PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK DAUN PEPAYA

TERHADAP KADAR MALONDIALDEHIDA PLASMA DARAH TIKUS

Studi Eksperimental Tikus Jantan Galur Wistar yang Dipapar

Asap Rokok Kretek

Usulan Penelitian untuk Skripsi

Oleh :
Aditya Reza Prianugraha
30101407113

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS ISLAM SULTAN AGUNG
SEMARANG
2017
LEMBAR PENGESAHAN

ii
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL................................................................................................ i

LEMBAR PENGESAHAN .................................................................................... ii

DAFTAR ISI .......................................................................................................... iii

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. vi

BAB I PENDAHULUAN .................................................................................. 1

1.1. Latar Belakang................................................................................. 1

1.2. Rumusan Masalah ........................................................................... 3

1.3. Tujuan Penelitian ............................................................................. 3

1.3.1. Tujuan Umum ........................................................................ 3

1.3.2. Tujuan Khusus ....................................................................... 4

1.4. Manfaat Penelitian ........................................................................... 4

1.4.1. Manfaat Teoritis ..................................................................... 4

1.4.2. Manfaat Praktis ...................................................................... 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ......................................................................... 6

2.1. MDA ................................................................................................ 6

2.1.1. Definisi MDA ........................................................................ 6

2.1.2. Mekanisme pembentukan MDA ............................................ 8

2.1.3. Pengukuran MDA ................................................................ 10

2.1.4. Faktor yang Mempengaruhi kadar MDA ............................. 11

2.2. Rokok ............................................................................................ 11

2.2.1. Definisi dan Klasifikasi Rokok ............................................ 11

2.2.2. Kandungan Asap Rokok ...................................................... 12

iii
 2.3. Pepaya (Carica papaya L.) ............................................................ 13

2.3.1. Deskripsi tanaman ................................................................ 13

2.3.2. (Carica papaya L.) ............................................................... 14

2.3.3. Manfaat pepaya (Carica papaya L.) .................................... 15

2.3.4. Antioksidan dalam daun pepaya (Carica papaya L.) .......... 16

2.4. Hubungan Asap Rokok, MDA, dan Daun Pepaya (Carica papaya

L.),.................................................................................................. 18

2.5. Kerangka Teori .............................................................................. 21

2.6. Kerangka konsep ........................................................................... 22

2.7. Hipotesis ........................................................................................ 22

BAB III METODE PENELITIAN ..................................................................... 23

3.1. Jenis Penelitian dan Rancangan Penelitian.................................... 23

3.2. Variabel dan Definisi Operasional ................................................ 24

3.2.1. Variabel Penelitian ............................................................... 24

3.2.2. Definisi Operasional ............................................................ 24

3.3. Subjek Uji ...................................................................................... 25

3.3.1. Subjek Uji ............................................................................ 25

Kriteria Inklusi : ............................................................................ 25

3.4. Instrumen dan Bahan Penelitian .................................................... 26

3.4.1. Instrumen ............................................................................. 26

3.4.2. Bahan Penelitian .................................................................. 26

3.5. Pelaksanaan Penelitian .................................................................. 27

3.5.1. Persiapan Penelitian ............................................................. 27

iv
 3.5.2. Pemberian Perlakuan............................................................ 27

3.5.3. Pengukuran kadar MDA ...................................................... 29

3.6. Alur Penelitian ............................................................................... 30

3.7. Tempat dan Waktu Penelitian ....................................................... 31

3.8. Analisis Data ................................................................................. 31

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 33

v
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Mekanisme Pembentukan Malondialdehid .................................. 10

Gambar 3.1 Alur Penelitian…………………………………………………. 31

Gambar 3.2 Jadwal Penelitian .......................................................................... 32

vi
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Stres oksidatif adalah kondisi dimana kadar ROS (Reactive Oxygen

Species) melebihi kapasitas buffer (penyangga) antioksidan yang tersedia.

Asap rokok termasuk salah satu sumber radikal bebas yang berasal dari luar

tubuh dan dapat menimbulkan stres oksidatif (Adly, 2010). Aktivitas radikal

bebas dalam sel dapat diukur dengan parameter Malondialdehida.

Malondialdehida (MDA) adalah produk peroksidasi lipid akibat adanya

radikal bebas. MDA akan mengalami peningkatan jika antioksidan tubuh

tidak bisa mengatasi peningkatan radikal bebas (Asni et al., 2009)..

Antioksidan diperlukan untuk mencegah peningkatan kadar MDA

akibat paparan asap rokok. Senyawa antioksidan seperti flavonoid, vitamin

C, vitamin E, beta karoten, dan alkaloid dapat mencegah radikal bebas

(Rahayu dan Tjitraresmi, 2016). Tanaman pepaya (Carica papaya L.)

mengandung antioksidan yang diperlukan untuk mencegah radikal bebas,

khususnya pada bagian daunnya yang memiliki aktivitas radical scavenging

yang lebih kuat daripada bagian buah dan akarnya (Maisarah et al., 2013).

Senyawa antioksidan dalam ekstrak daun pepaya (Carica papaya L.) bisa

mencegah dampak buruk radikal bebas akibat paparan asap rokok (Rahayu

dan Tjitraresmi, 2016), namun demikian pemberian ekstrak daun pepaya

(Carica papaya L.) belum terbukti dapat menurunkan kadar MDA plasma

darah tikus yang terpapar asap rokok.

1
 2

Menurut WHO (2015), pada tahun 2010, prevalensi perokok di

Indonesia tertinggi yaitu pada rentang usia 55-69 tahun, sedangkan pada

tahun 2016 prevalensi perokok di Indonesia menduduki peringkat ke-1 di

dunia dengan data 76,2% penduduk Indonesia adalah perokok (World

Health Organization, 2016). Kebiasaan merokok dapat menyebabkan

kerusakan oksidatif pada DNA dan mutasi gen sehingga dapat

meningkatkan resiko kanker (Fitria et al., 2013). Kerusakan oksidatif pada

organ pernapasan memiliki peranan penting dalam patogenesis terjadinya

Penyakit Paru Obstruktif Kronis (PPOK) (Mansour dan Kusnadi, 2013).

Berdasarkan uraian di atas, jumlah perokok semakin meningkat sepanjang

tahun. Akibatnya, semakin banyak pula risiko terjadinya penyakit kanker

dan PPOK yang disebabkan oleh adanya stres oksidatif dari asap rokok

sehingga diperlukan upaya pencegahan yang efektif dan efisien untuk

masyarakat yaitu dengan menggunakan ekstrak daun pepaya (Carica

papaya L.).

Penelitian sebelumnya pada tahun 2008 di Jadavpur University,

membuktikan bahwa ekstrak buah Phyllanthus Emblica yang mengandung

antioksidan dapat menurunkan kadar MDA sel darah merah pada tikus yang

terpapar asap rokok non filter (Islam et al., 2008). Penelitian Adyttia, Untari,

dan Wahdaningsih (2014) tentang pemberian ekstrak etanol daun Premna

cordifolia dengan dosis 200 mg/kgBB, 400 mg/kgBB, dan 600 mg/kgBB

dapat menurunkan kadar MDA plasma darah tikus yang terpapar asap rokok

3 batang/hari selama 14 hari. Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan

 3

oleh Mohammed, Abubakar, dan Sule (2011), ekstrak air daun pepaya

(Carica papaya L.) dengan dosis 200 mg/kgBB dan 400 mg/kgBB dapat

memberikan proteksi terhadap hepar tikus yang diinduksi CCl4, namun

ekstrak daun pepaya (Carica papaya L.) belum terbukti dapat menurunkan

kadar MDA plasma darah tikus yang dipapar asap rokok.

Berdasarkan uraian di atas, ekstrak daun pepaya (Carica Papaya L)

berperan penting mencegah terjadinya stres oksidatif yang diakibatkan oleh

paparan asap rokok, maka perlu dilakukan penelitian mengenai pengaruh

pemberian ekstrak daun pepaya (Carica Papaya L) dengan dosis 200

mg/kgBB dan 400 mg/kgBB terhadap kadar MDA plasma darah tikus yang

dipapar asap rokok selama 14 hari.

1.2. Rumusan Masalah

Bagaimana pengaruh pemberian ekstrak daun pepaya (Carica

Papaya L) terhadap kadar MDA plasma darah tikus jantan galur Wistar

yang dipapar asap rokok?

1.3. Tujuan Penelitian

1.3.1. Tujuan Umum

Untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak daun pepaya

(Carica Papaya L) terhadap kadar MDA plasma darah tikus jantan

galur Wistar yang dipapar asap rokok.

 4

1.3.2. Tujuan Khusus

1.3.2.1. Mengetahui kadar MDA plasma darah tikus yang dipapar

asap rokok 5 batang per hari (kelompok kontrol normal).

1.3.2.2. Mengetahui kadar MDA plasma darah tikus yang dipapar

asap rokok 5 batang per hari dan diberikan ekstrak daun

pepaya (Carica Papaya L) dengan dosis 200 mg/kgBB.

1.3.2.3. Mengetahui kadar MDA plasma darah tikus yang dipapar

asap rokok 5 batang per hari dan diberikan ekstrak daun

pepaya (Carica Papaya L) dengan dosis 400 mg/kgBB.

1.3.2.4. Mengetahui perbedaan kadar MDA plasma darah tikus

antara kelompok kontrol normal dan kelompok perlakuan.

1.4. Manfaat Penelitian

1.4.1. Manfaat Teoritis

1.4.1.1. Hasil penelitian dapat dijadikan referensi untuk penelitian

lebih lanjut mengenai pengaruh ekstrak daun pepaya

(Carica Papaya L.) terhadap kadar MDA plasma darah.

1.4.1.2. Hasil penelitian ini dapat dijadikan sebagai landasan untuk

peneliti selanjutnya tentang pengaruh pemberian ekstrak

daun pepaya (Carica Papaya L) terhadap kadar MDA

plasma tikus yang dipapar asap rokok.

1.4.2. Manfaat Praktis

Memberikan informasi kepada masyarakat mengenai

manfaat ekstrak daun pepaya(Carica Papaya L) sebagai anti-

 5

oksidan yang dapat melindungi tubuh dari dampak buruk paparan

asap rokok..
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. MDA

2.1.1. Definisi MDA

Malondialdehid (MDA) merupakan hasil metabolit reaktif

dari proses peroksidasi lipid oleh reactive oxygen species (ROS) atau

yang biasa disebut radikal bebas dan biosintesis prostaglandin. MDA

dapat digunakan sebagai biomarker biologis untuk mengukur

peroksidasi lipid sehingga dapat mengetahui peningkatan produksi

radikal bebas dalam tubuh (Shofia et al., 2013).

MDA dapat disajikan dalam bentuk enol:

CH2 (CHO) 2 → HOCH = CH-CHO

MDA memiliki efek sitotoksik yang sangat kuat. Reaksi

antara MDA dengan protein, DNA, RNA, atau fosfolipid dapat

menyebabkan kerusakan membran sel dan molekul intraseluler.

MDA yang menyerang DNA akan menghasilkan “radikal DNA”

yang mengakibatkan mutasi. MDA merupakan karsinogen dan

mutagen reaktif. MDA juga menghambat banyak enzim tiol-

dependent, seperti Na +, K + -ATP-ase, Ca2 + ATP-ase, glukosa-6-

fosfatase, dan adenilat siklase (Jovanović et al., 2013).

Peningkatan produksi radikal bebas dalam tubuh manusia

dapat menyebabkan stres oksidatif. Stres oksidatif adalah keadaan

6
 7

ketidakseimbangan antara ROS atau prooksidan dan antioksidan

pada tubuh manusia. Stres oksidatif dapat menyebabkan

pembentukan peroksidasi lipid yang akan menyebabkan kerusakan

struktur dan fungsi membran sel (Eliyati et al., 2010). Peroksidasi

lipid adalah rantai reaksi yang terjadi akibat reaksi asam lemak tak

jenuh ganda penyusun membran sel dengan senyawa reactive

oxygen species (ROS) (Setiawan dan Suhartono, 2007). ROS dapat

menyerang semua biomolekul seperti lipid, protein, dan asam lemak.

Lipid adalah yang paling sensitif terhadap ROS. Serangan ROS

terhadap lipid menghasilkan peroksida (Eliyati et al., 2010).

Menurut Grotto (2009), peroksidasi lipid menimbulkan

perusakan oksidatif terhadap asam lemak tak jenuh ganda. Jika

peroksidasi lipid menyebar dalam membran biologis, reaksi ini dapat

ditingkatkan oleh beberapa senyawa beracun, termasuk

endoperoksida dan aldehida. Senyawa kompleks yang sangat rentan

terhadap peroksidasi lipid yaitu lipoprotein (Eliyati et al., 2010).

Hasil pertama dari proses peroksidasi lipid adalah peroksida lipid

yang tidak stabil, kemudian dikonversi oleh reaksi oksidasi berturut-

turut (Weitner et al., 2016).

Menurut Murray (2009), proses keseluruhan peroksidasi lipid

adalah sebagai berikut:

1. Inisiasi:

ROOH +Logam (n)+  ROO*+Logam(n-1)+ H +

 8

X*+ RHR* + XH

2. Propagasi:

R* + O2ROO*

ROO* + RH ROOH + R*, dst

3. Terminasi

ROO* + ROO*ROOR + O2

ROO* + R*ROOR

R* + R*RR

Stres oksidatif berhubungan dengan perkembangan berbagai

penyakit, termasuk kanker. Oleh karena itu, penting untuk

menemukan penanda yang bisa diandalkan untuk mengetahui

keparahan stres oksidatif. Tingkat MDA dalam plasma darah dapat

menggambarkan tingkat stres oksidatif pada seluruh tubuh (Weitner

et al., 2016).

2.1.2. Mekanisme pembentukan MDA

Rute pembentukan MDA dijelaskan pada Gambar 2.1.

Sasaran ROS adalah ikatan rangkap karbon-karbon dari asam lemak

tak jenuh ganda (I). Ikatan rangkap ini melemahkan ikatan karbon-

hidrogen sehingga memudahkan terjadinya perebutan atom hidrogen

oleh radikal bebas. Radikal bebas mengikat atom hydrogen,

kemudian asam lemak tak jenuh ganda berubah menjadi radikal

bebas lipid (II), Radikal bebas lipid mengalami oksidasi sehingga

menghasilkan radikal peroksil (III). Radikal peroksil dapat bereaksi

 9

dengan asam lemak tak jenuh ganda lainnya dengan merebut

elektron dan menghasilkan hidroperoksida lipid (IV) dan radikal

bebas lipid lainnya. Proses ini dapat disebarkan secara terus-menerus

dalam reaksi berantai. Hidroperoksida masih tidak stabil dan

fragmentasinya menghasilkan produk seperti malondialdehyde (V)

dan 4-hydroxy-2-nonenal (Grotto et al., 2009).

Gambar 2.1 Mekanisme Pembentukan Malondialdehid (Grotto

et al., 2009).
 10

2.1.3. Pengukuran MDA

Pengukuran nilai MDA dapat dilakukan pada berbagai

sampel biologis. Penggunaan zat reaktif asam thiobarbiturat

(TBARS) telah dilakukan pada plasma, serum, berbagai jaringan,

dan kadang-kadang dalam urin. Sampel yang paling sering

digunakan adalah plasma. Jenis antikoagulan yang dapat digunakan

dalam uji MDA antara lain sodium heparin, sodium citrate, dan

tripotassium EDTA. EDTA nampaknya lebih baik dari sitrat dan

heparin, karena kadar MDA plasma terendah ditemukan, mungkin

terkait dengan khelasi besi oleh EDTA dalam uji TBARS dan juga

aktivitasnya yang lemah seperti antioksidan. Reaksi ini dilakukan

pada suhu 95 ° C, dalam kondisi asam, menghasilkan metode "zat

asam reaktif thiobarbituric" yang terkenal (TBARS). Produknya

dapat dideteksi dengan kolorimetri (532-535 nm) atau fluorimetri

(eksitasi pada 532 nm dan emisi pada 553 nm). Pembentukan adukan

MDA-TBA2 terjadi oleh serangan nukleofilik yang melibatkan

karbon-5 dari TBA dan karbon-1 MDA, diikuti oleh dehidrasi dan

reaksi serupa dengan molekul kedua TBA, menghasilkan pigmen

merah. Intensitas dari pigmen merah muda yang terbentuk dari

kondensasi MDA-TBA menunjukkan tingkat peroksidasi lipid

(Grotto et al., 2009).

 11

2.1.4. Faktor yang Mempengaruhi kadar MDA

Kadar MDA dapat meningkat disebabkan oleh berbagai faktor.

Salah satu faktor tersebut adalah kebiasaan merokok. Semakin

banyak rokok yang dikonsumsi maka akan semakin tinggi kadar

MDA (Jaggi dan Yadav, 2015). Peningkatan kadar MDA juga dapat

dipengaruhi oleh adanya penyakit sindroma metabolik. Kadar MDA

pada penderita sindroma metabolik lebih tinggi daripada manusia

normal dipengaruhi oleh asupan energi, lingkar pinggang, kadar gula

darah puasa, trigliserida, dan 𝛾-GT (Moreto et al., 2014). Faktor lain

yang dapat mempengaruhi kadar MDA adalah stres mental, olahraga

berlebihan, penuaan, aktivasi sel kekebalan tubuh, peradangan,

iskemia, infeksi, polusi, logam berat, radiasi, alkohol, dan obat-

obatan (Pham-Huy, He dan Pham-Huy, 2008).

2.2. Rokok

2.2.1. Definisi dan Klasifikasi Rokok

Rokok merupakan salah satu produk olahan dari tanaman

tembakau (Sukmaningsih, 2009) yang dimaksudkan untuk dibakar

dan dihisap dan/atau dihirup asapnya, termasuk rokok kretek, rokok

putih, cerutu atau bentuk lainnya yang dihasilkan dari tanaman

nicotiana tabacum, nicotiana rustica, dan spesies lainnya atau

sintetisnya yang asapnya mengandung nikotin dan tar, dengan atau

tanpa bahan tambahan (PP RI Nomor 109 Tahun 2012). Berdasarkan

isinya, rokok dibedakan menjadi rokok putih (isinya hanya daun

 12

tembakau), rokok kretek (berisi daun tembakau dan cengkeh), dan

rokok klembak (berisi daun tembakau, cengkeh, dan kemenyan).

Masing-masing jenis rokok tersebut diberi saus untuk mendapatkan

rasa dan aroma tertentu. Berdasarkan proses pembuatannya, rokok

dibedakan menjadi Sigaret kretek tangan (SKT) dan sigaret kretek

mesin (SKM). Sigaret kretek tangan (SKT) dibuat menggunakan

tangan dan atau alat bantu sederhana, sedangkan sigaret kretek

mesin (SKM) dibuat menggunakan mesin. Berdasarkan penggunaan

filter, rokok dibagi menjadi rokok filter (terdapat gabus pada bagian

pangkalnya) dan rokok non filter (tidak terdapat gabus pada bagian

pangkalnya) (Haris et al, 2012).

2.2.2. Kandungan Asap Rokok

Asap rokok mengandung 4800 jenis bahan kimia yang telah

diteliti berbahaya bagi kesehatan, antara lain: nikotin, tar, gas NO,

dan gas CO yang berasal dari tembakau. Kadar bahan berbahaya

tersebut dapat diturunkan dengan penggunaan filter dan kertas rokok

yang berpori-pori. Selain itu, dalam proses penanaman, pengolahan,

dan penyajian dalam perdagangan juga membentuk bahan-bahan

berbahaya, antara lain residu pupuk dan pestisida, NTRM (non-

tobacco related material), B-a-P (benzo-a-pyrene), dan TSNA

(tobacco spesific nitrosamine). Kadar residu pupuk dan pestisida,

NTRM (non-tobacco related material), B-a-P (benzo-a-pyrene), dan

TSNA (tobacco spesific nitrosamine) dapat diturunkan melalui

 13

proses produksi yang benar (Tirtosastro dan Murdiyati, 2010).

Bahan-bahan berbahaya dalam asap rokok dibagi dalam 2 fase, yaitu

fase gas dan fase tar. Fase gas yaitu gas-gas yang dihasilkan oleh

asap rokok yang terdiri dari nitrosopirolidin, vinil, nitrosamin, uretan

, hidrasin, hidrogen sianida, klorida, asetaldehida, formaldehid,

akrolein, amonia piridin, karbon monoksida, dan nitrogen oksida.

Fase tar adalah bahan yang terserap dari penyaringan asap rokok

menggunakan filter cartridge, antara lain bensopirin, fluoranten,

hidrokarbon aromatic, dibensokarbasol, dibensakridin, piren,

naftalen, polinuklear , nitrosamin yang tidak mudah menguap, fenol,

kresol, arsen, nikel, nikotin, dan alkaloid tembakau (Haris et al.,

2012). Dalam asap rokok terdapat juga substansi-substansi radikal

bebas, di antaranya adalah peroksinitrit, hidrogen peroksida, dan

superoksida (Fitria et al., 2013).

2.3. Pepaya (Carica papaya L.)

2.3.1. Deskripsi tanaman

Tanaman pepaya berasal dari famili Caricaceae, marga

Carica, jenis Carica papaya L. tumbuhan ini memiliki nama yang

berbeda-beda di setiap daerah di Indonesia, namun umum dikenal

dengan nama pepaya. Tanaman pepaya berbentuk seperti pohon

dengan tinggi 8-10 m. Akar tanaman pepaya tidak berkayu.

Batangnya tidak bercabang, bentuknya silindris, tidak berkayu,

berongga, mengandung banyak air dan getah di dalamnya serta

 14

memiliki diameter 10-30 cm. Daun tanaman pepaya berbentuk

menjari, helaian yang lebar, dan letaknya berdekatan dengan

pucuknya. Tangkai daun tanaman pepaya berwarna hijau

kekuningan dan memiliki panjang 25-100 cm dan tebalnya 0,15-1,5

cm. Bunga tanaman pepaya berwarna putih kekuningan, berbau

harum, dan berlapis lilin. Tanaman pepaya kadang hidup sebagai

tanaman berumah dua atau berumah satu (hermafrodit). Tanaman

pepaya mempunyai kulit yang tipis dan tidak mudah lepas dari

daging buah (Badan POM RI, 2012). Tanaman pepaya memiliki 2

macam bunga. Bunga jantan terletak pada tandan yang serupa malai,

kelopak kecil dengan kepala sari bertangkai pendek atau duduk dan

warnanya kuning. Bentuk mahkota bunganya seperti terompet dan

berwarna putih kekuningan. Bunga betina berdiri sendiri, warnanya

putih kekuningan dan mahkotanya lepas, kepala putiknya lima. Buah

tanaman pepaya berbentuk bulat memanjang, berwarna hijau muda

bila masih muda dan jingga bila sudah tua. Bentuk bijinya bulat

panjang, kecil dan bagian luarnya dibungkus selaput yang berisi

cairan berwarna putih bila masih muda dan hitam bila sudah tua

(Badan POM RI, 2008).

2.3.2. (Carica papaya L.)

Bagian dari tanaman pepaya, termasuk buah, daun, biji, dan

akar, memiliki banyak khasiat. Kandungan nutrisi pada 100 g buah

pepaya matang didapatkan 7,2 g karbohidrat, 0,6 g protein, 0,1 g

 15

lemak, 0,5 g mineral, dan 0,8 g serat. Bagian-bagian tersebut

memiliki komposisi kimia yang berbeda-beda. Buah pepaya

mengandung karbohidrat, protein, lemak, serat, mineral, vitamin C,

kalsium, besi, fosfor, tiamin, riboflavin, niacin, asam amino, dan

karoten. Biji pepaya mengandung asam lemak, serat kasar, protein

kasar, enzim mirosin, minyak pepaya, karikin, dan karpain. Akar

pepaya hanya memiliki kandungan karposid dan enzim mirosin

sedangkan pada daunnya terdapat alkaloid karpain, pseudokarpain,

dehidrokarpain, kolin, vitamin E, dan vitamin C (Krishna, Paridhavi

dan Patel, 2008).

2.3.3. Manfaat pepaya (Carica papaya L.)

Pepaya memiliki berbagai manfaat di bidang pengobatan

medis berdasarkan bagian-bagiannya, antara lain getah, buah, biji,

daun, akar, dan kulit batang. Biji pepaya memiliki manfaat sebagai

antimikroba, terutama mengatasi toksisitas bakteri Trichomonas

vaginalis, Bacillus subtilis, Enterobacter cloacae, Eschericia coli,

Salmonella typhi, Staphylococcus aureu, Pseudomonas aeruginosa,

Proteus vulgaris, dan Klebsiela pneumonia. Biji pepaya juga dapat

digunakan untuk anthelmintik pada parasit di usus manusia dan

sebagai antiamoeba terhadap Entamoeba hystolitica, serta

antifertilitas. Buah pepaya memiliki aktivitas antibakteri pada

S.aureus, Bacillus sereus, E.coli, P. aeruginosa, Shigella flexneri

serta dapat digunakan sebagai hepatoprotektor, mengobati ulkus

 16

kronik, dan komponen utama pembalut luka bakar. Daun pepaya

juga memiliki efek antibakteri terhadap S. typhii, S. paratyphi, dan S.

typhimurium. Kulit buah pepaya memiliki efek antimalarial. Getah

pepaya dapat berfungsi sebagai mencegah pertumbuhan Candida

albicans. Akar pepaya memiliki khasiat sebagai obat diuretik.

Pepaya dapat digunakan sebagai immunomodulator untuk

menangkal stres oksidatif, antiinflamasi pada penyakit sirosis akibat

virus hepatitis C (Krishna, Paridhavi dan Patel, 2008).

Daun pepaya dapat digunakan untuk mengobati demam

dengue, malaria, memperlancar pencernaan, meningkatkan nafsu

makan, meringankan mual, obat jerawat, meredakan nyeri haid, dan

menghambat pertumbuhan sel kanker. Buah pepaya memiliki efek

laksatif, mengobati gangguan pencernaan, mencegah serangan

jantung dan stroke. Biji pepaya dapat juga digunakan sebagai

nefroprotektor, antibakteri, antiparasit, anthelmintik, antiamoeba,

detoksifikasi racun, serta dapat mengobati penyakit ambeien dan

tifoid. Kulit pepaya dapat digunakan untuk kosmetik, antara lain

sebagai pelindung terhadap matahari, membasmi ketombe, dan

relaksasi otot. Akar pepaya dapat mengobati gangguan berkemih dan

dispepsia (Aravind et al., 2013).

2.3.4. Antioksidan dalam daun pepaya (Carica papaya L.)

Daun pepaya mengandung alkaloid carpaine, beta karoten,

vitamin C, dan E (Aravind et al., 2013). Daun pepaya juga

 17

mengandung pseudocarpain dan dehidrocarpaine I dan II, choline,

serta carposide (Krishna, Paridhavi dan Patel, 2008). Telah

dijelaskan di bab sebelumnya bahwa yang diperlukan untuk

mencegah dampak buruk stres oksidatif adalah senyawa antioksidan.

Kandungan antioksidan dalam daun pepaya antara lain vitamin C,

vitamin E, dan beta karoten, yang telah dibuktikan dapat

mengurangi keparahan dari penyakit asma, osteoarthritis, dan radang

sendi (Aravind et al., 2013). Daun pepaya juga mengandung

antraquinon, polifenol, karotenoid, flavonol, alkaloid seperti karpain

yang juga dapat digunakan untuk antioksidan (Maisarah et al., 2013;

Rahayu dan Tjitraresmi, 2016).

Polifenol dapat dikelompokkan menjadi 4 kelompok utama

berdasarkan jumlah cincin fenol yang terkandung dan berdasarkan

elemen struktur yang mengikat cincin ini satu sama lain, yaitu asam

fenolik, flavonoid, stilbenes dan lignans (Pandey dan Rizvi, 2009).

Daun pepaya memiliki kandungan antioksidan flavonoid dan fenol

yang tinggi dan memiliki aktivitas radical scavenging yang kuat

(Maisarah et al., 2013). Flavonoid bekerja dengan berbagai cara,

antara lain: menangkap radikal bebas secara langsung dan

mengaktivasi enzim antioksidan. Flavonoid mampu menangkap

radikal bebas secara langsung dengan mendonorkan atom hydrogen

sehingga membuat radikal bebas menjadi tidak aktif. Flavonoid juga

mampu menginduksi enzim detoksifikasi fase II (misalnya NAD (P)

 18

H-quinone oxidoreductase, glutathione S-transferase, dan UDP-

glucuronosyl transferase), yaitu enzim pertahanan utama terhadap

toksisitas elektrofilik dan stres oksidatif. Selain itu, flavonoid dapat

membantu merubah α-tokoferol radikal menjadi α-tokoferol

(Procházková, Boušová dan Wilhelmová, 2011). Fenolik akan

menetralkan lipid dan mencegah dekomposisi hidroperoksida

menjadi radikal bebas (Maisarah et al., 2013)

Kombinasi flavonoid dan alkaloid dalam daun pepaya juga

mempunyai aktivitas radical scavenging (Sadek, 2012). Vitamin C

dapat mendonorkan elektron ke senyawa lainnya untuk mencegah

terjadinya oksidasi. Vitamin E yang merupakan bentuk paling aktif

secara biologis dari α-tokoferol dapat melindungi membran sel dari

peroksidasi lipid dengan cara mengakhiri aktivitas LPO dengan

menghancurkan radikal peroksil lipid (LOO-). Beta karoten juga

telah terbukti dapat menekan peroksidasi lipid (Bhattacharyya et al.,

2014), khususnya pada fase propagasi peroksidasi lipid dan melalui

mekanisme transfer electron (Mueller dan Boehm, 2011).

2.4. Hubungan Asap Rokok, MDA, dan Daun Pepaya (Carica papaya L.),

Asap rokok termasuk salah satu sumber radikal bebas yang berasal

dari luar tubuh dan dapat menimbulkan stres oksidatif (Adly, 2010). Bahan-

bahan yang terkandung dalam asap rokok terbagi dalam 2 fase, yaitu fase

gas dan fase tar (Haris et al., 2012). Saat fase gas, asap rokok mengandung

NO, radikal peroksil, dan radikal yang berpusat pada karbon serta saat fase
 19

tar mengandung polycyclic yang relatif stabil, hidrokarbon aromatik dan

nitrosamine. Dengan adanya besi, tar semiquinone dapat menghasilkan

radikal hidroksil (HO-) dan hidrogen peroksida (H2O2) (Bhattacharyya et al.,

2014). Saat fase tar, asap rokok juga menghasilkan nikotin (Haris, Ikhsan

dan Rogayah, 2012). Nikotin juga menginduksi stres oksidatif baik in vivo

dan in vitro yang menyebabkan ketidakseimbangan prooksidan dan

antioksidan dalam sel darah, plasma darah, dan jaringan (Chattopadhyay

dan Chattopadhyay, 2008). Keadaan stres oksidatif bisa mengakibatkan

oksidasi lipid, induksi kerusakan DNA untai tunggal, inaktivasi protein

tertentu, dan gangguan membran sel (Kiral dan Fidanci, 2008).

Malondialdehid (MDA) dihasilkan dari proses peroksidasi lipid oleh

radikal bebas (ROS) dan biosintesis prostaglandin. MDA merupakan salah

satu biomarker biologis yang dapat digunakan digunakan untuk mengukur

peroksidasi lipid sehingga peningkatan produksi radikal bebas menyebabkan

peningkatan MDA (Shofia et al., 2013). Kerusakan yang ditimbulkan oleh

radikal bebas dapat diminimalkan oleh sistem antioksidan hayati, yang

terbagi menjadi 2 jenis, yaitu sistem enzimatik dan non-enzimatik.

Antioksidan enzimatik terdiri dari tembaga (Cu) dan Seng (Zn) superoksida

dismutase (SOD), SOD mangan, ceruloplasmin (Cp), selenium glutathione

peroxidase, glutathione reduktase, dan katalase, sedangkan antioksidan non-

enzimatik termasuk vitamin C, α-tocopherol, dan provitamin karotenoid

(Kiral dan Fidanci, 2008).

 20

Daun pepaya mengandung total konten fenolik (TPC) dan total

konten flavonoid (TFC) tertinggi dibandingkan bagian tanaman pepaya

yang lainnya. Fenolik dan flavonoid termasuk kelompok antioksidan utama

yang memiliki aktivitas radical scavenging yang kuat (Maisarah et al.,

2013). Flavonoid bekerja dengan berbagai cara, antara lain : menangkap

radikal bebas secara langsung, mengaktivasi enzim antioksidan, dan

membantu merubah α-tokoferol radikal menjadi α-tokoferol (Procházková,

Boušová dan Wilhelmová, 2011).

 21

2.5. Kerangka Teori

Ekstrak daun pepaya

Rokok
Fenolik

Alkaloid Vitamin Flavo- Beta Vitamin

C noid karoten E

Radical Donor elektron

Asap rokok scavenging

Kerusakan membran
Peningkatan
sel dan molekul
MDA
Stres oksidatif intraseluler

Peroksidasi
lipid
Biosintesis
prostaglandin

Trigliserida

GDP

𝛾-GT
Keterangan:

Asupan Energi
: Menyebabkan
: Menghambat
: Faktor perancu Lingkar Pinggang
yang dikendalikan
 22

2.6. Kerangka konsep

Paparan Asap Rokok

Ekstrak Daun Kadar MDA Plasma

Pepaya

2.7. Hipotesis

Hipotesis dari penelitian ini adalah pemberian ekstrak daun pepaya

berpengaruh terhadap kadar MDA plasma pada tikus galur Wistar yang

dipapar asap rokok selama 14 hari.

 BAB III

METODE PENELITIAN

3.1. Jenis Penelitian dan Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan

menggunakan rancangan “Post Test Only Control Group Design” terhadap

24 ekor tikus jantan galur Wistar yang kemudian dibagi menjadi 4

kelompok perlakuan seperti yang tertera pada skema berikut:

X1 O1

S R X2 O2

X3 O3

X4 O4
Keterangan:
S = sampel berupa tikus jantan galur Wistar 24 ekor
R = randomisasi
X1 = kelompok I (kelompok kontrol normal) terdiri atas 6 ekor tikus
jantan galur Wistar
X2 = kelompok II (kelompok perlakuan 1) terdiri atas 6 ekor tikus jantan
galur Wistar
X3 = kelompok III (kelompok perlakuan 2) terdiri atas 6 ekor tikus
jantan galur Wistar
X4 = kelompok IV (kelompok perlakuan 3) terdiri atas 6 ekor tikus
jantan galur Wistar
O1 = observasi kelompok I dimana tikus diberi pakan dan minum
O2 = observasi kelompok II dimana tikus diberi pakan, minum, dan
dipapar asap rokok
O3 = observasi kelompok III dimana tikus diberi pakan, minum, 200
mg/kg ekstrak daun pepaya, dan dipapar asap rokok
O4 = observasi kelompok IV dimana tikus diberi pakan, minum, 400
mg/kg ekstrak daun pepaya, dan dipapar asap rokok

23
 24

3.2. Variabel dan Definisi Operasional

3.2.1. Variabel Penelitian

3.2.1.1 Variabel Bebas: Ekstrak daun pepaya

3.2.1.2 Variabel Tergantung : Kadar MDA plasma darah

3.2.2. Definisi Operasional

3.2.2.1 Ekstrak Daun Pepaya

Ekstrak daun pepaya yang digunakan pada penelitian

ini merupakan ekstrak yang dibuat dari 200 g bubuk daun

tanaman pepaya jenis gandul yang berwarna hijau yang

diperoleh dari daerah Demak. Daun pepaya diekstrak dengan

pelarut 1 liter air suling. Dosis ekstrak yang digunakan

adalah 200 mg/kg dan 400mg/kg. Berat sampel yang

digunakan ±200 g maka dosis 200 mg/kgBB dikonversi

menjadi 40 mg dan 400 mg/kgBB dikonversi menjadi 80 mg.

Untuk menyesuaikan kapasitas maksimal lambung tikus (5

ml), maka dosis 40 mg dan 80 mg dilarutkan dengan air

hingga 2 ml dan diberikan dengan sonde lambung. Ekstrak

daun pepaya diberikan secara oral selama 14 hari pada pagi

hari sebelum dipapar asap rokok.

Skala: Rasio

3.2.2.2 Kadar malondialdehyde (MDA)

Kadar malondialdehyde (MDA) adalah kadar hasil

akhir peroksidasi lipid di dalam tubuh dan digunakan

 25

sebagai indikator terjadinya peningkatan radikal bebas.

Kadar MDA diambil dari plasma darah dan dianalisis dengan

metode TBARs assay. Reaksi yang terjadi antara

thiobarbiturat dan MDA membentuk kromogen berwarna

merah muda yang dapat diukur absorbansinya pada panjang

gelombang 545 nm. Sampel darah menggunakan

antikoagulan tripotasium EDTA. Kadar MDA diukur dengan

spektrofotometri, hasilnya dalam satuan nmol/ml.

Skala: Rasio

3.3. Subjek Uji

3.3.1. Subjek Uji

Jumlah sampel yang digunakan diambil secara random

adalah 24 ekor tikus yang kemudian dibagi secara acak (randomisasi

kelompok subjek) dalam 4 kelompok perlakuan. Jumlah sampel tiap

kelompok berdasarkan ketetapan WHO yaitu jumlah minimal

hewan uji coba tiap kelompok adalah 5 ekor dan ditambah 1 ekor

untuk menghindari kemungkinan lost of follow, maka jumlah tiap

kelompok adalah 6 ekor tikus.

Kriteria Inklusi :

1. Tikus galur wistar yang berumur 2 bulan

2. Tikus galur wistar yang tidak sakit

3. Tikus galur wistar dengan berat antara 200-300 gram

4. Tikus galur wistar yang tidak memiliki kelainan anatomis

 26

5. Tikus galur wistar berjenis kelamin jantan

Kriteria drop out adalah tikus mati selama penelitian

3.4. Instrumen dan Bahan Penelitian

3.4.1. Instrumen

1. Timbangan digital

2. Mortar

3. Botol kaca steril

4. Kertas penyaring

5. Timbangan tikus

6. Kandang tikus lengkap dengan tempat makan dan minum

7. Kandang perlakuan

8. Sonde oral

9. Spuit untuk mengambil darah

10. Tabung untuk menampung darah yang ditetesi EDTA

11. Tabung sentrifuse

12. Tabung polipopilin

13. Mikropipet + blue tip

14. Waterbath

15. Alat sentrifuse

16. Spektrofotometer UV

3.4.2. Bahan Penelitian

1. Daun pepaya

2. Air suling
 27

3. Rokok

4. 1.0 mL plasma darah

5. 1.0 mL TCA 20%

6. 1.0 mL TBA 1% dalam sam asetat glasial 50%

3.5. Pelaksanaan Penelitian

3.5.1. Persiapan Penelitian

3.5.1.1 Persiapan pemberian asap rokok

Disiapkan 5 batang rokok per hari selama 14 hari pada pagi

hari untuk semua tikus kecuali kelompok kontrol normal.

3.5.1.2 Pembuatan Ekstrak Air Daun Pepaya

1. Daun pepaya hijau ditimbang sebanyak 200 g

2. Daun pepaya dikeringkan selama 2 minggu

3. Daun pepaya dihaluskan menggunakan mortar hingga halus

(bubuk daun pepaya)

4. Bubuk daun pepaya dilarutkan menggunakan air suling 1

liter

5. Kemudian disaring menggunakan kertas penyaring

6. Filtrat kemudian di keringkan dalam suhu 30oC selama 10

jam hingga beratnya mencapai 20,5 g

3.5.2. Pemberian Perlakuan

Tikus diadaptasikan selama satu minggu. Kemudian

diberikan ekstrak air daun pepaya dan asap rokok diberikan selama

14 hari dengan pembagian sebagai berikut:

 28

1. Kelompok I (kontrol normal): Kelompok ini hanya diberi pakan

hi-pro-vite dan minum standar.

2. Kelompok II (perlakuan I): Kelompok ini diberi paparan asap

rokok 5 kali dalam sehari dengan durasi 10 menit setiap paparan

per batang rokok dan diberi jeda 60 menit antarpaparan,

dilakukan selama 14 hari.

3. Kelompok III (perlakuan II): Kelompok ini diberi ekstrak daun

pepaya dengan dosis 40 mg pada pagi hari, 30 menit kemudian

diberi paparan asap rokok 5 kali dalam sehari dengan durasi 10

menit setiap paparan per batang rokok dan diberi jeda 60 menit

antarpaparan, dilakukan selama 14 hari.

4. Kelompok IV (perlakuan III): Kelompok ini diberi ekstrak daun

pepaya dengan dosis 80 mg pada pagi hari, 30 menit kemudian

diberi paparan asap rokok 5 kali dalam sehari dengan durasi 10

menit setiap paparan per batang rokok dan diberi jeda 60 menit

antarpaparan, dilakukan selama 14 hari.

Pada hari ke-15 dilakukan pengambilan sampel darah dari

vena orbita. Darah diambil sebanyak 3 ml dan ditampung dalam

tabung reaksi yang telah terisi 2 tetes antikoagulan EDTA. Ambil

plasma darah yang terdapat pada bagian atas lalu dipisahkan dan

dianalisis kadar MDA plasma darah.

 29

3.5.3. Pengukuran kadar MDA

Pengukuran MDA dapat dilakukan dengan metode TBARs

(Thiobarbituric acid reactive substance) dengan cara seperti berikut:

1. Ambil darah tikus sebanyak 3cc, masukkan dalam tabung

sentrifuge yang telah diberi 2 tetes EDTA.

2. Sampel darah yang telah disentrifuge pada kecepatan 3000 rpm

selama 30 menit diambil supernatannya sebanyak 200 µ

masukkan ke dalam tabung sentrifuge yang kosong.

3. Tambahkan dengan larutan TCA 15% sebanyak 2000 µl.

4. Tambahkan dengan larutan TBA 0,37% dalam HCl 0,25 N

sebanyak 2000 µl.

5. Panaskan dalam waterbath pada suhu 95ºc selama 60 menit.

6. Dinginkan pada suhu ruang diatas ice bath selama 15 menit.

7. Sentrifuge selama 15 menit pada kecepatan 300 rpm.

8. Ambil supernatan dan masukkan ke dalam cuvet.

9. Baca absorbansi supernatan dengan spektrofotometer pada

panjang gelombang 545 nm

 30

3.6. Alur Penelitian

24 ekor Tikus
Galur Wistar

Adaptasi 7 hari dan

diberikan aquades dan
makan standar

Randomisasi

Kelompok 1 Kelompok 2 Kelompok 3 Kelompok 4

6 ekor 6 ekor 6 ekor 6 ekor

Pakan dan Pakan dan Pakan dan Pakan dan

minum minum standar minum standar minum standar +
standar + paparan asap + paparan asap paparan asap
rokok 5 batang rokok 5 batang rokok 5 batang
per hari per hari + per hari + ekstrak
ekstrak daun daun pepaya
pepaya dosis 40 dosis 80 mg
mg

Pengambilan sampel kadar MDA plasma

darah tikus hari ke-15

Analisa Hasil

Gambar 3.1 Alur Penelitian

 31

3.7. Tempat dan Waktu Penelitian

Perlakuan terhadap tikus dilakukan di Laboratorium Biologi

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Negeri

Semarang. Perhitungan kadar MDA plasma darah dilakukan di

Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro.

Penelitian dilakukan pada bulan Juli 2017.

Juni Juli Agustus

Rincian Kegiatan
1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 5

1. Persiapan dan
seleksi sampel
2. Aklimatisasi

3. Pemberian
perlakuan
4. Pengambilan Hari
sampel darah ke-
15

5. Perhitungan
kadar MDA
plasma darah
6. Pembacaan
hasil

Gambar 3.2 Jadwal Penelitian

3.8. Analisis Data

Analisis data menggunakan SPSS (Statistical Package for Social

Science) 21 for windows. Data yang diperoleh berupa data numerik dengan

skala rasio. Analisis deskriptif disajikan dalam rata-rata dan standard

deviasi. Analisis normalitas data dengan uji Shapiro-Wilk untuk melihat

 32

sebaran distribusi data. Analisis homogenitas kelompok menggunakan

Levene’s Test, sebagai syarat uji parametrik. Jika hasil uji Saphiro-Wilk dan

Leuvene’s Test didapatkan nilai p>0,05 maka distribusi data normal dan

homogen. Data yang berdistribusi normal dan homogen digunakan uji

statistik parametrik One Way Anova. Jika didapatkan nilai p<0,05 pada uji

One Way Annova maka dilanjutkan dengan uji Post Hoc LSD. Jika tidak

memenuhi syarat uji parametrik, maka menggunakan uji statistik Kruskal-

Wallis.
 DAFTAR PUSTAKA

Adly, A. A. M. (2010) “Oxidative stress and disease: An updated review,”

Research Journal of Immunology, hal. 129–145. doi:
10.3923/rji.2010.129.145.
Aravind, G., Bhowmik, D., Duraivel, S. dan Harish, G. (2013) “Traditional and
Medicinal Uses of Carica papaya,” Journal of Medicinal Plants Studies
Traditional, 1(1), hal. 7–15.
Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia. 2008. Taksonomi
Koleksi Tanaman Obat Kebun Tanaman Obat Citeureup. Badan POM RI
Deputi Bidang Pengawasan Obat Tradisional, Kosmetik, dan Produk
Komplemen Direktorat Obat Asli Indonesia. Jakarta Pusat.
Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia. 2012. Acuan Sediaan
Herbal Volume 7 Edisi 1. Badan POM RI. Deputi Bidang Pengawasan Obat
Tradisional, Kosmetik, dan Produk Komplemen. Direktorat Obat Asli
Indonesia. Jakarta Pusat.
Bhattacharyya, A., Chattopadhyay, R., Mitra, S. dan Crowe, S. E. (2014)
“Oxidative stress: an essential factor in the pathogenesis of gastrointestinal
mucosal diseases,” Physiological reviews, 94(2), hal. 329–354.
doi:10.1152/physrev.00040.2012.
Eliyati, N., Rachmawaty, E., S, D. P. A., Suhartono, E., Sman, P. K., Masyarakat,
S. K., Kedokteran, F., Biokimia, B. K., Kedokteran, F., Mangkurat, U. L.,
Studi, K., Bebas, R., Alam, B. dan Mangkurat, U. L. (2010) “Model
Peroksidasi Lipid dan Kerusakan Membran Eritrosit Akibat Pajanan
Organofosfat In Vitro Lipid Peroxidation and Erythrocyte Membrane Lysis
Model Caused by Organophosphate Exposure In Vitro,” JKM, 897(x), hal.
24–29.
Fitria, Mangimbulude, J. C., Karwur, F. F. dan Triandhini, R. I. N. . R. (2013)
“Merokok dan Oksidasi DNA,” Sains Medika, Vol. 5, No. 2, 5(2), hal. 113–
120.
Grotto, D., Santa Maria, L., Valentini, J., Paniz, C., Schmitt, G., Garcia, S. C.,
Pomblum, V. J., Rocha, J. B. T. dan Farina, M. (2009) “Importance of the
lipid peroxidation biomarkers and methodological aspects for
malondialdehyde quantification,” Quimica Nova, 32(1), hal. 169–174. doi:
10.1590/S0100-40422009000100032.
Haris, A., Ikhsan, M. dan Rogayah, R. (2012) “Asap Rokok sebagai Bahan
Pencemar dalam Ruangan,” Departemen Pulmonologi dan Ilmu Kedokteran
Respirasi, Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia-RS Persahabatan
Jakarta, 39(1), hal. 17–24.

33
 34

Jaggi, S. dan Yadav, A. S. (2015) “Increased serum malondialdehyde levels

among cigarette smokers,” The Pharma Innovation Journal, 4(4), hal. 94–
96.
Jovanović, J. M., Nikolić, R. S., Kocić, G. M., Krstić, N. S. dan Krsmanović, M.
M. (2013) “Glutathione protects liver and kidney tissue from cadmiumand
lead- provoked lipid peroxidation,” Journal of the Serbian Chemical Society,
78(2), hal. 197–207. doi: 10.2298/JSC120214053J.
Kiral, F. dan Fidanci, U. R. (2008) “Lipid peroxidation and antioxidant enzymes
in rats exposed to cigarette smoke,” Ankara Üniv Vet Fak Derg, 55, hal.
145–148.
Krishna, K. L., Paridhavi, M. dan Patel, J. A. (2008) “Review on nutritional,
medicinal and pharmacological properties of papaya (Carica papaya linn.),”
Indian Journal of Natural Products and Resources, 7(4), hal. 364–373. doi:
0975-6299.
Maisarah, A., Nurul Amira, B., Asmah, R. dan Fauziah, O. (2013) “Antioxidant
analysis of different parts of Carica papaya.,” International Food Research
Journal, 20(3), hal. 1043–1048.
Mohammed, A., Abubakar, S. A. dan Sule, M. S. (2011) “Hepatoprotective effect
of aqueous leaf extract of Carica papaya Linn. against CCL4-induced
hepatic damage in rats,” International Journal of Pharmaceutical Sciences
Review and Research, 11(2), hal. 13–16.
Moreto, F., De Oliveira, E. P., Manda, R. M. dan Burini, R. C. (2014) “The higher
plasma malondialdehyde concentrations are determined by metabolic
syndrome-related glucolipotoxicity,” Oxidative Medicine and Cellular
Longevity, 2014. doi: 10.1155/2014/505368.
Mueller, L. dan Boehm, V. (2011) “Antioxidant Activity of β-Carotene
Compounds in Different in Vitro Assays,” Molecules, hal. 1055–1069. doi:
10.3390/molecules16021055.
Murray, Robert K., Granner, Daryl K., Rodwell, Victor W. (2009) “Biokimia
Harper”. Jakarta: EGC
Pandey, K. B. dan Rizvi, S. I. (2009) “Plant polyphenols as dietary antioxidants in
human health and disease.,” Oxidative medicine and cellular longevity, 2(5),
hal. 270–8. doi: 10.4161/oxim.2.5.9498.
Peraturan Pemerintah Republik Indonesia Nomor 109 Tahun 2012 Pengamanan
Bahan yang Mengandung Zat Adiktif berupa Produk Tembakau bagi
Kesehatan. Jakarta.
 35

Pham-Huy, L. A., He, H. dan Pham-Huy, C. (2008) “Free radicals, antioxidants in

disease and health.,” International journal of biomedical science : IJBS,
4(2), hal. 89–96. doi: 10.1073/pnas.0804252105.
Procházková, D., Boušová, I. dan Wilhelmová, N. (2011) “Antioxidant and
prooxidant properties of flavonoids,” Fitoterapia, 82(4), hal. 513–523. doi:
10.1016/j.fitote.2011.01.018.
Rahayu, S. dan Tjitraresmi, A. (2016) “Review Artikel : Tanaman Pepaya (Carica
papaya L .) dan Manfaatnya dalam Pengobatan,” Farmaka Vol. 14 No. 1
2016, 14(1).
Setiawan, B. dan Suhartono, E. (2007) “Peroksidasi Lipid dan Penyakit Terkait
Stres Oksidatif pada Bayi Prematur,” Majalah Kedokteran Indonesia 57(1),
hal. 10–14.
Shofia, V., Aulanni’am dan Mahdi, C. (2013) “Studi Pemberian Ekstrak Rumput
Laut Coklat (Sargassum prismaticum) terhadap Kadar Malondialdehid dan
Gambaran Histologi Jaringan Ginjal pada Tikus (Rattus norvegicus)
Diabetes Melitus Tipe 1,” Kimia.studentjournal, 1(1), hal. 119–125.
Sukmaningsih (2009) “Penurunan Jumlah Spermatosit Pakiten dan Spermatid
Tubulus Seminiferus Testis pada Mencit ( Mus Musculus ) yang Dipaparkan
Asap Rokok,” Jurnal Biologi, 13(September), hal. 31–35.
Tirtosastro, S. dan Murdiyati, a S. (2010) “Kandungan Kimia Tembakau dan
Rokok,” Buletin Tanaman Tembakau, Serat & Minyak Industri 2, 2(1), hal.
33–43.
Weitner, T., Jablan, J., Domijan, A., Gabričević, M. dan Inić, S. (2016)
“Spectrophotometric Determination of Malondialdehyde in Urine Suitable
for,” Croat. Chem. Acta, 89(1), hal. 133–139. doi: 10.5562/cca2902.