View
at Scopus
27. A. Siegling, M. Lehmann, C. Platzer, F.
Emmrich, and H. D. Volk, A novel
multispecific competitor fragment for
quantitative PCR analysis of cytokine gene
expression in rats, Journal of
Immunological Methods, vol. 177, no. 1-2,
pp. 2328, 1994. View at Publisher View
at Google Scholar View at Scopus
28. A. Grilli, M. A. De Lutiis, A. Patruno et al.,
Inducible nitric oxide synthase and heme
oxygenase-1 in rat heart: direct effect of
chronic exposure to hypoxia, Annals of
Clinical and Laboratory Science, vol. 33, no.
2, pp. 208215, 2003. View at Google
Scholar View at Scopus
29. Z. H. Maayah, M. A. Ansari, M. A. El
Gendy, M. N. Al-Arifi, and H. M. Korashy,
Development of cardiac hypertrophy by
sunitinib in vivo and in vitro rat
cardiomyocytes is influenced by the aryl
hydrocarbon receptor signaling
pathway, Archives of Toxicology, vol. 88,
no. 3, pp. 725738, 2014. View at
Publisher View at Google Scholar View
at PubMed View at Scopus
30. W. Brand-Williams, M. E. Cuvelier, and C.
Berset, Use of a free radical method to
evaluate antioxidant activity, LWTFood
Science and Technology, vol. 28, no. 1, pp.
2530, 1995. View at Publisher View at
Google Scholar View at Scopus
31. R. A. A. Mothana, Anti-inflammatory,
antinociceptive and antioxidant activities of
the endemic Soqotraen Boswellia elongata
Balf. f. and Jatropha unicostata Balf. f. in
different experimental models, Food and
Chemical Toxicology, vol. 49, no. 10, pp.
25942599, 2011. View at Publisher View
at Google Scholar View at PubMed View
at Scopus
32. H. Wagner and S. Bladt, Plants Drug
Analysis: A Thin Layer Chromatography
Atlas, Springer, Berlin, Germany, 1996.
33. B. M. Lee and K.-K. Park, Beneficial and
adverse effects of chemopreventive
agents, Mutation Research, vol. 523-524,
pp. 265278, 2003. View at
Publisher View at Google Scholar View
at Scopus
34. S. I. Aleynik, M. A. Leo, X. Ma, M. K.
Aleynik, and C. S. Lieber,
Polyenylphosphatidylcholine prevents
carbon tetrachloride-induced lipid
peroxidation while it attenuates liver
fibrosis, Journal of Hepatology, vol. 27, no.
3, pp. 554561, 1997. View at
Publisher View at Google Scholar View
at Scopus
35. Y. Y. Hu, C. H. Liu, R. P. Wang, C. Liu, P.
Liu, and D. Y. Zhu, Protective actions of
salvianolic acid A on hepatocyte injured by
peroxidation in vitro, World Journal of
Gastroenterology, vol. 6, no. 3, pp. 402404,
2000. View at Google Scholar View at
Scopus
36. R. S. Britton and B. R. Bacon, Role of free
radicals in liver diseases and hepatic
fibrosis, Hepato-Gastroenterology, vol. 41,
no. 4, pp. 343348, 1994. View at Google
Scholar View at Scopus
S. Mohideen, R. Ilavarasan, E. Sasikala, and
R. T. Kumaran, Hepatoprotective activity
of Nigella sativaLinn, Indian Journal of
Pharmaceutical Sciences, vol